腦膜炎奈瑟球菌組合物及其方法與流程
相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
本申請(qǐng)要求于2015年2月19日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)62/118,457以及于2016年1月19日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)62/280,212的權(quán)益。所有上述申請(qǐng)通過(guò)引用整體并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及腦膜炎奈瑟球菌(neisseriameningitidis)組合物及其方法。
發(fā)明背景
腦膜炎奈瑟球菌是革蘭氏陰性包膜細(xì)菌，可引起膿毒癥、腦膜炎和死亡?；诨瘜W(xué)上和抗原上明顯不同的多糖莢膜，腦膜炎奈瑟球菌可以分類為至少12個(gè)血清群(包括血清群a、b、c、29e、h、i、k、l、w-135、x、y和z)。具有這些血清群中五個(gè)血清群(a、b、c、y和w135)的菌株導(dǎo)致大多數(shù)疾病。
腦膜炎球菌性腦膜炎是一種破壞性疾病，盡管有抗生素仍可在數(shù)小時(shí)內(nèi)殺死兒童和年輕人。需要改善針對(duì)腦膜炎球菌血清群a、b、c、y和w135和/或x的免疫原性組合物。
目前，有效針對(duì)廣泛的mnb分離物的交叉保護(hù)性疫苗或組合物尚未商業(yè)化。例如，至少在青少年中，迄今為止公開(kāi)的涉及許可的用于保護(hù)免受血清群b疾病侵害的多組分組合物的結(jié)果尚未證明針對(duì)表達(dá)異源lp2086(fhbp)變體的多種菌株的直接殺菌免疫應(yīng)答。迄今為止公開(kāi)的涉及用于保護(hù)免受血清群b疾病侵害的多組分組合物的結(jié)果似乎至多顯示針對(duì)該多組分組合物中與lp2086(fhbp)變體同源的lp2086(fhbp)變體的免疫原性。因此，需要有效針對(duì)一組不同的mnb分離物的交叉保護(hù)性疫苗或組合物，如針對(duì)不同或異源腦膜炎球菌菌株(例如代表不同的地理區(qū)域)確定真實(shí)疫苗覆蓋度。
發(fā)明概述
一方面，本發(fā)明涉及包含約120μg/ml的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，120μg/ml的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80與第一多肽的摩爾比為約2.8，聚山梨酯80與第二多肽的摩爾比為約2.8，約0.5mg/ml鋁，約10mm組氨酸和約150mm氯化鈉的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一劑量總體積為約0.5ml。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物可誘導(dǎo)腦膜炎奈瑟球菌血清群a、c、29e、h、i、k、l、w-135、x、y或z的殺菌免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括與seqidno：1具有小于100％序列同一性的多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括與seqidno：2具有小于100％序列同一性的多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽總共具有258個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽總共具有261個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)，其中在接受第一劑量后在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)比在接受第一劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)至少高2倍，其中在使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定中的相同條件下測(cè)量殺菌效價(jià)的增加。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一脂化多肽由seqidno：1所示的氨基酸序列組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂化多肽由seqidno：2所示的氨基酸序列組成。
另一方面，本發(fā)明涉及誘導(dǎo)在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的免疫應(yīng)答的方法。該方法包括向人施用有效量的第一劑量和第二劑量的組合物，所述組合物包含120μg/ml的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，120μg/ml的包括seqidno：2所示的氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80與第一多肽的摩爾比為2.8，聚山梨酯80與第二多肽的摩爾比為2.8，0.5mg/ml鋁，10mm組氨酸和150mm氯化鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，一個(gè)劑量組合物具有0.5ml的總體積。在一個(gè)實(shí)施方案中，最多向人施用兩個(gè)劑量的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，不再向人進(jìn)一步施用加強(qiáng)劑量的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，向人施用第三劑量的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，在第三劑量之后，不再向人進(jìn)一步施用加強(qiáng)劑量的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，不再向人進(jìn)一步施用第四劑量的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，在第一劑量后約6個(gè)月的時(shí)間段內(nèi)向人施用第三劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，在第一劑量后至少30天施用第二劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括施用第三劑量的組合物，其中在第二劑量后至少90天施用第三劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定中的相同條件下測(cè)量時(shí)，該組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)，其中在接受第一劑量后在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)比在接受第一劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)至少高2倍。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答是針對(duì)對(duì)于表達(dá)a05的腦膜炎奈瑟球菌是異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的殺菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答是針對(duì)對(duì)于表達(dá)b01的腦膜炎奈瑟球菌是異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答是針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌m98250771是異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的殺菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答是針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌cdc1127是異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免免疫應(yīng)答是針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌cdc1573是異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽具有總共258個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽具有總共261個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一脂化多肽由seqidno：1所示的氨基酸序列組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂化多肽由seqidno：2所示的氨基酸序列組成。
另一方面，本發(fā)明涉及一種組合物，其包含60μg的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，60μg的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80與第一多肽的摩爾比為2.8，聚山梨酯80與第二多肽的摩爾比為2.8，0.5mg/ml鋁，10mm組氨酸和150mm氯化鈉，其中該組合物具有約0.5ml的總體積。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物誘導(dǎo)針對(duì)對(duì)于表達(dá)a05的腦膜炎奈瑟球菌是異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的殺菌免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物誘導(dǎo)針對(duì)對(duì)于表達(dá)b01的腦膜炎奈瑟球菌是異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定中的相同條件下測(cè)量時(shí)，該組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)，其中在接受第一劑量后在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)比在接受第一劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)至少高2倍。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括與seqidno：1具有小于100％序列同一性的多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括與seqidno：2具有小于100％序列同一性的多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽總共具有258個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽總共具有261個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一脂化多肽由seqidno：1所示的氨基酸序列組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二脂化多肽由seqidno：2所示的氨基酸序列組成。
又一方面，本發(fā)明涉及一種在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株和腦膜炎奈瑟球菌b亞科b菌株的殺菌免疫應(yīng)答的方法。所述方法包括向人施用有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物，所述組合物包含a)包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，其中所述方法進(jìn)一步包括在針對(duì)抗腦膜炎奈瑟球菌血清群b施用所述組合物的24小時(shí)內(nèi)向人施用以下免疫原性組合物中至少一種：(i)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或腦膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株的免疫原性組合物；(ii)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)和百日咳的免疫原性組合物；(iii)針對(duì)甲型肝炎病毒的免疫原性組合物；(iv)針對(duì)人乳頭瘤病毒的免疫原性組合物；(v)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎的免疫原性組合物；或(vi)其任何組合。“免疫原性”是指誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力。
一方面，本發(fā)明涉及一種在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株和腦膜炎奈瑟球菌b亞科b菌株的殺菌免疫應(yīng)答的方法。該方法包括向人施用有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物，所述組合物包含a)包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，其中所述方法進(jìn)一步包括伴隨地向人施用以下額外的免疫原性組合物中的至少一種：(i)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或腦膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株的免疫原性組合物；(ii)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)和百日咳的免疫原性組合物；(iii)針對(duì)甲型肝炎病毒的免疫原性組合物；(iv)針對(duì)人乳頭瘤病毒的免疫原性組合物；(v)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎的免疫原性組合物；或(vi)其任何組合。
另一方面，本發(fā)明涉及有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物和伴隨至少一種額外的免疫原性組合物用于在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株和針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌免疫應(yīng)答的用途，其中所述腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物包含a)包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，其中所述至少一種額外的免疫原性組合物是：(i)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a菌株、腦膜炎奈瑟球菌血清群c菌株、腦膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或腦膜炎奈瑟球菌血清群w135株的免疫原性組合物；(ii)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)和百日咳的免疫原性組合物；(iii)針對(duì)甲型肝炎病毒的免疫原性組合物；(iv)針對(duì)人乳頭瘤病毒的免疫原性組合物；(v)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎的免疫原性組合物；或(vi)其任何組合。
在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物還包括聚山梨酯80。在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物還包括鋁。在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物還包括組氨酸緩沖劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物還包括氯化鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物包含約120μg/ml的第一多肽；約120μg/ml的第二多肽；摩爾比為約2.8的聚山梨酯80；約0.5mg/ml鋁；約10mm組氨酸；和約150mm氯化鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物包含約60μg的第一多肽；約60μg的第二多肽；約18μg聚山梨酯80；約250μg鋁；約780μg組氨酸；和約4380μg氯化鈉。
在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群ba22，a56，b24，b44菌株或其任何組合中的至少一種的殺菌免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群ba22的殺菌免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb24的殺菌免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb24，b16，b44，a22，b03，b09，a12，a19，a05，a07，b153菌株或其任何組合的殺菌免疫應(yīng)答。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或腦膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株或其任何組合中的至少一種的免疫應(yīng)答。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括向人施用額外的免疫原性組合物，其包括四種不同和分別制備的蛋白質(zhì)-莢膜多糖綴合物的混合物，其中第一綴合物包括與載體蛋白綴合的純化的血清群w-135的腦膜炎奈瑟球菌莢膜多糖，第二綴合物包括與載體蛋白綴合的純化的血清群y的腦膜炎奈瑟球菌莢膜多糖，第三綴合物包括與純化的載體蛋白綴合的純化的血清群a的腦膜炎奈瑟球菌莢膜多糖，第四綴合物包括與載體蛋白綴合的純化的血清群c的腦膜炎奈瑟球菌莢膜多糖，其中載體蛋白選自白喉類毒素，crm197和破傷風(fēng)類毒素。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體蛋白是白喉類毒素。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該免疫原性組合物是液體組合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該免疫原性組合物未被凍干。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括誘導(dǎo)針對(duì)6型、10型、16型、18型人乳頭瘤病毒或其任何組合中的至少一種的免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括在人中誘導(dǎo)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)、百日咳，脊髓灰質(zhì)炎或其任何組合中的至少一種的免疫應(yīng)答。
在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物包括一個(gè)劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物包括兩個(gè)劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物還包括加強(qiáng)劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物包括至多三個(gè)劑量。
在一個(gè)實(shí)施方案中，腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物在施用額外的組合物的24小時(shí)內(nèi)施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，將腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物與額外的組合物同時(shí)施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一劑量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物與額外的組合物伴隨施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一劑量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物與額外的組合物同時(shí)施用。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明
圖1-達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq的受試者的比例。hsba＝使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定；lloq＝定量下限。
圖2-用rlp2086免疫后的個(gè)體人受試者達(dá)到對(duì)普林斯頓大學(xué)爆發(fā)菌株和ucsb爆發(fā)菌株的hsba效價(jià)4倍升高的個(gè)體人類受試者的百分比(研究b1971012–描述于實(shí)施例5、實(shí)施例6中)。在臨床研究b1971012中用二價(jià)rlp2086免疫的9名人類受試者的血清樣品在使用來(lái)自普林斯頓大學(xué)和來(lái)自u(píng)csb的mnb爆發(fā)菌株的探索性hsba中進(jìn)行了評(píng)估。參見(jiàn)實(shí)施例9。
序列標(biāo)識(shí)
seqidno：1列出了重組腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a05多肽抗原的氨基酸序列。
seqidno：2列出了重組腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b01多肽抗原的氨基酸序列。
seqidno：3列出了seqidno：1和seqidno：2的1-4位的氨基酸殘基。
seqidno：4列出了重組奈瑟球菌亞科alp2086多肽(rlp2086)(a05)多肽抗原的n末端的氨基酸序列。
seqidno：5列出了奈瑟亞科alp2086m98250771多肽(a05)多肽抗原的n末端的氨基酸序列。
seqidno：6列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b153的氨基酸序列。
seqidno：7列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a04的氨基酸序列。
seqidno：8列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a05的氨基酸序列
seqidno：9列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a12的氨基酸序列。
seqidno：10列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a22的氨基酸序列。
seqidno：11列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b02的氨基酸序列。
seqidno：12列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b03的氨基酸序列。
seqidno：13列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b09的氨基酸序列。
seqidno：14列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b22的氨基酸序列。
seqidno：15列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b24的氨基酸序列。
seqidno：16列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b44的氨基酸序列。
seqidno：17列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b16的氨基酸序列。
seqidno：18列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a07的氨基酸序列。
seqidno：19列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a19的氨基酸序列。
seqidno：20列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a06的氨基酸序列。
seqidno：21列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a15的氨基酸序列。
seqidno：22列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體a29的氨基酸序列。
seqidno：23列出了腦膜炎奈瑟球菌，血清群b，2086變體b15的氨基酸序列。
發(fā)明詳述
本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)了一種rlp2086組合物，其包括包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽和包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽。該組合物在人類中具有可接受的安全性概況并且該組合物令人驚訝地在人中引發(fā)針對(duì)至少兩種以上不同的腦膜炎奈瑟球菌菌株的廣泛的交叉反應(yīng)性殺菌免疫應(yīng)答。
本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，即使在伴隨施用rlp2086組合物和下列免疫原性組合物中的至少一種之后也產(chǎn)生針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答：(i)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或腦膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株的免疫原性組合物；(ii)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)和百日咳的免疫原性組合物；(iii)針對(duì)甲型肝炎病毒的免疫原性組合物；(iv)針對(duì)人乳頭瘤病毒的免疫原性組合物；(v)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎的免疫原性組合物；或(vi)其任何組合。
至少rlp2086組合物和腦膜炎球菌群a、c、y和w-135多糖綴合疫苗(mcv4)的伴隨施用也出乎意料地產(chǎn)生除了針對(duì)腦膜炎球菌群b之外至少針對(duì)腦膜炎球菌群a、c、y和w-135的免疫應(yīng)答。與在不存在rlp2086組合物的情況下施用mcv4組合物產(chǎn)生的免疫應(yīng)答相比，伴隨施用rlp2086組合物和mcv4組合物后，針對(duì)腦膜炎球菌群a、c、y和w-135組的免疫應(yīng)答是非劣的(noninferior)。
至少rlp2086組合物，腦膜炎球菌群a、c、y和w-135多糖綴合疫苗(mcv4)以及破傷風(fēng)，白喉和無(wú)細(xì)胞百日咳(tdap)疫苗的伴隨施用也出乎意料地產(chǎn)生除了針對(duì)腦膜炎球菌群a、c、y和w-135以及除了針對(duì)腦膜炎球菌群b以外至少針對(duì)破傷風(fēng)，白喉和無(wú)細(xì)胞百日咳的免疫應(yīng)答。與在不存在rlp2086組合物的情況下施用mcv4組合物和tdap組合物產(chǎn)生的免疫應(yīng)答相比，伴隨施用rlp2086組合物，mcv4組合物和tdap組合物后，針對(duì)tdap和腦膜炎球菌群a、c、y和w-135的免疫應(yīng)答是非劣的。
此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)rlp2086組合物可以伴隨針對(duì)甲型肝炎病毒的免疫原性組合物安全地施用于人。
本發(fā)明人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，使用疫苗異源lp2086(因子h結(jié)合蛋白(fhbp))亞科a和b，2-劑量施用方案和3-劑量施用方案出乎意料地在高比例的人受試者產(chǎn)生≥8的針對(duì)來(lái)自腦膜炎奈瑟球菌血清群b的測(cè)試菌株的hsba效價(jià)。當(dāng)與2-劑量施用方案相比時(shí)，3-劑量施用方案可以在人中提供對(duì)各種mnb臨床菌株的更廣泛的保護(hù)。
本發(fā)明人還出乎意料地發(fā)現(xiàn)，在伴隨施用rlp2086組合物和針對(duì)人乳頭瘤病毒(hpv4)的四價(jià)免疫原性組合物后，產(chǎn)生針對(duì)人乳頭瘤病毒和腦膜炎奈瑟球菌血清群b的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。例如，rlp2086組合物和hpv4組合物的伴隨施用至少產(chǎn)生了針對(duì)表達(dá)與rlp2086組合物中的那些fhbps異源的fhbps的腦膜炎奈瑟球菌血清群b測(cè)試菌株的免疫應(yīng)答。此類異源測(cè)試菌株包括表達(dá)a22fhbp，a56fhbp，b24fhbp或b44fhbp的野生型腦膜炎奈瑟球菌血清群b菌株，它們均與rlp2086組合物中的fhbp是異源的。參見(jiàn)其中描述了包括a22fhbp，a56fhbp，b24fhbp和b44fhbp等變體fhbp蛋白質(zhì)的wo/2012/032489，wo/2013/132452，美國(guó)專利公開(kāi)號(hào)us20120093852和美國(guó)專利公開(kāi)號(hào)us20130243807。這些參考文獻(xiàn)通過(guò)引用各自并入本文。伴隨施用也出乎意料地產(chǎn)生至少針對(duì)6型，11型，16型和/或18型hpv的免疫應(yīng)答。與在不存在rlp2086組合物的情況下由hpv4組合物施用產(chǎn)生的免疫應(yīng)答相比，伴隨施用rlp2086組合物和hpv4組合物后，針對(duì)hpv類型的免疫應(yīng)答是非劣的。
此外，本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，在伴隨施用rlp2086組合物和針對(duì)白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎的免疫原性組合物后，產(chǎn)生針對(duì)白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎以及腦膜炎奈瑟球菌血清群b的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。例如，rlp2086組合物和repevax組合物的伴隨施用至少產(chǎn)生了針對(duì)表達(dá)與rlp2086組合物中的那些fhbp異源的fhbp的腦膜炎奈瑟球菌血清群b測(cè)試菌株的免疫應(yīng)答。伴隨施用還出乎意料地產(chǎn)生了，至少針對(duì)repevax中的以下9種抗原的免疫應(yīng)答：白喉、破傷風(fēng)、百日咳類毒素，百日咳絲狀血凝素，百日咳粘附素，2型+3型百日咳菌毛凝集原，1型脊髓灰質(zhì)炎病毒，2型脊髓灰質(zhì)炎病毒，3型脊髓灰質(zhì)炎病毒。與在不存在rlp2086組合物的情況下通過(guò)施用repevax組合物產(chǎn)生的免疫應(yīng)答相比，伴隨施用rlp2086組合物和repevax組合物后，針對(duì)repevax抗原的免疫應(yīng)答是非劣的。
組合物與疫苗
一方面，本發(fā)明涉及針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的組合物。該組合物包含具有seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽和具有seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽。
本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)了單一的腦膜炎奈瑟球菌多肽組分，其誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的多種菌株的有效的廣泛保護(hù)性免疫應(yīng)答。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包括融合蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包括嵌合蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包括雜合蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括肽片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括不是fhbp的奈瑟球菌多肽。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包括pora蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包括nada蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包括奈瑟球菌肝素結(jié)合抗原(nhba)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括奈瑟球菌外膜囊泡(omv)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物不包括除第一多肽和第二多肽之外的抗原。
另一方面，本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，衍生自至多兩種腦膜炎奈瑟球菌血清群b菌株的多肽抗原誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的多種菌株的免疫應(yīng)答。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括不是衍生自腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科am98250771菌株和/或腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科bcdc1573菌株的多肽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括與seqidno：1具有小于100％序列同一性的多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括與seqidno：2具有小于100％序列同一性的多肽。例如，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括與seqidno：1和/或seqidno：2全長(zhǎng)具有小于100％序列同一性的多肽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包括聚山梨酯80，鋁，組氨酸和氯化鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含約60μg的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，約60μg的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80與每種多肽的摩爾比為2.8，0.5mg鋁/ml如磷酸鋁，10mm組氨酸和150mm氯化鈉，其中組合物的總體積優(yōu)選為約0.5毫升。
另一方面，組合物包含約120μg/ml的包含seqidno：1所示的氨基酸序列的第一脂化多肽，約120μg/ml的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80與每種多肽的摩爾比為2.8，0.5mg鋁/ml如磷酸鋁，10mm組氨酸和150mm氯化鈉。
在另一方面，組合物包括a)60μg的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽；b)60μg的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽；c)18μg聚山梨酯80；d)250μg鋁；e)780μg組氨酸，以及f)4380μg氯化鈉。
在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，組合物包含約60μg的由seqidno：1所示氨基酸序列組成的第一脂化多肽，約60μg的由seqidno：2所示氨基酸序列組成的第二脂化多肽，聚山梨酯80與第一脂化多肽和與第二脂化多肽的摩爾比為2.8，0.5mg/ml磷酸鋁，10mm組氨酸和150mm氯化鈉的，其中組合物的總體積為約0.5ml。在該示例性實(shí)施方案中，組合物是無(wú)菌等滲緩沖的液體懸浮劑。在該示例性實(shí)施方案中，組合物具有ph6.0。在該示例性實(shí)施方案中，第一多肽和第二多肽被吸附到鋁上。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物的總體積為約0.5ml。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一劑量的組合物具有約0.5ml的總體積?！暗谝粍┝俊笔侵冈诘?天施用的組合物的劑量?！暗诙┝俊被颉暗谌齽┝俊笔侵冈诘谝粍┝恐笫┯玫慕M合物的劑量，其可與第一劑量相同或可不與第一劑量相同。
在向人施用第一劑量后該組合物是免疫原性的。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一劑量為總體積約0.5ml。
當(dāng)在使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定(hsba)中的相同條件下測(cè)量時(shí)，該組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)，其中在接受第一劑量后在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)比在接受第一劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)至少高1倍，優(yōu)選至少高2倍。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，殺菌效價(jià)或殺菌免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株和針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株。最優(yōu)選地，殺菌效價(jià)或殺菌免疫應(yīng)答至少針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b，亞科b，b01菌株。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，殺菌效價(jià)或殺菌免疫應(yīng)答至少針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b，亞科b，b24菌株。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，殺菌效價(jià)或殺菌免疫應(yīng)答至少針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b，亞科a，a22菌株。
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定中的相同條件下測(cè)量時(shí)，該組合物誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)，其中在接受一個(gè)劑量的組合物后在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)比在接受所述劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)至少高1倍，例如至少高1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍或16倍。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是用于人的免疫原性組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是疫苗?！耙呙纭笔侵赴乖慕M合物，其含有誘導(dǎo)針對(duì)該抗原特異性的免疫應(yīng)答的至少一個(gè)表位。疫苗可以通過(guò)皮下，口服，口鼻或鼻內(nèi)施用途徑直接施用于受試者。優(yōu)選地，肌內(nèi)施用疫苗。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是用于人的疫苗。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是液體組合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物是液體懸浮劑組合物。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物未被凍干。
第一多肽
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包括具有seqidno：1所示氨基酸序列的第一多肽。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物包含約60μg的包括seqidno：1所示氨基酸序列的第一多肽，其中組合物的總體積優(yōu)選為0.5ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含約120μg/ml的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一多肽。多肽是來(lái)自腦膜炎奈瑟球菌m98250771菌株的經(jīng)修飾的因子h結(jié)合蛋白(fhbp)。在wo2012032489和美國(guó)專利公開(kāi)us2012/0093852(其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文)中公開(kāi)了fhbp的描述。該多肽n-末端脂化有與在多肽的三個(gè)位置共價(jià)連接的三個(gè)主要脂肪酸c16:0，c16:1和c18:1。第一多肽包括總共258個(gè)氨基酸。
與來(lái)自腦膜炎奈瑟球菌菌株m98250771的相應(yīng)野生型序列相比，第一多肽包括引入多肽的n末端區(qū)域的兩個(gè)修飾。作為引入克隆位點(diǎn)的結(jié)果，加入第二位置的甘氨酸。第二個(gè)修飾包括缺失四個(gè)氨基酸。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽在n末端包含c-g-s-s序列(seqidno：3)。見(jiàn)seqidno：1，前四個(gè)氨基酸殘基。
第一個(gè)多肽序列和野生型奈瑟球菌序列之間的n-末端差異如下所示。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽包括seqidno：1所示氨基酸序列的至少前2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基。優(yōu)選地，第一多肽包含seqidno：1的至少前4個(gè)，更優(yōu)選至少前6個(gè)，最優(yōu)選至少前8個(gè)氨基酸殘基。
重組和奈瑟球菌亞科lp2086多肽的預(yù)測(cè)n末端序列的比較
rlp2086m98250771cgss-----ggggvaad(seqidno:4)
neisseriallp2086m98250771c-ssgs-gsggggvaad(seqidno:5)
>a05(seqidno:1)
cgssggggvaadigtgladaltapldhkdkglksltledsisqngtltlsaqgaektfkvgdkdnslntgklkndkisrfdfvqkievdgqtitlasgefqiykqdhsavvalqiekinnpdkidslinqrsflvsglggehtafnqlpsgkaeyhgkafssddaggkltytidfaakqghgkiehlktpeqnvelasaelkadekshavilgdtrygseekgtyhlalfgdraqeiagsatvkirekvheigiagkq
在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽包括seqidno：1所示的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽總共具有258個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽不包括與seqidno：1具有小于100％序列同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽由seqidno：1所示的氨基酸序列組成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽包括氨基酸序列kdn。參見(jiàn)例如seqidno：1的氨基酸殘基73-75。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽包括在該多肽的n末端的seqidno：3所示的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽包括在該多肽的n-末端的seqidno：4所示的氨基酸序列。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，易于在重組宿主細(xì)胞中表達(dá)第一多肽。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一多肽包含seqidno：1的n-和/或c-結(jié)構(gòu)域上的殺菌表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽包括seqidno：1所示氨基酸序列的至少前4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個(gè)氨基酸殘基。優(yōu)選地，第一多肽包含seqidno：1的至少前2個(gè)，更優(yōu)選至少前4個(gè)，以及最優(yōu)選至少前8個(gè)氨基酸殘基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽包括seqidno：1所示氨基酸序列的至少最后4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個(gè)氨基酸殘基。
第二多肽
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含具有seqidno：2所示氨基酸序列的第二多肽。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物包含約60μg的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二多肽，其中組合物的總體積優(yōu)選為0.5ml。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含120μg/ml的包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二多肽。該多肽是來(lái)自腦膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573的因子h結(jié)合蛋白(fhbp)。在wo2012032489和美國(guó)專利公開(kāi)us2012/0093852(其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文)中公開(kāi)了fhbp的描述。該多肽n-末端脂化有與在該多肽的三個(gè)位置共價(jià)連接的三個(gè)主要脂肪酸c16:0、c16:1和c18:1。第二多肽總共包括261個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽在n末端包含c-g-s-s序列(seqidno：3)。參見(jiàn)seqidno：2的前4個(gè)氨基酸殘基。
>b01(seqidno:2)
cgssggggsggggvtadigtgladaltapldhkdkglksltledsisqngtltlsaqgaektygngdslntgklkndkvsrfdfirqievdgqlitlesgefqvykqshsaltalqteqeqdpehsekmvakrrfrigdiagehtsfdklpkdvmatyrgtafgsddaggkltytidfaakqghgkiehlkspelnvdlavayikpdekhhavisgsvlynqdekgsyslgifgekaqevagsaevetangihhiglaakq
在一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽包括seqidno：2所示的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽總共具有261個(gè)氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽由seqidno：2所示的氨基酸序列組成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽沒(méi)有進(jìn)一步包括與seqidno：2具有小于100％序列同一性的多肽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一多肽和第二多肽在各自多肽的n末端包含c-g-s-s(seqidno：3)序列。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，易于在重組宿主細(xì)胞中表達(dá)第二多肽。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二多肽包含seqidno：2的n-和/或c結(jié)構(gòu)域上的殺菌表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二多肽包括seqidno：2所示氨基酸序列的至少前2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個(gè)氨基酸殘基。優(yōu)選地，第二多肽包含seqidno：2的至少前2個(gè)，更優(yōu)選至少前4個(gè)，以及最優(yōu)選至少前8個(gè)氨基酸殘基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一多肽包括seqidno：2所示的氨基酸序列的至少最后4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個(gè)氨基酸殘基。
聚山梨酯80
聚山梨酯80(ps-80)是非離子表面活性劑。使用基于體外單克隆抗體的效價(jià)測(cè)定法進(jìn)行的加速穩(wěn)定性研究表明，在最終制劑中，ps-80與mnbrlp2086蛋白質(zhì)的摩爾比較高的亞科b蛋白的不穩(wěn)定性。具有不同比例ps-80的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明保留效價(jià)的ps-80與mnbrlp2086蛋白的最佳摩爾比約為2.8±1.4。
組合物中ps-80的濃度取決于ps-80與多肽的摩爾比。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含ps-80與第一多肽和與第二多肽的摩爾比為2.8±1.4。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含ps-80與第一多肽和與第二多肽的摩爾比為2.8±1.1。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含ps-80與多肽的摩爾比為至少1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2或3.3。優(yōu)選地，組合物包含ps-80與多肽的摩爾比為2.8。
通過(guò)從測(cè)量的ps-80濃度和測(cè)量的總多肽濃度(其中兩個(gè)值均以摩爾表示)計(jì)算確定ps-80與多肽的摩爾比。例如，通過(guò)在最終藥物物質(zhì)中測(cè)量的ps-80濃度(例如，通過(guò)反相高壓液相色譜(rp-hplc))與測(cè)量的總蛋白質(zhì)濃度(例如通過(guò)離子交換-高壓液相色譜(iex-hplc))(其中兩個(gè)值都以摩爾表示)計(jì)算確定ps-80與蛋白質(zhì)的摩爾比。
使用rp-hplc來(lái)定量疫苗制劑中聚山梨酯80的濃度。洗滌劑的濃度通過(guò)脂肪酸部分的皂化來(lái)確定；聚山梨酯80在40℃下通過(guò)堿水解轉(zhuǎn)化為游離油酸。使用c18柱通過(guò)rp-hplc分離樣品，并使用uv檢測(cè)器在200nm波長(zhǎng)下進(jìn)行定量。
通過(guò)陰離子交換hplc解析第一和第二多肽。rlp2086(fhbp)亞科a和b蛋白在不同的保留時(shí)間洗脫，并使用針對(duì)相應(yīng)的rlp2086蛋白質(zhì)參考物質(zhì)產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。
術(shù)語(yǔ)“摩爾比”和包含fhbp和ps-80的免疫原性組合物的描述進(jìn)一步公開(kāi)在wo2012025873和美國(guó)專利公開(kāi)us2013/0171194中，其各自通過(guò)引用整體并入本文。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“摩爾比”是指組合物中兩種不同元素的摩爾數(shù)比。在一些實(shí)施方案中，摩爾比是洗滌劑的摩爾數(shù)與多肽的摩爾數(shù)之比。在一些實(shí)施方案中，摩爾比是ps-80的摩爾數(shù)與蛋白質(zhì)的摩爾數(shù)之比。在一個(gè)實(shí)施方案中，基于蛋白質(zhì)和聚山梨酯80濃度，摩爾比可以使用以下等式計(jì)算：
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含約0.0015、0.0017、0.0019、0.0021、0.0023、0.0025、0.0027、0.0029、0.0031、0.0033、0.0035、0.0037、0.0039、0.0041、0.0043、0.0045、0.0047、0.0049、0.0051mg/ml的ps-80。優(yōu)選地，組合物包含約0.0035mg/mlps-80。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含約10μg、11μg、12μg、13μg、14μg、15μg、16μg、17μg、18μg、19μg、20μg、21μg、22μg、23μg、24μg或25μgps-80。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物包含約18μgps-80。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含0.0005％至1％的ps-80濃度。例如，組合物中的ps-80濃度可以為0.0005％、0.005％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.10％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％或1.1％的ps-80。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物包含約0.07％的ps-80。
任何最小值都可以與此處描述的任何最大值相結(jié)合，以定義一個(gè)范圍。
鋁
組合物優(yōu)選包含約0.5mg/ml磷酸鋁。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含約0.5mg鋁/ml如磷酸鋁。加入0.50mg/ml的alpo4作為穩(wěn)定劑，以提供增強(qiáng)的可制造性和穩(wěn)定性。該濃度保持亞科a和b蛋白與鋁的結(jié)合(90％或更好的結(jié)合)。
生產(chǎn)磷酸鋁的方法描述于美國(guó)專利公開(kāi)us2009/0016946中，其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括除鋁以外的多價(jià)陽(yáng)離子。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物沒(méi)有進(jìn)一步包括al(oh)3或al(so4)3。
賦形劑
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包括組氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包括氯化鈉。組合物優(yōu)選包含約10mm組氨酸和約150mm氯化鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含10mm組氨酸和150mm氯化鈉。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含約650μg、660μg、670μg、680μg、690μg、700μg、710μg、720μg、730μg、740μg、750μg、760μg、770μg、780μg、790μg、800μg、810μg、820μg、830μg、840μg或850μg的組氨酸。優(yōu)選地，組合物包含約780μg組氨酸。任何最小值可以與本文所述的任何最大值組合以定義范圍。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含三羥甲基氨基甲烷(tris)、磷酸鹽或琥珀酸鹽緩沖劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物不包括三羥甲基氨基甲烷緩沖劑。優(yōu)選地，組合物不包括磷酸鹽緩沖劑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物不包括琥珀酸鹽緩沖劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物包括組氨酸緩沖劑。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物的ph為6.0-7.0，最優(yōu)選為ph6.0。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物的ph至多為6.1。
殺菌活性
通過(guò)使用人補(bǔ)體(hsba)針對(duì)四種腦膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)菌株的血清殺菌測(cè)定法測(cè)定向人施用組合物誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。從菌株庫(kù)中選出hsba中使用的4種mnb菌株。菌株庫(kù)代表來(lái)自美國(guó)和歐洲的系統(tǒng)收集的臨床相關(guān)腦膜炎奈瑟球菌血清群b菌株的集合。用于sba的4種菌株中的兩種來(lái)自腦膜炎奈瑟球菌血清群blp2086(fhbp)亞科a，4種菌株中的另外兩種來(lái)自腦膜炎奈瑟球菌血清群blp2086(fhbp)亞科b。
對(duì)所有測(cè)試菌株、特別是表達(dá)具有與第一多肽異源的序列的脂蛋白2086變體的菌株的高比例的hsba表明該組合物是廣泛保護(hù)性疫苗，并且兩個(gè)劑量足以賦予至少針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的高血清保護(hù)作用。
對(duì)所有測(cè)試菌株、特別是表達(dá)具有與第一多肽和第二多肽二者異源的序列的脂蛋白2086變體的菌株的高比例的hsba表明該組合物是廣泛保護(hù)性疫苗，并且在約6個(gè)月的時(shí)間段內(nèi)至多三個(gè)劑量足以賦予表達(dá)rlp2086(fhbp)亞科a和/或亞科b的腦膜炎奈瑟球菌血清群b菌株的高血清保護(hù)作用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)亞科a菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是表達(dá)與表達(dá)a05的腦膜炎奈瑟球菌菌株異源的脂蛋白2086變體的lp2086(fhbp)亞科a菌株。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是表達(dá)與菌株m98250771異源的脂蛋白2086變體的lp2086(fhbp)亞科a菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)a22菌株。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)a56菌株。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)a22和lp2086(fhbp)a56菌株。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086a04菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086a05菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086a12菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086a22菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086a12菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086a04菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086a19菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086a07菌株。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括a22，a12，a19，a05和a07，或其任何組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括a06，a15和a29，或其任何組合。
在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)與表達(dá)a05的腦膜炎奈瑟球菌菌株異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株具有殺菌作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群ba22菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群ba56菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群ba06菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群ba15菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群ba29菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群ba62菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)與腦膜炎奈瑟球菌菌株m98250771異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株具有殺菌作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與第一多肽具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株m98250771表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株m98250771表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有至少80％、更優(yōu)選至少84％同一性的氨基酸序列。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與第一多肽具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株m98250771表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株m98250771表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有至多99％、更優(yōu)選至多85％的同一性的氨基酸序列。任何最小值可以與本文所述的任何最大值組合以定義范圍。
在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)亞科b菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是表達(dá)與表達(dá)b01的腦膜炎奈瑟球菌菌株異源的脂蛋白2086變體的lp2086(fhbp)亞科b菌株。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是表達(dá)與菌株cdc1127異源的脂蛋白2086變體的lp2086(fhbp)亞科b菌株。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，hsba菌株是表達(dá)與菌株cdc1573異源的脂蛋白2086變體的lp2086(fhbp)亞科b菌株。
在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)與表達(dá)b01的腦膜炎奈瑟球菌菌株異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb24菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb44菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb16菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb03菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb09菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb15菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群bb153菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)與腦膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573異源的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與第二多肽具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有至少80％、81％、82％、83％、84％85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有至少80％同一性、更優(yōu)選至少87％同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有100％同一性的氨基酸序列。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用，所述表達(dá)因子h結(jié)合蛋白包括與第二多肽具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有至多81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答針對(duì)表達(dá)因子h結(jié)合蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用，所述因子h結(jié)合蛋白包括與由腦膜炎奈瑟球菌菌株cdc1573表達(dá)的因子h結(jié)合蛋白具有至少99％同一性、更優(yōu)選至少88％同一性的氨基酸序列。任何最小值可以與本文所述的任何最大值組合以定義范圍。
在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)b24菌株。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086(fhbp)b44菌株。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括lp2086(fhbp)b24和lp2086(fhbp)b44菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括lp2086(fhbp)a22，lp2086(fhbp)a56，lp2086(fhbp)b24和lp2086(fhbp)b44菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括b15。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括b153。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086b16菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086b03菌株。在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株是lp2086b09菌株。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括b24，b16，b44，b03和b09，或其任何組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括b24、b16、b44、a22、b03、b09、a12、a19、a05和a07，或其任何組合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括a22和b24。在另一個(gè)實(shí)施方案中，hsba菌株包括a06，a07，a12，a15，a19，a29，b03，b09，b15和b16，或其任何組合。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株和針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的免疫應(yīng)答。優(yōu)選地，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株和針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株具有殺菌作用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的免疫應(yīng)答大于針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的免疫應(yīng)答。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下進(jìn)行測(cè)試時(shí)，免疫原性組合物誘導(dǎo)比針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株更高的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的殺菌效價(jià)。在一個(gè)實(shí)施方案中，更高的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的殺菌效價(jià)在第二劑量的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物后30天內(nèi)發(fā)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，更高的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的殺菌效價(jià)在不存在第三劑量的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物的情況下發(fā)生。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的免疫應(yīng)答大于針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株的免疫應(yīng)答。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下進(jìn)行測(cè)試時(shí)，免疫原性組合物誘導(dǎo)比針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株更高的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌效價(jià)。在一個(gè)實(shí)施方案中，更高的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌效價(jià)在第二劑量的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物后30天內(nèi)發(fā)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，更高的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌效價(jià)在不存在第三劑量的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物的情況下發(fā)生。
效價(jià)
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下(例如在hsba中)測(cè)量時(shí)，與施用一個(gè)劑量的組合物之前人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)相比，組合物在人中誘導(dǎo)的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)增加。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下(例如在hsba中)測(cè)量時(shí)，與施用第一劑量的組合物之前人中的殺菌效價(jià)相比，殺菌效價(jià)的增加是相比于施用第一劑量的組合物之前人中的殺菌效價(jià)。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下(例如在hsba中)測(cè)量時(shí)，與施用第二劑量的組合物之前人中的殺菌效價(jià)相比，在第二劑量的組合物后觀察到效價(jià)的增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下(例如在hsba中)測(cè)量時(shí)，與施用第三劑量的組合物之前人中的殺菌效價(jià)相比，在第三劑量的組合物后觀察到殺菌效價(jià)的增加。
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下(例如在hsba中)測(cè)量時(shí)，組合物在施用一個(gè)劑量后在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)，其中所述殺菌效價(jià)比在施用一個(gè)劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)至少高1倍。例如，當(dāng)在相同條件下(例如在hsba中)測(cè)量時(shí)，在接受一個(gè)劑量的組合物后在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的血清免疫球蛋白的殺菌效價(jià)與在施用該劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)相比至少高1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍或16倍。
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下測(cè)量時(shí)，當(dāng)與針對(duì)人乳頭瘤病毒的額外的免疫原性組合物組合使用時(shí)，與施用一個(gè)劑量的組合物之前在人中針對(duì)人乳頭瘤病毒的殺病毒效價(jià)相比，組合物在人中誘導(dǎo)針對(duì)人乳頭瘤病毒的殺病毒效價(jià)的增加。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下測(cè)量時(shí)，與施用第一劑量的組合物之前在人中的殺病毒效價(jià)相比，殺病毒效價(jià)的增加是相比于在施用第一劑量的組合物之前在人中的殺病毒效價(jià)。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下測(cè)量時(shí)，與施用第二劑量的組合物之前人中的殺病毒效價(jià)相比，在第二劑量的組合物后觀察到效價(jià)的增加。在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下測(cè)量時(shí)，與施用第三劑量的組合物之前人中的殺病毒效價(jià)相比，在第三劑量的組合物后觀察到殺病毒效價(jià)的增加。
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在相同條件下測(cè)量時(shí)，當(dāng)與針對(duì)人乳頭瘤病毒的額外的免疫原性組合物組合使用時(shí)，組合物在施用一個(gè)劑量后在人中誘導(dǎo)殺病毒效價(jià)，其中針對(duì)人乳頭瘤病毒的殺病毒效價(jià)比在施用該劑量之前在人中針對(duì)人乳頭瘤病毒的殺病毒效價(jià)至少高1倍。例如，當(dāng)在相同條件下測(cè)量時(shí)，在接受一個(gè)劑量的組合物后在人中針對(duì)人乳頭瘤病毒的殺病毒效價(jià)與在施用該劑量之前在人中針對(duì)人乳頭瘤病毒的殺病毒效價(jià)相比至少高1.01倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍或16倍。
在一個(gè)實(shí)施方案中，“應(yīng)答者”是指人，其中組合物在施用一個(gè)劑量后在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)，其中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)與在施用該劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)相比至少高1倍。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，與施用該劑量之前在人中的殺菌效價(jià)相比，應(yīng)答者達(dá)到hsba效價(jià)至少≥4倍的升高。這樣的應(yīng)答者可以被稱為具有保護(hù)性效價(jià)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba效價(jià)是產(chǎn)生可測(cè)量效應(yīng)的血清樣品的最高稀釋度的倒數(shù)。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，hsba效價(jià)是測(cè)試血清的最高2倍稀釋度的倒數(shù)，其導(dǎo)致與t30cfu值(即，在含有除測(cè)試血清以外的所有測(cè)定組分的測(cè)定孔中孵育后存活細(xì)菌的數(shù)量；100％細(xì)菌存活)相比mnb細(xì)菌至少50％的降低(50％細(xì)菌存活)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在hsba中的相同條件下測(cè)量時(shí)，該組合物在接受第一劑量后在人中誘導(dǎo)比在接受第一劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)至少高2倍的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)(例如比在不存在第一劑量的情況下在人中的殺菌效價(jià)更高)。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在采用人補(bǔ)體(hsba)的人血清殺菌測(cè)定中的相同條件下測(cè)量時(shí)，該組合物在人中誘導(dǎo)比在接受第一劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)至少高4倍的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在采用人補(bǔ)體(hsba)的人血清殺菌測(cè)定中的相同條件下測(cè)量時(shí)，該組合物在人中誘導(dǎo)比在接受第一劑量之前在人中針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)至少高8倍的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的殺菌效價(jià)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，人血清補(bǔ)體衍生自對(duì)于給定sba測(cè)試菌株具有低固有殺菌活性的人。低固有殺菌活性是指例如針對(duì)給定的sba測(cè)試菌株至少小于1:4稀釋度的殺菌效價(jià)。在一個(gè)實(shí)施方案中，人補(bǔ)體衍生自具有針對(duì)給定sba測(cè)試菌株至少小于1:4稀釋度、例如1:2稀釋度的hsba效價(jià)的人，其中未向該人施用所述組合物。
在施用組合物如二價(jià)rlp2086組合物之前，人可以表現(xiàn)出小于1:4的hsba效價(jià)，或者在施用組合物之前，人可以表現(xiàn)出≥1:4的hsba效價(jià)。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方案和實(shí)施例中，向人施用至少一個(gè)劑量的組合物導(dǎo)致hsba效價(jià)至少大于1:4，例如hsba效價(jià)≥1:8，hsba效價(jià)≥1:16，以及hsba效價(jià)≥1：32。本文所述的各個(gè)實(shí)施例包括具有hsba效價(jià)≥1:8和/或≥1:16的人受試者比例的評(píng)估，其中向該人施用二價(jià)rlp2086組合物。對(duì)于hsba效價(jià)大于1:4的優(yōu)選評(píng)估顯示保護(hù)(即在人中誘導(dǎo)的殺菌免疫應(yīng)答)與該組合物相關(guān)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，在施用第一劑量的組合物后，該人具有等于或大于hsba的定量下限(lloq)的hsba效價(jià)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在施用第二劑量的組合物后，該人具有等于或大于hsba的lloq的hsba效價(jià)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在施用第三劑量的組合物后，該人具有等于或大于hsba的lloq的hsba效價(jià)。
額外的免疫原性組合物
一方面，本發(fā)明涉及一種除了誘導(dǎo)針對(duì)以下中的至少任一種的免疫應(yīng)答之外還誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科a菌株和針對(duì)腦中腦膜炎奈瑟球菌血清群b亞科b菌株的殺菌免疫應(yīng)答的方法：腦膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或腦膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株；白喉，破傷風(fēng)和/或百日咳；甲型肝炎病毒；人乳頭瘤病毒；白喉、破傷風(fēng)、百日咳和/或脊髓灰質(zhì)炎；或其任何組合。
該方法包括向人施用有效量的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的免疫原性組合物，并且伴隨向人施用以下免疫原性組合物中的至少一種：(i)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群y菌株和/或腦膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株的免疫原性組合物；(ii)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)和百日咳的免疫原性組合物；(iii)針對(duì)甲型肝炎病毒的免疫原性組合物；(iv)針對(duì)人乳頭瘤病毒的免疫原性組合物；(v)針對(duì)白喉、破傷風(fēng)、百日咳和脊髓灰質(zhì)炎的免疫原性組合物；或(vi)其任何組合。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括向人施用有效量的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b的免疫原性組合物，并且伴隨向人施用以下免疫原性組合物中的至少一種：(i)menactra，menveo或nimenrix；(ii)adacel；(iii)havrix；(iv)gardasil；(v)repevax；或(vi)其任何組合。
例如，在示例性的實(shí)施方案中，該方法包括伴隨向人施用以下組合物的組合中的至少一種：
本文所用的“伴隨的”和“伴隨地”和“共同施用的”和“共同施用”是指將向人同時(shí)施用至少兩種組合物或在一段時(shí)間內(nèi)施用，在此期間第一次施用的組合物的作用在人中仍然有效。如果第一組合物是例如rlp2086組合物并且第二組合物是mcv4組合物，則第二組合物的伴隨施用可以在施用第一組合物的1至7天內(nèi)，優(yōu)選48小時(shí)內(nèi)，更優(yōu)選24小時(shí)內(nèi)發(fā)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，伴隨施用發(fā)生在施用第一組合物的至多1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)、5小時(shí)、6小時(shí)、7小時(shí)、8小時(shí)、9小時(shí)、10小時(shí)、11小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)或48小時(shí)內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，伴隨施用發(fā)生在施用第一組合物的同時(shí)。
在伴隨施用中，第一組合物可以在規(guī)定時(shí)間段內(nèi)在額外的組合物之前、之后或同時(shí)施用。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，將第一組合物(例如rlp2086組合物)首先施用于人，而第二組合物(例如mcv4組合物)在rlp2086組合物后24小時(shí)內(nèi)施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將第一組合物(例如mcv4組合物)首先施用于人，而第二組合物(例如rlp2086組合物)在mcv4組合物后24小時(shí)內(nèi)施用于人。
在一個(gè)實(shí)施方案中，額外的組合物在規(guī)定時(shí)間段內(nèi)在第一劑量的rlp2086組合物之前、之后或同時(shí)施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在一個(gè)實(shí)施方案中，額外的組合物在規(guī)定時(shí)間段內(nèi)在第二劑量的rlp2086組合物之前、之后或同時(shí)施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，額外的組合物在規(guī)定時(shí)間段內(nèi)在第三劑量的rlp2086組合物之前、之后或同時(shí)施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，額外的組合物在規(guī)定時(shí)間段內(nèi)在加強(qiáng)劑量的rlp2086組合物之前、之后或同時(shí)施用。
本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，rlp2086組合物可以與至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14種額外的抗原一起施用，而不會(huì)不利地影響針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫應(yīng)答。例如，實(shí)施例11證實(shí)了觀察到對(duì)腦膜炎奈瑟球菌菌株和至少10種mcv4和tdap抗原中的每一種的大量hsba應(yīng)答。實(shí)施例13證實(shí)了rlp2086組合物可以與hpv4、mcv4和tdap疫苗中包含的14種抗原共同施用，同時(shí)誘導(dǎo)有效的免疫應(yīng)答，其可包括殺菌和/或殺病毒的免疫應(yīng)答。
因此，一方面，本發(fā)明涉及誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群c菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群y菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群w135菌株，腦膜炎奈瑟球菌血清群b菌株的免疫應(yīng)答的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌免疫應(yīng)答。所述方法包括向人施用有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物，所述組合物包含a)具有seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)具有seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽；以及另外的組合物，其包含四種不同且分開(kāi)制備的蛋白質(zhì)-莢膜多糖綴合物的混合物，其中所述第一綴合物包括與載體蛋白綴合的血清群w-135的純化的腦膜炎奈瑟球菌莢膜多糖，所述第二綴合物包括與載體蛋白綴合的血清群y的純化的腦膜炎奈瑟莢膜多糖，第三綴合物包括與純化的載體蛋白綴合的血清群a的純化的腦膜炎奈瑟球菌莢膜多糖，以及第四綴合物包括與載體蛋白綴合的血清群c的純化的腦膜炎奈瑟球菌莢膜多糖，其中載體蛋白選自白喉類毒素、crm197和破傷風(fēng)類毒素。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法包括施用mcv4組合物，其中載體蛋白是白喉類毒素。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括施用menactra疫苗。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括施用mcv4組合物，其中載體蛋白為crm197。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括施用menveo疫苗。menveo[腦膜炎球菌(群a、c、y和w-135組)寡糖白喉crm197綴合疫苗]是一種無(wú)菌液體疫苗，通過(guò)肌內(nèi)注射施用，含有分別綴合至白喉棒狀桿菌crm197蛋白的腦膜炎奈瑟球菌血清群a、c、y和w-135寡糖。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括施用mcv4組合物，其中載體蛋白是破傷風(fēng)類毒素。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括施用nimenrix疫苗。
在一個(gè)實(shí)施方案中，與施用免疫原性組合物之前在人中的效價(jià)相比，該方法提高針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a，c，w-135和/或y的效價(jià)至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。在另一個(gè)實(shí)施方案中，與在施用免疫原性組合物之前在人中的效價(jià)相比，該方法提高針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a，c，w-135和y的效價(jià)至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。在另一個(gè)實(shí)施方案中，與在施用免疫原性組合物之前在人中的效價(jià)相比，該方法提高針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌腦膜炎奈瑟球菌血清群a，c，w-135和y以及血清群b的效價(jià)至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。
另一方面，本發(fā)明涉及一種在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b菌株誘導(dǎo)免疫應(yīng)答和針對(duì)破傷風(fēng)、白喉和百日咳的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺病毒免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌和殺病毒的免疫應(yīng)答。該方法包括向人施用有效量的腦膜炎奈瑟球菌rlp2086組合物，所述組合物包含a)具有seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，和b)具有seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽；以及包括破傷風(fēng)和白喉類毒素和百日咳抗原的另外的組合物，優(yōu)選吸附在磷酸鋁上。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括施用adacel疫苗。
在一個(gè)實(shí)施方案中，與施用免疫原性組合物之前在人中的效價(jià)相比，所述方法增加至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多倍的針對(duì)破傷風(fēng)，白喉和/或百日咳的效價(jià)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，與在施用免疫原性組合物之前在人中的效價(jià)相比，所述方法增加至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多的針對(duì)破傷風(fēng)，白喉和百日咳的效價(jià)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，與在施用免疫原性組合物之前在人中的效價(jià)相比，該方法增加了至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多的針對(duì)破傷風(fēng)，白喉和百日咳，腦膜炎奈瑟球菌血清群a，c，w-135和y和血清群b的效價(jià)。
一方面，本發(fā)明涉及在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b菌株、針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a，c，y和w135菌株以及針對(duì)破傷風(fēng)，白喉和百日咳的免疫應(yīng)答的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺病毒免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌和殺病毒的免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括伴隨施用rlp2086組合物、menactra和adacel疫苗。
一方面，本發(fā)明涉及在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群b菌株、針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌血清群a，c，y和w135菌株以及針對(duì)破傷風(fēng)，白喉和百日咳和進(jìn)一步針對(duì)人類乳頭瘤病毒的免疫應(yīng)答的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺病毒免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌和殺病毒的免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括伴隨施用rlp2086組合物，menactra和adacel疫苗。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括伴隨施用rlp2086組合物，menactra，adacel和gardasil疫苗。
本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物可以與針對(duì)人乳頭瘤病毒(hpv)的免疫原性組合物一起施用，而不會(huì)對(duì)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的殺菌應(yīng)答產(chǎn)生不利影響。如實(shí)施例7和實(shí)施例8中所解釋的，在用針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和gardasil的免疫原性組合施用和用針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和鹽水的免疫原性組合物施用的人中觀察到大量對(duì)腦膜炎奈瑟球菌測(cè)試菌株的hsba應(yīng)答。在第三劑量的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物約1個(gè)月后觀察到hsba應(yīng)答的額外增加。
此外，本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，與施用組合物之前在人中的免疫應(yīng)答相比，在施用針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物和針對(duì)hpv的免疫原性組合物兩者之后，在人中產(chǎn)生穩(wěn)健的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和hpv兩者的免疫應(yīng)答。如在實(shí)施例7和實(shí)施例8中所解釋的，與施用免疫原性組合物之前在人中的效價(jià)相比，在施用針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和gardasil免疫原性組合物后，在人中針對(duì)hpv的效價(jià)增加。針對(duì)hpv的效價(jià)的增加至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。
因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫應(yīng)答，其中所述方法還包括向人施用針對(duì)人乳頭瘤病毒的免疫原性組合物。優(yōu)選地，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌具有殺菌作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括誘導(dǎo)針對(duì)hpv的免疫應(yīng)答。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法還包括誘導(dǎo)針對(duì)人類6型、11型、16型和18型乳頭瘤病毒或其任何組合中的至少一種的免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，在施用所述針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的組合物24小時(shí)內(nèi)向人施用針對(duì)hpv的免疫原性組合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括在人中誘導(dǎo)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫應(yīng)答，其中所述方法還包括向人施用針對(duì)hpv的免疫原性組合物。優(yōu)選地，免疫應(yīng)答針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌具有殺菌作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括誘導(dǎo)針對(duì)hpv的免疫應(yīng)答。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法還包括誘導(dǎo)針對(duì)人類6型、11型、16型和18型乳頭瘤病毒或其任何組合中的至少一種的免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，在施用所述針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的組合物24小時(shí)內(nèi)向人施用針對(duì)人乳頭瘤病毒的免疫原性組合物。
另一方面，本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物可以與針對(duì)白喉，破傷風(fēng)，無(wú)細(xì)胞百日咳和滅活的脊髓灰質(zhì)炎病毒(dtap)的免疫原性組合物一起施用，而不會(huì)對(duì)針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的殺菌應(yīng)答產(chǎn)生不利影響。如實(shí)施例4所解釋的，在用針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和repevax的免疫原性組合物施用的人中觀察到大量對(duì)腦膜炎奈瑟球菌測(cè)試菌株的hsba應(yīng)答。在第三劑量的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物約1個(gè)月后觀察到hsba應(yīng)答的額外增加。
此外，本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，與施用組合物之前在人中的免疫應(yīng)答相比，在施用針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌的免疫原性組合物和針對(duì)dtap的免疫原性組合物兩者之后，在人中產(chǎn)生了穩(wěn)健的針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和dtap的免疫應(yīng)答。如在實(shí)施例4中所解釋的，與施用免疫原性組合物之前在人中的效價(jià)相比，在施用針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和repevax免疫原性組合物后，在人中針對(duì)dtap的效價(jià)增加。針對(duì)dtap的效價(jià)的增加至少大于1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或更多。
方法與施用
一方面，本發(fā)明涉及在人中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺病毒免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括殺菌和殺病毒的免疫應(yīng)答。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫應(yīng)答包括滅活細(xì)菌和/或病毒。
另一方面，本發(fā)明涉及疫苗接種人的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括向人施用至少一劑量的上述組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括向人施用至少第一劑量和第二劑量的上述組合物。
出乎意料的是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，rlp2086組合物的兩劑量方案在人中誘導(dǎo)針對(duì)不同異源亞科a和針對(duì)不同異源亞科b菌株的殺菌效價(jià)。例如，按照上述組合物的兩劑量方案，對(duì)于表達(dá)lp2086(fhbp)a22或lp2086(fhbp)a56的sba測(cè)試菌株，hsba效價(jià)≥1:8的人的百分比為90％或更高。參見(jiàn)實(shí)施例1。
在一個(gè)實(shí)施方案中，第二劑量在第一劑量后至少20、30、50、60、100、120、160、170或180天，并且在第一劑量后至多250、210、200或190天施用。任何最小值可以與本文所述的任何最大值組合以定義范圍。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二劑量在第一劑量后約30天施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二劑量在第一劑量后約60天施用，例如在0、2個(gè)月的免疫方案中施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二劑量在第一劑量后約180天施用，例如在0、6個(gè)月的免疫方案中施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二劑量在第一劑量后約120天施用，例如在2、6個(gè)月的免疫方案中施用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括向人施用兩個(gè)劑量的組合物并且至多兩個(gè)劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，兩次劑量在第一劑量后約6個(gè)月的時(shí)間段內(nèi)施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法不包括向人進(jìn)一步施用加強(qiáng)劑。本文所用的“加強(qiáng)劑”是指向人額外施用組合物。向人施用至多兩個(gè)劑量的組合物可能是有利的。這樣的優(yōu)點(diǎn)包括，例如，促進(jìn)人遵守完整的施用方案并促進(jìn)方案的成本效益。
在一個(gè)實(shí)施方案中，第一劑量和第二劑量在約25、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200天，以及最多400、390、380、370、365、350、340、330、320、310、3300、290、280、270、260、250、240、230、220、210或200天的時(shí)間段上向人施用。任何最小值可以與本文所述的任何最大值組合以定義范圍。
在一個(gè)實(shí)施方案中，在約30天的時(shí)間段內(nèi)向人施用第一劑量和第二劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在約60天的時(shí)間段內(nèi)向人施用第一劑量和第二劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在約180天的時(shí)間段內(nèi)向人施用第一劑量和第二劑量。
三個(gè)劑量
本發(fā)明人進(jìn)一步出乎意料地發(fā)現(xiàn)，rlp2086組合物的三劑量方案針對(duì)表達(dá)異源lp2086(fhbp)亞科b菌株的菌株比二劑量方案在更大百分比的人群中誘導(dǎo)更廣泛的殺菌效價(jià)。例如，按照上述組合物的兩劑量方案，對(duì)于sba測(cè)試菌株lp2086(fhbp)b24和lp2086(fhbp)b44，hsba效價(jià)≥1:8的人的百分比為65％或更高。按照上述組合物的三劑量方案，對(duì)于sba測(cè)試菌株b24和b44，hsba效價(jià)≥1:8的人的百分比為86％或更高。參見(jiàn)實(shí)施例1。
因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物的三劑量方案比兩劑量方案在更大百分比的人中誘導(dǎo)針對(duì)第一和/或第二多肽表達(dá)lp2086(fhbp)的多種菌株的殺菌效價(jià)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括向人施用三個(gè)劑量的組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括施用至多三個(gè)劑量的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，三個(gè)劑量在第一劑量后約6個(gè)月的時(shí)間段內(nèi)施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括在第三劑量后向人施用加強(qiáng)劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法不包括在第三劑量后向人施用加強(qiáng)劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法沒(méi)有進(jìn)一步包括向人施用第四或加強(qiáng)劑量的組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在約6個(gè)月的時(shí)間段內(nèi)向人施用至多三個(gè)劑量。
在示例性實(shí)施方案中，第二劑量在第一劑量后約30天施用，第三劑量在第二劑量后約150天施用，例如在0、1、6個(gè)月的免疫方案中施用。在另一個(gè)示例性實(shí)施方案中，第二劑量在第一劑量后約60天施用，第三劑量在第二劑量后約120天施用，例如在0、2、6個(gè)月的免疫方案中施用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，在約150、160、170或180天，最多240、210、200或190天的時(shí)間段上向人施用第一劑量、第二劑量和第三劑量。任何最小值可以與本文所述的任何最大值組合以定義范圍。優(yōu)選地，在約180天或6個(gè)月的時(shí)間段上向人施用第一劑量、第二劑量和第三劑量。例如，可以在第一劑量后約60天向人施用第二劑量，并且可以在第二劑量后約120天向人施用第三劑量。因此，示例性施用方案包括在約0、2和6月向人施用一個(gè)劑量。
如上所述，可以向人施用多個(gè)劑量的免疫原性組合物，并且每個(gè)劑量之間的天數(shù)可以變化。該方法的優(yōu)點(diǎn)包括例如人可以靈活遵守施用方案。
實(shí)施例
以下實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案。除非另有說(shuō)明，否則在以下實(shí)施例中提及研究性二價(jià)重組疫苗(rlp2086)，其是組合物的優(yōu)選示例性實(shí)施方案，所述組合物包含每0.5ml劑量60μg的包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽，每0.5ml劑量60μg包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽，聚山梨酯80與第一多肽的摩爾比為2.8，聚山梨酯80與第二多肽的摩爾比為2.8，0.5mgal3+/ml組合物，10mm組氨酸和150mm氯化鈉。更具體地，該研究性二價(jià)重組rlp2086疫苗包括(a)60μg包含seqidno：1所示氨基酸序列的第一脂化多肽；(b)60μg包含seqidno：2所示氨基酸序列的第二脂化多肽；(c)18μg聚山梨酯80；(d)250μg鋁；(e)780μg組氨酸，(f)4380μg氯化鈉。每個(gè)劑量為0.5ml。
實(shí)施例1：在11至18歲的健康受試者中以2或3個(gè)劑量的方案施用時(shí)，調(diào)查性腦膜炎球菌血清群b二價(jià)(mnb)rlp2086疫苗在健康青少年中的安全性、耐受性和免疫原性
背景：在11-18歲的健康青少年中使用包括2或3次疫苗接種的5種劑量方案研究了調(diào)查性二價(jià)重組疫苗(rlp2086)的安全性、耐受性和免疫原性(表1)。
疫苗是配制成含有60μg純化的亞科a和60μg純化的亞科brlp2086蛋白，摩爾比2.8的聚山梨酯80和0.25mg的al3+如alpo4，10mm組氨酸緩沖鹽水，ph為6.0的0.5ml劑量。
鹽水被用作安慰劑，因?yàn)闆](méi)有已知的已證實(shí)的安全、免疫原性和有效的針對(duì)mnb的疫苗可以作為活性對(duì)照。生理鹽水溶液在0.5ml劑量中包含0.9％氯化鈉。
方法：在該2期、隨機(jī)分組、安慰劑對(duì)照、單盲研究中的所有受試者均在0、1、2和6個(gè)月參加了疫苗接種就診。對(duì)于盲法，當(dāng)沒(méi)有安排疫苗時(shí)，給予鹽水對(duì)照。使用表達(dá)lp2086(fhbp)fhbp變體a22、a56、b24和b44(即主要終點(diǎn)分析中的4種“主要(primary)hsba測(cè)試菌株”)的4種mnb測(cè)試菌株(與疫苗中的變體均不同)進(jìn)行使用人補(bǔ)體(hsba)的血清殺菌測(cè)定。評(píng)估了主動(dòng)不良事件(ae)、征集的局部和全身反應(yīng)和解熱用藥。
對(duì)于每種主要菌株在每個(gè)血液采樣時(shí)間點(diǎn)計(jì)算幾何平均hsba效價(jià)與雙側(cè)95％置信區(qū)間(ci)。計(jì)算幾何平均倍數(shù)升高與95％ci。
應(yīng)答者被定義為hsba效價(jià)等于或高于hsba測(cè)定的定量下限(lloq)的受試者。在主要終點(diǎn)分析中，4種hsba測(cè)試菌株中的每一個(gè)的lloq是等于1:8的hsba效價(jià)。每種主要測(cè)試菌株的檢測(cè)限(lod)為等于1:4的效價(jià)(被廣泛視為與保護(hù)免受腦膜炎球菌病相關(guān))。
結(jié)果：在最后一次疫苗劑量后1個(gè)月，86-99％的受試者(3個(gè)劑量后，p<0.001)和69-100％的受試者(2個(gè)劑量后)對(duì)每種mnb測(cè)試菌株的hsba效價(jià)≥8。研究劑量1后，按組分別有19-27％(1.1-4.3％嚴(yán)重)和23-27％(0.0-1.0％嚴(yán)重)rlp2086受體發(fā)生發(fā)紅和腫脹。注射部位疼痛是研究劑量1后最常見(jiàn)的局部反應(yīng)(7.6-13.1％嚴(yán)重)。第一研究劑量的二價(jià)rlp2086疫苗后，按組發(fā)生發(fā)熱≥38℃，發(fā)生率為3.3-6.5％，而鹽水接受者為2.1％。局部和全身反應(yīng)在劑量1之后通常比后續(xù)劑量之后更常見(jiàn)。1712名受試者中有43人(2.5％)報(bào)告了51例嚴(yán)重不良事件；2例被認(rèn)為相關(guān)(1例眩暈、寒戰(zhàn)和頭痛，1例發(fā)燒和嘔吐)。沒(méi)有報(bào)告死亡。
表1
表.每種主要菌株在最后一次劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥8*的可評(píng)估研究受試者的比例的統(tǒng)計(jì)分析-可評(píng)估免疫原性群體
＊所有菌株的定量下限＝8。
結(jié)論：二價(jià)rlp2086具有可接受的安全特征。所有5種給藥方案在高比例受試者中針對(duì)所有4種測(cè)試菌株產(chǎn)生hsba效價(jià)≥8。與2個(gè)劑量相比，3個(gè)劑量后的一些測(cè)試菌株的比例較高，表明3個(gè)劑量可以為對(duì)抗多種mnb臨床菌株提供最廣泛的保護(hù)。二價(jià)rlp2086疫苗正在進(jìn)行全球三期臨床試驗(yàn)。
本研究的目標(biāo)之一是評(píng)估如在組1受試者(0-，1-和6-個(gè)月的方案，隨機(jī)分組)中和組2受試者(0-，2-和6-個(gè)月的方案，隨機(jī)分組)中通過(guò)使用表達(dá)lp2086亞科a和b蛋白的mnb菌株在用二價(jià)rlp2086第三次接種后1個(gè)月進(jìn)行的hsba測(cè)量的免疫應(yīng)答。免疫原性分析的終點(diǎn)是對(duì)于4種主要mnb測(cè)試菌株(a22、a56、b24和b44)中每一種，組1和組2中在第7個(gè)月(或第三劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月)達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例。對(duì)于4種主要mnb測(cè)試菌株，lloq為1:8。
對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，組1中達(dá)到hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例為91.7％(a22)，99.4％(a56)，89.4％(b24)，以及88.5％(b44)(參見(jiàn)上面的表1)。由于所有菌株的97.5％ci的下限均>50％(菌株a22、a56、b24和b44分別為87.8％，p<0.001；97.8％，p<0.001；84.7％，p<0.001和84.1％，p<0.001)，組1的受試者滿足研究目標(biāo)。
對(duì)于組2，3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，達(dá)到hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例為95.0％(a22)，98.9％(a56)，88.4％(b24)，86.1％(b44)(見(jiàn)上表1)。與組1所見(jiàn)相似，所有菌株的97.5％ci的下限均>50％(菌株a22、a56、b24和b44分別為91.7％，p<0.001；96.9％，p<0.001；84.1％，p<0.001和81.4％，p<0.001)，這表明組2中的受試者也滿足目標(biāo)。
次要目標(biāo)是評(píng)估如在組3受試者(0-和6個(gè)月的方案，隨機(jī)分組)中通過(guò)使用表達(dá)lp2086亞科a和b蛋白的mnb菌株在第二劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月進(jìn)行的hsba測(cè)量的免疫應(yīng)答。該次要目標(biāo)是對(duì)于4種主要mnb測(cè)試菌株中的每一種，組3中在第7個(gè)月(或第二劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月)達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq(1:8)的受試者比例。
該次要目標(biāo)也得到滿足，因?yàn)樵?個(gè)劑量的rlp2086后，組3中達(dá)到hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例對(duì)于主要mnb測(cè)試菌株為93.5％，98.4％，81.1％和77.5％，其中所有菌株的97.5％ci的下限均>50％(菌株a22、a56、b24和b44分別為90.0％，p<0.001；96.2％，p<0.001；76.0％，p<0.001；和72.2％，p<0.001，見(jiàn)上表1)。
另一個(gè)次要目標(biāo)是在組1至5受試者的每個(gè)采血時(shí)間點(diǎn)的4種主要mnb測(cè)試菌株中的每一種的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例。4種主要hsba測(cè)試菌株中的每一種的lloq是1:8的效價(jià)。對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，按照研究時(shí)間的hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例顯示在上表1中。
1個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后(組5[2個(gè)月和6個(gè)月的方案]，注射3后1個(gè)月)的hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例為55.9％(a22)，67.6％(a56)，56.9％(b24)，以及23.8％(b44)。
2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后一個(gè)月hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例，亞科a菌株為
實(shí)施例2：使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定(hsba)
mnb從人血流中的清除主要通過(guò)補(bǔ)體介導(dǎo)的溶菌作用實(shí)現(xiàn)，完整的補(bǔ)體系統(tǒng)對(duì)于抗mnb引起的感染是重要的。通過(guò)使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定(hsba)在體外模擬體內(nèi)補(bǔ)體介導(dǎo)的mnb的溶菌，功能性血清學(xué)測(cè)定顯示其是保護(hù)免受腦膜炎球菌疾病侵害的替代物(surrogate)。也就是說(shuō)，使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定(hsba)中的細(xì)菌殺傷的證明與防止免受腦膜炎球菌疾病侵害相關(guān)。使用針對(duì)4種mnb菌株(fhbp變體a22、a56、b24和b44)的hbba測(cè)定由疫苗引起的免疫力。
在實(shí)施例中描述的hsba中使用四種主要mnb測(cè)試菌株用于測(cè)定終點(diǎn)。也就是說(shuō)，這些菌株用于使用hsba免疫原性終點(diǎn)來(lái)估計(jì)疫苗功效。這些測(cè)試菌株代表了在美國(guó)和歐洲流行的占疾病分離物＞90％的6種fhbp系統(tǒng)發(fā)育亞群中的4種。
2014年10月29日，
在從入侵性疾病分離物中選擇4種主要mnb測(cè)試菌株時(shí)，采用考慮了體外lp2086表面表達(dá)的群體分布的方法。此外，hsba測(cè)試菌株必須顯示低基線hsba陽(yáng)性，因?yàn)樘幱谀X膜炎球菌病風(fēng)險(xiǎn)的群體的特征在于對(duì)大多數(shù)菌株具有不存在或低基線殺菌活性。此外，4種主要mnb測(cè)試菌株中的每一種表達(dá)lp2086變體，其不同于疫苗中的lp2086變體，因此允許客觀評(píng)估在群體中流行的侵襲性腦膜炎球菌疾病(imd)菌株的功能性免疫原性和功效。
hsba測(cè)量能啟動(dòng)補(bǔ)體介導(dǎo)的殺菌活性的血清中抗腦膜炎球菌血清群b(mnb)抗體的量。簡(jiǎn)言之，將測(cè)試血清以2倍的步驟連續(xù)稀釋并加入到96孔測(cè)定板中。加入mnbsba測(cè)試菌株和人血清補(bǔ)體，開(kāi)始?xì)⒕鷳?yīng)答。在37℃下孵育測(cè)定板30-60分鐘(取決于sba測(cè)試菌株(稱為t30))后，將含有在該孵育中存活的細(xì)菌的反應(yīng)混合物稀釋并轉(zhuǎn)移至微孔濾板。過(guò)夜孵育后，使用immunospot分析儀計(jì)數(shù)以菌落形成單位(cfu)表達(dá)的存活細(xì)菌。原始cfu數(shù)據(jù)以電子方式記錄，并轉(zhuǎn)移到計(jì)算hsba效價(jià)的數(shù)據(jù)分析應(yīng)用程序。hsba效價(jià)是測(cè)試血清最高2倍稀釋度的倒數(shù)，與t30cfu值(即，在含有除測(cè)試血清以外的所有測(cè)定組分的測(cè)定孔中孵育后存活細(xì)菌的數(shù)量；100％細(xì)菌存活)相比，所述測(cè)試血清導(dǎo)致mnb細(xì)菌至少降低50％(50％細(xì)菌存活)。效價(jià)可以報(bào)告為逐步的效價(jià)(steptiter)，即1:4、1:8、1:16等。血清樣品通過(guò)在相同測(cè)定中的兩次單獨(dú)的重復(fù)測(cè)定來(lái)測(cè)試。對(duì)于其中重復(fù)測(cè)量不相同的樣品報(bào)告的最終效價(jià)是當(dāng)滿足系統(tǒng)適用性和樣品適合性標(biāo)準(zhǔn)(例如，一個(gè)2倍稀釋度中的重復(fù)效價(jià)必須一致)時(shí)，兩次重復(fù)測(cè)量中較低者。
在dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水中連續(xù)稀釋測(cè)試血清后進(jìn)行hsba測(cè)定。將細(xì)菌(約2000個(gè)菌落形成單位)和人血清補(bǔ)體(終濃度為20重量％)加入到96孔板中的連續(xù)稀釋的血清中，并在37℃下在小半徑軌道振蕩器中以700rpm孵育30-40分鐘(取決于hsba測(cè)試菌株)。孵育后，將一部分反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至微孔濾板。孵育過(guò)夜后，用immunospot分析儀(cellulartechnologylimited；shakerheights，oh，usa)計(jì)數(shù)存活的細(xì)菌，并用sas(9.2版)分析hsba效價(jià)。計(jì)算hsba效價(jià)是內(nèi)插測(cè)試血清稀釋度的倒數(shù)，導(dǎo)致與未經(jīng)測(cè)試血清的對(duì)照相比細(xì)菌減少了50％(即hsba應(yīng)答結(jié)束時(shí)存活的細(xì)菌)。按照操作方案，hsba是基于hsba效價(jià)完成的，所述hsba效價(jià)等于或高于在實(shí)施例1的表1中列出的菌株的測(cè)定鑒定期間確定的hsba測(cè)定的定量下限。
人血清是sba的補(bǔ)體來(lái)源。然而，hsba效價(jià)可能會(huì)取決于所使用的人補(bǔ)體批次而變化。因此，人的補(bǔ)體優(yōu)選通過(guò)嚴(yán)格的篩選和鑒定來(lái)控制，以確保在hsba中的一致性能。對(duì)于hsba，人血清補(bǔ)體可以從多個(gè)正常健康成年人匯集或者從個(gè)體供體使用(即未匯集)。
實(shí)施例3-聚山梨酯80
已經(jīng)針對(duì)藥物產(chǎn)品配制優(yōu)化了三個(gè)參數(shù)：ph，鋁濃度和聚山梨酯80(ps-80)與蛋白質(zhì)的摩爾比。在總體積為0.5ml的一個(gè)劑量的組合物中，在約6.0的ph和約0.5mg/ml濃度的鋁如磷酸鋁(alpo4)(其相當(dāng)于每個(gè)劑量0.25mg鋁)。ps-80與蛋白質(zhì)的摩爾比保持在2.8±1.4，以便相對(duì)于體外功效使制劑穩(wěn)定。將聚山梨酯80(ps-80)加入到藥物物質(zhì)中以獲得2.8的目標(biāo)ps-80與蛋白質(zhì)的摩爾比。因此，優(yōu)選在藥物產(chǎn)品配制期間不加入ps-80。
實(shí)施例4
與二價(jià)rlp2086疫苗伴隨施用的
背景/目的：評(píng)估被開(kāi)發(fā)用于預(yù)防青少年腦膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)疾病的研究性二價(jià)rlp2086疫苗，并伴隨施用目前在該人群中使用的
方法：在0、2和6個(gè)月給青少年(1：1隨機(jī)分組至repevax+rlp2086或repevax+鹽水)接種疫苗。測(cè)定初次疫苗接種后30天達(dá)到9種repevax抗原預(yù)先確定抗體水平的受試者比例。在疫苗接種2和3后30天測(cè)量對(duì)4種mnb測(cè)試菌株的免疫應(yīng)答(hsba)。評(píng)估不良事件(ae)和局部/全身反應(yīng)。
repevax(sanofipasteurmsdlimited)是一種組合低劑量白喉、破傷風(fēng)、無(wú)細(xì)胞百日咳和滅活的脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗，其每0.5ml劑量含有白喉類毒素(不低于2iu)，破傷風(fēng)類毒素(不低于20iu)，百日咳抗原(百日咳類毒素(2.5微克)，絲狀血凝素(5微克)，粘附素(3微克)和2型和3型菌毛(5微克)))，脊髓灰質(zhì)炎病毒(滅活)1型(40d抗原單位)，脊髓灰質(zhì)炎病毒(滅活)2型(8d抗原單位)，脊髓灰質(zhì)炎病毒(滅活)3型(32d抗原單位)，吸附在磷酸鋁(1.5mg(0.33mg鋁))上。
使用多重luminex測(cè)定評(píng)估了對(duì)repevax(白喉類毒素，破傷風(fēng)類毒素，百日咳類毒素，粘附素，2型和3型菌毛和絲狀血凝素)的白喉、破傷風(fēng)和百日咳成分的免疫應(yīng)答。在病毒中和測(cè)定中測(cè)量對(duì)1、2型和3型脊髓灰質(zhì)炎病毒的免疫應(yīng)答。在這兩種測(cè)定中使用從兩組中的所有受試者獲得的血清。
為了評(píng)估對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答，在hsba中用描述的4種主要的mnb測(cè)試菌株分析了功能性抗體。選擇四種主要mnbhsba測(cè)試菌株(a22，a56，b44和b24)，2種表達(dá)lp2086亞科a，另外2種表達(dá)lp2086亞科b變體。這4種主要hsba測(cè)試菌株(來(lái)自6種fhbp系統(tǒng)發(fā)育亞群中的4種，并且代表在美國(guó)和歐洲流行的＞90％的疾病分離物)用于確定本研究中的主要免疫原性終點(diǎn)。此外，a22，b24和b44變體在歐洲是流行病學(xué)相關(guān)的變體，而在美國(guó)，a22和b24是發(fā)現(xiàn)在mnb菌株引起的疾病中表達(dá)的最普遍的變體。在測(cè)試用于主要和次要分析的樣品之前，驗(yàn)證mnbhsba。
來(lái)自兩組隨機(jī)選擇受試者中50％的血清樣品均用a22和b24進(jìn)行hsba檢測(cè)，其余50％用a56和b44測(cè)試。這些測(cè)試是對(duì)疫苗接種1之前，疫苗接種2之后和疫苗接種3之后收集的血液樣品進(jìn)行的。
repevax的免疫原性通過(guò)使用形成repevax許可基礎(chǔ)的青少年中關(guān)鍵三期臨床試驗(yàn)中定義的每種抗原的預(yù)先規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估。repevax伴隨抗原包括白喉、破傷風(fēng)、百日咳類毒素，百日咳絲狀血凝素，百日咳粘附素，2+3型百日咳菌毛凝集原，1型脊髓灰質(zhì)炎病毒，2型脊髓灰質(zhì)炎病毒，3型脊髓灰質(zhì)炎病毒。例外是2+3型百日咳菌毛凝集原(fim)，在用于repevax許可的測(cè)定中定義了≥5eu/ml的效價(jià)。在本研究中，2+3型百日咳f(wàn)im測(cè)定的定量下限(lloq)≥10.6eu/ml，比repevax的許可標(biāo)準(zhǔn)更高，因此更嚴(yán)格。
伴隨抗原的lloq為0.037iu/ml(白喉類毒素)；0.05iu/ml(破傷風(fēng)類毒素)；0.9eu/ml(百日咳類毒素)；2.9eu/ml(百日咳絲狀血凝素)，3.0eu/ml(百日咳粘附素)；10.6eu/ml(2+3型百日咳菌毛凝集原)；1:8(1型脊髓灰質(zhì)炎病毒，2型脊髓灰質(zhì)炎病毒，3型脊髓灰質(zhì)炎病毒)。
主要目標(biāo)的附加描述性終點(diǎn)是在疫苗接種1后(就診2)以幾何平均效價(jià)(gmt)或幾何平均濃度(gmc)測(cè)量的抗伴隨疫苗抗原的抗體。
另一終點(diǎn)是對(duì)于4種主要mnb測(cè)試菌株中的每一種，在疫苗接種3后(就診6)，hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例。
伴隨疫苗抗原。對(duì)于組1和組2，在白喉、破傷風(fēng)和百日咳無(wú)細(xì)胞(dtap)-ipv(repevax)疫苗接種后1個(gè)月達(dá)到預(yù)先規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的伴隨疫苗抗原的受試者比例用雙側(cè)95％確切(或clopper-pearson置信限)進(jìn)行計(jì)算。還計(jì)算比例的差異(二價(jià)rlp2086/dtap-ipv-dtap-ipv或組1-組2)以及差異的雙側(cè)95％確切ci。如果dtap-ipv疫苗的所有9種抗原的差異的雙側(cè)95％ci的下限大于-0.10(-10％)，則宣布非劣性。
用主要測(cè)試菌株進(jìn)行hsba。對(duì)于每個(gè)主要的mnbhsba測(cè)試菌株，在每個(gè)血液采樣時(shí)間點(diǎn)，描述性概括達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq，≥1:4，≥1:8，≥1:16和≥1:128的受試者的數(shù)量和比例，以及比例的確切的雙側(cè)95％ci(或clopper-pearson置信限)。
結(jié)果：749名隨機(jī)分組的受試者中，685名(91.5％)包括可評(píng)估免疫原性群體。repevax+rlp2086或repevax+生理鹽水后免疫應(yīng)答對(duì)所有9種repevax抗原均為非劣的。對(duì)二價(jià)rlp2086疫苗的免疫應(yīng)答在2個(gè)劑量后是顯著的，并且在3個(gè)劑量后進(jìn)一步增強(qiáng)(表2)。輕度至中度注射部位疼痛是最常見(jiàn)的局部反應(yīng)；頭痛和疲勞是最常見(jiàn)的全身事件。在疫苗接種后30天內(nèi)報(bào)告ae的受試者比例相似(repevax+rlp2086和repevax+鹽水分別為8.8％和11.4％)。
對(duì)于伴隨疫苗可評(píng)估免疫原性群體，，repevax劑量后1個(gè)月，達(dá)到預(yù)先規(guī)定抗伴隨疫苗抗原的抗體水平(應(yīng)答閾值)的受試者比例在二價(jià)rlp2086+repevax組和單獨(dú)repevax組之間對(duì)于伴隨疫苗抗原是相似的：白喉類毒素(每組99.4％)，破傷風(fēng)類毒素(每組100％)，百日咳類毒素(分別為94.7％和96.0％)，百日咳絲狀血凝素(每組100％)，百日咳粘附素(每組100％)，2+3型百日咳菌毛凝集原(分別為97.6％和98.9％)，1型脊髓灰質(zhì)炎病毒(每組100％)，2型脊髓灰質(zhì)炎病毒(每組100％)，3型脊髓灰質(zhì)炎病毒(100％在每組)。
實(shí)現(xiàn)了非劣性，因?yàn)樵趓epevax劑量后1個(gè)月，二價(jià)rlp2086+repevax組(組1)和單獨(dú)repevax組(組2)之間的應(yīng)答者比例差異的雙側(cè)95％ci的下限對(duì)于repevax中的9種抗原大于-0.10(-10％)(即，比例差異的95％ci的最低下限為-4.7％(百日咳類毒素)。因此，給予repevax與二價(jià)rlp2086誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答不比單獨(dú)使用repevax誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答差。
評(píng)估了4種主要mnb測(cè)試菌株中的每一種對(duì)于疫苗接種3后可評(píng)估免疫原性群體的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例。a22的lloq是等于1:16的hsba效價(jià)，而所有其他mnb測(cè)試菌株的lloq是等于1:8的hsba效價(jià)。
對(duì)于組1，基線(疫苗接種1之前)hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例為14.4％(主要mnb菌株a22)，18.2％(a56)，12.7％(b24)，以及6.2％(b44)。對(duì)于組2，基線(疫苗接種1之前)hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例為23.0％(主要mnb菌株a22)，21.8％(a56)，12.9％(b24)，以及6.3％(b44)。
在劑量2的二價(jià)rlp2086之后，觀察到組1受試者的大量hsba應(yīng)答，疫苗接種3后1個(gè)月3個(gè)劑量后觀察到額外增加。對(duì)于組1(二價(jià)rlp2086+repevax)，在疫苗接種2后1個(gè)月和疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例為81.1％和95.6％(a22)，97.3％和100％(a56)，81.0％和96.8％(b24)，以及55.5％和81.5％(b44)。雖然僅在兩個(gè)二價(jià)rlp2086劑量后實(shí)現(xiàn)了大量hsba應(yīng)答，但與3個(gè)劑量(疫苗接種3后1個(gè)月)相比，2個(gè)劑量(疫苗接種2后1個(gè)月)后hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例增加，這例證了3個(gè)劑量后的免疫應(yīng)答增強(qiáng)。在對(duì)照組(組2)中，在疫苗接種2后1個(gè)月和疫苗接種3后1個(gè)月4種主要mnb測(cè)試菌株中每一種的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例與每種mnb測(cè)試菌株的基線hsba結(jié)果(疫苗接種1之前)相似。
對(duì)于4種主要mnb測(cè)試菌株，組1中表現(xiàn)出限定的hsba效價(jià)的受試者比例在3個(gè)劑量后大于2個(gè)劑量后。描述了達(dá)到≥1:16的hsba效價(jià)的受試者，因?yàn)樵撔r(jià)是從1:4效價(jià)(效價(jià)≥1:4被廣泛認(rèn)為與保護(hù)免受imd侵害相關(guān))提高4倍。對(duì)于組1，在疫苗接種2后1個(gè)月時(shí)hsba效價(jià)為1:16的受試者比例為81.8％(a22)，97.3％(a56)，68.0％(b24)，以及53.4％(b44)。疫苗接種后1個(gè)月，hsba效價(jià)為1:16的受試者比例為95.6％(a22)，100％(a56)，87.3％(b24)，以及79.5％(b44)。
在對(duì)照組(組2)中，在疫苗接種2后1個(gè)月和疫苗接種3后1個(gè)月，4種主要mnb測(cè)試菌株中的每一種顯示出限定的hsba效價(jià)的受試者比例與具有限定的hsba效價(jià)的基線受試者比例(疫苗接種1之前)相似。
對(duì)于組1，3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，hsba效價(jià)為1:16的受試者比例表明，當(dāng)施用3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086時(shí)，疫苗引起穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
hsba幾何平均效價(jià)(gmt)。一般來(lái)說(shuō)，兩組的基線gmt低于hsba的lloq。對(duì)于組1，疫苗接種2后1個(gè)月的hsbagmt為35.5(a22)，91.1(a56)，15.9(b24)，以及14.6(b44)。疫苗接種3后1個(gè)月的hsbagmt為63.4(a22)，151.5(a56)，28.3(b24)，以及36.5(b44)。
對(duì)于組1，亞科a菌株的2個(gè)劑量后以及亞科b菌株的3個(gè)劑量后觀察到的gmt均表現(xiàn)出穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
評(píng)估了顯示a22、a56、b24和b44的hsba效價(jià)分布的反向累積分布曲線(rcdc)。組1中的rcdc的結(jié)果顯示，在二價(jià)rlp2086的疫苗接種2之后，組1受試者中觀察到大量免疫應(yīng)答；然而，這些圖還顯示了第三劑量的二價(jià)rlp2086的益處，因?yàn)楦蟊壤氖茉囌攉@得更高的針對(duì)4種mnb測(cè)試菌株的效價(jià)。對(duì)于菌株b44，效果最明顯。
結(jié)論：當(dāng)伴隨給予二價(jià)rlp2086時(shí)，repevax誘導(dǎo)不比單獨(dú)使用repevax引起的免疫應(yīng)答差的免疫應(yīng)答。二價(jià)rlp2086疫苗針對(duì)四種不同的mnb測(cè)試菌株、特別是代表亞科b的那些菌株誘導(dǎo)了穩(wěn)健的殺菌應(yīng)答，在3個(gè)劑量之后比2個(gè)劑量更大。一般而言，伴隨施用安全且耐受性好。
實(shí)施例5
研究性腦膜炎球菌血清群b二價(jià)rlp2086疫苗在健康青少年中的免疫原性
背景和目的：腦膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)引起嬰兒，青少年和成年人的侵襲性疾病。一種保守的，表面暴露的脂蛋白lp2086(因子h結(jié)合蛋白[fhbp])是一種有希望的mnb疫苗靶標(biāo)。在健康青少年(11-18歲)研究了研究性二價(jià)重組疫苗(rlp2086)的安全性和免疫原性。
方法：將該安慰劑對(duì)照、單盲研究中的受試者隨機(jī)分為兩個(gè)3劑量方案和三個(gè)2劑量方案。每個(gè)120μg劑量含有2種rlp2086抗原，1種來(lái)自每個(gè)lp2086亞科(a和b)。當(dāng)沒(méi)有安排疫苗時(shí)，給予鹽水。用4種mnb測(cè)試菌株(與疫苗fhbp異源)進(jìn)行使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定(hsba)。
結(jié)果：1713例受試者(平均年齡14.4歲)隨機(jī)分組。在3個(gè)劑量的疫苗一個(gè)月后，分別在95-99％和86-89％的受試者中觀察到亞科a和b菌株的hsba效價(jià)≥8；2個(gè)劑量后，這些數(shù)字分別為91-100％和69-77％的受試者。在2劑量方案中，0和6個(gè)月誘導(dǎo)最高的抗體應(yīng)答(實(shí)施例5的表1)。4種mnb異源測(cè)試菌株的2個(gè)劑量后的hsbagmt范圍為6.2-125.6，3個(gè)劑量后的范圍為25.6-155.6。輕度至中度注射部位疼痛是最常見(jiàn)的局部反應(yīng)。在劑量1后，分別在3.3-6.5％和2.1％的rlp2086和鹽水接受者中發(fā)生發(fā)熱≥38℃。
表1.達(dá)到每種菌株在最后一次劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月hsba效價(jià)≥8*的受試者比例
hsba＝使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定。
*所有菌株的定量下限＝8。
表2.每種菌株在最后一次劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月hsbagmt
gmt＝幾何平均效價(jià)；hsba＝使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定。
*使用在給定時(shí)間點(diǎn)的所有具有有效和確定的hsba效價(jià)的受試者計(jì)算gmt。
結(jié)論：rlp2086耐受良好。所有給藥方案產(chǎn)生穩(wěn)健的殺菌應(yīng)答，在3個(gè)劑量后最顯著。
實(shí)施例5的表1與上述實(shí)施例1的表1相同。表2總結(jié)了可評(píng)估免疫原性群體按照研究時(shí)間的hsbagmt和相應(yīng)的ci。gmt從基線(注射1之前)增加，并且隨后續(xù)劑量的二價(jià)rlp2086繼續(xù)增加。
對(duì)于4種主要mnb菌株，3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086(組1和2)之后的gmt比在2個(gè)劑量(組3、4和5)之后更大。兩個(gè)3劑量組之間的gmt相似，三個(gè)2劑量組之間的gmt相似。
注射1之前(基線)，組1、2、3、4和5的hsbagmt分別如下：a22分別為7.1、6.3、6.4、6.4和6.8；a56分別為6.8、6.1、6.7、6.3和6.2；b24分別為5.3、5.1、5.0、4.9和5.1；以及b44分別為4.4、4.5、4.5、4.6和4.4。
對(duì)于組1(0-，1-和6個(gè)月)，所有4種主要mnb菌株在劑量2后1個(gè)月后，注意到gmt的顯著增加(a22、a56、b24和b44分別為24.4、77.3、13.8和13.1)。對(duì)于4種主要mnb測(cè)試菌株，組1受試者3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，gmt進(jìn)一步增加；55.1(a22)；152.96(a56)；29.1(b24)；以及40.3(b44)。
對(duì)于組2，在2個(gè)和3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，注意到gmt的類似增加。對(duì)于a22，組2受試者在2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后的gmt為32.9(a22)；94.6(a56)；14.9(b24)；以及15.5(b44)。3個(gè)劑量后，gmt增加到56.3(a22)；155.6(a56)；25.6(b24)；以及35.0(b44)。
對(duì)于組1和組2，亞科a菌株的2個(gè)劑量后以及亞科b菌株的3個(gè)劑量后觀察到的gmt值均表現(xiàn)出穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
對(duì)于組3，1個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，觀察到gmt的微小增加如下：a22為12.0；a56為18.5；b24為9.2；以及b44為5.7。2個(gè)劑量后，gmt增加到48.4(a22)；125.6(a56)；20.6(b24)；以及22.5(b44)。
對(duì)于組4，在1個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，gmt為13.3(a22)；17.7(a56)；9.8(b24)；以及5.9(b44)。在2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，gmt為37.1(a22)；104.9(a56)；17.7(b24)；以及19.1(b44)。
對(duì)于組5，在1個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，gmt為16.0(a22)；26.8(a56)；12.6(b24)；以及6.8(b24)。在2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，gmt增加到39.6(a22)；111.8(a56)；14.7(b24)；以及17.8(b44)。
綜合考慮，對(duì)于組3、4和5，觀察到的gmt指示了2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后亞科a和b菌株的免疫應(yīng)答。
總之，3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086提供了基于4種主要mnb測(cè)試菌株的hsba效價(jià)的穩(wěn)健且最廣泛的免疫應(yīng)答。與2個(gè)劑量相比，接受3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086的達(dá)到針對(duì)4種主要mnb測(cè)試菌株的hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例更高。
按照0-，1-和6個(gè)月給藥方案的結(jié)果(組1)與按照0-，2-和6個(gè)月給藥方案的結(jié)果(組2)相似。對(duì)于組1和2，劑量3后達(dá)到的gmt值高于劑量2后的gmt值。對(duì)于組1和組2，亞科a菌株的劑量2后gmt值范圍為24.4至94.6，亞科b菌株為13.1至15.5。亞科a菌株的劑量3后gmt值范圍為55.1至155.6，亞科b菌株為25.6至40.3。對(duì)于組1和組2，與2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后達(dá)到針對(duì)4種主要mnb測(cè)試菌株的hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例相比，在3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，達(dá)到針對(duì)4種主要mnb測(cè)試菌株的hsba效價(jià)≥1:8的受試者比例更高。
還評(píng)估了達(dá)到≥1:16的hsba效價(jià)的受試者。對(duì)于組1，2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后一個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的受試者百分比為73.5％(a22)；96.3(a56)；57.6(b24)；以及47.2％(b44)。3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的組1受試者的百分比為91.4％(a22)；99.5％(a56)；82.8％(b24)；以及84.8％(b44)。
對(duì)于組2，2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的受試者百分比為88.1％(a22)；97.9％(a56)；63.5％(b24)；以及58.6％(b44)。3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的組2受試者的百分比為95.0％(a22)；98.9％(a56)；83.6％(b24)；以及83.8％(b44)。
對(duì)于組1和組2，3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的受試者百分比表明疫苗引起了穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
對(duì)于組3，2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后達(dá)到≥1:16的hsba效價(jià)的受試者百分比為93.2％(a22)；98.4％(a56)；73.8％(b24)；以及70.8％(b44)。
對(duì)于組4，2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的受試者百分比為90.8％(a22)；99.2％(a56)；67.1％(b24)；以及64.5％(b44)。
對(duì)于組5，2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后達(dá)到≥1:16的hsba效價(jià)的受試者百分比為91.0％(a22)；99.1％(a56)；64.5％(b24)；以及66.7％(b44)。
對(duì)于組3、4和5，達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的受試者百分比表明，疫苗僅在2個(gè)劑量后引起對(duì)亞科a菌株的穩(wěn)健免疫應(yīng)答。然而，3個(gè)劑量增加了對(duì)亞科b菌株的應(yīng)答的穩(wěn)健性。
3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的受試者百分比顯示，疫苗對(duì)表達(dá)與疫苗組分不同的lp2086變體的mnb菌株引起了穩(wěn)健且廣泛的免疫應(yīng)答。
還對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體、每種菌株按組評(píng)估了按照研究時(shí)間顯示hsba效價(jià)分布的反向累積分布曲線(rcdc)。rcdc在2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后針對(duì)亞科a菌株顯示出穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。在第三劑量的二價(jià)rlp2086之后，應(yīng)答曲線下的面積對(duì)于所有4種主要mnb測(cè)試菌株增加，從而證明3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后免疫應(yīng)答的增加。
主要和次要免疫原性終點(diǎn)分析的結(jié)果表明，疫苗可以產(chǎn)生針對(duì)mnb的異源亞科a和亞科b變體具有顯著hsba活性的抗體。雖然在2或3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，達(dá)到hsba效價(jià)≥1:8的受試者的比例更高，但在1個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后1個(gè)月，大部分受試者的hsba效價(jià)≥1:8。參見(jiàn)例如組5。
對(duì)于4種主要mnb測(cè)試菌株，3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086(組1和2)之后的gmt比在2個(gè)劑量(組3、4和5)之后更大。兩個(gè)3劑量組的gmt相似。三個(gè)2劑量組之間的gmt也相似。這些數(shù)據(jù)還顯示了基于達(dá)到hsba效價(jià)≥1:16的受試者百分比的3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后的穩(wěn)健的hsba應(yīng)答。
這些數(shù)據(jù)表明，二價(jià)rlp2086的最終制劑產(chǎn)生穩(wěn)健的免疫應(yīng)答，當(dāng)以2或3個(gè)劑量給藥時(shí)，其安全且耐受良好。即便是1個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086也提供了高于基線的大量免疫應(yīng)答，并且也是安全且耐受良好的?？傮w來(lái)說(shuō)，2或3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，安全性方面沒(méi)有明顯的臨床意義上的差異。
實(shí)施例6
腦膜炎球菌血清群b二價(jià)rlp2086疫苗在三個(gè)二期、隨機(jī)分組、對(duì)照研究中在11-18歲健康青少年中的安全性，耐受性和免疫原性
背景：腦膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)是青少年中侵襲性腦膜炎球菌病的主要原因。保守的表面暴露的脂蛋白lp2086(因子h結(jié)合蛋白[fhbp])是保護(hù)免受mnb引起的侵入性疾病的有希望的疫苗靶標(biāo)。在對(duì)于11-18歲健康青少年的三個(gè)2期、隨機(jī)分組、對(duì)照研究中進(jìn)行了檢查了研究性二價(jià)重組mnb疫苗(包括seqidno：1和seqidno：2，摩爾比為2.8的聚山梨酯80，0.5mg/ml鋁，10mm組氨酸和150mm氯化鈉，在整個(gè)實(shí)施例中稱為“二價(jià)rlp2086”)的安全性，耐受性和免疫原性。
方法：研究1012檢查了二價(jià)rlp2086的5種疫苗方案，而研究1010和1011分別評(píng)估了與tdap-ipv和hpv疫苗伴隨給予的二價(jià)rlp2086疫苗的3劑量方案。每個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086含有60μg的rlp2086亞科a變體a05和60μg的rlp2086亞科b變體b01。為了檢查三個(gè)研究中每一個(gè)的二價(jià)rlp2086的免疫原性，使用表達(dá)異源fhbp變體a22、a56、b24和b44的4種mnb測(cè)試菌株進(jìn)行使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定(hsba)，這些菌株被選擇為代表fhbp變異性的相關(guān)多樣性，以及提供針對(duì)表達(dá)流行病學(xué)流行的fhbp變體的菌株的疫苗引發(fā)的免疫應(yīng)答的廣度的觀點(diǎn)。評(píng)估不良事件和征集的局部和全身反應(yīng)。
結(jié)果：在所有3項(xiàng)研究中，82-100％的受試者在劑量3后1個(gè)月達(dá)到高于4種mnb測(cè)試菌株中每一種的定量下限(lloq)的hsba效價(jià)(表)。在三項(xiàng)研究中，大多數(shù)全身事件和局部反應(yīng)的嚴(yán)重程度輕微至中度；不良事件一般不嚴(yán)重或與研究疫苗有關(guān)。
結(jié)論：高于1:4的血清殺菌抗體效價(jià)可防止免受侵襲性腦膜炎球菌病侵害。在這些青少年2期研究中每一項(xiàng)研究中，針對(duì)4種mnb測(cè)試菌株(每種與疫苗抗原異源)的hsba效價(jià)≥lloq的證明表明，二價(jià)rlp2086疫苗提供了可能針對(duì)多種mnb疾病相關(guān)菌株的廣泛活性的功能性抗體應(yīng)答。二價(jià)rlp2086的疫苗接種通常耐受良好。
表.達(dá)到由每種測(cè)試菌株表達(dá)的每種fhbp變體在最后一次劑量的二價(jià)rlp2086疫苗后1個(gè)月hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例
lloq＝定量下限；fhbp＝因子h結(jié)合蛋白；hsba＝使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定；tdap-ipv疫苗＝破傷風(fēng)、白喉、百日咳、脊髓灰質(zhì)炎疫苗。
lloq＝樣品中可被定量測(cè)定的最低量的分析物?！?:4的hsba效價(jià)是保護(hù)免受侵襲性腦膜炎球菌疾病侵害的相關(guān)因素?！輑loq的hsba效價(jià)高于最小相關(guān)因素。lloq為1:16(a22)以及1:8(a56，b24，以及b44)。
實(shí)施例7
當(dāng)與人乳頭瘤病毒疫苗伴隨施用時(shí)腦膜炎球菌血清群b二價(jià)rlp2086疫苗在11-18歲的健康青少年中的免疫原性
該2期、隨機(jī)分組、觀察者盲、對(duì)照研究在≥11至<18歲的健康青少年中評(píng)估了與
方法：受試者在第0，第2和第6個(gè)月接受二價(jià)rlp2086(包括seqidno：1和seqidno：2，摩爾比為2.8的聚山梨酯80，0.5mg/ml鋁，10mm組氨酸和150mm氯化鈉)+hpv4(組1)，二價(jià)rlp2086+鹽水(組2)或者h(yuǎn)pv4+鹽水(組3)。使用4種mnb測(cè)試菌株使用人補(bǔ)體進(jìn)行血清殺菌測(cè)定(hsba)測(cè)試了來(lái)自疫苗接種1之前和疫苗接種2和3后1個(gè)月的血清，所述菌株每種表達(dá)與疫苗組分異源的fhbp(a22，a56，b44和b24)，代表fhbp多樣性的廣度以及流行病學(xué)流行。評(píng)估的終點(diǎn)包括具有hsba效價(jià)≥下限定量(lloq；1:16[a22]或1:8[a56，b44，b24])和hsba幾何平均效價(jià)(gmt)的受試者比例。
為了證明與單獨(dú)的gardasil相比，給予gardasil加二價(jià)rlp2086的非劣性，使用代表亞科a變體的1個(gè)主要測(cè)試菌株(a22)和代表亞科b變體的1個(gè)主要測(cè)試菌株(b24)，使用2個(gè)hsba進(jìn)行免疫原性評(píng)估。然而，所有4種主要mnb測(cè)試菌株用于測(cè)定額外的二價(jià)rlp2086免疫原性/功效探索性終點(diǎn)。
為了評(píng)估對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答，如實(shí)施例2所述，隨機(jī)選擇輝瑞代表性的mnbsba菌株庫(kù)的腦膜炎球菌血清群b菌株在hsba中分析功能性抗體。hsba測(cè)量人血清中的功能性抗體，其在補(bǔ)體依賴方式殺死目標(biāo)腦膜炎球菌株。
結(jié)果：814和812名受試者分別包括組1和組2的可評(píng)估免疫原性群體。與疫苗接種1之前相比，疫苗接種2(55％-99％)和3(83％-99％；圖1)后所有4種測(cè)試菌株的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例更高。實(shí)施例7的表a顯示了可評(píng)估免疫原性群體按照取樣時(shí)間點(diǎn)4種主要mnb菌株中的每一種的hsbagmt和相應(yīng)的ci。兩組的基線gmt低于hsballoq。組1和組2在疫苗接種1后，gmt范圍分別為11.1-70.6和11.9-76.3，疫苗接種2后分別為25.8-117.2和28.0-128.2(下表a)。
對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，在疫苗接種3后1個(gè)月組1和組2的3個(gè)二價(jià)rlp2086劑量針對(duì)2種主要mnb菌株的hsbagmt分別如下：a22分別為53.3和57.8，b24分別為25.8和28.0。
對(duì)于組2(二價(jià)rlp2086+鹽水)，在疫苗接種2后1個(gè)月hsbagmt如下：a22為33.7，a56為76.3，b24為16.3，以及b44為11.9。疫苗接種3后1個(gè)月的hsbagmt如下：a22為57.8，a56為128.2，b24為28.0，以及b44為31.9。
對(duì)于組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)，在疫苗接種2后1個(gè)月hsbagmt如下：a22為31.9，a56為70.6，b24為15.0，以及b44為11.1。在疫苗接種3后2個(gè)月hsbagmt如下：a22為53.3，a56為117.2，b24為25.8，以及b44為27.2。
對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，評(píng)估了在所有取樣時(shí)間點(diǎn)顯示a22、a56、b24和b44的hsba效價(jià)分布的反向累積分布曲線(rcdc)。rcdc顯示大多數(shù)受試者在疫苗接種2后應(yīng)答，并且在疫苗接種3之后對(duì)4種主要mnb測(cè)試菌株的效價(jià)進(jìn)一步增加。對(duì)于組1和組2，對(duì)抗原的免疫應(yīng)答是相似的。
結(jié)論：二價(jià)rlp2086可與hpv4一起施用，不影響hsba血清應(yīng)答或gmt評(píng)估的殺菌應(yīng)答。由于hsba效價(jià)≥1:4與保護(hù)免受腦膜炎球菌疾病侵害相關(guān)，這些數(shù)據(jù)表明，在伴隨施用hpv疫苗的情況下施用二價(jià)rlp2086后，青少年對(duì)廣泛范圍的mnb菌株有保護(hù)作用。
表a.hsbagmt–可評(píng)估免疫原性群體
gmt＝幾何平均效價(jià)；hpv4＝四價(jià)人乳頭瘤病毒疫苗；hsba＝使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定。
an＝對(duì)于給定菌株具有有效和確定的hsba效價(jià)的受試者數(shù)量。
b在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)使用所有具有有效和確定的hsba效價(jià)的受試者計(jì)算幾何平均效價(jià)。
c置信區(qū)間是基于hsba效價(jià)平均對(duì)數(shù)的studentt分布的置信區(qū)間的反向變換。
實(shí)施例8
在健康青少年中與針對(duì)腦膜炎球菌血清群b的二價(jià)rlp2086疫苗共同施用的人乳頭瘤疫苗的免疫原性
背景：該2期隨機(jī)分組研究評(píng)估了針對(duì)人乳頭狀瘤病毒(hpv4)的四價(jià)疫苗與二價(jià)rlp2086(針對(duì)由腦膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)引起的侵襲性疾病的研究性疫苗)在年齡≥11至<18歲的健康青少年中的共同施用。
方法：受試者在第0、2和6個(gè)月時(shí)接受hpv4+二價(jià)rlp2086(組1)，二價(jià)rlp2086+鹽水(組2)或鹽水+hpv4(組3)。在基線和劑量2和3后在所有組中收集血清。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性luminex免疫測(cè)定(clia)測(cè)定對(duì)hpv4抗原(hpv-6、11、16和18)的免疫應(yīng)答。通過(guò)用表達(dá)疫苗異源fhbp變體的2種mnb測(cè)試菌株(a22和b24)使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定法(hsba)測(cè)量二價(jià)rlp2086的免疫原性。均在劑量3之后的免疫原性終點(diǎn)包括：組1和組3中針對(duì)hpv抗原的幾何平均效價(jià)(gmt)；組1和2中表達(dá)變體a22和b24的菌株的hsbagmt；和組1和組3基線血清陰性受試者中hpv抗原的血清轉(zhuǎn)化率。在與hpv4或鹽水伴隨施用后，還評(píng)估了二價(jià)rlp2086的安全性。
使用基于熒光標(biāo)記的基于微球的平臺(tái)(luminex)的clia進(jìn)行對(duì)gardasil(hpv6型、11型、16型和18型l1蛋白)的免疫應(yīng)答的評(píng)估。在使用gardasil進(jìn)行第一次疫苗接種之前(就診1)和使用gardasil(就診5)進(jìn)行第三次疫苗接種后1個(gè)月從組1和組3的所有受試者獲得的血清用于這些測(cè)定。
組1和組3對(duì)4種hpv抗原的gmt比較，以及其對(duì)應(yīng)的組1與3組的gmt比(gmr)和比率的雙側(cè)95％ci列于本實(shí)施例后面的表a。非劣性邊界的標(biāo)準(zhǔn)為1.5倍，其對(duì)應(yīng)于gmr的雙側(cè)95％ci的下限值為0.67。所有mnb測(cè)試菌株和除hpv-18(其95％置信區(qū)間(ci)下限為0.62)之外的hpv抗原均滿足0.67的1.5倍標(biāo)準(zhǔn)。在分開(kāi)的分析中，≥99％的受試者在鹽水+hpv4和rlp2086+hpv4兩組中血清轉(zhuǎn)化所有4種hpv抗原。
本研究的另一個(gè)目標(biāo)是描述由二價(jià)rlp2086+gardasil(組1)和鹽水+gardasil(組3)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答，如通過(guò)在兩組中疫苗接種3劑gardasil后(就診5)的hpv免疫原性測(cè)定中血清轉(zhuǎn)化所測(cè)量的。
在組1和組3基線時(shí)hpv血清陰性的受試者的最后一次劑量gardasil后1個(gè)月，4種hpv抗原中的每一種的血清轉(zhuǎn)化率計(jì)算為具有抗hpv血清clia水平hpv-6為≥20mmu/ml，hpv-11為≥16mmu/ml，hpv-16為≥20mmu/ml，hpv-18為≥24mmu/ml的受試者的比例。
基線hpv陰性血清陰性受試者的數(shù)量和比例達(dá)到4種hpv抗原血清轉(zhuǎn)化的預(yù)先規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，每組具有相應(yīng)的95％ci，比例的百分比差異(組1-組3)和差異的95％ci在實(shí)施例8的表b中給出了基線hpv-血清陰性可評(píng)估免疫原性群體。
結(jié)果：4種hpv抗原中的3種(不是hpv-18)和兩種mnb測(cè)試菌株，滿足預(yù)先規(guī)定的1.5倍的非劣性標(biāo)準(zhǔn)(gmr的95％ci的下限為0.67)(表a)。組1和組3中所有hpv抗原的血清轉(zhuǎn)化率均≥99％(表b)。rlp2086之后與鹽水相比發(fā)生更大的局部反應(yīng)原性，但沒(méi)有增加后續(xù)劑量；注射部位疼痛是最常見(jiàn)的局部反應(yīng)。一般而言，所有3組的全身事件的嚴(yán)重程度輕微和中度。
對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，組1和組3在gardasil劑量疫苗接種3后1個(gè)月時(shí)抗4種hpv抗原的抗體的gmt分別如下：451.8和550.3(hpv-6)；892.9和1084.3(hpv-11)；3695.4和4763.4(hpv-16)；以及744.0和1047.4(hpv-18)。在gardasil劑量疫苗接種3后1個(gè)月時(shí)組1與組3的gmr對(duì)于hpv-6(95％ci：0.72,0.94)為0.82，對(duì)于hpv-11(95％ci：0.74,0.91)為0.82，對(duì)于hpv-16(95％ci：0.68,0.88)為0.78，以及對(duì)于hpv-18(95％ci：0.62,0.81)為0.71。因此，與組3相比，組1的抗hpvgmr的雙側(cè)95％ci的下限對(duì)于hpv6為0.72，對(duì)于hpv-11為0.74，對(duì)于hpv-16為0.68，以及對(duì)于hpv-18為0.62。除hpv-18(95％ci的下限為0.62)外，所有hpv抗原均滿足0.67(gmr雙側(cè)95％ci的下限)的1.5倍標(biāo)準(zhǔn)。
疫苗接種3個(gè)二價(jià)rlp2086劑量后1個(gè)月的二價(jià)rlp2086+gardasil組與二價(jià)rlp2086+鹽水組的gmr值對(duì)于a22為0.92(95％ci：0.85,1.00)，以及對(duì)于b24為0.92(95％ci：0.84，1.01)。與組2相比，組1的hsbagmr的雙側(cè)95％ci的下限對(duì)于a22為0.85和對(duì)于b24為0.84，二者均大于0.67，因此滿足1.5倍的非劣性邊界。
通過(guò)分析2個(gè)主要mnb菌株(a22和b24)在疫苗接種3后1個(gè)月時(shí)的hsba效價(jià)4倍應(yīng)答率，將二價(jià)rlp2086+gardasil(組1)施用的數(shù)據(jù)與來(lái)自二價(jià)rlp2086+鹽水(組2)施用的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。對(duì)于接受二價(jià)rlp2086+gardasil的組1受試者和接受二價(jià)rlp2086+鹽水的組2受試者，測(cè)量了2種主要mnb菌株從基線到疫苗接種3后1個(gè)月的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例。在組1的受試者中，85.3％的針對(duì)b24的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4。在組2的受試者中，86.4％的針對(duì)a22的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4，84.8％的針對(duì)b24的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4。
在疫苗接種后1個(gè)月組1與2組之間在應(yīng)答者比例中的差異對(duì)于a22為-1.1％(95％ci：-4.6,2.3)，對(duì)于b24為-1.4％(95％ci：-5.1,2.3)。4倍應(yīng)答率的差異均接近1％的值，比例差異的95％ci的下限對(duì)于a22為-4.6％，并且對(duì)于b24為-5.1％。
二價(jià)rlp2086+gardasil與鹽水+gardasil相比或與二價(jià)rlp2086+鹽水相比的非劣性標(biāo)準(zhǔn)要求所有4種hpv抗原(hpv-6，hpv-11，hpv-16和hpv-18)的抗hpv抗體的gmr以及在疫苗接種3后1個(gè)月使用2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(a22和b24)的hsba效價(jià)的雙側(cè)95％ci的下限大于0.67。對(duì)于兩種mnb測(cè)試菌株和4種hpv抗原中的至少3種，滿足了該預(yù)先規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于hpv-18，gmr的雙側(cè)ci的下限略低于0.67的預(yù)設(shè)閾值，為0.62。
在接受二價(jià)rlp2086+gardasil的組與接受二價(jià)rlp2086+鹽水的組之間，對(duì)2種主要mnb測(cè)試菌株(a22和b24)的4倍升高應(yīng)答相似(范圍為83.4％至86.4％)。
對(duì)于菌株a22，組1和2中疫苗接種前(即疫苗接種1之前)hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例分別為15.2％和18.8％；對(duì)于菌株a56分別為10.4％和10.5％；對(duì)于菌株b24分別為6.1％和8.4％以及對(duì)于菌株b44分別為1.7％和3.2％。此外，對(duì)于a22型菌株，組2和組1中疫苗接種前(即疫苗接種1之前)hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例分別為13.7％和16.4％；對(duì)于菌株a56分別為9.0％和9.1％；對(duì)于菌株b24分別為4.1％和5.4％，以及對(duì)于菌株b44分別為1.2％和2.1％。
在組2(二價(jià)rlp2086+鹽水)中，疫苗接種2后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例如下：a22為86.3％，a56為98.7％，b24為77.1％，以及b44為60.1％。疫苗接種3后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例如下：a22為96.4％，a56為99.4％，b24為92.8％，以及b44為86.5％。在組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)中，疫苗接種2后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例如下：a22為83.8％，a56為97.8％，b24為71.9％，以及b44為57.7％。疫苗接種3后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例如下：a22為94.3％，a56為99.1％，b24為91.1％，以及b44為84.4％。
在組2(二價(jià)rlp2086+鹽水)中，疫苗接種2后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:16的受試者如下：a22為85.8％，a56為98.4％，b24為68.8％，以及b44為49.9％。疫苗接種3后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:16的受試者如下：a22為96.3％，a56為99.4％，b24為89.2％，以及b44為82.4％。在組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)中，疫苗接種2后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例如下：a22為83.0％，a56為97.2％，b24為65.2％，以及b44為46.4％。疫苗接種3后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例如下：a22為94.0％，a56為98.9％，b24為86.3％，以及b44為78.0％。
對(duì)于組1和組2，高比例的受試者在2或3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后達(dá)到≥1:16或更高的hsba效價(jià)，而大多數(shù)受試者在疫苗接種前就診1時(shí)對(duì)于任何主要mnb測(cè)試菌株沒(méi)有可測(cè)量的hsba效價(jià)。
對(duì)于基線hpv-血清陰性可評(píng)估免疫原性群體，二價(jià)rlp2086+gardasil組(組1)和鹽水+gardasil組(組3)在疫苗接種3的gardasil劑量后1個(gè)月達(dá)到hpv抗原的hpv血清轉(zhuǎn)化的預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)的受試者比例如下：hpv-6(分別為99.4％和99.3％)，hpv-11(分別為99.6％和99.5％)，hpv-16(分別為99.6％和99.5％)，以及hpv-18(分別為99.5％和99.0％)。
gardasil劑量后1個(gè)月，二價(jià)rlp2086+gardasil組(組1)和鹽水+gardasil組(組3)之間的應(yīng)答者的比例差異對(duì)于hpv-6為0.1％(95％ci；-0.9,1.5)，對(duì)于hhpv-11為0.1％(95％ci：-0.7,1.3)，對(duì)于hpv-16為0.1％(95％ci為-0.7,1.3)，以及對(duì)于hpv-18為0.5％(95％ci為-0.6，1.9)。
對(duì)于二價(jià)rlp2086+gardasil組(組1)和鹽水+gardasil組(組3)，所有4種hpv抗原的血清轉(zhuǎn)化率差異均在0.1％和0.5％之間，血清轉(zhuǎn)化率在各組間非常相似，超過(guò)99％的受試者血清轉(zhuǎn)化所有4種hpv抗原。
作為額外的評(píng)估，通過(guò)分析疫苗接種3后1個(gè)月2個(gè)主要mnb菌株(a22和b24)的hsba效價(jià)4倍的應(yīng)答率，將二價(jià)rlp2086+gardasil(組1)與二價(jià)rlp2086+鹽水(組2)進(jìn)行比較。達(dá)到從基線到疫苗接種3后1個(gè)月2個(gè)主要mnb菌株的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例如下：在組1的受試者中，85.3％表現(xiàn)出針對(duì)測(cè)試菌株a22的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4，83.4％表現(xiàn)出針對(duì)測(cè)試菌株b24的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4。在組2的受試者中，86.4％表現(xiàn)出針對(duì)測(cè)試菌株a22的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4，84.8％表現(xiàn)出針對(duì)測(cè)試菌株b24的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4。
疫苗接種3后1個(gè)月組1與組2之間應(yīng)答者比例差異對(duì)于a22為-1.1％(95％ci：-4.6,2.3)，對(duì)于b24為-1.4％(95％ci：-5.1,2.3)。4倍應(yīng)答率差異均接近1％，比例差異95％ci的下限為-4.6％(a22)和-5.1％(b24)。
對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答。本研究的另一個(gè)目標(biāo)是描述通過(guò)用4個(gè)主要mnb測(cè)試菌株，2個(gè)表達(dá)lp2086亞科a蛋白(a22和a56)和2個(gè)表達(dá)lp2086亞科b蛋白(b24和b44)的hsba測(cè)量的免疫應(yīng)答，第二次就診(就診3)和第三次(就診5)用二價(jià)rlp2086疫苗接種后1個(gè)月測(cè)量。
該目標(biāo)的一個(gè)終點(diǎn)是在疫苗接種2(就診3)后1個(gè)月和疫苗接種3(就診5)后1個(gè)月，4個(gè)主要mnb測(cè)試菌株中的每一種的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例。評(píng)估了四種主要mnb測(cè)試菌株對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例。a22的lloq是等于1:16的hsba效價(jià)，而所有其他mnb測(cè)試菌株的lloq為等于1:8的hsba效價(jià)。
對(duì)于組2(二價(jià)rlp2086+鹽水)，基線(疫苗接種1之前)的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例如下：a22為16.4％，a56為9.3％，b24為6.9％，以及b44為2.5％。對(duì)于組2，在疫苗接種2后1個(gè)月和疫苗接種3后1個(gè)月后達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例如下：a22分別為85.8％和96.3％，a56分別為98.5％和99.4％，b24分別為74.2％和92.6％，以及b44分別為57.1％和85.7％。
對(duì)于組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)，基線(疫苗接種1之前)hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例如下：a22為13.7％，a56為9.2％，b24為5.1％，b44為1.4％。對(duì)于組1，在疫苗接種2后1個(gè)月和疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例如下：a22分別為83.0％和94.0％，a56分別為97.5％和98.9％，b24分別為70.6％和90.5％；以及b44分別為54.5％和82.7％。
在疫苗接種2后1個(gè)月，觀察到1組和組2受試者對(duì)4種主要mnb測(cè)試菌株的大量hsba應(yīng)答，疫苗接種3后1個(gè)月觀察到額外增加。
評(píng)估了達(dá)到對(duì)四種主要mnb測(cè)試菌株中每一種的hsba效價(jià)升高≥4的受試者比例以及達(dá)到可評(píng)價(jià)免疫原性群體的復(fù)合應(yīng)答的受試者比例。在基線(疫苗接種1之前)組合的所有4種mnb菌株觀察到的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例在組1(0.3％)和組2(0.7％)之間是相似的。
對(duì)于組2(二價(jià)rlp2086+鹽水)，從基線至疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例如下：a22為86.4％，a56為95.3％，b24為84.8％，b44為80.7％，并且83.9％的受試者達(dá)到復(fù)合hsba應(yīng)答(對(duì)于組合的所有4種主要菌株hsba≥lloq)。疫苗接種2后1個(gè)月，從基線達(dá)到hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例如下：a22為74.2％，a56為92.6％，b24為63.4％，b44為47.4％，并且51.9％的受試者達(dá)到復(fù)合hsba應(yīng)答。
對(duì)于組1(二價(jià)rlp2086+生理鹽水)，從基線至疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例如下：a22為86.4％，a56為95.3％，b24為84.8％，b44為80.7％，并且83.9％的受試者達(dá)到復(fù)合hsba應(yīng)答(對(duì)于所有組合的4種主要菌株hsba≥lloq)。疫苗接種2后1個(gè)月，從基線達(dá)到hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例如下：a22為74.2％，a56為92.6％，b24為63.4％，b44為47.4％，并且51.9％的受試者達(dá)到復(fù)合hsba應(yīng)答。
額外的hsba倍數(shù)應(yīng)答。其他終點(diǎn)是對(duì)于4個(gè)主要mnb菌株中的每一個(gè)，達(dá)到從基線到每個(gè)疫苗接種后血液取樣就診至少2倍和3倍hsba效價(jià)的受試者比例。注意，a22的lloq是等于1:16的hsba效價(jià)，而所有其他mnb測(cè)試菌株的lloq是等于1:8的hsba效價(jià)。
組1和組2的達(dá)到從基線至疫苗接種2后1個(gè)月對(duì)于mnb菌株的hsba效價(jià)≥2倍升高的受試者比例如下：a22分別為77.3％和81.1％，a56分別為94.4％和95.3％，b24分別為63.0％和66.0％；和b44分別為46.1％和48.6％。組1和組2的達(dá)到從基線至疫苗接種3后1個(gè)月對(duì)于mnb菌株的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥2的受試者比例如下：a22分別為90.2％和92.8％，a56分別為97.2％和97.9％，b24分別為84.6％和87.2％，以及b44分別為77.7％和81.7％。
組1和組2的達(dá)到從基線至疫苗接種2后1個(gè)月對(duì)于mnb菌株的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥3的受試者比例如下：a22分別為73.1％和74.2％，a56分別為92.5％和92.6％，b24分別為61.3％和63.4％和b44分別為45.7％和47.4％。組1和組2的達(dá)到從基線至疫苗接種3后1個(gè)月對(duì)于mnb菌株的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥3的受試者比例如下：a22分別為85.3％和86.4％，a56分別為95.0％和95.3％，b24分別為83.4％和84.8％，b44分別為77.0％和80.7％。
總結(jié)目標(biāo)描述性終點(diǎn)，組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)和組2(二價(jià)rlp2086+鹽水)的大多數(shù)受試者對(duì)于所有4種主要mnb測(cè)試菌株均為hsba效價(jià)≥lloq，而只有非常小比例的受試者在基線(疫苗接種之前就診1)時(shí)具有可測(cè)量的hsba效價(jià)≥lloq。在疫苗接種2后1個(gè)月觀察到具有4種mnb菌株的大量免疫應(yīng)答，在組1和組2受試者接種疫苗3后1個(gè)月觀察到額外增加。該結(jié)論由3個(gè)劑量后hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例，觀察到的兩組中2個(gè)劑量后和3個(gè)劑量后達(dá)到的gmt以及4種主要mnb測(cè)試菌株的rcdc證實(shí)。
對(duì)于組1和組2，高比例的受試者在第三次研究疫苗接種后，對(duì)于所有4種主要mnb菌株中的每一種的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4，復(fù)合hsba應(yīng)答≥lloq。
此外，大多數(shù)受試者在所有采樣時(shí)間點(diǎn)對(duì)于組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)和組2(二價(jià)rlp2086+鹽水)達(dá)到4個(gè)主要mnb菌株的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥2。滿足這些標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果的受試者比例在3次疫苗接種后比2次疫苗接種更高。
這些結(jié)果支持以下證據(jù)，當(dāng)與hpv疫苗gardasil共同施用時(shí)，對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答產(chǎn)生與對(duì)二價(jià)rlp2086+鹽水的免疫應(yīng)答相當(dāng)?shù)姆€(wěn)健的免疫應(yīng)答。
hpvgmt。實(shí)施例8的表b列出了在可評(píng)估免疫原性群體中，組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)和組3(鹽水+gardasil)的疫苗接種3后1個(gè)月的4種hpv抗原中的每一種的gmt和相應(yīng)的ci。
對(duì)于組3，基線(疫苗接種1之前)和疫苗接種3后1個(gè)月的hpvgmt如下：hpv-6分別為6.0和550.3；hpv-11分別為4.3和1084.3；6.1和4763.4；和hpv-18分別為5.3和1047.4。對(duì)于組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)，基線(疫苗接種1之前)和疫苗接種3后1個(gè)月的hpvgmt如下：hpv-6分別為5.8和451.8；hpv-11分別為4.2和892.9；hpv-16分別為5.8和3695.4；和hpv-18分別為5.2和744.0。總體而言，與組1相比，組3的gmt數(shù)值較高。針對(duì)組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)和組3(鹽水+gardasil)評(píng)估了在所有采樣時(shí)間點(diǎn)針對(duì)可評(píng)估免疫原性群體顯示hpv-6，hpv-11，hpv-16和hpv-18效價(jià)分布的反向累積分布曲線(rcdc)。對(duì)于組1和組3，rcdc在疫苗接種3后在受試者中顯示出穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
對(duì)gardasil的免疫應(yīng)答概述。與組1(二價(jià)rlp2086+gardasil)相比，組3(鹽水+gardasil)的對(duì)hpv抗原的gmt數(shù)值更高，疫苗接種3后觀察到的hpvgmt指示了兩組的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。rcdc也支持組1和組3接種疫苗3后的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。這一點(diǎn)也受到4種hpv抗原血清陽(yáng)性狀態(tài)的受試者比例的支持，兩組的接受疫苗接種3后1個(gè)月的受試者比例大于99％。在組3(鹽水+gardasil)中年齡較小的亞組比年齡較大的亞組具有更高的hpvgmt。當(dāng)gardasil與二價(jià)rlp2086伴隨給予時(shí)，這種差異得以保持。
免疫原性結(jié)論。二價(jià)rlp2086_gardasil與鹽水+gardasil相比或與二價(jià)rlp2086+鹽水相比的非劣性標(biāo)準(zhǔn)要求所有4種hpv抗原(hpv-6，hpv-11，hpv-16和hpv-18)的hpv抗體的幾何平均效價(jià)比(gmr)以及在疫苗接種3后1個(gè)月使用2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(a22和b24)的hsba效價(jià)的雙側(cè)95％ci的下限大于0.67。對(duì)于兩種mnb菌株和4種hpv抗原中的3種，滿足了該預(yù)先確定的閾值。對(duì)于hpv-18，gmr的雙側(cè)95％ci的下限略低于0.67的預(yù)設(shè)閾值，為0.62。
對(duì)于與二價(jià)rlp2086或鹽水伴隨接受gardasil的組的99％或更多受試者，達(dá)到了所有4種hpv抗原的血清轉(zhuǎn)化。所有4種hpv抗原的rcdc顯示，大多數(shù)受試者在接種疫苗3后1個(gè)月達(dá)到高于血清轉(zhuǎn)化閾值的應(yīng)答。對(duì)于接受gardasil的兩組，均觀察到相對(duì)于基線的穩(wěn)健的gmt。
在以下兩組之間，針對(duì)兩個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(a22和b24)的4倍升高應(yīng)答相似(范圍為83.4％至86.4％)：接受二價(jià)rlp2086+gardasil的組(分別為85.3％和83.4％)和接受二價(jià)rlp2086+鹽水的組(分別為86.4％和84.8％)。
使用4個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(a22、a56、b24和b44)進(jìn)一步描述性分析對(duì)二價(jià)rlp2086的應(yīng)答。對(duì)于接受二價(jià)rlp2086的兩組可評(píng)估免疫原性群體(與gardasil伴隨(二價(jià)rlp2086+gardasil)或者與鹽水伴隨(二價(jià)rlp2086+鹽水))，在疫苗接種2或3后1個(gè)月，高比例的受試者達(dá)到了hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4和復(fù)合應(yīng)答(所有4個(gè)主要mnb測(cè)試菌株和與3期臨床程序中使用的相同的免疫原性/功效終點(diǎn)定義)。這些應(yīng)答明顯高于hsba效價(jià)≥1:4，其已證明與保護(hù)免受腦膜炎球菌疾病(包括血清群b疾病)侵害相關(guān)。這些結(jié)果還表明并支持這樣的證據(jù)：無(wú)論是與鹽水還是與gardasil伴隨施用，對(duì)二價(jià)rlp2086產(chǎn)生穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
結(jié)論：數(shù)據(jù)表明，在伴隨施用rlp2086+hpv4后，產(chǎn)生對(duì)兩種疫苗的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。6種抗原中的5種符合預(yù)先規(guī)定的非劣性標(biāo)準(zhǔn)。雖然hpv-18的gmr較接近地錯(cuò)過(guò)了非劣性標(biāo)準(zhǔn)，但高比例的應(yīng)答者(≥99％)表明預(yù)計(jì)在伴隨施用后維持臨床有效性。二價(jià)rlp2086良好耐受，并引發(fā)了對(duì)表達(dá)與疫苗中那些異源的fhbp的測(cè)試菌株的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
表a.比較疫苗接種3后1個(gè)月的幾何平均效價(jià)(可評(píng)估免疫原性群體)
ci＝置信區(qū)間；gmt＝幾何平均效價(jià)；hpv＝人乳頭瘤病毒；hsba＝使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定；
lloq＝定量下限；na＝不適用。
注:lloq＝11mmu/ml(hpv-6),8mmu/ml(hpv-11)；11mmu/ml(hpv-16)；以及10mmu/ml(hpv-18)。lloq＝1:16(a22)；1:8(a56,b24,以及b44)。低于lloq的結(jié)果設(shè)為0.5*lloq用于分析。
a.n＝對(duì)于給定抗原或菌株具有有效和確定的hsba效價(jià)的受試者數(shù)量。
b.使用在疫苗接種3后1個(gè)月的所有具有有效和確定的測(cè)定結(jié)果計(jì)算幾何平均效價(jià)(gmt)。
c.置信區(qū)間(ci)是基于測(cè)定結(jié)果平均對(duì)數(shù)的studentt分布的置信水平的反向變換。
d.gmt之比(組1/組3為hpv抗原效價(jià)而組1/組2為hsba菌株效價(jià))。
e.比的置信區(qū)間(ci)是基于這些測(cè)量的對(duì)數(shù)的平均差異的studentt分布的置信區(qū)間的反向變換。(組1-組3(hpv效價(jià))和組1-組2(hsba菌株效價(jià)))。
表b.比較在疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到hpv血清轉(zhuǎn)化的受試者——基線hpv血清陰性可評(píng)估免疫原性群體
ci＝置信區(qū)間；hpv＝人乳頭瘤病毒。
a.n＝對(duì)于給定抗原具有基線hpv血清陰性狀態(tài)的受試者數(shù)量。
b.n＝對(duì)于給定抗原在疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到血清轉(zhuǎn)化(預(yù)先規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn))的受試者數(shù)量。
c.基于觀察到的受試者比例的確切的雙側(cè)置信區(qū)間(clopper和pearson)。
d.比例差異，以百分比表示。
e.比例差異的確切的雙側(cè)置信區(qū)間(基于chan&zhang)，以百分比表示。
實(shí)施例9：二價(jià)rlp2086疫苗功效
已經(jīng)使用hsba應(yīng)答作為功效替代物和對(duì)侵襲性腦膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)菌株的血清殺菌抗體應(yīng)答的證明來(lái)推斷二價(jià)rlp2086的功效。
在評(píng)估中使用了四種mnb菌株，代表引起侵襲性腦膜炎球菌病(imd)的菌株。每個(gè)mnb測(cè)試菌株表達(dá)與疫苗組分(a05和b01)異源(不同)的fhbp蛋白質(zhì)變體(a22，a56，b24或b44)。
在美國(guó)和歐洲的11至18歲的4,459名青少年中進(jìn)行的3項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照ii期研究中評(píng)估了二價(jià)rlp2086的療效。另見(jiàn)實(shí)施例6?？偣?,293名使用0個(gè)月、2個(gè)月和6個(gè)月疫苗接種方案接受至少1個(gè)劑量的120μg二價(jià)rlp2086。通過(guò)在用二價(jià)rlp2086接種的受試者中評(píng)估hsba免疫應(yīng)答來(lái)評(píng)估功效。
使用5個(gè)共同的主要免疫原性終點(diǎn)推斷功效。對(duì)于5個(gè)共同主要終點(diǎn)中的4個(gè)，預(yù)先規(guī)定比例的受試者在3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，在4個(gè)mnb測(cè)試菌株中的每一個(gè)中必須達(dá)到hsba效價(jià)的4倍升高。第五個(gè)共同主要終點(diǎn)是一個(gè)復(fù)合終點(diǎn)，其要求預(yù)先規(guī)定的高比例受試者在3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后，在用主要的mnb測(cè)試菌株所有4個(gè)hsba中各自應(yīng)答。還根據(jù)在第三劑量的疫苗后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥定量下限(lloq)的受試者比例評(píng)估免疫應(yīng)答。lloq定義為可測(cè)量樣品中抗體的最低量。
研究1(在實(shí)施例7和實(shí)施例8中描述)是ii期、隨機(jī)分組、活性對(duì)照、觀察者盲法、多中心試驗(yàn)，其中2499名11至17歲的受試者被隨機(jī)分配(以2:2:1比例)至3個(gè)組之一：組1接受二價(jià)rlp2086+hpv4，組2接受二價(jià)rlp2086+鹽水，組3接受鹽水+hpv4。所有的疫苗接種均以0個(gè)月、2個(gè)月和6個(gè)月的方案進(jìn)行。
研究2(實(shí)施例4中描述)是ii期，隨機(jī)分組，安慰劑對(duì)照，單盲試驗(yàn)，其中753名11至18歲的歐洲受試者以1：1的比例隨機(jī)分配至2組：組1在0個(gè)月、2個(gè)月和6個(gè)月接受二價(jià)rlp2086，在0個(gè)月接受dtap-ipv(白喉、破傷風(fēng)、無(wú)細(xì)胞百日咳-滅活的脊髓灰質(zhì)炎病毒)。組2在0個(gè)月、2個(gè)月和6個(gè)月時(shí)接受鹽水和在0個(gè)月接受dtap-ipv。
研究3(實(shí)施例5中所述)是ii期，隨機(jī)分組，安慰劑對(duì)照，單盲，多中心試驗(yàn)，其中1,713名11至18歲的歐洲受試者以3:3:3:2:1的比隨機(jī)分配至5個(gè)組。受試者接受2或3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086以0個(gè)月、1個(gè)月和6個(gè)月的方案(組1)；以0個(gè)月、2個(gè)月和6個(gè)月的方案(組2)；以0個(gè)月和6個(gè)月的方案(組3)；以0個(gè)月和2個(gè)月的方案(組4)；或以0個(gè)月和4個(gè)月的方案(組1)。在每組中施用鹽水注射(取決于組1或2個(gè)劑量)以維持盲法。
在上文各實(shí)施例4-8中描述了在0個(gè)月、2個(gè)月和6個(gè)月接受3-劑量的二價(jià)rlp2086系列的受試者中的研究1、2和3的結(jié)果。所有研究的4倍和復(fù)合應(yīng)答率的評(píng)估是探索性終點(diǎn)。4倍的應(yīng)答率表明，所有4個(gè)終點(diǎn)的95％置信區(qū)間(ci)的下限在3項(xiàng)研究中是相似的，并且一致地滿足了iii期終點(diǎn)的閾值限值。在3項(xiàng)研究中，達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例是相似的。
根據(jù)2次施用疫苗以1或2個(gè)月隔開(kāi)給予后獲得的hsba數(shù)據(jù)，在這些間隔期間施用的2個(gè)劑量的疫苗可能由于潛在的暴露于腦膜炎球菌血清群b病的情況而處于風(fēng)險(xiǎn)增加中的個(gè)體提供保護(hù)。在2次疫苗施用以1或2個(gè)月隔開(kāi)遞送后觀察到的反應(yīng)顯示，一部分受試者表達(dá)的hsba水平等于或高于4種主要測(cè)試菌株中的每一種的lloq值(參見(jiàn)組1和組2的研究1結(jié)果；參見(jiàn)組2的研究2結(jié)果；參見(jiàn)組2的研究3結(jié)果)。在6個(gè)月時(shí)施用的第三劑量的疫苗可以實(shí)現(xiàn)疫苗介導(dǎo)的保護(hù)。
伴隨疫苗施用。研究1(實(shí)施例7和實(shí)施例8中描述)評(píng)估了在美國(guó)青少年中二價(jià)rlp2086和hpv4的伴隨使用。研究終點(diǎn)包括針對(duì)四個(gè)hpv4抗原(基于幾何效價(jià)效價(jià)[gmt])和針對(duì)二價(jià)rlp2086(基于使用兩個(gè)mnb測(cè)試菌株[變體a22和b24]的hsba)在第三次疫苗接種后1個(gè)月的免疫應(yīng)答的非劣性評(píng)估。hpv4免疫應(yīng)答還通過(guò)對(duì)4種hpv抗原中的每一種的血清轉(zhuǎn)化進(jìn)行評(píng)估。
研究1顯示了比較組1(二價(jià)rlp2086+hpv4)和組3(鹽水+hpv4)的抗hpv抗原抗體的幾何平均效價(jià)(gmt)，和組1與組3之間相應(yīng)的gmt比(gmr)和這些比的雙側(cè)95％ci。研究1還提供了比較組1和組2的對(duì)2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的hsbagmt，和組1與組2之間相應(yīng)的gmr以及這些比的雙側(cè)95％ci。非劣性邊界的標(biāo)準(zhǔn)為1.5倍，其對(duì)應(yīng)于gmr的雙側(cè)95％ci的下限值為0.67。所有mnb測(cè)試菌株和除hpv-18(其95％置信區(qū)間(ci)下限為0.62)之外的hpv抗原均滿足1.5倍標(biāo)準(zhǔn)。雖然對(duì)hpv-18的應(yīng)答不符合預(yù)先規(guī)定的非劣性標(biāo)準(zhǔn)，但差異是微不足道的。在分開(kāi)的分析中，在鹽水+hpv4和二價(jià)rlp2086+hpv4組中的≥99％的受試者血清轉(zhuǎn)化所有4種hpv抗原。
實(shí)施例10：二價(jià)rlp2086在個(gè)體中引發(fā)針對(duì)表達(dá)普遍和爆發(fā)相關(guān)的fhbp變體的mnb菌株提供廣泛覆蓋的抗體
在使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定(hsba)中測(cè)量的殺菌抗體已經(jīng)與保護(hù)免受腦膜炎球菌疾病侵害相關(guān)，并且hsba應(yīng)答已經(jīng)被常規(guī)地用作疫苗功效的替代物。fhbp多樣性的全球流行病學(xué)研究表明，約80％的腦膜炎球菌病是由表達(dá)10種流行的fhbp變體之一的菌株引起的。
方法：評(píng)估了在用二價(jià)rlp2086免疫的個(gè)體人類受試者中針對(duì)表達(dá)美國(guó)和歐洲中10種最流行的fhbp變體(b24、b16、b44、a22、b03、b09、a12、a19、a05和a07)的腦膜炎奈瑟球菌血清群b(mnb)菌株的hsba應(yīng)答。表達(dá)這十種最流行的變體的mnb菌株代表fhbp多樣性的廣度，包括6個(gè)主要fhbp亞群中的5個(gè)，其分別代表mnbsba菌株庫(kù)和mnbsba菌株庫(kù)的us子集中>98％和97％菌株(按照亞群)。從輝瑞的mnbsba菌株庫(kù)(n＝1263)獲得了二十三種mnb測(cè)試菌株，其代表了從2000年到2006年間從美國(guó)和歐洲系統(tǒng)收集的菌株。此外，最近的mnb疾病爆發(fā)的分離物被納入分析。從參與臨床研究b1971005、b1971012或b1971003的青少年和年輕成年受試者隨機(jī)獲得匹配的疫苗接種前和疫苗接種后血清(劑量2后和劑量3后)。
為了提供支持用二價(jià)rlp2086進(jìn)行疫苗接種的潛在覆蓋度的額外信息，用爆發(fā)菌株和來(lái)自用二價(jià)rlp2086免疫的9名受試者的血清樣品進(jìn)行hsba(臨床研究b1971012，實(shí)施例5和實(shí)施例6中所述)。受試者(年齡在11至＜19歲)在0、2和6個(gè)月時(shí)已經(jīng)接受了3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086。為了確保保守的hsba評(píng)估，從針對(duì)主要mnb測(cè)試菌株沒(méi)有基線hsba活性的一組受試者以非偏倚的方式選擇了9名受試者。測(cè)試了克隆的普林斯頓大學(xué)爆發(fā)菌株中的兩株(pmb5021和pmb5025)和ucsb爆發(fā)菌株中的兩株(來(lái)自兩個(gè)遺傳簇中每一個(gè)的菌株，pmb4478和pmb4479)。
克隆的普林斯頓大學(xué)mnb爆發(fā)菌株的遺傳特征如下：數(shù)據(jù)表明普林斯頓大學(xué)爆發(fā)菌株是克隆的。每個(gè)菌株分型為cc41/44(st409)，表達(dá)fhbp變體b153(seqidno：6)。該菌株對(duì)于nhba(2)、pora(亞型p1.5-1,2-2)和porb(3-82)具有相同的等位基因分配，都沒(méi)有nada，并且都具有相同的脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pfge)譜(429)。
2013年加州圣巴巴拉大學(xué)(universityofcaliforniasantabarbara，ucsb)爆發(fā)菌株的遺傳特征如下：ucsb菌株分型為cc32(et5；st32)，表達(dá)fhbp變體b24，與自1993年以來(lái)高度流行血清群b疾病有關(guān)的俄勒岡克隆有關(guān)。與普林斯頓爆發(fā)組的菌株不同，ucsb菌株基因分離成兩個(gè)不同的簇，其通過(guò)其pfge譜(468或467)和porb類型(3-461或3-24)進(jìn)行區(qū)分。該菌株對(duì)于nada(1)、nhba(5)、pora(亞型p1.7,16-20)具有相同的等位基因分配
所有受試者和所有爆發(fā)菌株的基線hsba效價(jià)<4，表明受試者在用二價(jià)rlp2086免疫之前對(duì)任何爆發(fā)菌株沒(méi)有保護(hù)性抗體。
結(jié)果：用二價(jià)rlp2086免疫的個(gè)體受試者的血清中，所有23種mnb菌株在hsba中敏感。代表所有10種流行的fhbp變體和其他菌株的菌株都被hsba殺死?；€hsba血清保護(hù)率(達(dá)到hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例)通常較低。在用二價(jià)rlp2086免疫前觀察到的受試者中較低的血清保護(hù)率證明非接種疫苗的青少年或年輕人群對(duì)mnb疾病的脆弱性。然而，在具有疫苗接種后血清的青少年和年輕人中觀察到穩(wěn)健的血清保護(hù)率：根據(jù)mnb菌株和測(cè)試群體，觀察到這些菌株中的83％的血清保護(hù)率>70％。表達(dá)最流行的亞科a和bfhbp變體b24和a22的菌株的疫苗接種后血清保護(hù)率范圍為81.0％至100％，對(duì)表達(dá)fhbp變體b24和b153的近期爆發(fā)菌株為77.8％至100％。此外，根據(jù)hsba中使用的爆發(fā)菌株，在這些受試者中觀察到對(duì)所有爆發(fā)菌株的穩(wěn)健的劑量2后應(yīng)答(與基線相比)，其范圍在56至89％之間。相比之下，對(duì)最近美國(guó)爆發(fā)菌株的疫苗接種前血清保護(hù)率低或不可檢測(cè)。對(duì)普林斯頓大學(xué)和ucsb爆發(fā)菌株的hsba應(yīng)答示于圖2中。
結(jié)論：二價(jià)rlp2086在個(gè)體中引起對(duì)美國(guó)和歐洲表達(dá)流行的fhbp的不同侵入性mnb菌株以及新出現(xiàn)的變體(b153)(seqidno：6)穩(wěn)健的血清保護(hù)性hsba應(yīng)答。用二價(jià)rlp2086免疫后顯示血清保護(hù)應(yīng)答的受試者比例大大超過(guò)了在基線時(shí)血清保護(hù)的受試者比例。數(shù)據(jù)支持二價(jià)rlp2086有潛力為青少年和年輕人提供廣泛的保護(hù)，免受侵襲性腦膜炎球菌血清群b疾病、包括最近爆發(fā)疾病的侵害。
>b153(seqidno:6)
cssggggvaadigagladaltapldhkdkglqsltldqsvrkneklklaaqgaektygngdslntgklkndkvsrfdfirqievdgqlitlesgefqvykqshsaltalqteqvqdsedsgkmvakrqfrigdiagehtsfdklpkggsatyrgtafgsddaggkltytidfaakqghgkiehlkspelnvdlaaayikpdekhhavisgsvlynqdekgsyslgifggkaeevagsaevktvngirhiglaakq
實(shí)施例11：二價(jià)rlp2086、腦膜炎球菌血清群b疫苗在美國(guó)青少年中與tdap和mcv4共同施用的免疫原性和安全性
2期、隨機(jī)分組、活性對(duì)照、觀察者盲法試驗(yàn)評(píng)估在年齡≥10歲至＜13歲的健康受試者中伴隨施用的mcv4、tdap疫苗和二價(jià)rlp2086疫苗的安全性、耐受性和免疫原性，。
背景：二價(jià)rlp2086與美國(guó)推薦的疫苗同時(shí)施用可以提高對(duì)疫苗方案的遵守。
目的：確定由共同施用
設(shè)計(jì)/方法：年齡≥10至<13歲的健康青少年接受mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086、mcv4+tdap或二價(jià)rlp2086。通過(guò)使用表達(dá)疫苗異源fhbp變體的2個(gè)mnb測(cè)試菌株使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定(hsba)來(lái)評(píng)估二價(jià)rlp2086免疫原性；多重luminex測(cè)定和/或兔sba評(píng)估m(xù)cv4/tdap抗原的免疫原性。評(píng)估安全性。
結(jié)果：2648名受試者接受mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086、mcv4+tdap或二價(jià)rlp2086。對(duì)伴隨給予mcv4、tdap和二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答不比對(duì)mcv4+tdap或單獨(dú)的二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答差。疫苗接種2和3后分別有的62.3-68.0％和87.5-90％mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086接受者具有預(yù)先規(guī)定的針對(duì)2個(gè)mnb測(cè)試菌株的血清保護(hù)性hsba效價(jià)；單獨(dú)的二價(jià)rlp2086誘導(dǎo)相似的應(yīng)答。與單獨(dú)的二價(jià)rlp2086相比，伴隨施用并沒(méi)有顯著增加局部反應(yīng)或全身事件。
與mcv4+tdap伴隨給予的二價(jià)rlp2086符合所有非劣免疫原性標(biāo)準(zhǔn)，沒(méi)有臨床顯著增加的反應(yīng)原性。與伴隨施用相關(guān)的便利可以提高對(duì)推薦方案的遵守。
本研究(b1971015)評(píng)估了四價(jià)腦膜炎球菌多糖綴合物(mcv4)疫苗；破傷風(fēng)、白喉和無(wú)細(xì)胞百日咳(tdap)疫苗；和二價(jià)rlp2086伴隨施用的免疫原性。它還評(píng)估了二價(jià)rlp2086在美國(guó)年齡≥10歲至<13歲的健康受試者的安全性、耐受性和免疫原性。用于hsba以評(píng)估對(duì)具有或不具有許可疫苗的對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答的非劣性的2個(gè)mnb測(cè)試菌株表達(dá)美國(guó)兩種最流行的fhbp，即a22和b24。
使用鹽水作為安慰劑來(lái)維持研究盲法，因?yàn)闆](méi)有證明安全、具有免疫原性和有效的針對(duì)mnb的疫苗可以作為活性對(duì)照。此外，選擇鹽水作為惰性對(duì)照，而不是具有賦形劑(例如鋁)的對(duì)照疫苗，因?yàn)槊枋鲅芯啃援a(chǎn)品的耐受性特征的安全目標(biāo)符合鹽水而不是另一種疫苗。
約2625名受試者在美國(guó)約88個(gè)地點(diǎn)(每個(gè)地點(diǎn)約30名受試者)參加本研究。受試者以1:1:1的比例(組1:組2:組3)隨機(jī)分配到3組中之一(表a)。受試者在每次疫苗接種就診時(shí)都接受了研究性產(chǎn)品(就診1、3和5)。
呈現(xiàn)以下任何一項(xiàng)的受試者不包括在研究中：以前接種過(guò)任何腦膜炎球菌血清群b疫苗；在第一次研究疫苗接種的5年內(nèi)接種任何白喉、破傷風(fēng)或百日咳疫苗；以前接種過(guò)任何mcv4疫苗。
在研究期間，組1和組3的受試者在約0、2和6個(gè)月在左臂中接受二價(jià)rlp2086(分別為就診1、3和5)。對(duì)于組2中的受試者，在約0、2和6個(gè)月(分別為就診1、3和5)在左臂通過(guò)肌內(nèi)(im)注射(0.5ml)施用鹽水。組3受試者在0個(gè)月時(shí)在右臂接受2個(gè)im鹽水注射。mcv4和tdap疫苗僅在0個(gè)月時(shí)通過(guò)im注射施用一次(組1和2)于右臂。在就診6最后一次抽血后(疫苗接種3后抽血)，組3中的受試者接受了mcv4和tdap疫苗。
mcv4和tdap疫苗僅在0個(gè)月時(shí)通過(guò)im注射施用一次(組1和2)，進(jìn)入右臂上三角肌。將疫苗施用至少分隔開(kāi)5cm。在他們最后一次抽血后，組3中的受試者在就診6時(shí)接受了mcv4和tdap疫苗。
在疫苗接種1之前立刻、在疫苗接種1后28至41天、在疫苗接種2后28至42天以及在疫苗接種3后28至42天，收集血樣(每次約20ml)用于免疫原性分析。
使用的二價(jià)rlp2086疫苗是配制成含有以下內(nèi)容的0.5ml劑量：60μg純化的亞科arlp2086蛋白(變體a05，seqidno：1)和純化的亞科brlp2086蛋白(變體b01，seqidno：2))，0.15m氯化鈉，摩爾比2.8的聚山梨酯80和0.25mgal3+如磷酸鋁(alpo4)作為穩(wěn)定劑，在ph6.0的10mm組氨酸緩沖鹽水中。
mcv4疫苗是市售疫苗
tdap疫苗是市售疫苗
用于注射的無(wú)菌生理鹽水溶液(0.9％氯化鈉)在0.5ml的劑量中。
二價(jià)rlp2086的血清殺菌試驗(yàn)。為了評(píng)估對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答，在驗(yàn)證的hsba中分析功能性抗體。hsba測(cè)量人血清中的抗體，其導(dǎo)致補(bǔ)體介導(dǎo)的目標(biāo)mnb菌株的殺死。在hsba中用菌株pmb80[a22]和pmb2948[b24]測(cè)試了在用二價(jià)rlp2086的第一次疫苗接種之前、用二價(jià)rlp2086第二次疫苗接種后約1個(gè)月(就診3)、用二價(jià)rlp2086第三次疫苗接種后約1個(gè)月(就診5)從組1和組3中所有受試者得到血清。
mcv4伴隨疫苗的sba。為了評(píng)估對(duì)mcv4疫苗的免疫應(yīng)答，在使用兔補(bǔ)體血清殺菌測(cè)定(rsba)中用代表血清群a、c、y和w-135的腦膜炎球菌菌株分析功能性抗體。在用mcv4第一次疫苗接種之前(就診1)和用mcv4疫苗接種后1個(gè)月(就診2)從組1和組2中的所有受試者獲得的血清用于這些測(cè)定。
mcv4和其他伴隨疫苗的抗原檢測(cè)測(cè)定。使用經(jīng)驗(yàn)證的和多重luminex多重測(cè)定評(píng)估白喉、破傷風(fēng)和百日咳抗體應(yīng)答(mcv4lxa)。在用mcv4和tdap第一次疫苗接種之前(就診1)和用mcv4和tdap疫苗接種后1個(gè)月(就診2)從組1和組2中的所有受試者獲得的血清用于該測(cè)定。使用經(jīng)驗(yàn)證的多重lxa額外評(píng)估腦膜炎球菌血清群a、c、y和w-135應(yīng)答(a、c、y、wlxa)。在用mcv4和tdap第一次疫苗接種之前(就診1)和用mcv4和tdap疫苗接種后1個(gè)月(就診2)從組1和組2中的所有受試者獲得的血清用于這些測(cè)定。
樣品大小。對(duì)市售的10種抗原疫苗和2種mnb菌株的抗體應(yīng)答被認(rèn)為是獨(dú)立的。非劣邊界的標(biāo)準(zhǔn)為1.5倍。
分析方法。pmb80(a22)的lloq為1:16，pmb2948(b24)的lloq為1:8。tdap/mcv4測(cè)定的lloq列于表b中。
共同主要(coprimary)目標(biāo)分析(非劣性目標(biāo))
gmt和gmc。對(duì)于mnb菌株pmb80(a22)和pmb2948(b24)，在每個(gè)血液采樣時(shí)間點(diǎn)(就診1、4和6)測(cè)量的hsba效價(jià)對(duì)數(shù)變換用于分析，并計(jì)算每個(gè)主要菌株和每組在每個(gè)血液采樣時(shí)間點(diǎn)的gmt以及雙側(cè)95％置信區(qū)間(ci)?；趕tudent'st分布，通過(guò)對(duì)對(duì)數(shù)變換的測(cè)定數(shù)據(jù)的平均值計(jì)算的置信限的反向變換構(gòu)建ci。在rsba中測(cè)定的對(duì)4個(gè)mcv4抗原中的每一個(gè)的gmt和在lxasr中測(cè)定的對(duì)4個(gè)mcv4抗原中的每一個(gè)的gmc在就診1和就診2時(shí)都類似地總結(jié)了。通過(guò)lxa對(duì)tdap疫苗中的6種抗原中的每一種測(cè)定的gmc在就診1和就診2總結(jié)了。
幾何平均比。為了測(cè)試非劣性假設(shè)，使用了在每個(gè)適用的就診對(duì)應(yīng)組之間的幾何平均比(gmr)(就診6的hsba效價(jià)對(duì)應(yīng)組1/組3，就診2的mcv4/tdap抗原對(duì)應(yīng)組1/組2)以及95％的ci。對(duì)數(shù)變換結(jié)果的平均差相當(dāng)于對(duì)數(shù)尺度的比的平均值：log(組1/組2)＝log(組1)-log(組2)。使用適當(dāng)?shù)闹笖?shù)變換來(lái)計(jì)算gmr。類似地，通過(guò)使用studentt分布計(jì)算的對(duì)數(shù)變換的測(cè)定結(jié)果的平均差的ci反向變換，構(gòu)建了比率的雙側(cè)95％ci。統(tǒng)計(jì)學(xué)推論基于gmr的ci(即95％ci的下限>0.67)。
市售疫苗的非劣性(mcv4/tdap的共同主要作用)。對(duì)于第一個(gè)共同主要目標(biāo)，在疫苗接種后1個(gè)月測(cè)量對(duì)市售疫苗中的10種抗體中的每種抗體效價(jià)或濃度(就診2)被對(duì)數(shù)變換用于分析，并計(jì)算組1和組2的gm。對(duì)于10種抗原中的每一種提供gm比([二價(jià)rlp2086+mcv4/tdap]/[mcv4/tdap])的雙側(cè)95％ci。
rlp2086疫苗的非劣性(二價(jià)rlp2086的共同主要作用)。對(duì)于第二個(gè)共同主要目標(biāo)，在就診6測(cè)量的2種主要菌株中的每一種的hsba效價(jià)被對(duì)數(shù)變換用于分析，并且計(jì)算組1和組3的gmt。提供2種主要菌株中的每一種的gmr([二價(jià)rlp2086+mcv4/tdap]/二價(jià)rlp2086)的雙側(cè)95％ci。對(duì)于所有10種mcv4/tdap抗原和2種主要菌株中的每一種，當(dāng)在就診2時(shí)([二價(jià)rlp2086+mcv4/tdap]/[mcv4/tdap]和在就診6時(shí)[二價(jià)rlp2086+mcv4/tdap]/二價(jià)rlp2086))的gmr的雙側(cè)95％ci的下限大于0.67，達(dá)到對(duì)兩種市售疫苗(mcv4/tdap)和研究性產(chǎn)品(二價(jià)rlp2086)的非劣性研究的共同主要目標(biāo)。對(duì)于mcv4中4種抗原中的每一種在就診2的igg濃度，將gmr(組1/組2)用雙側(cè)95％ci進(jìn)行描述性總結(jié)。
hsba數(shù)據(jù)分析。在每個(gè)血液采樣時(shí)間點(diǎn)，描述性概括了以下的受試者數(shù)量和比例：達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq、≥1:4、≥1:8、≥1:16、≥1:32、≥1:64和≥1:128，并且從基線到疫苗接種2和疫苗接種3之后的hsba效價(jià)至少升高了2倍、3倍和4倍，以及組1和組3的主要mnb測(cè)試菌株pmb80(a22)和pmb2948(b24)的比例確切的雙側(cè)95％ci(或clopper-pearson置信限)。使用f分布計(jì)算比例的確切ci。作為對(duì)二價(jià)rlp2086的非劣性的額外分析，比較組1和組3的a22變體(pmb80)和b24變體(pmb2948)的hsba4倍應(yīng)答率。提供了比(二價(jià)rlp2086/mcv4/tdap-二價(jià)rlp2086或組1-組3)的差異和關(guān)于該差異的確切的雙側(cè)95％ci。使用標(biāo)準(zhǔn)化檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量計(jì)算確切的ci，γ＝0.000001。這被認(rèn)為是一種描述性分析。
mcv4/tdap免疫原性的分析。用組1和組2的確切的雙側(cè)95％ci總結(jié)了達(dá)到對(duì)每個(gè)mcv4/tdap抗原血清應(yīng)答的受試者比例以及達(dá)到破傷風(fēng)和白喉類毒素的抗體水平≥1.0iu/ml的受試者比例。分析了對(duì)于每種mcv4/tdap抗原的血清應(yīng)答率以及達(dá)到破傷風(fēng)和白喉類毒素的抗體水平≥1.0iu/ml的受試者比例(組1-組2)的非劣性。
伴隨施用時(shí)對(duì)二價(jià)rlp2086和mcv4/tdap抗原的免疫應(yīng)答。對(duì)tdap和mcv4抗原的幾何平均濃度和幾何平均效價(jià)的非劣性分析。本研究的第一個(gè)共同主要目標(biāo)是證明當(dāng)在兩組中第一疫苗接種后1個(gè)月(就診2)測(cè)量時(shí)，由與二價(jià)rlp2086一起給予mcv4和tdap疫苗誘導(dǎo)的基于gmt(或適用的情況下gmc)的免疫應(yīng)答不比由單獨(dú)的mcv4和tdap疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答差。第一個(gè)共同主要目標(biāo)的主要終點(diǎn)是在組1和組2的受試者中，在第一次疫苗接種后1個(gè)月(就診2)，對(duì)市售疫苗中的10種抗原中的每一種的gmt或gmc。
將比較組1和組2的對(duì)10種mcv4和tdap抗原的gmt(或在適用情況下gmc)，與其對(duì)應(yīng)的組1與組2的gmt(或在適用情況下gmc)比(gmr)以及這些比的雙側(cè)95％ci列于表c。非劣性邊界的標(biāo)準(zhǔn)為1.5倍，其對(duì)應(yīng)于gmr的雙側(cè)95％ci的下限值為0.67。
對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，tdap抗原在疫苗接種后1個(gè)月組1與組2的gmr如下：白喉類毒素為0.94(95％ci：0.86,1.03)，破傷風(fēng)類毒素為0.92(95％ci：0.85,0.99)，百日咳類毒素為0.93(95％ci：0.85，1.02)，百日咳絲狀血凝素為0.91(95％ci：0.84,0.98)，百日咳粘附素為0.88(95％ci：0.80,0.98)，2+3型百日咳菌毛凝集原為0.90(95％ci：0.74,1.08)；并且mcv4抗原的gmr如下：血清群a為0.91(95％ci：0.82,1.01)，血清群c為1.02(95％ci：0.90,1.15)，血清群y為0.99(95％ci：0.89,1.09)，血清群w-135為0.93(95％ci：0.83,1.04)。因此，與組2相比，組1的mcv4和tdap抗原gmr的雙側(cè)95％ci的下限如下：白喉類毒素為0.86，破傷風(fēng)類毒素為0.85，百日咳類毒素為0.85，百日咳絲狀血凝素為0.84，百日咳粘附素為0.80，2+3型百日咳菌毛凝集原為0.74，血清群a為0.82，血清群c為0.90，血清群y為0.89，血清群w-135為0.83。所有mcv4和tdap抗原都滿足0.67的1.5倍標(biāo)準(zhǔn)(gmr的雙側(cè)95％ci的下限)。因此，第一個(gè)共同主要目標(biāo)得到滿足。
當(dāng)這些疫苗與二價(jià)rlp2086伴隨給予時(shí)，對(duì)tdap+mcv4抗原的免疫應(yīng)答不比單獨(dú)給予時(shí)獲得的免疫應(yīng)答差。
對(duì)二價(jià)rlp2086的hsbagmt的非劣性分析。
本研究的第二個(gè)共同主要目標(biāo)是證明由mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086(組1)誘導(dǎo)的對(duì)主要菌株pmb80(a22)和pmb2948(b24)(基于gmt)的hsba應(yīng)答不比由鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086(組3)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答差。兩組在用二價(jià)rlp2086第三次疫苗接種后1個(gè)月(就診6)進(jìn)行hsba。第二個(gè)共同主要目標(biāo)的主要終點(diǎn)是評(píng)估2種主要菌株(pmb80[a22]和pmb2948[b24])中的每一種在向組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)的受試者施用第三劑量的二價(jià)rlp2086(就診6)后1個(gè)月測(cè)量的hsbagmt。
對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，表c呈現(xiàn)了比較對(duì)組1和組3的2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的hsbagmt與其對(duì)應(yīng)的組1與組3的gmr和比的雙側(cè)95％ci。非劣性邊界的標(biāo)準(zhǔn)為1.5倍，其對(duì)應(yīng)于gmr的雙側(cè)95％ci的下限值為0.67。
對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，組1和組3在接種疫苗3(二價(jià)rlp2086)后1個(gè)月對(duì)2個(gè)主要mnb菌株的hsbagmt如下：pmb80(a22)分別為45.9和49.7，以及pmb2948(b24)分別為24.8和27.4。在疫苗接種3(二價(jià)rlp2086)后1個(gè)月時(shí)，mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086組與鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086組的gmr如下：pmb80(a22)為0.92(95％ci：0.84,1.02)，pmb2948(b24)為0.90(95％ci：0.82,1.00)。與組3相比，組1的hsbagmr的雙側(cè)95％ci的下限是pmb80(a22)為0.84，pmb2948(b24)為0.82，這兩者均大于0.67，滿足了1.5倍的非劣性邊界。因此，實(shí)現(xiàn)了第二個(gè)共同主要目標(biāo)。
當(dāng)與tdap+mcv4伴隨給予時(shí)，對(duì)二價(jià)rlp2086疫苗的免疫應(yīng)答不比單獨(dú)給予疫苗時(shí)獲得的免疫應(yīng)答差。
共同主要目標(biāo)的非劣性分析。
通過(guò)檢查設(shè)定為1.5倍的非劣性邊界(其對(duì)應(yīng)于疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體的針對(duì)10種mcv4和tdap抗原中的每一種的gmr的雙側(cè)95％ci的下限值為0.67)來(lái)測(cè)試與單獨(dú)的mcv4和tdap疫苗相比，與mcv4和tdap疫苗一起給予的二價(jià)rlp2086的非劣性的第一個(gè)共同主要目標(biāo)。所測(cè)試的所有mcv4和tdap抗原都符合該標(biāo)準(zhǔn)。
通過(guò)檢查設(shè)定為1.5倍的非劣性邊界(其對(duì)應(yīng)于當(dāng)在疫苗接種3后1個(gè)月測(cè)量時(shí)在疫苗接種3后可評(píng)估免疫原性群體的針對(duì)2種主要mnb菌株(變體a22和b24)中的每一種的gmr的雙側(cè)95％ci的下限值為0.67)來(lái)測(cè)試與單獨(dú)的二價(jià)rlp2086相比，與mcv4和tdap疫苗一起給予的二價(jià)rlp2086的非劣性的第二個(gè)共同主要目標(biāo)。兩種mnb測(cè)試菌株pmb80(a22)和pmb2948(b24)均滿足該標(biāo)準(zhǔn)。
因此，在tdap、mcv4和二價(jià)rlp2086疫苗中的所有抗原的1.5倍非劣性邊界處均達(dá)到了兩個(gè)共同主要目標(biāo)。
mcv4/tdap血清應(yīng)答率的描述。本研究的次要目標(biāo)之一是在用mcv4和tdap疫苗接種后1個(gè)月測(cè)量時(shí)(就診2)，描述mcv4和tdap(組1和2)中包含的抗原的血清應(yīng)答。
對(duì)于疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體，每組10個(gè)tdap和mvc4抗原的血清應(yīng)答率與相應(yīng)的95％ci，和百分比差異(組1-組2)和差異的95％ci列于表d中。
對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，組1和組2在疫苗接種1后1個(gè)月的6個(gè)tdap抗原的血清應(yīng)答率分別為98.6％和98.3％(白喉類毒素)；分別為97.7％和97.4％(破傷風(fēng)類毒素)；68.1和72.7％(百日咳類毒素)；分別為85.3％和89.2％(百日咳絲狀血凝素)；分別為96.0％和96.2％(百日咳粘附素)；和79.5％和81.9％(2+3型百日咳菌毛凝集原)。對(duì)于可評(píng)估免疫原性群體，組1和組2在疫苗接種1后1個(gè)月時(shí)4種mcv4抗原的血清應(yīng)答率分別為85.4％和88.6％(血清群a)；分別為89.3％和88.9％(血清群c)；分別為90.5％和93.6％(血清群y)；分別為97.1％和97.2％(血清群w-135)。疫苗接種1后1個(gè)月，組1與組2的血清應(yīng)答率差異如下：白喉類毒素為0.2％(95％ci：(-1.1,1.6))，破傷風(fēng)類毒素為0.2％(95％ci：-1.4,1.8)，百日咳類毒素為-4.6％(95％ci：-9.1，-0.1)，百日咳絲狀血凝素為-4.0％(95％ci：-7.3,-0.6)，百日咳粘附素為-0.2％(95％ci：-2.1,1.8)，2+3型百日咳菌毛凝集原為-2.5％(95％ci：-6.4，1.5)，血清群a為-3.2％(95％ci：-6.7,0.3)，血清群c為0.3％(95％ci：-2.8,1.5)，血清群y為-3.2％(95％ci：-6.0,-0.4)，血清群w-135為-0.1％(95％ci：-1.9,1.7)。
對(duì)于mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086組(組1)和mcv4+tdap+鹽水組(組2)，6個(gè)tdap和4個(gè)mcv4抗原的血清應(yīng)答率估計(jì)值差異在-4.6％至0.3％，該率差異的95％ci的下限為-9.1％以上(即全部大于-10％)。
hsba效價(jià)4倍升高的描述。通過(guò)分析在疫苗接種3后1個(gè)月2種主要mnb菌株(pmb80[a22]和pmb2948[b24])的hsba效價(jià)4倍的應(yīng)答率，將mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086(組1)與鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086(組3)進(jìn)行比較。對(duì)于疫苗接種3后可評(píng)估免疫原性人群，達(dá)到從基線至疫苗接種3后1個(gè)月2種主要mnb菌株的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者數(shù)量和比例，每組中相應(yīng)的95％ci，百分比差異(組1-組3)以及這些差異百分比的95％ci呈現(xiàn)在表e中。
對(duì)于接受mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086的組1受試者和接受鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086的組3受試者，測(cè)量了2種主要mnb測(cè)試菌株從基線至疫苗接種3后1個(gè)月hsba效價(jià)≥4倍升高的受試者比例。在組1的受試者中，84.0％表現(xiàn)出針對(duì)測(cè)試菌株pmb80(a22)的hsba效價(jià)≥4倍升高，85.7％表現(xiàn)出針對(duì)測(cè)試菌株pmb2948(b24)的hsba效價(jià)≥4倍升高。在組3的受試者中，88.7％表現(xiàn)出針對(duì)測(cè)試菌株pmb80(a22)的hsba效價(jià)≥4倍升高，87.7％表現(xiàn)出針對(duì)測(cè)試菌株pmb2948(b24)的hsba效價(jià)≥4倍升高。
疫苗接種3后1個(gè)月，組1和組3之間達(dá)到hsba效價(jià)≥4倍升高的受試者比例差異如下：pmb80(a22)為-4.7％(95％ci：-8.4，-1.1)，pmb2948(b24)為-2.1％(95％ci：-5.7,1.6)。4倍應(yīng)答率的估計(jì)差異小(<5.0％)，比例差異的95％ci的下限為-8.4％(pmb80[a22])和-5.7％(pmb2948[b24])。
表e.比較從基線至疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥4倍升高的受試者–疫苗接種3后可評(píng)估免疫原性群體
縮寫:hsba＝使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定；lloq＝定量下限；lod＝檢測(cè)限。
注:基線定義為疫苗接種1之前的抽血。
注:4倍增加定義如下：(1)對(duì)于基線hsba效價(jià)<lod或hsba效價(jià)<lloq的受試者，4倍應(yīng)答定義為hsba效價(jià)≥4倍lloq。(2)對(duì)于基線hsba效價(jià)≥lloq的受試者，4倍應(yīng)答定義為hsba效價(jià)≥4倍基線效價(jià)。
a.n＝對(duì)于給定菌株在基線和在疫苗接種3后1個(gè)月具有有效和確定的hsba效價(jià)的受試者數(shù)量。
b.n＝對(duì)于給定菌株在疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到至少4倍應(yīng)答的受試者數(shù)量。
c.使用clopper和pearson方法基于觀察到的受試者比例的確切的雙側(cè)置信區(qū)間(ci)。
d.比例差異，以百分比表示。
e.比例差異的確切的雙側(cè)ci和p值(基于chan&zhang)，以百分比表示。
當(dāng)伴隨施用時(shí)對(duì)二價(jià)rlp2086和mcv4和tdap抗原的免疫應(yīng)答的總結(jié)。與單獨(dú)的mcv4和tdap疫苗相比或者與鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086相比，與mcv4和tdap疫苗一起給予的二價(jià)rlp2086的非劣性標(biāo)準(zhǔn)要求對(duì)于10個(gè)mcv4/tdap抗原(疫苗接種1后1個(gè)月)中的每一個(gè)和2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(a22和b24)(疫苗接種3后1個(gè)月)中的每一個(gè)，其gmr的雙側(cè)95％ci下限大于0.67。對(duì)于兩種mnb測(cè)試菌株和10種tdap和mcv4抗原中的每一種，均滿足預(yù)先設(shè)定的閾值。
對(duì)于mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086組(組1)和mcv4+tdap+鹽水組(組2)，6個(gè)tdap和4個(gè)mcv4抗原的血清應(yīng)答率估計(jì)值差異在-4.6％至0.3％，該率差異的95％ci的下限等于9.1％或更低(所有差異均大于-10％)。對(duì)2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(a22和b24)的≥4倍升高的hsba應(yīng)答在接受mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086的組與接受鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086的組之間是相似的(范圍為84.0％至88.7％)。
對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答。hsba效價(jià)≥lloq(描述性終點(diǎn))。
本研究的次要目標(biāo)之一是描述通過(guò)用2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(1個(gè)表達(dá)亞科alp2086(pmb80[a22])和1個(gè)表達(dá)亞科blp2086(pmb2948[b24]))用二價(jià)rlp2086第二次(就診4)和第三次(就診6)疫苗接種后1個(gè)月測(cè)定進(jìn)行hsba測(cè)量的免疫應(yīng)答。
該次要目標(biāo)的描述性次要終點(diǎn)之一是在疫苗接種2(就診4)后1個(gè)月和疫苗接種3(就診6)后1個(gè)月，2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株中的每一個(gè)的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例。對(duì)于疫苗接種3后可評(píng)估免疫原性群體，兩個(gè)主要mnb測(cè)試菌株中的每一個(gè)的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例列于表f中。注意，pmb80(a22)的lloq為hsba效價(jià)等于1:16，而pmb2948(b24)的lloq為hsba效價(jià)等于1:8。
對(duì)于組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)，基線(疫苗接種1之前)hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例是pmb80(a22)為5.6％，pmb2948(b24)為3.4％。對(duì)于組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)，疫苗接種2后1個(gè)月和疫苗接種3后1個(gè)月達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例如下：pmb80(a22)分別為68.0％和91.4％，pmb2948(b24)分別為66.0％和92.7％。
對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)，基線(疫苗接種1之前)具有hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例是pmb80(a22)為4.4％，pmb2948(b24)為1.6％。對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)，在疫苗接種2后1個(gè)月和疫苗接種3后1個(gè)月，達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例如下：pmb80(a22)分別為68.0％和87.5％；pmb2948(b24)分別為62.3％和90.0％。
與疫苗接種1之前相比，在疫苗接種2后1個(gè)月，在組1和組3的受試者中觀察到具有2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的hsba效價(jià)≥lloq的受試者比例顯著增加，疫苗接種3后1個(gè)月觀察到額外增加。可評(píng)估免疫原性群體的組1和組3中的hsba應(yīng)答相似。
達(dá)到規(guī)定水平的hsba效價(jià)
另一個(gè)次要終點(diǎn)是在每個(gè)血液采樣時(shí)間點(diǎn)對(duì)2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的hsba效價(jià)≥lloq、≥1:4、≥1:8、≥1:16、≥1：32、≥1：64和≥1:128的受試者比例。
達(dá)到hsba效價(jià)≥1:4和≥1:16的受試者如下所述?！?:4的hsba效價(jià)被廣泛認(rèn)為是與保護(hù)免受imd侵害相關(guān)；然而，更保守的≥1:16的hsba效價(jià)已被認(rèn)為是對(duì)疫苗接種前血清陰性的受試者的4倍疫苗作用的水平。
疫苗接種前(即疫苗接種1之前)的hsba效價(jià)≥1:4的組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)中的受試者比例對(duì)于菌株pmb80(a22)分別為6.9％和7.5％；和對(duì)于菌株pmb2948(b24)分別為2.1％和3.7％。此外，組1和組3中疫苗接種前的hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例對(duì)于菌株pmb80(a22)分別為4.4％和5.6％和對(duì)于菌株pmb2948(b24)分別為1.5％和2.1％。
在組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)中，疫苗接種2后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例是pmb80(a22)為68.6％，pmb2948(b24)為68.2％。疫苗接種3后1個(gè)月，hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例是pmb80(a22)為91.7％，pmb2948(b24)為93.1％。在組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)中，疫苗接種2后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例是pmb80(a22)為68.2％，pmb2948(b24)為64.8％。疫苗接種3后1個(gè)月，hsba效價(jià)≥1:4的受試者比例是pmb80(a22)為87.8％，pmb2948(b24)為90.7％。
在組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)中，疫苗接種2后1個(gè)月hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例是pmb80(a22)為68.0％，pmb2948(b24)為60.3％。疫苗接種3后1個(gè)月，hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例是pmb80(a22)為91.4％，pmb2948(b24)為88.9％。在組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)中，疫苗接種2后1個(gè)月，hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例是pmb80(a22)為68.0％，pmb2948(b24)為57.6％。疫苗接種3后1個(gè)月，hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例是pmb80(a22)為87.5％，pmb2948(b24)為86.7％。
對(duì)于組1和組3，大多數(shù)受試者在2或3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086后達(dá)到1:16或更高的hsba效價(jià)，而相對(duì)較少的受試者在疫苗接種前就診1時(shí)對(duì)任何主要mnb測(cè)試菌株中具有可測(cè)量的hsba效價(jià)。
hsba幾何平均滴定。另一個(gè)次要終點(diǎn)是在每個(gè)適用的血液采樣時(shí)間點(diǎn)，2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株中的每一個(gè)的hsbagmt。表g列出了在接種疫苗3后可評(píng)估免疫原性群體中按照組1和組3的采樣時(shí)間點(diǎn)的2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株中的每一個(gè)的hsbagmt和相應(yīng)ci。兩組的基線gmt低于hsballoq。對(duì)于組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)，疫苗接種2后1個(gè)月的hsbagmt是pmb80(a22)為23.8，pmb2948(b24)為13.0。疫苗接種3后1個(gè)月的hsbagmt是pmb80(a22)為49.7，pmb2948(b24)為27.4。對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)，疫苗接種2后1個(gè)月的hsbagmt是pmb80(a22)為23.7，pmb2948(b24)為12.0。疫苗接種3后1個(gè)月的hsbagmt是pmb80(a22)為45.9，pmb2948(b24)為24.8。如gmt所測(cè)量的hsba應(yīng)答在組1和組3之間是相似的。
hsba效價(jià)的反向累積分布曲線
對(duì)于疫苗接種3后可評(píng)估免疫原性群體，對(duì)組1和組3在所有采樣時(shí)間點(diǎn)評(píng)估顯示pmb80(a22)和pmb2948(b24)的hsba效價(jià)分布的反向累積分布曲線(rcdc)。rcdc顯示大多數(shù)受試者在疫苗接種2后應(yīng)答，并且在疫苗接種3之后對(duì)2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的效價(jià)進(jìn)一步增加。對(duì)抗原的免疫應(yīng)答在組1和3中是相似的。
hsba≥4倍應(yīng)答
本研究的預(yù)先規(guī)定的探索性目標(biāo)是描述對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答，如用2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(1個(gè)表達(dá)lp2086亞科a蛋白和1個(gè)表達(dá)lp2086亞科b蛋白)的hsba效價(jià)中的4倍應(yīng)答所測(cè)量的，在用二價(jià)rlp2086第二次和第三次疫苗接種后1個(gè)月測(cè)量(就診3和就診5)。
探索性目標(biāo)的終點(diǎn)是達(dá)到從基線至用二價(jià)rlp2086第二次和第三次接種疫苗后1個(gè)月的2個(gè)mnb菌株(pmb80(a22)和pmb2948(b24))的hsba效價(jià)至少提高4倍的受試者比例。請(qǐng)注意，pmb80(a22)的lloq是等于1:16的hsba效價(jià)，而pmb80(a22)的lloq是等于1:8的hsba效價(jià)。4倍應(yīng)答定義如下：對(duì)于基線hsba效價(jià)低于檢測(cè)限(lod)或hsba效價(jià)<1:4的受試者，4倍應(yīng)答定義為hsba效價(jià)≥1：16。對(duì)于基線hsba效價(jià)≥lod(即hsba效價(jià)≥1:4)和<lloq的受試者，4倍應(yīng)答定義為hsba效價(jià)≥lloq的4倍。對(duì)于基線hsba效價(jià)≥lloq的受試者，4倍應(yīng)答定義為hsba效價(jià)≥基線效價(jià)的4倍。
對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)，對(duì)于疫苗接種3后可評(píng)估免疫原性群體，達(dá)到對(duì)2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株中的每一個(gè)的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例呈現(xiàn)在表h中。
對(duì)于組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)，從基線到疫苗接種3后1關(guān)于的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例是pmb80(a22)為88.7％，pmb2948(b24)為87.7％。疫苗接種2后1個(gè)月，達(dá)到hsba效價(jià)從基線的倍數(shù)升高≥4的受試者比例是pmb80(a22)為63.4％，pmb2948(b24)為58.4％。
對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)，從基線到疫苗接種3后1個(gè)月的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4的受試者比例是pmb80(a22)為84.0％，pmb2948(b24)為85.7％。在疫苗接種2后1個(gè)月，達(dá)到hsba效價(jià)從基線的倍數(shù)升高≥4的受試者比例是pmb80(a22)為64.3％，pmb2948(b24)為56.3％。
通過(guò)4倍效價(jià)應(yīng)答測(cè)量的hsba應(yīng)答在組1和組3之間是相似的。
額外的hsba倍數(shù)應(yīng)答
額外的終點(diǎn)是達(dá)到至少2倍增加的受試者比例和2個(gè)主要mnb菌株的每一個(gè)在每一次疫苗接種后血液采樣就診時(shí)達(dá)到hsba效價(jià)至少比基線增加3倍的受試者比例。注意pmb80(a22)的lloq是等于1:16的hsba效價(jià)，而pmb2948(b24)的lloq是等于1:8的hsba效價(jià)。
對(duì)于組1和組3，從基線至疫苗接種2后1個(gè)月mnb菌株的hsba效價(jià)達(dá)到≥2倍升高的受試者比例是pmb80(a22)分別為66.2％和66.1％；和pmb2948(b24)分別為56.8％和59.7％。對(duì)于組1和組3，達(dá)到從基線至疫苗接種3后1個(gè)月mnb菌株的hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥2的受試者比例是pmb80(a22)分別為86.6％和90.3％；pmb2948(b24)分別為86.1％和88.5％。
對(duì)于組1和組3，從基線至疫苗接種2后1個(gè)月mnb菌株的hsba效價(jià)達(dá)到≥3倍升高的受試者比例是pmb80(a22)分別為64.3％和63.7％；和pmb2948(b24)分別為56.3％和58.4％。對(duì)于組1和組3，從基線至疫苗接種2后1個(gè)月mnb菌株的hsba效價(jià)達(dá)到≥3倍升高的受試者比例是pmb80(a22)分別為84.0％和88.7％；分別為pmb2948(b24)的85.7％和87.7％。
對(duì)于在接種疫苗3后可評(píng)估免疫原性群體中基線效價(jià)低于lod(1:4)的受試者，大多數(shù)受試者在組1和組3在所有血液采樣時(shí)間點(diǎn)達(dá)到2倍、3倍和4倍的應(yīng)答，疫苗接種2后1個(gè)月范圍為56.7％至66.6％，疫苗接種3后1個(gè)月范圍為86.3％至91.0％。
對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答的總結(jié)
在根據(jù)次要目標(biāo)的描述性終點(diǎn)的總結(jié)中，對(duì)于兩種主要mnb測(cè)試菌株，對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)，大多數(shù)受試者均達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq，而只有非常小比例的受試者在基線時(shí)具有可測(cè)量的hsba效價(jià)≥lloq(疫苗接種前就診1)。對(duì)于組1和組3的受試者，在疫苗接種2后個(gè)月觀察到2種mnb菌株的顯著免疫應(yīng)答，疫苗接種3后1個(gè)月觀察到額外增加。這個(gè)結(jié)論通過(guò)3個(gè)劑量后hsba效價(jià)≥1:16的受試者比例，2個(gè)劑量和3個(gè)劑量后在兩組中達(dá)到觀察的gmt以及兩個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的rcdc得到證實(shí)。
對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)，高比例的受試者對(duì)于2種主要mnb測(cè)試菌株中的每一種達(dá)到hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥4。
此外，對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組3(鹽水+鹽水+二價(jià)rlp2086)，在所有采樣時(shí)間點(diǎn)大多數(shù)受試者對(duì)于兩個(gè)主要mnb菌株達(dá)到hsba效價(jià)倍數(shù)升高≥2和hsba效價(jià)倍數(shù)上升≥3。具有符合這些標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果的受試者比例在3次疫苗接種后比2次疫苗接種更高。靈敏度分析還支持兩組對(duì)3個(gè)劑量誘導(dǎo)的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
這些結(jié)果支持以下證據(jù)：當(dāng)與mcv4+tdap疫苗共同施用時(shí)，對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答產(chǎn)生可相當(dāng)于對(duì)二價(jià)rlp2086+鹽水的免疫應(yīng)答的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
對(duì)mcv4和tdap的免疫應(yīng)答
tdap/mcv4抗原gmt和gmc
表1列出了在組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組2(mcv4+tdap+鹽水)的疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體中，基線和疫苗接種1后1個(gè)月對(duì)tdap和mcv4抗原中的每一個(gè)的gmt和gmc以及相應(yīng)的ci。
對(duì)于組2(mcv4+tdap+鹽水)，基線(疫苗接種1前)和疫苗接種1后1個(gè)月的tdap抗原gmc分別為0.2和9.8(白喉類毒素)；0.5和10.3(破傷風(fēng)類毒素)；3.9和14.2(百日咳類毒素)；21.8和122.9(百日咳絲狀血凝素)；16.2和228.9(百日咳粘附素)；8.5和154.2(2+3型百日咳菌毛凝集原)；和基線(疫苗接種1前)和疫苗接種1后1個(gè)月的mcv4抗原gmt分別為436.3和5113.0(血清群a)；84.3和1650.2(血清群c)；168.5和2244.9(血清群y)；和177.7和6367.9(血清群w-135)。對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)，基線(疫苗接種1前)和疫苗接種1后1個(gè)月的tdap抗原gm分別為0.2和9.3(白喉類毒素)；0.5和9.4(破傷風(fēng)類毒素)；3.9和13.2(百日咳類毒素)；21.3和112.0(百日咳絲狀血凝素)；15.7和202.0(百日咳粘附素)；8.4和138.1(2+3型百日咳菌毛凝集原)；和基線(疫苗接種1前)和疫苗接種1后1個(gè)月的mcv4抗原gm分別為490.0和4647.3(血清群a)；87.6和1679.2(血清群c)；183.3和2212.6(血清群y)；和176.7和5925.1(血清群w-135)?？傮w而言，組1與組2之間的估計(jì)gm相似。
iggmcv4gmc
本研究的探索性目標(biāo)是描述當(dāng)通過(guò)抗mcvigggmc測(cè)量時(shí)，當(dāng)使用和不使用二價(jià)rlp2086時(shí)，由mcv4疫苗誘導(dǎo)的抗mcv4igggmc測(cè)量的igg免疫應(yīng)答。本研究的探索性免疫原性終點(diǎn)應(yīng)用于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組2(mcv4+tdap+鹽水)受試者中的4種mcv4抗原成分。探索性終點(diǎn)是血清群a、c、y或w-135多糖的igg應(yīng)答(測(cè)量為gmc)。在驗(yàn)證該測(cè)定之后(即驗(yàn)證后)和樣本測(cè)試之前，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)參考曲線的額外數(shù)據(jù)分析向上調(diào)整lloq，對(duì)于血清群a為0.1795μg/ml，血清群c為0.0940μg/ml，血清群c為0.2485血清群y為μg/ml，血清群w-135為0.2530μg/ml。低于lloq的結(jié)果設(shè)為0.5×lloq用于分析。使用經(jīng)調(diào)整的驗(yàn)證后lloq在疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體中組1和組2的mcv4igggmc呈現(xiàn)在表j中。
對(duì)于組1(mcv4+tdap+rlp2086)，基線(疫苗接種1前)和疫苗接種1后1個(gè)月的mcv4igggmc分別為：0.17和11.42μg/ml(血清群a)；0.11和5.59μg/ml(血清群c)；0.14和2.49μg/ml(血清群y)；和0.13和1.79μg/ml(血清群w-135)。對(duì)于組2(mcv4+tdap+鹽水)，基線(疫苗接種1前)和疫苗接種1后1個(gè)月的mcv4igggmc分別為：0.15和11.38μg/ml(血清群a)；0.11和5.47μg/ml(血清群c)；0.13和2.14μg/ml(血清群y)；和0.13和1.84μg/ml(血清群w-135)。
總體而言，mcv4igggmc在組1和組2中數(shù)值相似。基于初步測(cè)定驗(yàn)證數(shù)據(jù)分析，mcv4igg測(cè)定lloq對(duì)于血清群a設(shè)為0.1037μg/ml，血清群c為0.0204μg/ml，血清群y為0.1104μg/ml，血清群w-135為0.1198μg/ml。使用驗(yàn)證lloq的疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體中組1和組2的mcv4igggmc還顯示，組1和組2的mcv4igggmc在數(shù)值上相似。
達(dá)到白喉類毒素/破傷風(fēng)抗原的預(yù)定抗體水平的受試者
本研究的描述性次要終點(diǎn)是達(dá)到抗破傷風(fēng)類毒素的抗體水平≥1.0iu/ml的受試者比例(組1和2)與達(dá)到抗白喉類毒素的抗體水平≥1.0iu/ml的受試者比例(組1和2)。
組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組2(mcv4+tdap+鹽水)疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體中達(dá)到抗白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素抗原的預(yù)定抗體水平的受試者比例與相應(yīng)的95％ci列出在表k中。
對(duì)于組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)，在疫苗接種1后1個(gè)月達(dá)到抗白喉類毒素和破傷風(fēng)類毒素抗原的預(yù)定抗體水平的受試者比例分別為98.1％(95％ci：96.8,98.9)和99.1％(95％ci：98.2,99.6)。
對(duì)于組2(mcv4+tdap+鹽水)，在疫苗接種1后1個(gè)月達(dá)到抗白喉類毒素和破傷風(fēng)抗原的預(yù)定抗體水平的受試者比例分別為99.0％(95％ci：98.0,99.6)和99.0％(95％ci：98.0,99.6)。
mcv4和tdap抗原的rcdc
在疫苗接種1之前和之后1個(gè)月，顯示組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組2(mcv4+tdap+鹽水)的mcv4血清群a、c、y和w135的rsba效價(jià)分布的rcdc，在兩組的疫苗接種1之后，對(duì)疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體在受試者之間顯示出穩(wěn)健的免疫應(yīng)答，并且曲線在整個(gè)rsba效價(jià)范圍內(nèi)是相似的。
在疫苗接種1之前和之后1個(gè)月，使用組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組2(mcv4+tdap+鹽水)的驗(yàn)證后lloq，顯示對(duì)mcv4血清群a、c、y和w-135多糖的igg效價(jià)分布的rcdc，對(duì)疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體，以及在疫苗接種1之前和之后1個(gè)月，使用組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組2(mcv4+tdap+鹽水)的驗(yàn)證lloq，顯示對(duì)mcv4血清群a、c、y和w-135的igg效價(jià)分布的rcdc，對(duì)疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體，在疫苗接種1后對(duì)兩組使用驗(yàn)證和驗(yàn)驗(yàn)后lloq在受試者之間均顯示穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
在疫苗接種1之前和之后1個(gè)月，顯示組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)和組2(mcv4+tdap+鹽水)的2+3型的白喉、破傷風(fēng)、百日咳類毒素，百日咳絲氨血紅蛋白，百日咳粘附素和百日咳菌血凝素的tdap效價(jià)分布的rcdc，對(duì)疫苗接種1后可評(píng)估免疫原性群體在兩組接種疫苗1后，在受試者之間表現(xiàn)出穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。
對(duì)mcv4和tdap的免疫應(yīng)答
抗tdap/mcv4抗原的抗體的gm在組2(mcv4+tdap+鹽水)和組1(mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086)之間相似，疫苗接種1后觀察到的tdap/mcv4抗原gm表現(xiàn)出對(duì)兩組的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。rcdc還支持組1和組2疫苗接種1后的穩(wěn)健免疫應(yīng)答。
與二價(jià)rlp2086+鹽水+鹽水和mcv4+tdap+鹽水相比，mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086的非劣性標(biāo)準(zhǔn)要求，對(duì)于10個(gè)mcv4/tdap抗原中的每一個(gè)(疫苗接種1后1個(gè)月)和使用2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(pmb80[a22]和pmb2948[b24])中的每一個(gè)的hsba效價(jià)(疫苗接種3后1個(gè)月)，gmr的雙側(cè)95％ci的下限大于0.67。對(duì)于兩個(gè)mnb測(cè)試菌株和所有10個(gè)tdap和mcv4抗原，均滿足該預(yù)定的閾值。本研究的共同主要免疫原性目標(biāo)滿足該預(yù)定的閾值因?yàn)樗鼈儩M足了預(yù)定的非劣性標(biāo)準(zhǔn)。
在兩組中首次接種疫苗后1個(gè)月測(cè)定時(shí)，由與二價(jià)rlp2086伴隨給予mcv4疫苗和tdap疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答不比單獨(dú)用mcv4和tdap疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答差。評(píng)估了對(duì)mcv4和tdap疫苗的所有抗原成分的免疫應(yīng)答。
在兩組中第三次疫苗接種后1個(gè)月測(cè)定時(shí)，如用2種mnb測(cè)試菌株進(jìn)行的hsba測(cè)定的由與mcv4和tdap疫苗伴隨給予的二價(jià)rlp2086所誘導(dǎo)的二價(jià)rlp2086誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答不比由單獨(dú)的二價(jià)rlp2086誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答差。
對(duì)于mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086組(組1)和mcv4+tdap+鹽水組(組2)，6個(gè)tdap和4個(gè)mcv4抗原的血清應(yīng)答率估計(jì)差異在-4.6％至0.3％，率差異的95％ci的下限等于9.1％或更低。由于差異的ci均大于-10％；這些差異在臨床上并不顯著。兩組的受試者在疫苗接種1后，rcdc顯示出穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。對(duì)于接受mcv4+tdap的兩組均觀察到相對(duì)于基線的穩(wěn)健的gmt。
對(duì)2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株pmb80(a22)和pmb2958(b24)的從基線到疫苗接種3后1個(gè)月的4倍升高應(yīng)答在接受mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086的組(分別為84.0％和85.7％)和接受二價(jià)rlp2086+鹽水+鹽水的組(分別為88.7％和87.7％)之間是相似的。
免疫原性討論
與二價(jià)rlp2086+鹽水+鹽水和mcv4+tdap+鹽水相比，mcv4+tdap+二價(jià)rlp2086的非劣性標(biāo)準(zhǔn)要求，對(duì)于10個(gè)mcv4/tdap抗原中的每一個(gè)(疫苗接種1后1個(gè)月)和使用2個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(a22和b24)中的每一個(gè)的hsba效價(jià)(疫苗接種3后1個(gè)月)，gmr的雙側(cè)95％ci的下限大于0.67(即在1.5的非劣性邊界)。對(duì)于兩個(gè)mnb測(cè)試菌株和10個(gè)tdap和mcv4抗原，滿足了該預(yù)定的閾值。因此，達(dá)成兩個(gè)共同主要的免疫原性目標(biāo)。具體來(lái)說(shuō)，這些數(shù)據(jù)至少支持以下幾點(diǎn)：1)當(dāng)在兩組中首次疫苗接種后1個(gè)月測(cè)量時(shí)，與二價(jià)rlp2086一起給予的mcv4和tdap疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答(基于gm)不比由單獨(dú)的mcv4和tdap疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答差。評(píng)估了對(duì)mcv4和tdap疫苗中所有組分的免疫應(yīng)答。2)當(dāng)在兩組中第三次疫苗接種后1個(gè)月測(cè)量時(shí)，如用2種mnb測(cè)試菌株進(jìn)行的hsba測(cè)量的，通過(guò)與mcv4和tdap疫苗一起給予的二價(jià)rlp2086所誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答(基于gmt)不比單獨(dú)的二價(jià)rlp2086誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答差。
在這種隨機(jī)分組、觀察者盲、活性對(duì)照、多中心試驗(yàn)中，在≥10至<13歲的受試者中，二價(jià)rlp2086和mcv4+tdap疫苗二者的免疫原性在疫苗伴隨施用時(shí)保持穩(wěn)健。
總的來(lái)說(shuō)，這些數(shù)據(jù)表明，tdap、mcv4、menacwy-crm和hpv疫苗可臨床上伴隨給予，并且這些疫苗建議在一次就診中給予。本研究(b1971015)的數(shù)據(jù)支持該結(jié)論，并且可以與tdap和mcv4一起給予二價(jià)rlp2086。這項(xiàng)研究表明，至少2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086引起對(duì)兩種主要mnb測(cè)試菌株的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。這項(xiàng)研究還顯示3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086引起對(duì)兩種主要mnb測(cè)試菌株(a22和b24)的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。在這些測(cè)試菌株上表達(dá)的fhbp與rlp2086疫苗抗原是異源的，并且代表在美國(guó)侵襲性腦膜炎球菌疾病分離物中鑒定的最流行的亞科a和亞科b變體。這兩種變體在其他地理區(qū)域的疾病分離物中也是突出的。研究b1971015的免疫原性評(píng)估采用hsba效價(jià)增加4倍的定義。
兩個(gè)主要mnb測(cè)試菌株中的每一個(gè)的lod的效價(jià)等于1:4(被認(rèn)為是保護(hù)的相關(guān)因素)，并且對(duì)于這兩個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的驗(yàn)證lloq是對(duì)于pmb2948(b24)為等于1:8的hsba效價(jià)和對(duì)于pmb80(a22)為1:16。在接受二價(jià)rlp2086之前，低比例的研究受試者的hsba效價(jià)≥1:4，表明該群體中的大多數(shù)受試者可被認(rèn)為不能對(duì)抗mnb疾病。第二次研究疫苗接種后，高比例的受試者達(dá)到hsba效價(jià)提高了4倍，并表現(xiàn)出免疫后效價(jià)≥1:4和≥lloq。這些對(duì)兩種mnb菌株的應(yīng)答率在接受二價(jià)rlp2086與mcv4+tdap共同施用的受試者和接受二價(jià)rlp2086與鹽水受試者之間是相似的。rcdc還表明，無(wú)論二價(jià)rlp2086是否與mcv4+tdap共同施用，大多數(shù)受試者引起對(duì)2種主要mnb菌株的應(yīng)答。
在目前的研究(b1971015)中，組1和組2合并時(shí)，pmb80(a22)的第二和第三劑量的二價(jià)rlp2086后，4倍應(yīng)答率(95％ci)分別為64.0％(61.3,66.5)和86.3％(84.4,88.1)。對(duì)于b24也類似，組1和組2合并的第二和第三劑量的二價(jià)rlp2086后，4倍應(yīng)答率(95％ci)分別為57.4％(54.6,60.1)和86.7％(84.8,88.5)。
值得注意的是，在研究b1971015中第二劑量的rlp2086后的免疫應(yīng)答是穩(wěn)健的，如從基線的hsba效價(jià)的4倍增加和疫苗接種后hsba效價(jià)≥lloq(1:16對(duì)于a22和1:8對(duì)于b24)的受試者比例所評(píng)估的。對(duì)于a22，合并的組1和組2中，第二劑量后達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq(1:16)的受試者的百分比(95％ci)為68.0％(65.4,70.5)。對(duì)于b24，在第二研究劑量后，達(dá)到hsba效價(jià)≥lloq(1:8)的受試者為64.2％(61.5,66.8)。這些數(shù)據(jù)顯示了2個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086的大量hsba應(yīng)答。
總體而言，這些結(jié)果表明，當(dāng)二價(jià)rlp2086和mcv4+tdap伴隨施用并滿足共同主要研究目標(biāo)時(shí)，對(duì)mcv4+tdap的免疫應(yīng)答和對(duì)二價(jià)rlp2086的免疫應(yīng)答保持穩(wěn)定。
年齡在≥10至＜13歲的受試者的這些數(shù)據(jù)滿足共同主要研究目標(biāo)，支持可以與mcv4+tdap伴隨給予二價(jià)rlp2086的假設(shè)。此外，在2或3個(gè)劑量的二價(jià)rlp2086疫苗接種后，高比例的受試者達(dá)到hsba4倍應(yīng)答和hsba效價(jià)≥lloq，并且這些穩(wěn)健的應(yīng)答不受伴隨使用mcv4+tdap的影響。當(dāng)考慮免疫原性和安全性數(shù)據(jù)時(shí)，效益風(fēng)險(xiǎn)特征(benefit-riskprofile)支持二價(jià)rlp2086單獨(dú)施用或與mcv4+tdap一起施用。
實(shí)施例12：評(píng)估在年齡≥10至＜26歲的健康受試者中給予腦膜炎球菌血清群b二價(jià)重組脂蛋白(rlp2086)疫苗的安全性和耐受性的3期、隨機(jī)分組、活性對(duì)照、觀察者盲法試驗(yàn)
這是一項(xiàng)3期、隨機(jī)分組、活性對(duì)照、觀察者盲法、多中心試驗(yàn)，其設(shè)計(jì)來(lái)評(píng)估二價(jià)rlp2086在≥10至<26歲的健康受試者中的安全性和耐受性。大約5,700名受試者以2：1的比例隨機(jī)分配到2組之一。組1在第0個(gè)月(第1天)接受二價(jià)rlp2086，隨后在第2和第6月接種疫苗。組2在第0和第6個(gè)月接受甲型肝炎病毒(hav)疫苗，在第2個(gè)月接受鹽水注射。
二價(jià)rlp2086疫苗為0.5ml劑量，其配制成含有60μg各自純化的亞科arlp2086蛋白(變體a05，seqidno：1)和純化的亞科brlp2086蛋白(變體b01，seqidno：2)，0.15m氯化鈉，摩爾比2.8的聚山梨酯80和0.25mgal3+如磷酸鋁(alpo4)在ph6.0的10mm組氨酸緩沖鹽水中。
hav疫苗(havrix，0.5ml劑量或1.0ml劑量)含有720elisa單位(el.u.)或1440el.u.的病毒抗原。特別地，havrix(甲型肝炎疫苗)是用于肌內(nèi)施用的滅活病毒的無(wú)菌懸浮液。病毒(株hm175)在mrc-5人二倍體細(xì)胞中繁殖。年齡特異性劑量的hav疫苗(havrix)根據(jù)國(guó)家具體指南提供。每1ml成人劑量的疫苗含有1440el.u.的病毒抗原，吸附在0.5mg鋁如氫氧化鋁上。每個(gè)0.5ml小兒劑量的疫苗含有720el.u.的病毒抗原，吸附到0.25mg鋁如氫氧化鋁上。havrix含有以下賦形劑：在磷酸鹽緩沖鹽溶液和聚山梨酯20(0.05mg/ml)中的氨基酸補(bǔ)充物(0.3％w/v)。從制造過(guò)程中，havrix還含有殘留的mrc-5細(xì)胞蛋白(不超過(guò)5mcg/ml)，福爾馬林(不超過(guò)0.1mg/ml)和硫酸新霉素(不超過(guò)40ng/ml)，包括在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的氨基糖苷抗生素。不使用防腐劑配制havrix。
用于注射的無(wú)菌生理鹽水溶液(0.9％氯化鈉)以0.5ml劑量供應(yīng)。
表a.研究設(shè)計(jì)
縮寫:vax＝疫苗接種。
本研究評(píng)估了使用0、2和6個(gè)月方案在≥10至＜26歲的健康受試者中施用的120μg劑量水平的二價(jià)rlp2086的安全性和耐受性，并提供了二價(jià)rlp2086安全性數(shù)據(jù)庫(kù)的重要組成部分。
在本研究中選擇在0和6月施用的hav疫苗作為對(duì)照，因?yàn)闆](méi)有證明可以作為活性對(duì)照的安全、具有免疫原性和有效的針對(duì)mnb的疫苗。與其他對(duì)該年齡組推薦的疫苗相比，hav疫苗具有良好的耐受性。此外，hav疫苗對(duì)未來(lái)旅行或其他暴露期間甲型肝炎病毒感染風(fēng)險(xiǎn)可能變得增加的受試者也有益。在對(duì)照組的第2個(gè)月施用鹽水以使研究保持盲法。受試者如果符合任何排除標(biāo)準(zhǔn)，則不符合參與條件，包括：以前接種過(guò)任何腦膜炎球菌血清群b疫苗；接受過(guò)hav疫苗接種的受試者；接種任何hav疫苗的禁忌。在根據(jù)表a的每次疫苗接種就診(就診1、3和7)時(shí)，受試者接受1個(gè)劑量的120μg二價(jià)rlp2086或hav疫苗/鹽水/hav疫苗。
受試者使用0、2、6個(gè)月的方案接受疫苗接種。組1在0月(第1天)接受二價(jià)rlp2086，隨后在第2和第6月接種疫苗。組2在第0和第6月接受hav疫苗，并在第2個(gè)月注射鹽水以保持研究盲法。年齡特異性劑量的hav疫苗根據(jù)國(guó)家具體指導(dǎo)原則提供。
安全群體的主要終點(diǎn)是從第一次研究疫苗接種至最后一次研究疫苗接種后6個(gè)月期間至少發(fā)生1次嚴(yán)重不良事件(sae)的受試者百分比，以及在每次接種后30天的時(shí)間段內(nèi)出現(xiàn)至少1次醫(yī)療上不良事件(ae)。
總體而言，兩組的在每次接種疫苗30天內(nèi)報(bào)告至少1次sae的受試者比例≤3.0％，并且在二價(jià)rlp2086與hav疫苗/鹽水對(duì)照組之間相似。在整個(gè)研究中，組2(hav疫苗/鹽水)受試者比組1(二價(jià)rlp2086)報(bào)告了數(shù)量更大的比例的sae(分別為2.52％和1.55％)。在疫苗接種期間和隨訪階段，與組1相比，組2中的受試者的數(shù)量更大的比例也報(bào)告了sae。總體來(lái)說(shuō)，疫苗接種階段報(bào)告的ae的百分比在組1中高于組2。在疫苗接種階段，組1中的受試者比組2中的受試者報(bào)告更多的反應(yīng)原性。反應(yīng)原性ae被定義為在疫苗接種后7天內(nèi)發(fā)生的任何ae，并匹配預(yù)定義的優(yōu)選術(shù)語(yǔ)列表。對(duì)于接受二價(jià)rlp2086的組，本研究沒(méi)有發(fā)現(xiàn)新的安全問(wèn)題。本研究的數(shù)據(jù)表明，二價(jià)rlp2086在≥10歲至＜26歲的受試者中安全且耐受良好。
實(shí)施例13：在健康青少年中與其他許可疫苗伴隨給予腦膜炎球菌血清群b二價(jià)rlp2086疫苗的免疫原性
背景：二價(jià)rlp2086
目標(biāo)：為了證明當(dāng)與trumenba伴隨給予時(shí)，由
設(shè)計(jì)/方法：研究1：受試者(11-<18歲)在0、2和6個(gè)月接受trumenba+hpv4、trumenba或hpv4。只接受trumenba或hpv4的受試者接受鹽水注射以維持盲法。研究2：受試者(10-<13歲)接受mcv4+tdap+trumenba、mcv4+tdap或trumenba。在0、2和6個(gè)月施用trumenba。在第0個(gè)月給予mcv4和tdap。僅接受mcv4和tdap或trumenba的組在第0、2和6月接受鹽水注射以維持盲法。在最終疫苗施用后評(píng)估免疫應(yīng)答。在兩項(xiàng)研究中，如果各組之間gm比率的95％ci的下限>0.67(1.5倍非劣性邊界)，則實(shí)現(xiàn)非劣。
結(jié)果：當(dāng)這些疫苗與trumenba共同施用時(shí)，除了hpv18(較低的95％ci＝0.62)之外的所有hpv抗原以及所有tdap和mcv4抗原都滿足非劣性標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)hpv4單獨(dú)給予或與trumenba一起給予時(shí)，所有hpv抗原的血清轉(zhuǎn)化率均≥99％。當(dāng)trumenba與許可疫苗共同施用時(shí)，mnbhsba應(yīng)答滿足非劣性標(biāo)準(zhǔn)(表)。
數(shù)據(jù)支持與推薦給美國(guó)青少年的hpv4、mcv4和tdap疫苗共同施用trumenba。
表.最后一次疫苗接種后1個(gè)月的幾何平均值比較
ci＝置信區(qū)間；gmt＝幾何平均效價(jià)；hpv＝人乳頭瘤病毒；hpv4＝人乳頭瘤病毒四價(jià)疫苗；mcv4＝腦膜炎球菌(群a,c,y和w-135)多糖白喉類毒素綴合疫苗；mnb＝腦膜炎奈瑟球菌血清群b；
na＝不適用；tdap＝吸附的破傷風(fēng)類毒素、減少的白喉類毒素和無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗。
an＝對(duì)于給定抗原或菌株具有有效和確定的測(cè)定結(jié)果的受試者數(shù)量。
b使用在疫苗接種3后1個(gè)月所有具有有效和確定測(cè)定結(jié)果的受試者計(jì)算幾何平均值。
cgm之比。
d比的ci是基于這些測(cè)量的對(duì)數(shù)的平均差異的studentt分布的置信區(qū)間的反向變換(組1-組3(hpv效價(jià))；組1-組2(tdap/mcv4抗原))。
e在第三個(gè)
f在第三個(gè)二價(jià)rlp2086疫苗接種后1個(gè)月使用人補(bǔ)體的血清殺菌測(cè)定中評(píng)估的對(duì)mnb抗原的免疫應(yīng)答。
g在單個(gè)
h在單個(gè)
實(shí)施例14：二價(jià)rlp2086、腦膜炎球菌血清群b疫苗在青少年中的免疫原性3期試驗(yàn)：針對(duì)一組抗原多樣性菌株的殺菌活性
背景：
在美國(guó)批準(zhǔn)了靶向因子h結(jié)合蛋白(fhbp)的二價(jià)rlp2086，以預(yù)防10-25歲的腦膜炎球菌血清群b(mnb)疾病。具有二價(jià)rlp2086的廣泛保護(hù)最初用4種表達(dá)具有不同于疫苗抗原的序列的fhbp的不同侵入性的mnb菌株在hsba中證實(shí)。在這個(gè)關(guān)鍵的3期試驗(yàn)中，具有代表了流行侵襲性mnb菌株多樣性的10個(gè)額外mnb測(cè)試菌株的hsba數(shù)據(jù)進(jìn)一步支持了對(duì)mnb疾病的廣泛覆蓋(clinicaltrials.gov：nct01830855)。
方法：
10-＜19歲的健康受試者在0、2和6個(gè)月時(shí)隨機(jī)接受二價(jià)rlp2086，或者在0和6個(gè)月時(shí)接受甲型肝炎病毒疫苗和在2個(gè)月時(shí)接受鹽水。在具有4個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(主要終點(diǎn)；n＝1210-1266)的hsba中和在使用10個(gè)次要mnb測(cè)試菌株(次要終點(diǎn)；n＝266-281)的群體子集中評(píng)估免疫應(yīng)答。所有菌株表達(dá)與疫苗異源的fhbp。
結(jié)果：
在二價(jià)rlp2086接受者中，通過(guò)hsba效價(jià)≥lloq測(cè)量的4個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的劑量2和3后1個(gè)月的hsba應(yīng)答分別為64.0％-99.1％和87.1％-99.5％(表)。劑量2和3后1個(gè)月，對(duì)10個(gè)次要mnb測(cè)試菌株的hsba應(yīng)答分別為61.1％-100.0％和75.1％-98.6％。每個(gè)次要測(cè)試菌株的hsbagmt從在基線時(shí)的4.5-11.4增加到劑量3之后的22.1-93.5。
表.二價(jià)rlp2086對(duì)次要mnb測(cè)試菌株的免疫原性
結(jié)論：
二價(jià)rlp2086疫苗接種導(dǎo)致在2和3個(gè)劑量后針對(duì)與疫苗抗原異源的不同mnb菌株的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。高比例的個(gè)體發(fā)展出對(duì)10種額外的mnb測(cè)試菌株的保護(hù)性hsba效價(jià)大于保護(hù)相關(guān)因素(hsba效價(jià)≥1:4)?？偟膩?lái)說(shuō)，這些3期免疫原性數(shù)據(jù)支持二價(jià)rlp2086廣泛保護(hù)青少年免受mnb疾病侵害。
實(shí)施例15：二價(jià)rlp2086、腦膜炎球菌血清群b疫苗在年輕人中的免疫原性3期試驗(yàn)：針對(duì)一組抗原多樣性菌株的殺菌活性
背景：
在美國(guó)批準(zhǔn)了靶向因子h結(jié)合蛋白(fhbp)的二價(jià)rlp2086，以預(yù)防10-25歲的腦膜炎球菌血清群b(mnb)疾病。具有二價(jià)rlp2086的廣泛保護(hù)最初用4種表達(dá)具有不同于疫苗抗原的序列的fhbp的不同侵入性的mnb菌株在hsba中證實(shí)。在這個(gè)關(guān)鍵的3期試驗(yàn)中具有代表了流行侵襲性mnb菌株多樣性的10個(gè)額外mnb測(cè)試菌株的hsba數(shù)據(jù)進(jìn)一步支持了對(duì)mnb疾病的廣泛覆蓋(clinicaltrials.gov：nct01352845)。
方法：
18-＜26歲的健康受試者在0、2和6個(gè)月時(shí)隨機(jī)接受二價(jià)rlp2086或鹽水。在具有4個(gè)主要mnb測(cè)試菌株(主要終點(diǎn)；n＝1702-1714)的hbbas中和使用10個(gè)次要mnb測(cè)試菌株(次要終點(diǎn)；n＝273-284)的群體子集中(n＝273-284)評(píng)估免疫應(yīng)答。所有菌株表達(dá)與疫苗異源的fhbp。
結(jié)果：
在二價(jià)rlp2086接受者中，通過(guò)hsba效價(jià)≥lloq測(cè)量的4個(gè)主要mnb測(cè)試菌株的劑量2和3后1個(gè)月的hsba應(yīng)答分別為68.3％-97.4％和87.4％-99.4％(表)。劑量2和3后1個(gè)月，對(duì)10個(gè)次要mnb測(cè)試菌株的hsba應(yīng)答分別為51.6％-97.9％和71.3％-99.3％。每個(gè)次要菌株的hsbagmt從在基線時(shí)的5.1-13.9增加到劑量3之后的20.6-96.3。
表.二價(jià)rlp2086對(duì)次要mnb測(cè)試菌株的免疫原性
結(jié)論：
二價(jià)rlp2086疫苗接種引起在2和3劑量后針對(duì)表達(dá)與疫苗抗原異源的fhbp變體的不同mnb菌株的穩(wěn)健的免疫應(yīng)答。高比例的個(gè)體發(fā)展出對(duì)10種額外的mnb測(cè)試菌株的保護(hù)性hsba效價(jià)大于保護(hù)相關(guān)因素(hsba效價(jià)≥1:4)?？偟膩?lái)說(shuō)，這些3期免疫原性數(shù)據(jù)支持二價(jià)rlp2086廣泛保護(hù)年輕人免受mnb疾病侵害。
序列表
<110>輝瑞大藥廠
<120>腦膜炎奈瑟球菌組合物及其方法
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