本發(fā)明屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種匙羹藤果在抗炎藥物中的應(yīng)用及其應(yīng)用的組合物。
背景技術(shù)：
：匙羹藤為蘿藦科匙羹藤屬植物,又名武靴藤、羊角、金剛藤，廣泛分布于印度、印尼、非洲、越南和我國廣東、廣西、福建、臺灣和云南省，其性平，味苦，全株入藥，具有清熱解毒、生肌消腫、祛風止痛等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，匙羹藤具有降血糖、降血脂、抗齲齒、抑制甜味反應(yīng)、抗病毒、抗過敏等作用。已開發(fā)成為抗糖尿病藥物如匙羹藤復(fù)方?jīng)_劑、降糖湯等。目前國內(nèi)外的研究僅局限于對匙羹藤葉的研究，對其莖的研究報道也不多，但是目前為止，還沒有有關(guān)對其果及匙羹藤果具有抗炎作用進行研究的相關(guān)報道，尤其是對其果中化學(xué)成分的研究尚屬空白，因此為了充分利用匙羹藤每一部位資源，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)上，開發(fā)匙羹藤果的藥用用途。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明針對以上問題，本發(fā)明目的是提供一種匙羹藤果在抗炎藥物中應(yīng)用及其應(yīng)用的組合物，能充分利用匙羹藤每一部位資源，開發(fā)匙羹藤果的藥用用途，且開發(fā)出的效果好，不良反應(yīng)低。為了達到上述目的，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：一種匙羹藤果在抗炎藥物中的應(yīng)用。如上所述一種匙羹藤果在抗炎藥物中的應(yīng)用的組合物，所述組合物中含有具有抗炎作用的匙羹藤果。進一步地，所述匙羹藤果為匙羹藤果水提液或匙羹藤果70%乙醇總浸膏，進一步地，所述匙羹藤果具有抗炎作用的主要物質(zhì)為香樹脂醇桂皮酸酯和羽扇豆醇桂皮酸酯。進一步地，所述匙羹藤果水提液的制備方法為：將匙羹藤果破碎，然后反復(fù)進行浸泡，煮沸至少3次，冷卻過濾，取濾液后進行濃縮至稀膏狀，即得匙羹藤果水提液。進一步地，所述浸泡是加入剛好沒過匙羹藤果的總量頂部的水；所述破碎的粒度為≤1cm。進一步地，所述匙羹藤果70%乙醇總浸膏的制備方法為：將匙羹藤果先后進行曬干、粉碎后加入體積濃度為70%乙醇浸泡后進行回流提取，反復(fù)提取至少20次后收集提取液，將得到的提取液再先后經(jīng)過減壓回收乙醇、濃縮、干燥后得浸膏，即為70%乙醇總浸膏。進一步地，所述加入體積濃度為70%乙醇的量為剛好沒過匙羹藤果的總量頂部；所述曬干的含水率≤5%；所述粉碎的粒度為≤1cm。如上所述一種匙羹藤果在抗炎藥物中的應(yīng)用的組合物制成的劑型，將組合物加入國家和行業(yè)標準及法規(guī)允許加入的輔料，可制成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、膏劑、注射劑和噴霧劑。本發(fā)明中涉及的藥品均能在市面上采購到。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：1.本發(fā)明通過對二甲苯，冰醋酸和角叉菜膠作為致炎因子研究匙羹藤果水提液和70%乙醇總浸膏的抗炎作用，結(jié)果表明匙羹藤果水提液和70%乙醇總浸膏均能抑制二甲苯致小鼠的耳廓腫脹反應(yīng)，降低冰醋酸誘發(fā)的小鼠腹腔血管通透性的增高，抑制角叉菜膠致小鼠的足趾腫脹，具有較好的抗炎作用，且服用不良反應(yīng)更低，安全性更好；并且實驗結(jié)果表明，匙羹藤果水提液和70%乙醇總浸膏均能減少角叉菜膠致小鼠腫脹足的炎性滲出液PGE2，恢復(fù)炎癥小鼠的SOD活力，降低MDA含量，提示匙羹藤果水提液和70%乙醇浸膏的抗炎作用可能是通過抑制COX途徑,阻斷炎性介質(zhì)PGs的合成與釋放,并通過減小機體細胞受自由基攻擊的程度,減少機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度和細胞損傷，從而降低炎癥反應(yīng),達到抗炎的效果。SOD對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基（O2-），保護細胞免受損傷，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機體清除自由基的能力；MDA的量常常可反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出機體細胞受自由基攻擊損傷的嚴重程度。本實驗測定了角叉菜膠致小鼠腫脹足PGE2、MDA含量及SOD活性，本發(fā)明通過匙羹藤果抗炎活性的評價實驗，實驗結(jié)果表明：匙羹藤果水提液和70%乙醇總浸膏均能減少角叉菜膠致小鼠腫脹足的炎性滲出液PGE2，恢復(fù)炎癥小鼠的SOD活力，降低MDA含量，提示匙羹藤果水提液和70%乙醇浸膏的抗炎作用可能是通過抑制COX途徑,阻斷炎性介質(zhì)PGs的合成與釋放,并通過減小機體細胞受自由基攻擊的程度,減少機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度和細胞損傷，從而降低炎癥反應(yīng),達到抗炎的效果。2.本發(fā)明中提取方法和浸膏制備方法操作簡單、易懂，且在制備浸膏中所用的溶劑只用了70%濃度的乙醇，溶劑配制簡易，同時本申請采用直接回流提取，不需長時間的滲漉和浸泡操作，時間短，效率高。附圖說明圖1是本發(fā)明香樹脂醇桂皮酸酯紅外光譜圖；圖2是本發(fā)明香樹脂醇桂皮酸酯EI-MS圖譜；圖3是本發(fā)明香樹脂醇桂皮酸酯13C-NMR和DEPT譜；圖4是本發(fā)明香樹脂醇桂皮酸酯1H-NMR譜；圖5是本發(fā)明羽扇豆醇桂皮酸酯紅外光譜圖；圖6是本發(fā)明羽扇豆醇桂皮酸酯EI-MS圖譜；圖7是本發(fā)明羽扇豆醇桂皮酸酯13C-NMR和DEPT譜；圖8是本發(fā)明羽扇豆醇桂皮酸酯1H-NMR譜。具體實施方式下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明的保護范圍不限于實施例。實施例1：將匙羹藤果洗凈搗碎成稀泥狀，即得到匙羹藤果原藥。使用得到的原藥直接涂抹至發(fā)炎傷口，每天上3次藥，一周后明顯改善。實施例2：（1）將匙羹藤果破碎粒度為1cm，然后加入剛好沒過匙羹藤果的總量頂部的水浸泡60min、煮沸20min，然后加入剛好沒過匙羹藤果的總量頂部的水浸泡10min、煮沸40min，再加入剛好沒過匙羹藤果的總量頂部的水浸泡5min、煮沸20min，冷卻過濾，取濾液后進行濃縮至稀膏狀，即得匙羹藤果水提液。（2）將匙羹藤果先后進行曬干至含水率5%、粉碎粒度為8mm后加入剛好沒過匙羹藤果的總量頂部、體積濃度為70%乙醇浸泡10h然后進行回流提取，反復(fù)提取3次后收集提取液，將得到的提取液再先后經(jīng)過減壓回收乙醇、濃縮、干燥后得浸膏，即為70%乙醇總浸膏。將上述得到的匙羹藤果水提液，可加入國家和行業(yè)標準及法規(guī)允許加入的輔料，可制成注射劑或噴霧劑。將上述得到的70%乙醇總浸膏，可加入國家和行業(yè)標準及法規(guī)允許加入的輔料，可制成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑或膏劑。實施例3：匙羹藤果抗炎活性的評價1.實驗方法1.1實驗動物昆明種小白鼠，22～24g，雄性，普通級（CV），由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。動物飼養(yǎng)條件：室溫：25±1℃（空調(diào)）；相對濕度：70%，自由攝食與飲水，各組飼料與飲用水完全相同。1.1.1小鼠二甲苯致耳廓腫脹實驗1.1.2分組與給藥取雄性小鼠，隨機分為8組，每組8只，即空白對照組；地塞米松組；水提液高、中、低劑量組（依次為：12g生藥/kg，6g生藥/kg，3g生藥/kg），70%乙醇總浸膏高、中、低劑量組（依次為：24g生藥/kg，12g生藥/kg，6g生藥/kg），灌胃給藥，地塞米松組灌胃地塞米松6mg/kg，空白對照組給予等體積的蒸餾水，連續(xù)給藥10d；末次給藥45min后,于小鼠右耳正反面均勻涂抹二甲苯20μL/只,左耳作對照，15min后脫頸椎處死小鼠，用8mm打孔器在左右耳相同的部位打下耳圓片，精確稱重。1.1.3實驗數(shù)據(jù)處理與計算腫脹度(mg)=右耳耳片重(mg)-左耳耳片重(mg)，抑制率(%)=(空白對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/空白對照組平均腫脹度×100%。1.2小鼠腹腔毛細血管通透性實驗1.2.1分組與給藥取雄性小鼠，隨機分為8組,每組8只，即空白對照組；地塞米松組；水提液高、中、低劑量組（依次為：12g生藥/kg，6生藥/kg，3g生藥/kg），70%乙醇總浸膏高、中、低劑量組（依次為：24g生藥/kg，12g生藥/kg，6g生藥/kg），灌胃給藥，地塞米松組灌胃地塞米松6mg/kg，空白對照組給予等體積的蒸餾水，連續(xù)給藥10d。末次給藥45min后，尾靜脈注射0.5%伊文思蘭溶液0.1ml/10g，立即腹腔注射0.6%冰醋酸0.2ml/只，15min后脫頸椎處死小鼠，剪開腹部皮膚，用6ml生理鹽水腹腔注射沖洗腹腔，收集腹腔液，加生理鹽水至10ml，3000轉(zhuǎn)/分離心，取上清液，用分光光度計在波長590nm下測定吸光度（OD）值。1.3角叉菜膠致小鼠足趾腫脹實驗1.3.1動物分組和給藥方法雄性小鼠，隨機分為8組，每組8只，即空白對照組；地塞米松組；水提液高、中、低劑量組（依次為：12g生藥/kg，6g生藥/kg，3g生藥/kg），70%乙醇總浸膏高、中、低劑量組（依次為：24g生藥/kg，12g生藥/kg，6g生藥/kg），灌胃給藥，地塞米松組灌胃地塞米松6mg/kg,空白對照組給予等體積的蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)7d。末次給藥1h后，每只小鼠右側(cè)足趾皮下注射1%角叉菜膠0.05mL，并分別于注射后60min、120min、180min，用足趾容積測量儀測量小鼠的足趾體積；4h后沿踝關(guān)節(jié)切下正常足和致炎足,稱重,計算腫脹度和抑制率。1.3.2對角叉菜膠致小鼠腫脹足PGE2、MDA含量及SOD活性的影響取小鼠致炎足和正常對照組小鼠右足，稱重，剪碎，按10%濃度浸于生理鹽水中，浸泡2h后，離心，取上清液。取上清液200μL，加0.5mol/l氫氧化鉀-甲醇溶液2mL，在50℃水浴異構(gòu)化20min后，用甲醇稀釋至4mL，于紫外-可見分光光度計在波長278nm處測定其吸光度(OD值)，代表PGE2的生成量；另取上清液，分別按照超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）試劑盒中的檢測方法測定SOD活性和MDA含量。2.實驗結(jié)果所有數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標準差表示，各組間均數(shù)差異以SPSS統(tǒng)計軟件進行t檢驗，結(jié)果見表1～表2.2.1匙羹藤果水提液和匙羹藤果70%乙醇總浸膏（以下簡稱70%乙醇總浸膏）對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響表1匙羹藤果水提液對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01表2匙羹藤果70%乙醇總浸膏對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01由表1～表2可以看出：高劑量的匙羹藤果70%乙醇總浸膏能明顯減輕二甲苯致小鼠耳廓腫脹反應(yīng)，與空白對照組相比，有顯著性差異（P＜0.05），從抑制率看，各給藥組在一定程度上，均能抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹反應(yīng)。結(jié)果表明：匙羹藤果水提液和匙羹藤果70%乙醇總浸膏均能抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹反應(yīng)，其中匙羹藤果70%乙醇總浸膏抑制能力最強；水提液和匙羹藤果70%乙醇總浸膏對二甲苯致小鼠耳廓腫脹反應(yīng)的抑制率可能跟劑量有關(guān)，隨著劑量減少，抑制率降低。2.2匙羹藤果水提液和70%乙醇總浸膏對小鼠腹腔血管通透性的影響表3匙羹藤果水提液對小鼠腹腔血管通透性的影響組別動物數(shù)（n）劑量（g/kg）OD值抑制率（%）空白對照組8—0.8813±0.2750地塞米松對照組80.0060.5554±0.1698＊＊36.97高劑量組813.330.6060±0.0871＊31.23中劑量組86.650.7479±0.075115.13低劑量組83.330.7662±0.158013.06注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01表4匙羹藤果70%乙醇總浸膏對小鼠腹腔血管通透性的影響組別動物數(shù)（n）劑量（g/kg）OD值抑制率（%）空白對照組8—0.8813±0.6342地塞米松對照組80.0060.5554±0.1698＊＊36.97高劑量組8240.5727±0.1560＊35.01中劑量組8120.8725±0.09641低劑量組860.8802±0.20460.12注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01由表3～表4可以看出：地塞米松組可以極顯著抑制醋酸誘發(fā)小鼠腹腔血管通透性的增高，小鼠在給予匙羹藤果水提液和70%乙醇浸膏后，腹腔血管通透性也得到了一定程度的抑制，特別是水提液和70%乙醇浸膏的高劑量組，與空白對照組相比，有顯著性差異（P＜0.05）。實驗結(jié)果表明：匙羹藤果水提液和70%乙醇浸膏可抑制醋酸誘發(fā)小鼠腹腔血管通透性的增高，其抑制率可能跟劑量有關(guān)，隨著劑量減少，抑制率降低。2.3匙羹藤果水提液和70%乙醇總浸膏對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響表5匙羹藤果水提液對小鼠腫脹足足趾體積的影響注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01表6匙羹藤果70%乙醇總浸膏對小鼠腫脹足足趾體積的影響注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01表7匙羹藤果水提液對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01表8匙羹藤果70%乙醇總浸膏對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01由表5～表8可以看出：地塞米松組可極顯著抑制角叉菜膠致小鼠足趾腫脹，與空白對照組相比，有極顯著性差義（P＜0.01）；匙羹藤果水提液的高劑量組和低劑量組可極顯著抑制角叉菜膠致小鼠足趾腫脹體積的增長（P＜0.01），水提液中劑量和70%乙醇總浸膏均能顯著抑制角叉菜膠致小鼠足趾腫脹體積的增長（P＜0.05）；匙羹藤果水提液和70%乙醇浸膏均能顯著抑制角叉菜膠致小鼠腫脹足重量的增長（P＜0.05）。實驗結(jié)果表明：匙羹藤果水提液和70%乙醇浸膏均能抑制角叉菜膠致小鼠足趾腫脹。2.4對角叉菜膠致小鼠腫脹足PGE2、MDA含量及SOD活性的影響表9水提液對角叉菜膠致小鼠腫脹足PGE2、SOD活性及MDA含量的影響注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01表1070%乙醇浸膏對角叉菜膠致小鼠腫脹足PGE2、SOD活性及MDA含量的影響注：1、與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01由表9～表10中可以看出：匙羹藤果水提液和70%乙醇浸膏均能減少角叉菜膠致小鼠腫脹足的炎性滲出液PGE2，與正常對照組相比，有極顯著性差異（P＜0.01），同時能恢復(fù)其SOD活力，降低MDA含量，與正常對照組相比，有顯著性差異（P＜0.05）。實施例3：進一步地，取實施例1得到的匙羹藤果70%乙醇總浸膏，用硅膠拌樣后，依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、95％乙醇回流提取，回收溶劑，濃縮，得石油醚部位浸膏、乙酸乙酯部位浸膏、正丁醇部位浸膏、95％乙醇部位浸膏。取石油醚部位浸膏，用硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑，梯度洗脫，在40：1洗脫部分，得到黃色的油狀物，先用石油醚將溶液洗去黃色的油狀物，再用丙酮反復(fù)重結(jié)晶得到白色羽狀結(jié)晶，為化合物香樹脂醇桂皮酸酯（β-Amyrincinnamate）；取乙酸乙酯部位，用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，用碘蒸氣、磷鉬酸乙醇溶液、香草醛-濃硫酸溶液顯色檢識。在100:1洗脫部分，從餾分得到白色粉末狀物質(zhì)，餾分后用乙酸乙酯溶解，硅膠拌勻，上硅膠色譜柱，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，在80:1洗脫部分，得到一白色粉末，得化合物羽扇豆醇桂皮酸酯（lupeolcinnamate）。對上述實施例3中的香樹脂醇桂皮酸酯（β-Amyrincinnamate）和羽扇豆醇桂皮酸酯（lupeolcinnamate）進行的鑒定：1.香樹脂醇桂皮酸酯（β-Amyrincinnamate）的鑒定：1.1物理性質(zhì)：白色羽狀結(jié)晶，mp229～230℃，溶于石油醚、丙酮；不溶于水。1.2IR(KBr壓片)：1767cm-1吸收峰顯示有羰基存在。1.3EI-MS（m/z）：556，結(jié)合其核磁數(shù)據(jù)確定分子式為C39H56O2。1H-NMR(500MHz,CDCl3)譜，7.68（1H，d，J=16.0）和6.44（1H，d，J=16.0）為反式烯氫，7.52（2H，m）和7.38（3H，m）為5個芳氫，說明為一個苯環(huán)單取代。13C-NMR(500MHz,CDCl3)譜中給出了一個肉桂酰信號：δC166.8、119.0、144.2、134.7、128.0、128.8、130.1，故推斷有一個肉桂酰結(jié)構(gòu)片段。碳譜中剩下還有30個碳信號，結(jié)合DEPT譜圖，可知結(jié)構(gòu)中含有8個甲基、10個亞甲基、5個次甲基和6個季碳，推測為三萜類結(jié)構(gòu)。δC145.2和δC121.7為齊墩果烷的特征烯鍵碳信號，判斷為齊墩果烷型的三萜?？梢娫摶衔锏慕Y(jié)構(gòu)為肉桂酰結(jié)構(gòu)和齊墩果烷結(jié)構(gòu)連在一起。核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[57]的香樹脂醇桂皮酸酯（β-Amyrincinnamate）數(shù)據(jù)基本一致，推斷該化合物為香樹脂醇桂皮酸酯（β-Amyrincinnamate），結(jié)構(gòu)式為：其核磁數(shù)據(jù)歸屬見表1.1，相關(guān)圖譜見說明書附圖圖1—圖4。表1.1香樹脂醇桂皮酸酯的碳譜數(shù)據(jù)(500MHz,CDCl3)2.羽扇豆醇桂皮酸酯（lupeolcinnamate）的鑒定：2.1白色粉末狀，溶于石油醚和乙酸乙酯，不溶于甲醇，乙醇和水。2.2IR(KBr壓片)：1710.39cm-1吸收峰顯示有-C=O存在，1639.25cm-1、1495.78cm-1、1450.39cm-1吸收峰顯示有苯環(huán)存在。2.3EI-MS（m/z）:556，結(jié)合其核磁數(shù)據(jù)確定分子式為C39H56O2。1H-NMR(500MHz,CDCl3,δppm)譜，7.66（1H，d，J=16.0）和6.44（1H，d，J=16.0）為反式烯氫，7.52（2H，m）和7.38（3H，m）為5個芳氫，說明為一個苯環(huán)單取代，13C-NMR(500MHz,CDCl3，δppm)譜中給出了一個肉桂酰信號：δC166.8、119.0、144.2、134.7、128.0、128.8、130.1，故推斷有一個肉桂酰結(jié)構(gòu)片段。碳譜中剩下還有30個碳信號，結(jié)合DEPT譜圖，可知結(jié)構(gòu)中還含有7個甲基、12個亞甲基、6個次甲基和5個季碳，δC151.0和δC109.4為羽扇豆烷的特征支鏈末端烯鍵碳信號，判斷該化合物為羽扇豆型的三萜類化合物。δC28.1、16.7、16.2、16.0、14.6、18.0、19.3為7個甲基的碳信號。核磁數(shù)據(jù)與文獻報道[59]的羽扇豆醇桂皮酸酯數(shù)據(jù)基本一致，推斷該化合物為羽扇豆醇桂皮酸酯，結(jié)構(gòu)式如為其核磁數(shù)據(jù)歸屬見表2.1，相關(guān)圖譜見說明書附圖5～8。表2.1羽扇豆醇桂皮酸酯的碳譜數(shù)據(jù)(500MHz,CDCl3)以上實施方式只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人了解本
發(fā)明內(nèi)容并加以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍，凡根據(jù)本發(fā)明精神實質(zhì)所做的等效變化或修飾例如匙羹藤果水提液的制備溫度、壓力大小、煮沸時間等的改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。當前第1頁1 2 3