本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
背景技術(shù)：
：骨質(zhì)疏松是一種全身性的、代謝性的骨疾病，其特征是骨量減少和丟失，骨脆性和骨折危險(xiǎn)性增加。隨著人口的老齡化，骨質(zhì)疏松的發(fā)病率也隨著迅速增加，已經(jīng)成為危害人類健康的重要疾病，并給全球帶來了巨大的社會和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。盡管國內(nèi)外相關(guān)專家學(xué)者對此病的防治十分重視，但該病尚缺乏有效的治療藥物。目前臨床上常用的防治骨質(zhì)疏松的藥物包括雌激素替代藥物，雙膦酸鹽類，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，維生素D，甲狀旁腺素和人重組甲狀旁腺激素(1-34)等。雙磷酸鹽類藥物雖然效果不錯(cuò)，但可導(dǎo)致頜骨壞死、肌肉骨骼痛和腎功能衰竭等嚴(yán)重不良反應(yīng)；激素替代療法雖然是防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的重要方法，但長期使用有導(dǎo)致乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌的潛在危險(xiǎn)且發(fā)生血栓的風(fēng)險(xiǎn)也增加；而選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑可以使血栓性事件明顯增加。其他藥物或價(jià)格昂貴，或遠(yuǎn)期療效不確切，均不夠理想。由于骨質(zhì)疏松是一種慢性病，需要長期服藥，因此價(jià)格便宜，毒副作用小的中草藥已成為研究治療骨質(zhì)疏松的熱點(diǎn)之一。骨質(zhì)疏松的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價(jià)值。本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2009年發(fā)表(ShengYinetal.,2009.HarrisotonesA–E,fivenovelprenylatedpolyketideswithararespirocyclicskeletonfromHarrisoniaperforata.Tetrahedron65(2009)1147–1152)的化合物，我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗骨質(zhì)疏松活性進(jìn)行了評價(jià)，其具有抗骨質(zhì)疏松活性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為50％和50％。本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明提供組合物的抗骨質(zhì)疏松新用途。本發(fā)明通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)組合物在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。進(jìn)一步，所述的骨質(zhì)疏松是由于雌激素缺乏導(dǎo)致。本發(fā)明通過體內(nèi)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)組合物有顯著的預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用。組合物能夠抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強(qiáng)和骨質(zhì)破壞，同時(shí)可以提高血鈣濃度，有利于骨的沉積。是一種理想的防治骨質(zhì)疏松的藥物。以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。具體實(shí)施方式實(shí)施例1化合物HarrisotoneA的制備化合物HarrisotoneA(I)的制備方法參照ShengYin等人發(fā)表的文獻(xiàn)(ShengYinetal.,2009.HarrisotonesA–E,fivenovelprenylatedpolyketideswithararespirocyclicskeletonfromHarrisoniaperforata.Tetrahedron65(2009)1147–1152)的方法。實(shí)施例2HarrisotoneA的O-溴乙基衍生物(II)的合成將化合物I(472mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌3h。3h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌2次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(602mg，76％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.18(s,2H),4.56(s,2H),3.93(d,J＝16.7Hz,4H),3.79(s,2H),3.62(d,J＝0.9Hz,4H),3.15(s,2H),2.48(s,2H),2.41(d,J＝9.4Hz,4H),2.27(s,1H),1.95(s,1H),1.88–1.80(m,8H),1.77(d,J＝15.5Hz,7H),1.68(s,1H),1.61(s,1H),1.51(s,1H),1.25(d,J＝58.1Hz,1H),1.15–0.75(m,6H).13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.46(s),198.24(s),195.44(s),190.27(s),135.27(s),120.09(s),115.02(s),84.45(s),76.58(s),74.12(s),63.67(s),62.76(s),60.36(s),50.96(s),45.22(s),39.69(s),36.61(s),34.40(s),32.63(s),30.81(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.30(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.77(s),18.20(s).HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforC34H50Br3O6:793.1137；found793.1134.實(shí)施例3HarrisotoneA的O-(二乙氨基)乙基衍生物(III)的合成將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和二乙胺(2920mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的淡黃色固體(246.1mg,64％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.13(s,2H),4.19(s,2H),3.52(d,J＝5.3Hz,4H),3.21(s,2H),3.04(s,2H),2.85(s,12H),2.64(d,J＝13.5Hz,4H),2.33(s,3H),2.18(s,1H),2.11(s,2H),2.04(s,1H),1.98(s,1H),1.88(s,1H),1.77(d,J＝5.0Hz,7H),1.70(d,J＝15.5Hz,7H),1.61(s,1H),1.54(s,1H),1.44(s,1H),1.37(s,1H),1.10(s,24H).13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.30(s),198.04(s),195.18(s),190.07(s),135.11(s),119.89(s),114.86(s),84.15(s),76.42(s),66.70(s),62.58(s),60.18(s),59.97(s),52.53(s),51.93(s),50.76(s),47.69(s),45.04(s),39.51(s),36.43(s),30.63(d,J＝8.9Hz),28.61(s),25.10(s),23.93(d,J＝19.2Hz),22.57(s),18.04(s),12.27(s).HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdforC46H80N3O6:770.6047；found:770.6044。實(shí)施例4HarrisotoneA的O-(哌嗪基)乙基衍生物的合成將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于16mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和無水哌嗪(6892mg，80mmol)，混合物加熱回流1h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入15mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集淡棕色集中洗脫帶即得到化合物IV的淡棕色固體(286.9mg,71％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.14(s,2H),4.21(s,2H),3.53(d,J＝6.2Hz,4H),3.09(s,2H),3.05(s,2H),2.66(s,12H),2.57–2.53(m,4H),2.33(d,J＝15.0Hz,15H),2.24(s,1H),2.14(s,2H),2.10(s,1H),2.00(s,1H),1.88(d,J＝10.5Hz,3H),1.79(d,J＝5.0Hz,7H),1.71(d,J＝15.5Hz,7H),1.63(s,1H),1.55(s,1H),1.46(s,1H),1.15–1.05(m,8H).13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.30(s),198.04(s),195.28(s),190.07(s),135.11(s),119.89(s),114.86(s),84.25(s),76.42(s),66.70(s),62.58(s),60.18(s),59.97(s),54.35(s),54.16(s),53.66(s),50.78(s),45.24(s),45.06(s),39.49(s),36.45(s),30.61(d,J＝8.9Hz),28.61(s),25.10(s),23.93(d,J＝19.2Hz),22.58(s),18.04(s).HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdforC46H77N6O6:809.5905；found:809.5901。實(shí)施例5組合物抗骨質(zhì)疏松作用的檢測1、材料與方法組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的50mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的50mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。將十周齡健康SD雌鼠(30只，江蘇省動物中心)隨機(jī)分成5組，每組6只：假手術(shù)組(Sham)、卵巢切除模型組(OVX)、組合物組、化合物III組和化合物IV組。飼養(yǎng)條件：溫度為(23±2)℃，光照:黑暗為12∶12。讓各組大鼠適應(yīng)環(huán)境2周后開始骨質(zhì)疏松造模手術(shù)：各組大鼠均經(jīng)腹腔注射20％烏拉坦麻醉(6ml/kg體重)，Sham組開腹后關(guān)腹，其余兩組行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。術(shù)后第4周起，Sham組和OVX組每天進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料和去離子水，組合物組、化合物III組和化合物IV組每天進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料和去離子水，同時(shí)分別灌胃給與組合物、化合物III和化合物IV10mg/kg，連續(xù)3個(gè)月，每周稱一次體重。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用烏拉坦麻醉，摘取眼球采血，2000r/min離心，吸取上清(即血清)。摘除大鼠子宮，迅速稱重。取出大鼠雙側(cè)股骨和雙側(cè)脛骨，剔除軟組織。兩脛骨經(jīng)800℃高溫爐(由南京大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院提供)中灰化8h，冷卻后稱灰重。用研缽碾碎成灰狀，取0.1g骨灰溶于1ml,6mol/l鹽酸中，測骨鈣和骨磷時(shí)取0.2ml用超純水稀釋至1ml，用全自動生化分析儀檢測骨鈣和骨磷含量。左股骨用骨密度儀測量骨密度(BMD)。血清生化指標(biāo)測定：取血清0.5ml，用全自動生化分析儀檢測血清堿性磷酸酶(ALP)、鈣(Ca)和磷(P)。2、結(jié)果(1)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠血清ALP，血清Ca和血清P的的影響表1可以看出去卵巢后，模型組大鼠血清堿性磷酸酶活性增加。去卵巢后，體內(nèi)雌激素缺乏，導(dǎo)致骨轉(zhuǎn)化率增加，與絕經(jīng)后婦女的高轉(zhuǎn)化型骨質(zhì)疏松癥一致。給予組合物3個(gè)月后，堿性磷酸酶活性顯著下降，可見組合物可以抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率的增加，減少骨質(zhì)的破壞。表中還顯示與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血清鈣明顯下降，而組合物可顯著提升血清鈣濃度。血清鈣是骨形成的重要標(biāo)記物，說明組合物可以有效逆轉(zhuǎn)由于卵巢切除導(dǎo)致的血清鈣的降低，有利于骨的形成。而化合物III和化合物IV沒有組合物的作用。表1組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠血清ALP，血清Ca和血清P的影響*P<0.05vsOVX組(2)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠左股骨BMD的的影響表2可以看出去卵巢后模型組大鼠左股骨骨密度較假手術(shù)組顯著下降，給予組合物3個(gè)月后，骨密度顯著增加。而化合物III和化合物IV沒有此作用。表2組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠左股骨BMD的的影響實(shí)驗(yàn)組別左股骨BMD(g/cm2)sham0.324OVX0.210組合物0.315*化合物III0.241化合物IV0.232*P<0.05vsOVX組(3)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠雙側(cè)脛骨參數(shù)的影響表3可以看出與假手術(shù)組相比，模型組大鼠雙脛骨灰重顯著降低，而組合物組較模型組顯著升高。組合物也能顯著升高骨鈣和骨磷含量。而化合物III和化合物IV沒有此作用。表3組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠雙側(cè)脛骨參數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)組別雙脛骨骨鈣(g/g)雙脛骨骨磷(g/g)雙脛骨灰重(g)Sham0.2520.2840.85OVX0.2040.2110.43組合物0.246*0.266*0.81*化合物III0.2130.2210.66化合物IV0.2190.2180.68*P<0.05vsOVX組結(jié)論：組合物能夠抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強(qiáng)和骨質(zhì)破壞，同時(shí)可以提高血鈣濃度，有利于骨的沉積。對于由于雌激素缺乏導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松具有防治作用，并且無雌激素樣副作用。組合物可以用于骨質(zhì)疏松的防治?；衔颕II和化合物IV不能夠抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強(qiáng)和骨質(zhì)破壞，不可以提高血鈣濃度，不利于骨的沉積，對于由于雌激素缺乏導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松不具有防治作用，不可以用于骨質(zhì)疏松的防治。實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。當(dāng)前第1頁1 2 3