本發(fā)明涉及一種中藥滴丸及其制備方法，具體涉及一種本發(fā)明滴丸的中藥滴丸及其制備方法。
背景技術(shù)：
：梔子為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的果實，是傳統(tǒng)中藥，屬衛(wèi)生部頒布的第一批藥食兩用資源，梔子具有瀉火除煩，涼血解毒，清利濕熱的功效，用于熱擾心神，咽腫目赤，熱毒瘡瘍，心煩易怒，肋同口苦，濕熱下注，熱淋澀痛等癥。黃芩為唇形科黃芩屬的黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的根，味苦、性寒，具有能清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。主治溫?zé)岵?、上呼吸道感染、肺熱咳嗽、濕熱黃膽、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎動不安、高血壓、癰腫癤瘡等癥?；瘜W(xué)成分及作用研究表明：黃芩根含有黃酮類化合物黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、黃芩新素Ⅰ、黃芩新素Ⅱ等，黃芩具有抗氧化、抗細(xì)菌、抗病毒、抗真菌作用，抗腫瘤，抗炎解熱作用，抗變態(tài)反應(yīng)，防止動脈粥樣硬化、降壓等作用，此外，黃芩及有效成分保肝和防輻射，抑制凝血酶引起的血小板凝聚等作用。梔子中含有環(huán)烯醚萜類成分，有梔子苷、京尼平苷(去羥梔子苷)及其水解產(chǎn)物京尼平等，此外，還含有β-谷甾醇、藏紅花苷、梔子素、藏紅花素和熊果酸等成分，梔子具有良好的護(hù)肝、促進(jìn)膽汁分泌、保護(hù)胰腺細(xì)胞、調(diào)節(jié)胃機(jī)能、保護(hù)腦組織、降壓、促進(jìn)血液循環(huán)、解熱鎮(zhèn)靜、抗菌抗炎、抗腫瘤、抗過敏、修復(fù)軟組織損傷的作用。臨床上用于治療急性黃疸型肝炎、扭挫傷。缺血性腦血管病是威脅人類健康與生存的主要疾病之一，具有高發(fā)病率、高患病率、高死亡率、高致殘率的特點。近年來，隨著藥物代謝動力學(xué)研究的不斷發(fā)展，越來越多的研究人員開始借助先進(jìn)儀器設(shè)備，利用動力學(xué)原理，采用數(shù)學(xué)模型來定量的揭示藥物在體內(nèi)的動態(tài)變化過程。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明目的在于提供一種具有清熱解毒、宣竅活絡(luò)功能的中藥滴丸及其制備方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：原料藥組成為：梔子苷提取物3-7重量份，黃芩苷提取物8-15重量份，冰片12-18重量份；制備：稱取重量份配比為1:0.8-1.5的原料藥藥粉和基質(zhì)，基質(zhì)為1:1.8-2.5的PEG6000和PEG4000，加熱至75-90℃，在滴速30-50滴/min條件下制成滴丸。原料藥組成優(yōu)選為：梔子苷提取物5.4重量份，梔子苷提取物12.6重量份，冰片15重量份；梔子苷提取物4重量份，黃芩苷提取物13重量份，冰片13重量份；梔子苷提取物6重量份，黃芩苷提取物10重量份，冰片16重量份；優(yōu)選其中，藥粉與基質(zhì)配比為1:1，基質(zhì)為1:2的PEG6000、PEG4000，加熱至80℃，在滴速40滴/min條件下制成滴丸。附圖說明圖1A高效液相色譜圖圖2B高效液相色譜圖圖3C高效液相色譜圖圖4D高效液相色譜圖圖5E高效液相色譜圖，A.梔子苷對照品；B.梔子提取物；C.黃芩苷對照品；D.黃芩提取物；E本發(fā)明滴丸圖6梔子苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖圖7黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖本發(fā)明所述梔子苷提取物、梔子苷提取物均由現(xiàn)有技術(shù)中所給出的制備方法得到。本發(fā)明滴丸具有清熱解毒、宣竅活絡(luò)之功，適用于中風(fēng)病中經(jīng)絡(luò)急性期和恢復(fù)早期的瘀血阻絡(luò)合風(fēng)火上擾證。與其他治療中風(fēng)病藥物相比，本發(fā)明滴丸在組方方面具有中醫(yī)“清熱解毒、宣竅活絡(luò)”的獨特治療法則；在病證方面其所治療缺血性中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)、瘀血阻絡(luò)合風(fēng)火上擾證急性期和恢復(fù)早期為臨床所急需；在藥劑方面其采用五類新藥的制備方法，為中藥有效部位(成分)滴丸,具有安全有效、質(zhì)量穩(wěn)定可控、口服速效之優(yōu)勢和特色。實驗例1藥學(xué)研究實驗1.儀器與試藥1.1儀器Waters2695高效液相色譜儀，配Waters2996二極管陣列檢測器(美國Waters公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG-9140型(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)；CQ250超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；BT-25S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，MP5002電子天平(上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；智能崩解儀(天精天大天發(fā)科技有限公司)DWJ-2000S-D型滴丸試驗機(jī)(煙臺百藥泰中藥科技發(fā)展有限公司)；PHS-3CPH計(上海精密科學(xué)儀器有限公司)1.2試藥梔子苷提取物(南京澤朗植提公司，批號：20130411)，黃芩苷提取物(南京澤朗植提公司，批號：20130322)，冰片(西安盛興中藥飲片公司)。對照品梔子苷(中國藥品生物制品檢定所，批號：110749-201115)；對照品黃芩苷(中國藥品生物制品檢定所，批號：715-200111)。乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。2.實驗方法與結(jié)果2.1本發(fā)明滴丸工藝的正交(Orthogonal)試驗2.1.1Orthogonal試驗設(shè)計對影響滴丸工藝的主要因素藥粉基質(zhì)比、PEG6000：PEG4000比例、料液溫度、藥液溫度進(jìn)行4因素3水平的正交試驗設(shè)計，因素水平見表1。表1Orthogonal試驗因素水平表Tab.1Factorsandlevelsoforthogonaltest2.1.2本發(fā)明滴丸的制備分別稱取梔子苷提取物5.4g，黃芩苷提取物12.6g，冰片15g,按正交實驗設(shè)計條件制備1-9個滴丸樣品，晾干，再于常溫25℃下干燥24h，粉碎(60目)成中粉，備用。2.2高效液相色譜法測定梔子苷、黃芩苷含量2.2.1色譜色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜柱Thermo(250mm×4.6mm，5um)，流動相：甲醇-0.1％磷酸溶液(35:65)，檢測波長:210-400nm,柱溫:30℃，理論塔板數(shù)按梔子苷峰計算不低于5000，采用等度洗脫條件洗脫。色譜圖見圖1、2、3、4、52.2.2共有峰的指定結(jié)合18組滴丸樣品的HPLC圖譜的相關(guān)參數(shù)，選擇HPLC色譜圖中可用于反映本發(fā)明滴丸作用的共有峰來進(jìn)行測定，并最終確定在238nm特定波長下的梔子苷共有峰共為1個，280nm特定波長下的黃芩苷共有峰共為1個。見圖52.3方法學(xué)考察2.3.1對照品溶液的制備取梔子苷對照品、黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1mL含梔子苷92μg、黃芩苷125μg的溶液，即得。2.3.2供試品溶液的制備分別取9組實驗項下滴丸中粉，(每組平行制樣2份)精密稱定，各組取樣量見下表，分別置25ml容量瓶中，加甲醇10ml,超聲30min，后取出，加甲醇至刻度，搖勻，即得。分別取梔子苷提取物，黃芩苷提取物，精密稱定，分別置25ml容量瓶中，加甲醇10ml,超聲30min，后取出，加甲醇至刻度，搖勻，即得。2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取梔子苷對照品溶液(濃度為：92μg/mL)2，4，6，8，10μL，按上述色譜條件注入色譜儀，測定其峰面積，以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得梔子苷回歸方程為A＝172690C+1213.8，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。結(jié)果表明梔子苷標(biāo)品在0.184～0.920μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。結(jié)果見表6，圖6。精密取黃芩苷對照品溶液2，4，5，6，8，10，12，14，16μL，測定其峰面積，計算得黃芩苷線性方程為A＝522169C-166421，r＝0.9997，結(jié)果表明黃芩苷標(biāo)品在0.25～2.00μg范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表7，圖7。表6梔子苷標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗數(shù)據(jù)Tab.6Standardcurveofgeniposid表7黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)Tab.7Standardcurveofbaicalin2.3.4精密度試驗取2.3.2供試液中同一供試品溶液(1-1)連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，計算RSD。結(jié)果見表6。表8精密度試驗結(jié)果Tab.8Resultsofprecisiontest結(jié)果表明，該儀器的精密度良好。2.3.5穩(wěn)定性試驗選取2.3.2供試液中同一樣品組(1-1)分別間隔0，4，8，12,24h后進(jìn)樣測定，結(jié)果見表7。表9穩(wěn)定性試驗結(jié)果Tab.9Resultsofstsbilitytest結(jié)果RSD分別為0.66％，0.74％表明供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定，測定結(jié)果可信。2.3.6重現(xiàn)性試驗選取同一批次供試品，按照供試品制備方法共制5個樣品，分別進(jìn)樣測定計算，結(jié)果見表10。表10重現(xiàn)性試驗結(jié)果Tab.10Resultsofrepetitiontest結(jié)果RSD為1.00％，1.85％表明重現(xiàn)性良好。2.4數(shù)據(jù)分析與制備工藝參數(shù)優(yōu)化2.4.1指標(biāo)數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化處理選擇PEG4000和PEG6000作為基質(zhì)，通過測量丸重差異、溶散時限及粒徑客觀指標(biāo)從而評價滴丸的質(zhì)量。采用L9(34)正交試驗設(shè)計，優(yōu)選最佳成型工藝，利用梔子苷和黃芩苷含量以及HPLC指紋圖譜評價優(yōu)選工藝參數(shù)。表11滴丸樣品指標(biāo)統(tǒng)計表Tab.11indexdroppingsamplestatistics表12黃芩苷圖譜峰面積統(tǒng)計Tab.12AreaofcharacteristicpeaksinHPLCbaicalinofdifferentsteamingprocessingsmple表13梔子苷圖譜峰面積統(tǒng)計Tab.13AreaofcharacteristicpeaksinHPLCjasminoidinofdifferentsteamingprocessingsmple表14本發(fā)明滴丸直觀分析表Tab.14droppingpillqingxuanqiaobrainintuitiveanalysistable注：采用“溶散時間”和“丸重差異”客觀指標(biāo)綜合評分，綜合評分＝(溶散時間/最大溶散時間)×100×0.4+(丸重差異/最大丸重差異)×100×0.3+(梔子苷轉(zhuǎn)移率+黃芩苷轉(zhuǎn)移率)/2/最大轉(zhuǎn)移率×100×0.3.表15本發(fā)明滴丸方差分析表Tab.15clearbrainxuanqiaodroppingvarianceanalysistable2.4.2數(shù)據(jù)分析由方差分析結(jié)果，比較各因素的極差值可以看出，影響滴丸成型的因素順序為提取物：基質(zhì)>藥液溫度>PEG6000：PEG4000>滴速，由直觀分析可以得出，確定滴丸制劑成型工藝條件為A1B1C3D2。即提取物與基質(zhì)比是1:1，PEG6000：PEG4000是1:2，料液溫度是80℃，滴速是40滴/min。2.4.3驗證試驗稱取藥粉與基質(zhì)配比為1:1，加熱至80℃，稱取比例是1:2的PEG6000、PEG4000，在滴速40滴/min條件下制備滴丸，為檢驗實驗結(jié)果的可靠性，采用上述工藝參數(shù)進(jìn)行本發(fā)明滴丸工藝試驗進(jìn)行3次平行試驗，隨機(jī)抽取樣本進(jìn)行考察，結(jié)果丸重差異的RSD為0.56％，平均溶散時間6.5分鐘，滴丸外觀質(zhì)量好，丸形完整，色澤均一，硬度較好，結(jié)果表明此工藝穩(wěn)定可行。實驗例2藥效學(xué)實驗1.材料和方法1.1儀器、藥物和試劑正置顯微鏡OlympusBX51；眼科手術(shù)剪；眼科手術(shù)鑷；水浴鍋：北京科偉永興儀器有限公司型號HH-1型；電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司，京制00000246號。本發(fā)明滴丸(按照實施例1方法制備)；血塞通分散片，云南白藥集團(tuán)大理藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號：國藥準(zhǔn)字Z20050467；青霉素：哈藥集團(tuán)制藥總廠，國藥準(zhǔn)字：H23021439；紅四氮唑(TTC)購自美國Sigma公司；水合氯醛：上海山浦化工有限公司，批號：20110209。1.2實驗動物、分組給藥及造模SD大鼠，雌雄各半，體重180～200g，西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供，許可證號:0011740。實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)3d,隨機(jī)分為5組，即假手術(shù)組、腦缺血模型組、本發(fā)明滴丸0.9g/kg組、本發(fā)明滴丸1.8g/kg組，血塞通0.3g/kg組。給藥組分別灌服大、小劑量本發(fā)明滴丸(分別相當(dāng)人用量的18倍、9倍)，血塞通30mg/kg(相當(dāng)人用量的6倍)，模型組灌服同體積生理鹽水，每天給藥1次。于第10d給藥后1h，10％水合氯醛0.35ml/100g腹腔注射麻醉，作頸部正中切口，鈍性分離雙側(cè)頸總動脈并結(jié)扎，造模后24h再給藥1次。1.3神經(jīng)癥狀評分根據(jù)ZeaLonga5級評分法加以改進(jìn)，于術(shù)后24h進(jìn)行評定，昏迷者剔除。評分標(biāo)準(zhǔn)：無明顯神經(jīng)癥狀，0分；不能完全伸展左側(cè)前爪，1分；向左側(cè)旋轉(zhuǎn)，2分；行走時向左側(cè)傾倒，3分；不能自行行走，4分。橫木測試是后肢運動的協(xié)調(diào)和整合能力的缺陷進(jìn)行評估。實驗橫木(長120cm，寬2.0cm，厚1cm)距地面80cm水平懸空放置，一端連一暗盒(長25cm，寬22cm，高18cm)，用噪音刺激大鼠通過橫木走進(jìn)暗盒。評分標(biāo)準(zhǔn):大鼠不能呆在橫木上，0分；大鼠能呆在橫木上但不動，1分；大鼠試圖通過，但從橫木摔下，2分；大鼠走上橫木，但后肢滑落次數(shù)超過50％,3分；后肢滑落超過1次但不到50％，4分；僅滑落1次，5分；順利通過，6分。術(shù)前訓(xùn)練3d，讓大鼠學(xué)會順利走過橫木。1.4腦梗塞面積術(shù)后24h動物深度麻醉,斷頭取腦,將腦組織置于0℃的冰生理鹽水中10min,由前極向后每隔2mm作冠狀切片,置于配置好的0.2％TTC溶液中，37℃孵育30min,正常組織染成紅色,梗死組織染成白色。染色后10％甲醛溶液固定24h,將白色組織仔細(xì)挖下稱重,以梗塞組織重量占全腦重量及患側(cè)腦重量的百分比作為腦梗塞范圍(％)。計算梗塞體積百分比。1.5腦含水量測定術(shù)后24h快速斷頭取腦,除去嗅球、腦干及小腦,用濾紙吸干表面水分，分別稱量左右腦濕重。再置于烘箱中，105℃烘烤48h至恒重，精確稱量干重，計算含水量。腦含水量＝[(濕重-干重)/濕重]*100％。1.6大鼠皮層組織病理形態(tài)檢查于術(shù)后24h，每組隨機(jī)取3只大鼠，經(jīng)腹腔注射10％水合氯醛麻醉(0.35ml/100g體重)，斷頭取腦，10％甲醛溶液固定，取材，按常規(guī)制作切片，用中性樹脂密封，在Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察HE染色切片，LEICA數(shù)字顯微照相機(jī)采集圖像，在各組動物缺血側(cè)(右側(cè))皮層部位各選取2個視野，拍照進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。1.7統(tǒng)計方法數(shù)值均采用表示，運用SPSS19.0forwindows進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，組間比較采用ANOVA分析。2.結(jié)果2.1行為學(xué)評分及橫木行走測試結(jié)果顯示，缺血2h再灌22h后，大鼠出現(xiàn)一定程度的神經(jīng)功能缺損癥狀,表現(xiàn)為前肢屈曲，側(cè)推動時阻力下降，前肢肌張力下降及不停向一側(cè)轉(zhuǎn)圈，行為學(xué)評分明顯升高，與假手術(shù)組相比，有顯著差異(P<0.01)；與模型組比較，本發(fā)明滴丸小劑量組和血塞通組神經(jīng)缺損癥狀也有不同程度改善，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表16。2.2梗塞面積測定模型組梗塞百分比最大，與各給藥組比較，其余各給藥組梗塞面積均呈現(xiàn)一定下降趨勢，表明所給藥物對腦缺血模型均有一定的治療作用。見表2。2.3腦腫脹率與假手術(shù)組比較，模型組及各給藥組左右腦含水量均有一定升高，表明腦缺血手術(shù)對模型的大鼠產(chǎn)生一定的腦水腫作用。見表17。表16本發(fā)明滴丸對大鼠腦缺血模型腦損傷行為學(xué)評分的影響注：與模型組比較，**p<0.01,*p<0.05表17本發(fā)明滴丸對大鼠腦缺血模型腦損傷腦梗死面積和腦含水量的影響注：與模型組比較，***p<0.012.4病理學(xué)觀察假手術(shù)組可見局部輕度水腫，其余未見明顯病理改變。模型組可見腦組織細(xì)胞性水腫、血管源性水腫，局部可見小膠質(zhì)細(xì)胞增生，成空網(wǎng)狀，可見少量壞死。大劑量組可見腦組織輕度細(xì)胞性水腫、血管源性水腫，小膠質(zhì)細(xì)胞增生。小劑量組腦組織可見水腫，局部可見成空網(wǎng)狀，可見小面積壞死，部分區(qū)域可見小膠質(zhì)細(xì)胞增生。血塞通局部可見水腫，小膠質(zhì)細(xì)胞增生。缺血性腦病發(fā)病后損傷機(jī)制多樣復(fù)雜，主要包括炎癥反應(yīng)、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、細(xì)胞毒性作用、氧化應(yīng)激等。可以看出與模型組比較各給藥組腦損傷均有一定減輕，表明本發(fā)明滴丸可改善大鼠腦缺血，而行為學(xué)和梗塞面積及腦腫脹率的結(jié)果也表明在缺血大腦腦保護(hù)上也存在一定趨勢。實施例1：梔子苷提取物5.4kg，黃芩苷提取物12.6kg，冰片15kg實施例2：梔子苷提取物4kg，黃芩苷提取物13kg，冰片13kg；稱取重量份配比為1:0.8的原料藥藥粉和基質(zhì)，基質(zhì)為1:2.5的PEG6000和PEG4000，加熱至75℃，在滴速50滴/min條件下制成滴丸。實施例3：梔子苷提取物6kg，黃芩苷提取物10kg，冰片16kg；稱取重量份配比為1:1.5的原料藥藥粉和基質(zhì)，基質(zhì)為1:1.8的PEG6000和PEG4000，加熱至90℃，在滴速30滴/min條件下制成滴丸。當(dāng)前第1頁1 2 3