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一種靶向熱消除調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的光熱轉(zhuǎn)換納米顆粒、制備及應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12325071閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種靶向熱消除調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的光熱轉(zhuǎn)換納米顆粒,其特征是所述納米顆粒表面設(shè)有接枝有長循環(huán)的親水性官能團(tuán)以及靶向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的官能團(tuán),其粒徑在2-100納米之間;所述的納米顆粒,包括非化學(xué)計量比的氧化鎢納米顆?;蛘呓鸺{米顆粒;其中非化學(xué)計量比的氧化鎢納米顆粒,其分子式為WOx,2<X<3;氧化鎢納米顆粒的粒徑在2-100納米之間;其形狀為球形或棒狀、長徑比大于1且小于20;所述的靶向納米顆粒為金納米顆粒時,其粒徑在1-200納米之間,形狀為球形,三角形或棒狀結(jié)構(gòu)中一種或多種;棒狀結(jié)構(gòu)的納米顆粒的長徑比大于1小于20;所述的納米顆粒,在可見-近紅外區(qū)即500-2000nm波長范圍內(nèi)具有強(qiáng)的光吸收能力,產(chǎn)生光熱轉(zhuǎn)化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米顆粒,其特征是所述的納米顆粒表面靶向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的官能團(tuán)包括,CD39單抗、CD25單抗、CTLA-4單抗或者Foxp3單抗中的一種或多種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米顆粒,其特征是所述的納米顆粒,其表面接枝有長循環(huán)的親水性官能團(tuán)是指長循環(huán)層為聚乙二醇(PEG),聚丙烯酸(PAA),聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)中的一種或多種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米顆粒,其特征是所述的納米顆粒表面長循環(huán)層的親水性官能團(tuán),PEG的分子量為500-20000Da;聚丙烯酸分子量為1000-10000Da,聚乙烯基吡咯烷酮分子量為2000-20000Da。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的納米顆粒的制備方法,其特征是納米顆粒的納米內(nèi)核為氧化鎢時,以WCl6在氮氣保護(hù)條件下,溶解在乙二醇中,室溫下攪拌溶解,得到金黃色溶液,而后加入分子量5KDa的聚丙烯酸聚合物,攪拌至全部溶解后,在140±15℃條件下氮氣保護(hù)攪拌反應(yīng),體系受熱后,最初為深棕黃色,最終轉(zhuǎn)變?yōu)樯钏{(lán)色,繼續(xù)加熱1.5h,而后降溫至80℃,加入50mL去離子水,繼續(xù)攪拌反應(yīng)1h,停止加熱,將反應(yīng)后的溶液離心純化,棄去上清液,產(chǎn)物用去離子水洗滌分散,重復(fù)這一洗滌過程三次,最終得到純化產(chǎn)物,為深藍(lán)色顆粒粉末;所制備的帶聚丙烯酸聚合物的氧化鎢W18O49納米材料分散在生理鹽水中,和靶向官能團(tuán)結(jié)合,制備靶向納米材料。WCl6與聚丙烯酸聚合物的質(zhì)量比為1:0.9-1.6。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的納米顆粒的制備方法,其特征是鎢藍(lán)納米粒子的合成,首先稱取WCl6 600mg,PAA 200mg加入50mL一縮二乙二醇當(dāng)中,N2保護(hù)條件下在60℃條件下攪拌反應(yīng)30min直至全部溶解,所得溶液為金黃色。而后將該分散液直接加入預(yù)熱至180℃的油浴當(dāng)中,反應(yīng)30min后停止加熱,將所得溶液自然冷卻至室溫,向體系中加入50mL去離子水,靜置約30min后,9000rpm×10min離心收集所得藍(lán)色沉淀后去離子水洗滌三遍,去除未反應(yīng)的PAA和WCl6,所得產(chǎn)物放置于4℃冰箱中待用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的納米顆粒的制備方法,其特征是鎢藍(lán)納米粒子的靶向性修飾,將100mg新制的鎢藍(lán)納米顆粒分散在20mL去離子水當(dāng)中(4℃)攪拌均勻后,加入150mg EDC和90mg sulfo-NHS,磁力攪拌條件下反應(yīng)1.5小時,而后將所得溶液離心純化后去離子水洗滌三次,去除EDC和sulfo-NHS反應(yīng)后的副產(chǎn)物,所得納米顆粒重新分散在50mL預(yù)冷至4℃的PBS溶液當(dāng)中。在冰浴條件下加入30μL CD39單抗(1mg/mL,兔抗小鼠CD39多抗,Lot#ab 128666,Abcam)反應(yīng)5h。離心收集表面修飾的鎢藍(lán)納米粒子后用PBS洗滌三次,將所得的納米粒子分散在PBS當(dāng)中,保存在4℃冰箱中待用(W18O49anti-CD39 antibody,簡記為WOAA納米粒子)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的納米顆粒的制備方法,其特征是納米顆粒的納米內(nèi)核為金納米顆粒時的制備方法:十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)加入HAuCl4溶液中,攪拌溶解后,加入的硼氫化鈉反應(yīng),得到藍(lán)色溶液;取CTAB和0.08g水楊酸鈉,溶解于25ml蒸餾水中,溶解完全后,加入0.5ml、4mM的硝酸銀,水浴30℃靜置15min左右,再加入25ml,1mM的HAuCl4和0.2ml濃鹽酸,溫和攪拌15min后,加入300微升0.1M的抗壞血酸,得到無色溶液。最后加入80微升步驟1所得的藍(lán)色溶液,反應(yīng)12h~24h后,終止反應(yīng),8500rpm離心、蒸餾水洗滌三次。獲得金納米棒,其長徑比為4;所制備的金納米棒分散在生理鹽水中,和靶向官能團(tuán)結(jié)合,制備靶向納米材料。

9.權(quán)利要求1-8之一得到的光熱轉(zhuǎn)換靶向熱消除調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的納米顆粒在制備聯(lián)合光熱治療與免疫治療的藥物中的應(yīng)用。

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