本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，涉及一種用于治療系膜增生性腎炎的藥物。

背景技術(shù)：

目前治療系膜增生性腎炎主要采用激素治療和細胞毒性藥物治療，激素治療通過抑制轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性進而抑制能促進腎小球腎炎的促炎因子(IL-1β、TNF-α)，而對多種類型的腎小球腎炎有治療效果。但是，激素治療通常伴有不同程度的副作用，且細胞毒性藥物的毒副作用更大，從而限制了激素和細胞毒性藥物的應用。因此，科學家正努力嘗試動物及臨床試驗，希望能夠找到調(diào)節(jié)免疫、減少損傷、促進修復、減少毒副作用的新的治療方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種新型的用于治療系膜增生性腎炎的藥物。

本發(fā)明基于以下構(gòu)思，CXC趨化因子配體10(CXCL 10)又稱為干擾素γ誘導蛋白10，其具有趨化、激活T細胞、調(diào)節(jié)粘附分子的表達、促進細胞增殖和抑制血管生成等功能。研究發(fā)現(xiàn)，在系膜增生性腎小球腎炎(MesPGN)患者腎小球系膜細胞內(nèi)存在CXCL10的高表達，且CXCL10可以促進系膜細胞的增殖，因此抗-CXCL10單克隆抗體具有治療系膜增生性腎炎的可能及應用前景。

為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供抗-CXCL10單克隆抗體在制備用于治療系膜增生性腎炎藥物中的應用。其中，所述抗-CXCL10單克隆抗體為CXCL10/IP-10/CRG-2抗體，即Mouse CXCL10/IP-10/CRG-2Antibody，R&D SYSTEM，貨號：AF-466-NA。

本發(fā)明還提供上述抗-CXCL10單克隆抗體在制備用于治療由竹葉青蛇毒素引起的急性系膜增生性腎小球腎炎藥物中的應用。

本發(fā)明首先利用C57BL/6小鼠，通過尾靜脈注射竹葉青蛇毒建立急性系膜增生性腎小球腎炎(Habu nephritis)動物模型，模型建立1天后，以抗-CXCL10單克隆抗體作為治療藥物以50-100mg/kg體重尾靜脈注射至小鼠體內(nèi)，然后在模型建立后的不同時間點處死小鼠獲取小鼠腎臟組織，制備病理樣本后，切片進行病理染色、免疫組織化學染色，并提取組織蛋白進行Western Blot實驗，觀察抗-CXCL10單克隆抗體治療效果。

本發(fā)明還提供一種用于治療系膜增生性腎炎的藥物或藥物組合物，所述藥物或藥物組合物的有效成分為上述CXCL10/IP-10/CRG-2抗體。

本發(fā)明進一步提供一種用于治療由竹葉青蛇毒素引起的急性系膜增生性腎小球腎炎的藥物或藥物組合物，所述藥物或藥物組合物的有效成分為上述CXCL10/IP-10/CRG-2抗體。

所述藥物或藥物組合物中，有效成分的單次劑量單元為50-100mg/kg體重。使用時，將CXCL10/IP-10/CRG-2抗體的凍干粉針劑溶于生理鹽水中，通過靜脈注射至體內(nèi)。

所述藥物或藥物組合物為凍干粉針劑。所述藥物或藥物組合物中還含有藥用輔料。

本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)抗-CXCL10單克隆抗體可明顯減輕腎小球病理變化，減少腎小球系膜細胞的增殖，緩解腎功能損傷。為治療系膜增生性腎炎的新藥研制提供了寶貴資源。

目前已經(jīng)證明CXCL10蛋白在機體發(fā)揮重要的生理和病理效應，參與炎癥、腫瘤、自身免疫疾病等多種疾病的發(fā)生發(fā)展。在腎臟病領(lǐng)域，有大量臨床證據(jù)證明CXCL10蛋白在腎移植、糖尿病腎病、狼瘡腎炎、急性腎損傷中的表達明顯增多，并且有研究表明抗-CXCL10抗體可以有效減少腎小管間質(zhì)T細胞浸潤、減輕炎癥反應。本發(fā)明首次研究抗-CXCL10單克隆抗體對系膜增殖性腎炎的作用，在小鼠急性系膜增生性腎小球腎炎(Habu nephritis)動物模型中可以看到，增殖期(7D)治療組腎小球內(nèi)細胞數(shù)量、增殖細胞核抗原(PCNA)陽性率均低于對照組，說明抗-CXCL10單克隆抗體可明顯減輕腎小球病理變化，減少腎小球系膜細胞的增殖，緩解腎功能損傷。為治療系膜增生性腎炎的新藥研制提供了寶貴資源。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1中Western Blot法檢測腎炎模型組小鼠腎小球CXCL10蛋白的表達情況。

圖2為本發(fā)明實施例1中抗-CXCL10單克隆抗體干預Habu系膜增生性腎炎小鼠腎臟病理染色結(jié)果。(400倍顯微鏡下觀察)

圖3為本發(fā)明實施例1中抗-CXCL10單克隆抗體干預Habu系膜增生性腎炎小鼠PCNA免疫組化染色結(jié)果。(400倍顯微鏡下觀察)

圖4為本發(fā)明實施例1中Western Blot法檢測抗-CXCL10單克隆抗體治療組與腎炎模型組小鼠腎小球CXCL10蛋白的表達情況。

圖5為本發(fā)明實施例1中抗-CXCL10單克隆抗體干預Habu系膜增生性腎炎小鼠PCNA陽性率比較結(jié)果。

圖6為本發(fā)明實施例1中抗-CXCL10單克隆抗體干預Habu系膜增生性腎炎小鼠的腎小球硬化指數(shù)。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。

以下實施例中使用的抗-CXCL10單克隆抗體為Mouse CXCL10/IP-10/CRG-2Antibody，R&D SYSTEM，貨號：AF-466-NA。

實施例1抗-CXCL10單克隆抗體在治療系膜增生性腎炎中的應用

1、Habu系膜增生性腎炎模型的建立

選取體重在25～30g的C57BL/6小鼠，以尾靜脈注射的方式向模型組小鼠體內(nèi)單次注入生理鹽水溶解竹葉青蛇毒素溶液，劑量為2.5mg/kg體重，對照組小鼠注入等體積的生理鹽水。

Western Blot法檢測腎炎模型組小鼠腎小球CXCL10蛋白的表達并與對照組比較。對小鼠腎組織進行裂解提取蛋白、測蛋白濃度、蛋白質(zhì)變性、SDS-PAGE(聚丙烯酰胺)凝膠電泳、蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移、麗春紅染色、膜的封閉和雜交。一抗使用1：1000稀釋的Anti-IP10兔多克隆抗體(abcam)，4℃條件下孵育過夜。結(jié)果如圖1所示，在Habu系膜增生性腎炎模型小鼠腎小球系膜細胞內(nèi)CXCL10蛋白高表達。

2、抗-CXCL10單克隆抗體治療Habu腎炎

在竹葉青蛇毒注射1天后，將模型組小鼠隨機分成腎炎模型組和抗-CXCL10單克隆抗體治療組，抗-CXCL10單克隆抗體治療組給予抗-CXCL10單克隆抗體治療，劑量為50-100mg/kg體重，通過尾靜脈注射的方式注射到小鼠體內(nèi)。在整個模型建立的第3、7和14天處死小鼠并獲取腎臟樣本，經(jīng)組織病理包埋后切片，進行PAS染色(圖2)和免疫組織化學染色(圖3)，并提取組織蛋白通過Western Blot法檢測模型組及治療組小鼠腎小球CXCL10蛋白的含量，結(jié)果如圖4所示，注射抗-CXCL10單克隆抗體后，治療組小鼠CXCL10表達量較模型組明顯降低。

從圖2可以看出，模型小鼠在接受抗-CXCL10單克隆抗體治療后，抗-CXCL10單克隆抗體治療組小鼠腎小球內(nèi)系膜溶解，系膜細胞增殖等系列病變明顯輕于腎炎模型組；增殖細胞核抗原(PCNA)免疫組織化學染色結(jié)果也表明抗-CXCL10單克隆抗體治療組小鼠腎小球內(nèi)細胞增殖程度低于腎炎模型組(圖3)，抗-CXCL10單克隆抗體治療能夠減輕系膜增生性腎炎小鼠腎臟病理損傷，抑制腎小球內(nèi)細胞過度增殖。

3、統(tǒng)計學分析及病理評分

3.1 PCNA陽性率比較

通過增殖細胞核抗原(PCNA)免疫組化觀察腎小球內(nèi)細胞增殖情況，結(jié)果見圖3。高倍顯微鏡(×400)下計數(shù)增殖期第7天腎小球PCNA陽性率，每只小鼠隨機計數(shù)20個腎小球。治療組小鼠腎小球PCNA陽性率為25±1.77％，對照組小鼠為30.00±1.31％。與腎炎模型組小鼠相比，抗-CXCL10抗體治療組小鼠腎小球PCNA陽性率明顯降低，p<0.05(圖5)。

3.2腎小球硬化指數(shù)的比較

光學顯微鏡下觀察兩組小鼠腎組織病理變化，并從腎小球硬化病變方面對其進行半定量評分，由兩位病理醫(yī)師采用雙盲法進行分析。具體評分標準為：

腎小球硬化指數(shù)(Glomerulosclerosis Index)：

Score 0：正常腎小球

Score 1：腎小球內(nèi)存在系膜細胞增殖，系膜區(qū)擴張或硬化約占整個腎小球面積的25％

Score 2：腎小球內(nèi)系膜區(qū)擴張或硬化約占整個腎小球面積的25％-50％

Score 3：腎小球內(nèi)系膜區(qū)擴張或硬化約占整個腎小球面積的50％-75％

Score 4：腎小球內(nèi)系膜區(qū)擴張或硬化超過整個腎小球面積的75％

對照組與模型組小鼠腎小球硬化指數(shù)均在第7天達到峰值。治療組小鼠腎小球硬化指數(shù)為0.876±0.244，對照組小鼠為1.218±0.208。與腎炎模型組小鼠相比，抗-CXCL10抗體治療組小鼠腎小球硬化指數(shù)明顯降低，p<0.05(圖6)。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。