本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及包含稀有人參皂苷Rk3的具有抗腫瘤活性的、高效低毒的稀有人參皂苷組合物。
背景技術(shù)：
癌癥是僅次于腦血管疾病的第二大威脅人類(lèi)的病種。我國(guó)癌癥的發(fā)病人數(shù)每年超過(guò)300萬(wàn)人，且肺癌、乳腺癌、食管癌的發(fā)病率逐年增長(zhǎng)，其中肺癌的發(fā)病率年增長(zhǎng)率26.8％，乳腺癌發(fā)病率年增長(zhǎng)率6.8％。30年以來(lái)，乳腺癌的死亡率上升了96％，肺癌的死亡率猛增465％，我國(guó)的癌癥防治工作刻不容緩且形勢(shì)嚴(yán)峻。
但是，關(guān)于如何以人參皂苷單組分為基礎(chǔ)進(jìn)行組合，增強(qiáng)其抗腫瘤效果，制備高效低毒的抗腫瘤藥物，尚未見(jiàn)任何報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種以稀有人參皂苷Rk3為基礎(chǔ)的、高效低毒的、具有抗腫瘤作用的稀有人參皂苷組合物。
此外，本發(fā)明的另一目的在于提供上述稀有人參皂苷組合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
本發(fā)明人經(jīng)過(guò)深入研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將稀有人參皂苷Rk3與可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸按特定比例進(jìn)行組合，不僅能夠顯著提高稀有人參皂苷組合物的抗腫瘤活性，而且能夠顯著降低其毒性，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下：
1.一種具有抗腫瘤活性的稀有人參皂苷組合物，其包含：人參皂苷Rk3，和可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸；其中，相對(duì)于100重量份的所述人參皂苷Rk3，包含0.05～5重量份的所述可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸。
2.根據(jù)項(xiàng)1所述的稀有人參皂苷組合物，其中，可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸是選自草酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸中的一種或多種。
3.根據(jù)項(xiàng)1或2所述的稀有人參皂苷組合物，其中，相對(duì)于所述稀有人參皂苷組合物100重量份，所述人參皂苷Rk3的含量為5重量份以上。
4.項(xiàng)1～3中任一項(xiàng)所述的稀有人參皂苷組合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
5.根據(jù)項(xiàng)6所述的用途，其中，所述抗腫瘤藥物為口服劑型或注射劑型。
6.根據(jù)項(xiàng)4或5中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述腫瘤為肺癌、肝癌和黑色素瘤。
發(fā)明效果
本發(fā)明的以稀有人參皂苷Rk3為基礎(chǔ)的稀有人參皂苷組合物具有高效低毒的抗腫瘤作用。
發(fā)明的具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。在無(wú)沖突的情況下，本說(shuō)明書(shū)中的科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義，如有沖突應(yīng)以本說(shuō)明書(shū)中的定義為準(zhǔn)。
首先，在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種具有抗腫瘤活性的稀有人參皂苷組合物(本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物)，其包含：
人參皂苷Rk3，和可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸；其中，相對(duì)于100重量份的所述人參皂苷Rk3，包含0.05～5重量份的所述可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸。
在本說(shuō)明書(shū)中，人參皂苷Rk3是指下述化學(xué)式1所述的化合物。
【化學(xué)式1】
上述人參皂苷Rk3是已知化合物，可以采用本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法來(lái)制備，例如可以通過(guò)熱裂解Rg1來(lái)制備人參皂苷Rk3。
在本說(shuō)明書(shū)中，可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸具體可以列舉出例如草酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、乳酸、琥珀酸、己二酸和a-酮戊二酸。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將上述人參皂苷Rk3與可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸以特定比例進(jìn)行組合，不僅能夠顯著提高稀有人參皂苷組合物的抗腫瘤活性，而且能夠顯著降低其毒性。
具體而言，本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物中，相對(duì)于100重量份的所述人參皂苷Rk3，可以例如包含0.05～5重量份、優(yōu)選0.1～4重量份、更優(yōu)選0.2～3重量份、更優(yōu)選0.5～2重量份的所述可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸。
本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物中除了包含上述人參皂苷Rk3和可食用的C2-C6有機(jī)二元或三元羧酸以外，還可以包含其他成分，只要在不顯著損害本發(fā)明的效果即可。作為其他成分，可以列舉出其他人參皂苷、其他抗腫瘤活性成分、輔料等。優(yōu)選地，本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物中，相對(duì)于所述稀有人參皂苷組合物100重量份，所述人參皂苷Rk3的含量為5重量份以上，優(yōu)選10重量份以上，更優(yōu)選20重量份以上，更優(yōu)選30重量份以上。所述人參皂苷Rk3的含量可以例如采用HPLC法測(cè)定。
本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物中還可以包含輔料。對(duì)于本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物中的輔料，沒(méi)有特殊限制，例如可以使用本技術(shù)領(lǐng)域通常用于藥品或保健品的輔料。
其次，在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供上述本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
正如前述，本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物具有高效低毒抗腫瘤作用。在“高效”方面，本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物的抗腫瘤效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用人參皂苷Rk3；在“低毒”方面，本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物的生物安全性可媲美甚至高于氯化鈉。
這里，“抗腫瘤”包括殺滅腫瘤細(xì)胞、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤生長(zhǎng)、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、改善腫瘤預(yù)后或防止腫瘤復(fù)發(fā)等。這些腫瘤包括例如：腦腫瘤、頭頸部癌、頸癌、腭癌、上腭癌、腭下腺癌、口腔癌、唾液腺癌、舌下腺癌、腮腺癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、喉頭癌、食道癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌(包括胰管癌)、胃癌、膽道癌、小腸癌或十二指腸癌、大腸癌、膀胱癌、腎癌(包括腎細(xì)胞癌)、肝癌、前列腺癌、子宮癌(包括子宮頸癌、子宮體癌)、卵巢癌、甲狀腺癌、咽頭癌、肉瘤、惡性淋巴瘤、白血病、淋巴瘤、皮膚癌以及黑色素瘤等。
抗腫瘤效果可通過(guò)例如X光照片、CT等的觀察結(jié)果、及活檢的病理組織診斷、或腫瘤標(biāo)志物的值等確認(rèn)。
對(duì)所述抗腫瘤藥物的劑型沒(méi)有特殊限制，例如可以是口服劑型或注射劑型。所述口服劑型可以是液體劑型，也可以是固體劑型。
制備口服用固體制劑時(shí)，可以在向主藥中加入賦形劑以及視需要而定的粘合劑、崩解劑、滑潤(rùn)劑、著色劑、矯味劑等后，按照常規(guī)方法制成片劑、包衣片劑、顆粒劑、細(xì)粒劑、散劑、膠囊劑等。
作為賦形劑，可使用例如乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、山梨糖醇、結(jié)晶纖維素、二氧化硅等；作為粘合劑，可使用例如聚乙烯醇、乙基纖維素、甲基纖維素、阿拉伯膠、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素等；作為滑潤(rùn)劑，可使用例如硬脂酸鎂、滑石、二氧化硅等；作為著色劑，可使用允許在藥品中添加的著色劑；作為矯味劑，可使用可可粉、薄荷腦、芳香酸、薄荷油、龍腦、桂皮粉。當(dāng)然，也可以在上述片劑、顆粒劑上包覆糖衣、明膠衣、以及其它的必要外衣。
制備注射劑時(shí)，可以根據(jù)需要向主藥中添加pH調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、懸助劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、防腐劑等，再按照常規(guī)方法制成靜脈、皮下、肌肉內(nèi)注射劑。此時(shí)，也可以根據(jù)需要，利用常規(guī)方法制成冷凍干燥物。
作為懸助劑，可列舉例如甲基纖維素、吐溫80、羥基乙基纖維素、阿拉伯膠、黃蓍樹(shù)膠粉、羧甲基纖維素鈉、聚氧乙烯山梨糖醇單月桂酸鹽等。
作為增溶劑，可列舉例如聚氧化乙烯氫化蓖麻油、吐溫80、煙酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇單月桂酸鹽、聚乙二醇、蓖麻油脂肪酸乙酯等。
另外，作為穩(wěn)定劑，可列舉例如亞硫酸鈉、偏亞硫酸鈉等；作為防腐劑，可列舉例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚等。
對(duì)于所述抗腫瘤藥物的作用機(jī)理沒(méi)有特殊限制，可以是抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抗腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤新生血管生成和/或提高機(jī)體的免疫力。
此外，在另一方面中，本發(fā)明還提供一種治療對(duì)象中的腫瘤的方法，其包括給所述對(duì)象使用本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物的步驟。
這里，所述對(duì)象可以是哺乳動(dòng)物，例如可以是人、大鼠、兔、羊、豬、牛、貓、狗、猴等，優(yōu)選為人。
本發(fā)明的稀有人參皂苷組合物，可以口服或非口服施用。施用量因癥狀程度、患者年齡、性別、體重、敏感性差異、施用方法、施用時(shí)期、施用間隔、藥物制劑的性質(zhì)、有效成分的種類(lèi)等而異，無(wú)特殊限制，但通常成人(體重60Kg)每日1～3000mg、優(yōu)選10～1000mg、更優(yōu)選100～500mg，上述施用量通常可每日分1～3次施用。較好的劑量是每日300mg左右。
實(shí)施例
下面給出的實(shí)施例，是為了便于理解本發(fā)明，并不以任何方式限定本發(fā)明的權(quán)利要求的范圍。
實(shí)施例1人參皂苷膠Rk3膠囊劑制備
稱(chēng)取人參皂苷Rk3 10kg，0.2kg草酸，加入淀粉68.5kg，混勻，過(guò)篩，用乙醇水溶液作為粘合劑，制成適宜軟材，18目篩制粒，60℃烘箱干燥5小時(shí)，16目篩整粒，加入500g硬脂酸鎂，混勻，制得膠囊劑。
實(shí)施例2人參皂苷膠Rk3片劑制備
取人參皂苷Rk3 50kg，草酸1kg，粉碎成細(xì)粉，加入微晶纖維素10kg、羧甲基淀粉鈉2kg，混合均勻，濕法制粒，干燥，加滑石粉2kg、硬脂酸鎂0.3kg，按常規(guī)制片劑制備工藝制成片劑。
實(shí)施例3人參皂苷膠Rk3粉劑制備
取人參皂苷Rk3 40kg和草酸0.8kg，粉碎成細(xì)粉，加入硬脂酸鎂0.3kg，混合均勻，分裝成散劑。
實(shí)施例4人參皂苷膠Rk3針劑的制備
取注射用人參皂苷Rk3 1kg和注射用草酸5g，用10L注射用水溶解，過(guò)濾，按常規(guī)凍干工藝灌裝成粉針劑。
實(shí)施例5人參皂苷Rk3和有機(jī)酸組合物延長(zhǎng)S180小鼠生存期實(shí)驗(yàn)
材料與方法
材料
藥物：草酸(AR，≥99.5％)，購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；人參皂苷Rk3(純度≥95％)，實(shí)驗(yàn)室水解工藝自制；取上述草酸與人參皂苷Rk3，按實(shí)施例4方法配制而成，即為與人參皂苷Rk3組合物；環(huán)磷酰胺(CTX)，200mg/瓶，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞系：昆明種小鼠，雌性，體重18±2g，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。Sarcoma 180腹水型瘤株(S180)，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所。
方法
瘤種保存與傳代：自腹腔荷瘤小鼠無(wú)菌取瘤細(xì)胞，經(jīng)滅菌生理鹽水(NS)稀釋后無(wú)菌操作接種于正常成年小鼠腹腔，每7天傳1代。
荷瘤模型制作方法：處死腹腔傳代7天的S180荷瘤小鼠，無(wú)菌操作取腹水。滅菌NS稀釋腹水調(diào)整瘤細(xì)胞濃度至8×106個(gè)/mL,瘤細(xì)胞死亡率<5％。按無(wú)菌操作要求將瘤細(xì)胞懸液接種于小鼠腹腔，0.2mL/只。
腹腔荷瘤細(xì)胞生存期實(shí)驗(yàn)：70只小鼠，除10只用于正常對(duì)照組外，其余均腹腔荷瘤，次日隨機(jī)分為6組，每組10只。分組包括腹腔荷瘤模型組；CTX治療組；草酸人參皂苷Rk3組合物低、高劑量組；草酸組；人參皂苷Rk3組。各組都在腹腔荷瘤次日起灌胃給藥，每天一次，每次給藥0.1mL/10g。CTX位腹腔注射給藥，50mg/kg，連用7天；草酸人參皂苷Rk3組合物低、高劑量分別為250mg/kg、1000mg/kg；人參皂苷Rk3組為1000mg/kg、草酸組為50mg/kg，用至死亡前1天。觀察生存期和一般情況。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)。
結(jié)果
草酸人參皂苷Rk3組合物高劑量組能顯著延長(zhǎng)S180小鼠生存期，且優(yōu)于人參皂苷Rk3組。草酸人參皂苷Rk3組合物低劑量組也具有延長(zhǎng)S180小鼠生存期的趨勢(shì)，CTX組和草酸組作用不明顯。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1草酸人參皂苷Rk3組合物對(duì)S180小鼠生存期的影響(n＝10，x±s)
△與CTX組比較
實(shí)施例6人參皂苷Rk3與有機(jī)酸組合物對(duì)S180皮下荷瘤小鼠抑瘤實(shí)驗(yàn)
參考中國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)CN104814972A實(shí)施例8，稍有改動(dòng)。
材料與方法
實(shí)驗(yàn)材料：草酸(AR，≥99.5％)，購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；人參皂苷Rk3(純度≥95％)，實(shí)驗(yàn)室自制；取上述草酸與人參皂苷Rk3，按實(shí)施例3方法配制而成，即為與人參皂苷Rk3組合物；環(huán)磷酰胺(CTX)，200mg/瓶，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞系：昆明種小鼠，雌性，體重20g-24g，購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。Sarcoma 180腹水型瘤株(S180)，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所。
方法
瘤種保存與傳代：自腹腔荷瘤小鼠無(wú)菌取瘤細(xì)胞，經(jīng)滅菌生理鹽水(NS)稀釋后無(wú)菌操作接種于正常成年小鼠腹腔，每7天傳1代。
荷瘤模型制作方法：處死腹腔傳代7天的S180荷瘤小鼠，無(wú)菌操作取腹水。滅菌NS稀釋腹水調(diào)整瘤細(xì)胞濃度至8×106個(gè)/mL，瘤細(xì)胞死亡率<5％。按無(wú)菌操作要求將瘤細(xì)胞懸液接種于小鼠腹腔，0.2mL/只。
對(duì)皮下荷瘤鼠的實(shí)驗(yàn)觀察：80只小鼠，除10只用于正常對(duì)照組外，其余均皮下荷瘤，次日隨機(jī)分為7組，每組10只。分組包括皮下荷瘤模型組；CTX治療組；組合物組：草酸人參皂苷Rk3組合物低、中、高劑量組，原人參三醇組；草酸組。各組都在腹腔荷瘤次日起灌胃給藥，每天一次，每次給藥0.1mL/10g。CTX位腹腔注射給藥，30mg/kg，連用7天；草酸(人參皂苷Rk3組合物低、中、高劑量分別為250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg；草酸組為4mg/kg，用至死亡前1天，于皮下荷瘤后第12天處理。用藥過(guò)程觀測(cè)一般情況。各批次動(dòng)物處理時(shí)，先稱(chēng)體重，處死后取瘤、胸腺、脾臟并稱(chēng)重，進(jìn)而換算出抑瘤率、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)；另取右后肢股骨做骨髓有核細(xì)胞(BMNC)計(jì)數(shù)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)。
結(jié)果
CTX組、草酸人參皂苷Rk3組合物低、中、高劑量組和人參皂苷Rk3組均能顯著延長(zhǎng)S180小鼠生長(zhǎng)，草酸組作用不明顯。其中CTX組抑瘤作用顯著；草酸人參皂苷Rk3組合物低劑量組、中、高劑量組和人參皂苷Rk3組的抑瘤作用顯著，草酸組作用不明顯。草酸人參皂苷Rk3組合物比人參皂苷Rk3組更能促進(jìn)胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的回升。草酸組對(duì)荷瘤所致的骨髓有核細(xì)胞的減少無(wú)明顯的促進(jìn)回升作用。結(jié)果見(jiàn)表2和表3。由此可見(jiàn)，人參皂苷Rk3與可食用有機(jī)二元酸或三元酸的組合物的活性明顯高于單用人參皂苷Rk3或可食用有機(jī)二元酸或三元酸。
表2草酸人參皂苷Rk3組合物對(duì)皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用(n＝10，x±s)
*與對(duì)照組比較，△與CTX組比較。
表3草酸人參皂苷Rk3組合物對(duì)皮下荷瘤小鼠免疫器官和骨髓有核細(xì)胞數(shù)的影響(n＝10，x±s)
*與對(duì)照組比較，△與CTX組比較。
實(shí)施例7人參皂苷Rk3與有機(jī)酸組合物對(duì)小鼠B16-BL6z細(xì)胞自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的抑瘤實(shí)驗(yàn)
參考中國(guó)專(zhuān)利公告CN101695513B實(shí)施例9設(shè)計(jì)，稍有改動(dòng)。
材料與方法
實(shí)驗(yàn)材料：草酸(純度99％)，購(gòu)自百靈威科技有限公司；人參皂苷Rk3(純度≥95％),實(shí)驗(yàn)室水解工藝自制；取上述草酸與人參皂苷Rk3，按實(shí)施例4方法配制而成，即為與人參皂苷Rk3組合物；紫杉醇，購(gòu)自廣州愛(ài)純醫(yī)藥科技有限公司。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞系：C57BL/6小鼠，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。B16-BL6小鼠黑色素瘤細(xì)胞高轉(zhuǎn)移株，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所。
方法
荷瘤模型制作方法：將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的B16-BL6細(xì)胞用0.25％胰蛋白酶消化，離心收集細(xì)胞，無(wú)菌PBS洗滌，用無(wú)菌生理鹽水配制成1×107個(gè)/mL細(xì)胞懸液。
實(shí)驗(yàn)觀察：120只小鼠，分成正常組；荷瘤對(duì)照組；草酸治療組；紫杉醇治療組；草酸人參皂苷Rk3組合物低、中、高劑量組；人參皂苷Rk3組，共8組，每組15只。正常組外，其余每只小鼠后肢爪墊皮下接種50μL(含5×105個(gè)瘤細(xì)胞)。各組都在荷瘤次日起腹腔注射給藥，每周5次，連續(xù)5周，每次給藥0.1mL/10g。紫杉醇劑量為10mg/kg；草酸人參皂苷Rk3組合物低、中、高劑量分別為250mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg；人參皂苷Rk3和草酸組的劑量分別為1000mg/kg，10mg/kg。接種瘤液后3周，當(dāng)瘤體>10mm3時(shí)，將小鼠用乙醚麻醉，無(wú)菌條件下切除患肢。2周后處死動(dòng)物，解剖取肺，稱(chēng)重，計(jì)算肺系數(shù)。將肺Bouins液固定，于解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。采用Mann Withey U-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
紫杉醇和草酸人參皂苷Rk3組合物高、中劑量組隊(duì)小鼠B16-BL6細(xì)胞自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移具有顯著抑制作用，草酸人參皂苷Rk3組合物低劑量組、人參皂苷Rk3對(duì)小鼠細(xì)胞自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移具有抑制趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4草酸人參皂苷Rk3組合物對(duì)小鼠B16-BL6細(xì)胞自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的抑制作用
實(shí)施例8人參皂苷Rk3與有機(jī)酸組合物的急性毒性實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明小鼠42只，小鼠體重要保證組內(nèi)差異<20％(20～24g)，雌雄各半，保證雌性未產(chǎn)、無(wú)孕。飼養(yǎng)前需要對(duì)小鼠的飼養(yǎng)房、籠具、飲水瓶等進(jìn)行消毒。小鼠飼養(yǎng)在方形透明的鼠籠中，保證充足的飲水和食物。實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)2～3天，以適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，并觀察其正常生長(zhǎng)活動(dòng)和健康狀況。給藥前禁食處理--空腹過(guò)夜(不禁水)。
樣品：
1：Rk3與蘋(píng)果酸1:0.02重量比配成組合物
2：氯化鈉
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：將小鼠平均分為7組，1組作為空白對(duì)照組，3組為氯化鈉給藥組，3組為Rk3與蘋(píng)果酸組合物給藥組，按照下表一給藥劑量進(jìn)行灌胃給藥，統(tǒng)計(jì)八天的動(dòng)物死亡數(shù)，結(jié)果如表5所示。
表5人參皂苷Rk3與有機(jī)酸組合物的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
還需要說(shuō)明的是，在可實(shí)施且不明顯違背本發(fā)明的主旨的前提下，在本說(shuō)明書(shū)中作為某一技術(shù)方案的構(gòu)成部分所描述的任一技術(shù)特征或技術(shù)特征的組合同樣也可以適用于其它技術(shù)方案；并且，在可實(shí)施且不明顯違背本發(fā)明的主旨的前提下，作為不同技術(shù)方案的構(gòu)成部分所描述的技術(shù)特征之間也可以以任意方式進(jìn)行組合，來(lái)構(gòu)成其它技術(shù)方案。本發(fā)明也包含在上述情況下通過(guò)組合而得到的技術(shù)方案，并且這些技術(shù)方案相當(dāng)于記載在本說(shuō)明書(shū)中。
以上通過(guò)具體實(shí)施方式和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說(shuō)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，這些并非意圖對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，本發(fā)明的范圍應(yīng)由權(quán)利要求書(shū)確定。
工業(yè)實(shí)用性
根據(jù)本發(fā)明，能夠提供一種高效低毒的稀有人參皂苷組合物。