本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及人參皂苷Rk3在抑制血管新生方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

新生血管是從一般血管新伸出的螺旋狀毛細(xì)血管。在正常的生理過(guò)程中，人體在懷孕、創(chuàng)傷等特定條件下，才會(huì)出現(xiàn)新生的血管，除此之外如果有新生血管出現(xiàn)，則很可能會(huì)引發(fā)某些疾病，這些疾病總稱為血管新生疾病，如腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變等。

新生血管與一般血管的生理功能相似，其主要作用是通過(guò)血液將氧氣與養(yǎng)分輸送到全身各處的組織細(xì)胞，如果腫瘤周圍有大量的新生血管，它就會(huì)將腫瘤細(xì)胞誤認(rèn)為正常細(xì)胞，不斷輸送氧氣與養(yǎng)分，使腫瘤細(xì)胞不斷增殖體積增大以至于到人體免疫系統(tǒng)無(wú)法控制的階段。此外，新生血管也成為腫瘤細(xì)胞尤其是惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的途徑。慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者退行性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病與新生血管也有密切的關(guān)系，原來(lái)應(yīng)該沒(méi)有血管存在的關(guān)節(jié)軟骨由于未知原因而異常變化，形成新生血管，使得軟骨受到侵蝕，造成關(guān)節(jié)變形或疼痛。

新生血管引起的疾病已經(jīng)受到了越來(lái)越多的科研人員和醫(yī)務(wù)工作者的重視，因此，具有抑制血管新生作用的藥物分子的研發(fā)成為熱點(diǎn)工作。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種新的用于治療或預(yù)防血管新生疾病的藥物組合物。本發(fā)明的其他目的在于提供人參皂苷Rk3在制備用于治療或預(yù)防血管新生疾病或抑制血管新生的藥物中的用途。

本發(fā)明人經(jīng)過(guò)深入研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rk3具有強(qiáng)的血管新生抑制作用，且其血管新生抑制作用明顯強(qiáng)于公認(rèn)的血管新生抑制物質(zhì)人參皂苷Rg3，從而完成了本發(fā)明。

即，本發(fā)明包括：

1.一種用于治療或預(yù)防血管新生疾病、或者用于抑制血管新生的藥物組合物，其包括：作為活性成分的人參皂苷Rk3，以及藥學(xué)可接受的載體。

2.根據(jù)項(xiàng)1所述的藥物組合物，其中，所述人參皂苷Rk3作為唯一活性成分。

3.根據(jù)項(xiàng)1或2所述的藥物組合物，其中，所述血管新生疾病是惡性實(shí)體腫瘤。

4.根據(jù)項(xiàng)1～3中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，該藥物組合物用于抑制血管新生。

5.根據(jù)項(xiàng)1～4中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，該藥物組合物中，人參皂苷Rk3的含量為0.1重量％以上。

6.人參皂苷Rk3在制備用于治療或預(yù)防血管新生疾病的藥物中的用途。

7.根據(jù)項(xiàng)6所述的用途，其中，人參皂苷Rk3作為所述藥物的唯一活性成分。

8.根據(jù)項(xiàng)6或7所述的用途，其中，所述藥物用于抑制血管新生。

9.根據(jù)項(xiàng)6～8中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述人參皂苷Rk3在所述藥物中的含量為0.1重量％以上。

10.根據(jù)項(xiàng)6～9中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述血管新生疾病為惡性實(shí)體腫瘤。

11.人參皂苷Rk3在制備用于抑制血管新生的藥物中的用途。

12.根據(jù)項(xiàng)11所述的用途，其中，人參皂苷Rk3作為所述藥物的唯一活性成分。

13.根據(jù)項(xiàng)11或12所述的用途，其中，所述人參皂苷Rk3在所述藥物中的含量為0.1重量％以上。

根據(jù)本發(fā)明，能夠提供顯著抑制血管新生的用于治療或預(yù)防血管新生疾病的藥物組合物，以及人參皂苷Rk3在制備用于治療或預(yù)防血管新生疾病、或者用于抑制血管新生的的藥物中的用途。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。在無(wú)沖突的情況下，本說(shuō)明書中的科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義，如有沖突應(yīng)以本說(shuō)明書中的定義為準(zhǔn)。

首先，在一個(gè)方面中，本發(fā)明一種藥物組合物(本發(fā)明的藥物組合物)，其包括：作為活性成分的人參皂苷Rk3，以及藥學(xué)可接受的載體。上述本發(fā)明的藥物組合物可用于治療或預(yù)防血管新生疾病、和/或用于抑制血管新生。

在本說(shuō)明書中，人參皂苷Rk3是指下述化學(xué)式1所述的化合物。

【化學(xué)式1】

上述人參皂苷Rk3是已知化合物，可以采用本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法來(lái)制備，例如可以通過(guò)熱裂解人參皂苷Rg1來(lái)制備人參皂苷Rk3。

本發(fā)明的藥物組合物可以包含人參皂苷Rk3作為唯一活性成分，也可以包含其他活性成分。

作為所述的藥學(xué)可接受的載體，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)劑型的需要等常規(guī)地進(jìn)行選擇。例如，在制備口服液體制劑(液體藥物組合物)時(shí)，可以將活性成分溶解或懸浮于適當(dāng)?shù)囊后w(例如水)中。在制備口服固體制劑(固體藥物組合物)時(shí)，可以在向活性成分中加入賦形劑以及視需要的粘合劑、崩解劑、滑潤(rùn)劑、著色劑、矯味劑等后，按照常規(guī)方法制成片劑、包衣片劑、顆粒劑、細(xì)粒劑、散劑、膠囊劑或丸劑等。作為賦形劑，可使用例如乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、山梨糖醇、結(jié)晶纖維素、二氧化硅等；作為粘合劑，可使用例如聚乙烯醇、乙基纖維素、甲基纖維素、阿拉伯膠、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素等；作為滑潤(rùn)劑，可使用例如硬脂酸鎂、滑石、二氧化硅等；作為著色劑，可使用允許在醫(yī)藥品中添加的著色劑；作為矯味劑，可使用可可末、薄荷腦、芳香酸、薄荷油、龍腦、桂皮粉等。當(dāng)然，也可以在上述片劑、顆粒劑上包覆糖衣、明膠衣、以及其它的必要外衣。

新生血管是從一般血管新伸出的螺旋狀毛細(xì)血管。在正常的生理過(guò)程中，人體在懷孕、創(chuàng)傷等特定條件下，才會(huì)出現(xiàn)新生的血管，除此之外如果有新生血管出現(xiàn)，則很可能會(huì)引發(fā)某些疾病，這些疾病總稱為血管新生疾病，如腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變等。

在本說(shuō)明書，作為惡性實(shí)體腫瘤，可列舉例如胰癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、腎癌、腦腫瘤、頭頸部癌、食道癌、皮膚癌、肝癌、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、甲狀腺癌、精巢腫瘤、絨毛癌、骨肉瘤、軟組織肉瘤和卵巢癌等。

本發(fā)明的口服藥物組合物可用于腫瘤(特別是惡性實(shí)體腫瘤)的治療和/或腫瘤(特別是惡性實(shí)體腫瘤)轉(zhuǎn)移的治療，特別是本發(fā)明的藥物組合物可用于轉(zhuǎn)移性腫瘤的治療。在該用途中，人參皂苷Rk3優(yōu)選作為唯一活性成分。

在本說(shuō)明書中，“腫瘤的治療”是指：對(duì)原位腫瘤的治療。“腫瘤轉(zhuǎn)移的治療”是指對(duì)轉(zhuǎn)移瘤以及轉(zhuǎn)移過(guò)程的治療，例如抑制腫瘤轉(zhuǎn)移?！稗D(zhuǎn)移性腫瘤”是指：腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位侵入淋巴管，血管或其他途經(jīng)被帶到其它組織、器官處繼續(xù)生長(zhǎng)，形成與原發(fā)部位腫瘤具有相同類型的腫瘤或異質(zhì)瘤，該過(guò)程稱為轉(zhuǎn)移，所形成的同質(zhì)或異質(zhì)腫瘤稱為轉(zhuǎn)移瘤或轉(zhuǎn)移癌，在該過(guò)程中，由于轉(zhuǎn)移瘤處于初期，急需大量的新生血管以供應(yīng)其迅速生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)等，我們把該過(guò)程及其過(guò)程中新形成的腫瘤統(tǒng)稱為轉(zhuǎn)移性腫瘤。

在本發(fā)明的藥物組合物中，人參皂苷Rk3的含量可以為0.1重量％以上，優(yōu)選為0.2重量％以上，更優(yōu)選為0.5重量％以上，更優(yōu)選為1重量％以上，更優(yōu)選為2重量％以上，更優(yōu)選為5重量％以上，更優(yōu)選為10重量％以上。

在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供人參皂苷Rk3在制備用于治療或預(yù)防血管新生疾病、或者用于抑制血管新生的藥物(例如本發(fā)明的藥物組合物)中的用途(本發(fā)明的用途)。

此外，在另一方面中，本發(fā)明還提供一種治療對(duì)象中的血管新生疾病的方法、或抑制對(duì)象中的血管新生的方法，其包括給所述對(duì)象施用本發(fā)明的藥物組合物的步驟。

這里，所述對(duì)象可以是哺乳動(dòng)物，例如可以是人、大鼠、兔、羊、豬、牛、貓、狗、猴等，優(yōu)選為人。

本發(fā)明的藥物組合物，可以口服或非口服施用。施用量因癥狀程度、患者年齡、性別、體重、敏感性差異、施用方法、施用時(shí)期、施用間隔、藥物制劑的性質(zhì)、有效成分的種類等而異，無(wú)特殊限制，但通常成人(體重60Kg)每日1～3000mg、優(yōu)選10～1000mg、更優(yōu)選100～500mg，上述施用量通?？擅咳辗?～3次施用。較好的劑量是每日300mg左右。

實(shí)施例

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。下面給出的實(shí)施例，是為了便于理解本發(fā)明而非對(duì)本發(fā)明的限定。

實(shí)施例1人參皂苷Rk3對(duì)堿燒傷角膜血管新生的抑制作用

參考青島大學(xué)碩士學(xué)位論文《雷帕霉素脂質(zhì)體滴眼液對(duì)大鼠角膜新生血管抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究》(2007，作者：張振華)，略作修改。

1.模型制作方法

1)麻醉方法采用10％的水合氯醛(3mg/kg)對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉，0.4％鹽酸奧布卡因滴眼做局部麻醉。

2)堿燒傷步驟將大鼠麻醉后用棉簽拭去過(guò)多水分，將統(tǒng)一規(guī)格直徑3mm的單層濾紙浸入氫氧化鈉溶液中1min，使其達(dá)飽和狀態(tài)，吸水紙吸除多余液體，將濾紙片置于大鼠角膜中央1min后取下，用生理鹽水沖洗結(jié)膜囊1min。用氯霉素滴眼液點(diǎn)眼，此時(shí)在角膜中央可見(jiàn)圓形灰白色角膜燒傷區(qū)。術(shù)后氯霉素滴眼液每天滴眼四次，預(yù)防感染。

2.動(dòng)物分組及給藥

健康成年清潔型wistar大鼠48只，裂隙燈顯微鏡下檢查無(wú)眼前節(jié)病變。堿燒傷空白對(duì)照組16只。堿燒傷后氯霉素滴眼液滴眼每天四次。按角膜堿燒傷后1d、4d、7d、14d隨機(jī)分成4組，每組4只(8只眼)。

堿燒傷人參皂苷Rk3治療組16只。堿燒傷后使用人參皂苷Rk3溶液(50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)每天滴眼三次，間隔氯霉素滴眼液每天滴眼四次。按角膜堿燒傷后1d、4d、7d、14d隨機(jī)分成4組，每組4只(8只眼)。

堿燒傷人參皂苷Rg3(R型)治療組16只。堿燒傷后使用人參皂苷Rg3(R型)溶液(50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)每天滴眼三次，間隔氯霉素滴眼液每天滴眼四次。按角膜堿燒傷后1d、4d、7d、14d隨機(jī)分成4組，每組4只(8只眼)。

48只大鼠均于堿燒傷后1d，每日行裂隙燈顯微鏡檢查，用YDY-91A眼科多功能圖像處理系統(tǒng)攝影，并按照公式1計(jì)算CNV(角膜新生血管)生長(zhǎng)面積。C為CNV網(wǎng)的跨圓周鐘點(diǎn)數(shù)，I為CNV從角膜緣深入角膜的長(zhǎng)度，r為大鼠角膜半徑(r＝3mm)。

公式1：C/12×3.1416×[r²-(r-I)²]

3.結(jié)果評(píng)價(jià)

按照公式1計(jì)算不同實(shí)驗(yàn)組、不同觀察天數(shù)大鼠CNV面積如表1所示：

表1:堿燒傷后各組大鼠CNV面積的比較

P值均滿足P<0.01

由表1可知，治療組在整個(gè)觀察期僅有少量新生血管生長(zhǎng)且與給藥濃度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)；燒傷空白組燒傷1d后，見(jiàn)損傷區(qū)角膜上皮水腫，增厚，角膜邊緣血管充血，4d時(shí)，角膜上皮缺失，角鞏膜邊緣處有CNV呈現(xiàn)細(xì)絲狀伸入角膜區(qū)域，7d時(shí)CNV顯著變長(zhǎng)，面積增加，血管分支生長(zhǎng)，隨后CNV面積增長(zhǎng)減慢，14d時(shí)，基質(zhì)層脫落，腫脹程度減緩，CNV交織成網(wǎng)狀，生長(zhǎng)區(qū)域穩(wěn)定。堿燒傷人參皂苷Rg3(R型)治療組燒傷1d后，角膜上皮輕微水腫，基質(zhì)略腫脹增厚，角膜邊緣血管充血，第4d時(shí)，角膜上皮缺失，角鞏膜邊緣處有CNV呈現(xiàn)細(xì)絲狀伸入角膜區(qū)域，比燒傷空白組稀疏，7d時(shí)，CNV顯著變長(zhǎng)，面積增加，血管開(kāi)始分支生長(zhǎng)，但新生血管比燒傷空白組血管細(xì)、數(shù)量少，14d時(shí)，少量新生血管達(dá)到堿燒傷區(qū)域，隨后CNV退化。堿燒傷人參皂苷Rk3治療組燒傷1d后，角膜上皮輕微水腫，基質(zhì)略腫脹增厚，角膜緣血管充血，第4d時(shí)，角膜上皮缺失，角鞏膜邊緣處有少量CNV呈現(xiàn)細(xì)絲狀伸入角膜區(qū)域，且比堿燒傷人參皂苷Rg3(R型)治療組血管稀疏，覆蓋面積小，7d時(shí)，CNV變長(zhǎng)，面積增加，血管開(kāi)始分支生長(zhǎng)，但明顯比人參皂苷Rg3(R型)治療組新生血管生長(zhǎng)緩慢，14d時(shí)，僅少量新生血管達(dá)到堿燒傷區(qū)域，其后CNV退化程度比人參皂苷Rg3(R型)治療組更明顯。

上述結(jié)果表明治療組的大鼠眼睛滴入人參皂苷Rk3溶液，CNV面積相比空白對(duì)照組以及人參皂苷Rg3(R型)治療組明顯減小，血管的數(shù)量少，血管細(xì)，并且隨著人參皂苷Rk3給藥濃度的增加，CNV面積減小，對(duì)新生血管生長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng)，P<0.01，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明人參皂苷Rk3能顯著抑制角膜新生血管的生長(zhǎng)，且抑制效果明顯強(qiáng)于人參皂苷Rg3(R型)。

實(shí)施例2人參皂苷Rk3對(duì)角膜微囊袋法建立鼠角膜血管形成的抑制作用

本實(shí)驗(yàn)參考中南大學(xué)博士學(xué)位論文《靶向VEGFR-1脫氧核酶抑制血管生成及腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究》(2014，作者：周琴)，略作修改。

1.模型制作方法

1)選取7周齡左右大的雄性大鼠42只，隨機(jī)分為7組，每組6只。

2)提前準(zhǔn)備含30μM的VEGF的溶液中浸泡的硝化纖維濾膜顆粒。濾膜置于管內(nèi)，種植前在冰上放置2小時(shí)。建立角膜血管新生模型。

3)模型的建立：用顯微剪在大鼠角膜中央剪一個(gè)局部的板層口。

4)顯微鑷子在切口的下層鈍性分離并延伸至下方角膜緣。

5)形成一個(gè)角膜基質(zhì)微囊袋將準(zhǔn)備好的硝化纖維濾膜植入微囊袋中，使其距離角膜緣新生血管可在幾天后通過(guò)顯微鏡和電腦圖像分析直接觀察。

2.動(dòng)物模型給藥

1)在放置顯微濾膜顆粒的當(dāng)天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)分為4組：

實(shí)驗(yàn)組1經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射50μg人參皂苷Rk3溶液(人參皂苷Rk3-50)；

實(shí)驗(yàn)組2經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射50μg人參皂苷Rg3(R型)溶液(人參皂苷Rg3(R型)-50)；

實(shí)驗(yàn)組3經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射100μg人參皂苷Rk3溶液(人參皂苷Rk3-100)；

實(shí)驗(yàn)組4經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射100μg人參皂苷Rg3(R型)溶液(人參皂苷Rg3(R型)-100)；

實(shí)驗(yàn)組5經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射200μg人參皂苷Rk3溶液(人參皂苷Rk3-200)；

實(shí)驗(yàn)組6經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射200μg人參皂苷Rg3(R型)溶液(人參皂苷Rg3(R型)-200)；

對(duì)照組經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射等量生理鹽水(Saline)；

2)5d后，分離角膜并通過(guò)光學(xué)顯微鏡分析血管的生長(zhǎng)面積及血管的數(shù)目評(píng)價(jià)人參皂苷Rk3以及人參皂苷Rg3(R型)的生物學(xué)活性。新生血管最多的面積被確定后，200×的視野下進(jìn)行計(jì)數(shù)(是否血管形成的數(shù)量和面積不同)

3.結(jié)果分析

表2:人參皂苷Rk3對(duì)大鼠角膜新生血管面積的影響

注：表中數(shù)值的誤差類型為標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表3人參皂苷Rk3對(duì)角膜新生血管數(shù)量的影響

注：表中數(shù)值的誤差類型為標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表2和表3展示了新生血管的區(qū)域和數(shù)量的變化趨勢(shì)。表中可以看出：相對(duì)于生理鹽水組，和人參皂苷Rg3(R型)實(shí)驗(yàn)組。人參皂苷Rk3實(shí)驗(yàn)組減少了新生血管面積和血管數(shù)量，各實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且新生血管抑制率隨給藥濃度增加而增加，但100μg、200μg給藥劑量的血管面積及血管數(shù)量差異不顯著(P>0.05)，說(shuō)明給藥劑量已至上限。綜上，通過(guò)角膜微囊袋法成功構(gòu)建角膜血管形成模型，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rk3顯著抑制了角膜新生血管形成的面積和數(shù)量(P<0.05)。

還需要說(shuō)明的是，在可實(shí)施且不明顯違背本發(fā)明的主旨的前提下，在本說(shuō)明書中作為某一技術(shù)方案的構(gòu)成部分所描述的任一技術(shù)特征或技術(shù)特征的組合同樣也可以適用于其它技術(shù)方案；并且，在可實(shí)施且不明顯違背本發(fā)明的主旨的前提下，作為不同技術(shù)方案的構(gòu)成部分所描述的技術(shù)特征之間也可以以任意方式進(jìn)行組合，來(lái)構(gòu)成其它技術(shù)方案。本發(fā)明也包含在上述情況下通過(guò)組合而得到的技術(shù)方案，并且這些技術(shù)方案相當(dāng)于記載在本說(shuō)明書中。

以上通過(guò)具體實(shí)施方式和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說(shuō)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，這些并非意圖對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，本發(fā)明的范圍應(yīng)由權(quán)利要求書確定。

工業(yè)實(shí)用性

本發(fā)明的藥物組合物能夠顯著抑制血管新生，因而其作為用于治療或預(yù)防血管新生疾病的藥物是有用的。