本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

腎纖維化(包括腎間質(zhì)纖維化和腎小球硬化)是各種原因引起的腎臟損害最后階段的主要病理基礎(chǔ)，腎纖維化發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，與多種因素有關(guān)，其中主要與細(xì)胞外基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞的增殖和活化，血管活性物質(zhì)、細(xì)胞因子以及細(xì)胞外基質(zhì)轉(zhuǎn)換失衡有關(guān)，腎間質(zhì)纖維化幾乎是所以原發(fā)或繼發(fā)腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎衰竭的共同途徑。急需研發(fā)高效低毒的抗腎纖維化藥物。

腎纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價(jià)值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表(Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily.Tetrahedron Letters,52(2011)4543–4545)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗腎纖維化活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗腎纖維化活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為5％和95％。

本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗腎纖維化作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽具有同樣的藥效。

以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1化合物Artalbic acid的制備

化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily.Tetrahedron Letters,52(2011)4543–4545)的方法。

實(shí)施例2Artalbic acid的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(266mg，1.00mmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?0攝氏度攪拌16h。16h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ11.41(s,1H),6.06(s,1H),5.76(s,1H),4.99(s,1H),4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H),2.10(s,1H),1.64(s,3H),1.54(s,1H),1.44(s,2H),0.95(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05(s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s),33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₁₇H₂₆BrO₄:373.1014；found 373.1017.

實(shí)施例3Artalbic acid的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(III)的合成

1、Artalbic acid的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的合成

將化合物II(187mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(252mg，1.5mmol)和二乙醇胺(1051mg，10mmol)，混合物加熱回流1h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集黃色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物Artalbic acid的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的淡黃色固體(146.9mg,74％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ18.72(s,1H),δ6.11(s,1H),5.80(s,1H),5.14(s,1H),4.73(s,1H),4.63(s,1H),3.57(s,2H),3.45(s,4H),2.70(d,J＝15.6Hz,3H),2.60(s,4H),2.50(s,2H),2.46(s,2H),2.33(s,1H),1.88(s,2H),1.68(s,3H),1.62(d,J＝19.9Hz,3H),1.02(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ202.01(s),176.11(s),149.21(s),148.55(s),117.15(s),109.60(s),81.93(s),67.25(s),59.28(s),57.88(s),56.83(s),53.74(s),41.36(s),39.24(s),38.93(s),35.88(s),30.82(s),20.61(s),18.49(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₁H₃₆N₁O₆:398.2543；found:398.2547。

Artalbic acid的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物

2、Artalbic acid的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(III)的合成

合成足夠多的Artalbic acid的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物，將Artalbic acid的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物(0.100g，0.5mmol)溶于4mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(0.238g，2mmol)，反應(yīng)物加熱回流2h。將反應(yīng)物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過量的氯化亞砜，減壓濃縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.2，v/v)，得到化合物III的淡黃色固體(145.4mg，67％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.05(s,1H),δ6.05(s,1H),5.75(s,1H),4.67(s,2H),4.58(d,J＝7.5Hz,1H),3.68(s,4H),3.50(s,2H),2.86(s,2H),2.74(s,2H),2.62(d,J＝0.9Hz,3H),2.44(s,2H),2.38(s,2H),2.22(s,1H),1.61(s,3H),1.49(s,1H),1.42(s,2H),0.95(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ201.68(s),175.56(s),148.88(s),147.80(s),116.82(s),109.05(s),81.60(s),66.70(s),57.44(s),55.79(s),53.30(s),41.03(s),39.21(s),38.80(s),38.49(s),35.44(s),30.38(s),20.17(s),18.05(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₁H₃₄Cl₂NO₄⁺:434.1865；found:434.1861。

實(shí)施例4Artalbic acid的O-(二(2-甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物(III)的合成

制備足夠多的化合物III，將化合物III(0.217g，0.5mmol)溶于10mL乙 醇，室溫下加入甲硫醇鈉(0.21g，3mmol)，反應(yīng)物加熱回流2h。減壓濃縮除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠柱層析進(jìn)行純化(石油醚/丙酮100:0.3，v/v)，得到黃色固體物，即化合物IV(0.158g，69％)。

¹H NMR(500MHz,Chloroform-d1)δ18.86(s,1H),6.14(s,1H),5.82(s,1H),5.33(s,1H),4.75(s,1H),4.62(s,1H),3.54(s,2H),2.86(s,1H),2.72(dd,J＝18.2,6.8Hz,11H),2.50(s,2H),2.39(s,2H),2.12(s,6H),1.71(s,3H),1.56(s,2H),1.41(s,1H),1.06(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ201.96(s),175.97(s),149.17(s),148.22(s),117.11(s),109.47(s),81.85(s),67.07(s),57.69(s),53.56(s),52.49(s),41.29(s),39.00(s),38.79(s),35.63(s),32.15(s),30.74(s),20.43(s),18.43(s),14.87(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₃H₄₀NO₄S₂⁺:434.1865；found:434.1863。

實(shí)施例5組合物對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響

1.1材料

貝那普利，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)；羥脯氨酸(HYP)試劑盒，南京建成生物公司；纖維連結(jié)蛋白(FN)試劑盒購自上海生物制品所。

組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的5mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的95mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：普通級(jí)Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠。

1.2試驗(yàn)方法與結(jié)果

大鼠60只，隨機(jī)分6組，即假手術(shù)組、模型組、苯那普利灌胃10mg/kg組、 組合物灌胃10mg/kg組、化合物III灌胃10mg/kg組、化合物IV灌胃10mg/kg組，動(dòng)物喂養(yǎng)1周，各大鼠以10％水合氯醛3.0mL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側(cè)臥位固定與手術(shù)臺(tái)上，剪毛后用碘酒、75％酒精消毒手術(shù)區(qū)，行左側(cè)腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側(cè)輸尿管，假手術(shù)組僅切開腹腔并游離左側(cè)輸尿管，但不結(jié)扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線結(jié)扎兩道，上一道結(jié)扎點(diǎn)位于左腎下極水平，然后在兩道結(jié)扎點(diǎn)剪斷輸尿管，逐層縫合，術(shù)后10天10％水合氯醛麻醉后處死各組動(dòng)物，取血，按纖維連結(jié)蛋白測(cè)定說明測(cè)定說明纖維聯(lián)接蛋白(FN)。生理鹽水反復(fù)灌洗后留取左側(cè)腎臟，腎組織經(jīng)4％的多聚甲醛緩沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測(cè)定說明測(cè)定羥脯氨酸。

常規(guī)病理學(xué)檢①肉眼觀察：假手術(shù)組腎臟顏色鮮紅，表明光滑，包膜光澤，無粘連。模型對(duì)照組腎臟體積增大，顏色蒼白，表明呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數(shù)區(qū)域腎包膜粘連。②光鏡檢查：假手術(shù)組腎單位結(jié)果清晰，腎小球囊無擴(kuò)張或炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型對(duì)照組大片腎小管壞死，腎間質(zhì)纖維細(xì)胞增生，腎小管擴(kuò)張，內(nèi)有大量棕黃色遮光物質(zhì)或壞死脫落的上皮細(xì)胞，腎小球數(shù)目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。組合物給藥組病變與模型對(duì)照組類似，但均有不同程度的形態(tài)學(xué)改善，與模型對(duì)照組比較有明顯差異。而化合物III給藥組和化合物IV給藥組與模型對(duì)照組無顯著性差異。

表1組合物對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響

*p<0.05，與模型組相比較

對(duì)各組FN、HYP進(jìn)行T檢驗(yàn)。結(jié)果見表1，組合物灌胃10mg/kg顯著降低FN、HYP水平(與模型對(duì)照組比較，P<0.05)；而化合物III和化合物IV灌胃10mg/kg未能顯著降低FN、HYP水平。

結(jié)論：組合物能夠顯著降低腎間質(zhì)纖維化FN、HYP水平的升高，抑制腎間質(zhì)纖維化，可以用來制備抗腎纖維化藥物?；衔颕II和化合物IV不能夠顯著降低腎間質(zhì)纖維化FN、HYP水平的升高，不能抑制腎間質(zhì)纖維化，不可以用來制備抗腎纖維化藥物。

實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。

實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。