本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗肺癌主動靶向脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：
肺癌是發(fā)病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來許多國家都報道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明確，大量資料表明，長期大量吸煙與肺癌的發(fā)生有非常密切的關(guān)系。已有的研究證明：長期大量吸煙者患肺癌的概率是不吸煙者的10～20倍，開始吸煙的年齡越小，患肺癌的幾率越高。此外，吸煙不僅直接影響本人的身體健康，還對周圍人群的健康產(chǎn)生不良影響，導(dǎo)致被動吸煙者肺癌患病率明顯增加。城市居民肺癌的發(fā)病率比農(nóng)村高，這可能與城市大氣污染和煙塵中含有致癌物質(zhì)有關(guān)。隨著如今霧霾的越發(fā)嚴重，人們對肺癌的關(guān)注也愈發(fā)重視。肺癌的臨床表現(xiàn)比較復(fù)雜，癥狀和體征的有無、輕重以及出現(xiàn)的早晚，取決于腫瘤發(fā)生部位、病理類型、有無轉(zhuǎn)移及有無并發(fā)癥，以及患者的反應(yīng)程度和耐受性的差異。肺癌早期癥狀常較輕微，甚至可無任何不適。中央型肺癌癥狀出現(xiàn)早且重，周圍型肺癌癥狀出現(xiàn)晚且較輕，甚至無癥狀，常在體檢時被發(fā)現(xiàn)。肺癌的治療有化學(xué)治療、放射治療和外科治療，其中，放療是一種局部治療，常常需要聯(lián)合化療；而外科手術(shù)并不是適用于所有病人，因此，化療是肺癌的主要治療方法，90%以上的肺癌需要接受化療治療，近年化療在肺癌中的作用已不再限于不能手術(shù)的晚期肺癌患者，而常作為全身治療列入肺癌的綜合治療方案。開發(fā)有效的肺癌化學(xué)藥物具有重要意義。舒尼替尼最先于２００６年被美國ＦＤＡ批準治療腎癌,2010年11月獲得了歐盟委員會的批準可以用來治療胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤（pancreaticneuroendocrinetumors）。2011年５月，美國ＦＤＡ也批準了舒尼替尼用來治療胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。舒尼替尼的也正在其他很多腫瘤上試驗，包括乳腺癌、肺癌、甲狀腺癌和接腸癌，但是初步結(jié)果顯示：同此類藥物治療腎癌類似，有一定的效果但是效果不完全、不持久。脂質(zhì)體(liposomes)是一種類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層囊泡。自20世紀60年代英國學(xué)者Bangham等首次報道脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)以來，脂質(zhì)體得到了越來越多的重視。1971年英國科學(xué)家Rymen等人開始將脂質(zhì)體作為藥物載體，使其在藥學(xué)領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用，迅速發(fā)展為新型藥物輸送系統(tǒng)。脂質(zhì)體具有長效、降低毒性及保護包封藥物的優(yōu)點，同時還存在一些缺點：一般的脂質(zhì)體的靶向性主要集中于網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞豐富的器官，若想對其他組織器官進行治療其靶向性不明顯；脂質(zhì)體的穩(wěn)定性不夠，用常規(guī)方法制得的脂質(zhì)體易于聚集和融和，有效期較短；脂質(zhì)體內(nèi)容物的泄漏，通常脂質(zhì)體在保存過程中，內(nèi)容物或多或少都會發(fā)生泄漏，尤其是對某些水溶性藥物；對不同的藥物，脂質(zhì)體的包封率和載藥量差別很大，有些藥物的載藥量極低，這就很難發(fā)揮藥物的作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明目的在于提供一種抗肺癌主動靶向脂質(zhì)體，是含有舒尼替尼和亞貢二萜酸類化合物,且具有靶向穩(wěn)定性的脂質(zhì)體組合物。其中亞貢二萜酸類化合物是從植物亞貢中提取出的化合物，包括亞貢二萜酸A、亞貢二萜酸B、亞貢二萜酸C或亞貢二萜酸D，其結(jié)構(gòu)如下所示：所述舒尼替尼和亞貢二萜酸類化合物的質(zhì)量比為（1-3）：6，優(yōu)選（2-2.5）：6。本發(fā)明還提供了所述脂質(zhì)體的制備方法，具體包括如下步驟：1）合成靶向RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物：由固相合成法合成RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物；2）稱取重量比的舒尼替尼和亞貢二萜酸類化合物，與磷脂、穩(wěn)定劑、RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物、DSPC-PEG2000和非離子表面活性劑按一定比例溶于乙醚，加入一定體積的PBS，冰水浴中超聲攪拌，形成乳劑，常溫下先在真空度小的情況下旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)，再調(diào)高真空度繼續(xù)減壓蒸發(fā)，形成水性懸液，用氬氣吹拂，再加入蒸餾水，最后冰水浴中短時攪拌超聲，用高壓均質(zhì)機均值，0.2微米聚碳酸酯末擠出，PVDF膜無菌過濾，分裝入西林瓶，冷凍干燥，西林瓶中通氬氣，壓蓋密封。進一步地，步驟1）中所述RGD肽序列為：甘氨酸-丙氨酸-精氨酸-酪氨酸-半胱氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-半胱氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸。進一步地，步驟2）中所述的磷脂為氫化飽和磷脂，優(yōu)選氫化飽和大豆磷脂、氫化飽和卵磷脂或二硬脂酰磷脂酰膽堿。進一步地，步驟2）中所述的穩(wěn)定劑為膽固醇和多羥基物質(zhì)的組合，所述膽固醇與多羥基物質(zhì)的重量比為1:2-4。所述多羥基物質(zhì)為葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、環(huán)糊精、乙二醇、木糖醇、山梨醇或甘油。進一步地，步驟2）中所述磷脂、穩(wěn)定劑、RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物、DSPC-PEG2000和非離子表面活性劑的重量比為10:1.5-2.0:0.03-0.035:0.5-0.6:100，優(yōu)選10:1.5:0.03：0.55:100。進一步地，步驟2）中亞貢二萜酸類化合物與磷脂的質(zhì)量比為：3：1。本發(fā)明還提供一種含有所述脂質(zhì)體組合物的制劑，所述脂質(zhì)體組合物包裹在海藻酸鹽-殼聚糖膠囊內(nèi)。這種制劑可使脂質(zhì)體組合物安全通過胃的酸性環(huán)境而到腸道的中性環(huán)境，使之順利吸收。本發(fā)明所述的脂質(zhì)體組合物通過工藝調(diào)整，克服了包裹多種成分包裹率不高、不穩(wěn)定的問題，同時，申請人首次通過藥效研究發(fā)現(xiàn)亞貢二萜酸類化合物可有效解決舒尼替尼藥效不完全，不持久的問題。通過動物及細胞試驗進行驗證，亞貢二萜酸類化合物對舒尼替尼殺死腫瘤細胞具有巨大的協(xié)同效應(yīng)，動物細胞試驗均顯示了很成功的實驗結(jié)果，達到了極好的抑制腫瘤的效果，開拓了抗腫瘤脂質(zhì)體領(lǐng)域的新篇章。附圖說明圖1為本發(fā)明所述組合物對A549肺癌細胞治療效果的結(jié)果圖。具體實施方式以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明，以下實施例靶向RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物由上海華大天源生物科技有限公司合成，所用試劑均為市售。所用的的實驗動物模型構(gòu)建方法為：SPF級BALB/c雌性裸鼠，體質(zhì)量為18±2g，4周齡，將肺腺癌細胞A549培養(yǎng)至對數(shù)生長期，胰酶消化，然后用無血清培養(yǎng)液稀釋成細胞懸液，取1×106個（1ml）細胞接種于BALB/c裸鼠右腋皮下。腫瘤大小的計算方法，腫瘤體積V（mm3）=實體瘤最長徑（mm）×實體瘤最短徑（mm）2/2。實施例1一種用于抗腫瘤的脂質(zhì)體組合物的制備方法，具體包括以下步驟：1）稱取舒尼替尼5g,亞貢二萜酸A30g，氫化飽和大豆磷脂10g，膽固醇0.5g，環(huán)糊精1.0g，RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物0.03g,DSPC-PEG2000為0.5g,非離子表面活性劑100g;2）合成靶向RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物：由固相合成法合成RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物，RGD肽序列為：甘氨酸-丙氨酸-精氨酸-酪氨酸-半胱氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-半胱氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸；3）將已經(jīng)稱好的配比量的的舒尼替尼和亞貢二萜酸A，與氫化飽和大豆磷脂、膽固醇、環(huán)糊精、RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物、DSPC-PEG2000和非離子表面活性劑溶于乙醚，加入150ml的PBS，冰水浴中超聲攪拌，形成乳劑，常溫下先在真空度小的情況下旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)，再調(diào)高真空度繼續(xù)減壓蒸發(fā)，形成水性懸液，用氬氣吹拂，再加入50ml蒸餾水，最后冰水浴中短時攪拌超聲，用高壓均質(zhì)機均值，0.2微米聚碳酸酯末擠出，PVDF膜無菌過濾，分裝入西林瓶，冷凍干燥，西林瓶中通氬氣，壓蓋密封。實施例2一種用于抗腫瘤的脂質(zhì)體組合物的制備方法，具體包括以下步驟：1）稱取舒尼替尼10g,亞貢二萜酸A30g，氫化飽和卵磷脂10g，膽固醇0.4g，葡萄糖1.6g，RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物0.035g,DSPC-PEG2000為0.6g,非離子表面活性劑100g;2）合成靶向RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物：由固相合成法合成RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物，RGD肽序列為：甘氨酸-丙氨酸-精氨酸-酪氨酸-半胱氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-半胱氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸；3）將已經(jīng)稱好的配比量的的舒尼替尼和亞貢二萜酸A，與氫化飽和卵磷脂、膽固醇、葡萄糖、RGD肽-6-氨基己酸臂復(fù)合物、DSPC-PEG2000和非離子表面活性劑溶于乙醚，加入150ml的PBS，冰水浴中超聲攪拌，形成乳劑，常溫下先在真空度小的情況下旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)，再調(diào)高真空度繼續(xù)減壓蒸發(fā)，形成水性懸液，用氬氣吹拂，再加入50ml蒸餾水，最后冰水浴中短時攪拌超聲，用高壓均質(zhì)機均值，0.2微米聚碳酸酯末擠出，PVDF膜無菌過濾，分裝入西林瓶，冷凍干燥，西林瓶中通氬氣，壓蓋密封。實驗一、實施例1和2所制備的脂質(zhì)體組合物的包封率實施例1和2所制備的脂質(zhì)體組合物經(jīng)11000r/min超濾1h后，收集下清液，高效液相色譜法分別測定其中的舒尼替尼和亞貢二萜酸A含量，記為W游離，將脂質(zhì)體組合物經(jīng)無水乙醇完全破膜后，高效液相色譜法分別測定其中的舒尼替尼和亞貢二萜酸A含量，記為W總，包封率=（W總-W游離）/W總×100%,經(jīng)測定舒尼替尼的包封率為（97.01±3.26）%，亞貢二萜酸A的包封率為（93.21±3.10）%。實驗二、實施例1和2所制備的脂質(zhì)體組合物穩(wěn)定性試驗實施例1和2所制備的脂質(zhì)體組合物在10℃長期儲存和在室溫下儲存，用水復(fù)溶后，結(jié)果見表1和表2：表1脂質(zhì)體組合物在10℃長期儲存穩(wěn)定性結(jié)果表2脂質(zhì)體組合物在室溫下儲存穩(wěn)定性結(jié)果實驗三、檢測脂質(zhì)體組合物的組織分布荷瘤裸鼠模型的腫瘤大小生長至100-200mm3時，分為2組，每組5只，分別尾靜脈注射實施例1所制備的脂質(zhì)體組合物（實驗組），有效成分等量的舒尼替尼和亞貢二萜酸A形成的組合物（對照組），分別在藥物注射后0.15，0.6，1，2，4，8h，取小鼠的心、肝、脾、肺、腎，腫瘤清洗稱重，組織勻漿、通過HPLC法測定組織內(nèi)藥物的量。實驗發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體中藥物釋放較為緩慢，在注射后8h時，仍能測出較高的濃度，具體藥物組織分布如表3所示，可以看出腫瘤細胞中藥物的累計量有所提高，而心、肝、脾和腎中藥物分布有所減少。表3藥物的組織分布實驗四、對A549肺癌細胞治療效果評價肺癌細胞A549分別與正常培養(yǎng)基（空白組）、200nM亞貢二萜酸A，在缺氧缺營養(yǎng)（是舒尼替尼的作用機理，可用于代替其在細胞試驗中的作用）或正常條件下分別進行孵育48小時，其中缺氧指氧含量0.5%，缺營養(yǎng)指無糖，然后分析存活的細胞水平，用Promega的單溶液細胞增殖檢測試劑盒來分析。實驗結(jié)果如圖1所示，舒尼替尼（缺氧缺營養(yǎng)代替）與亞貢二萜酸A組合時，在肺癌細胞A549中抑制率達到了92%，具有明顯的協(xié)同效應(yīng)。實驗五、體內(nèi)抑瘤作用荷瘤裸鼠模型建立7天后，隨機分為4組，每組6只，取實施例3所制備的組合物尾靜脈給藥，給藥方式為：等體積的生理鹽水（對照組），按4ml/kg的注射量分別注射實施例3所制備的組合物、2mg/ml的舒尼替尼和6mg/ml的亞貢二萜酸A，以及按50mg/kg實施例2制備的脂質(zhì)體，第7天起觀察荷瘤小鼠的狀況，同時每周2次側(cè)體重和腫瘤體積，當(dāng)對照組腫瘤大小超過2000mm3時結(jié)束觀察，稱重，眼球取血，頸椎脫臼處死小鼠并剝離腫瘤，記錄瘤重，瘤重變化如圖1所示。腫瘤抑制率計算公式：抑制率=[（對照組瘤重-給藥組瘤重）/對照組瘤重]×100%，結(jié)果見表4所示。表4腫瘤抑制率計算通過表1數(shù)據(jù)可知，舒尼替尼和亞貢二萜酸A的聯(lián)合使用，具有極好的協(xié)同效果，呈現(xiàn)了顯著的抗腫瘤效果，而脂質(zhì)體的使用，通過靶向?qū)⑺幬镙斔椭练伟┘毎?，因此，較少量的活性物質(zhì)即aa可達到顯著的抗腫瘤效果。