專利名稱:靶向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的脂質(zhì)體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本申請總體上涉及遞送諸如治療劑和/或顯像劑之類的活性劑的方法和組合物, 更具體地,涉及利用諸如脂質(zhì)體之類的脂質(zhì)顆粒遞送活性劑的方法和組合物。
發(fā)明內(nèi)容
一種實施方式提供一種藥物遞送方法,所述方法包括對有相應(yīng)需要的受治療者進(jìn) 行包含脂質(zhì)顆粒的組合物的給藥,所述脂質(zhì)顆粒含有至少一種PS脂質(zhì)。另一種實施方式提供一種治療或預(yù)防HIV (人類免疫缺陷病毒)感染的方法,所述 方法包括對有相應(yīng)需要的受治療者進(jìn)行包含脂質(zhì)顆粒的組合物的給藥,所述脂質(zhì)顆粒含有 PS脂質(zhì)或PI脂質(zhì)中的至少一種,其中,所述脂質(zhì)顆粒不含CHEMS(膽留醇半琥珀酸酯)脂 質(zhì)。又一種實施方式提供一種藥物遞送方法,所述方法包括對有相應(yīng)需要的受治療者 進(jìn)行包含脂質(zhì)顆粒的組合物的給藥,所述脂質(zhì)顆粒含有至少一種多不飽和脂質(zhì)。又一種實施方式提供一種組合物,所述組合物包含脂質(zhì)顆粒,所述脂質(zhì)顆粒含有 PS脂質(zhì)。又一種實施方式提供一種組合物,所述組合物包含脂質(zhì)顆粒,所述脂質(zhì)顆粒含有 至少一種多不飽和脂質(zhì)。再一種實施方式是一種對病毒進(jìn)行標(biāo)記的方法,所述方法包括使受病毒感染的細(xì) 胞與脂質(zhì)顆粒接觸,所述脂質(zhì)顆粒含有a)PI或PS脂質(zhì)中的至少一種和b)至少一種標(biāo)記 的脂質(zhì),所述標(biāo)記的脂質(zhì)包含至少一種標(biāo)記物,其中所述接觸使所述標(biāo)記物標(biāo)記所述病毒。
圖I(A)-(G)描述了下列脂質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)(A)D0PE ; (B)DOPC ; (C)CHEMS ; (D)PI ; (E)PS ; (F) Rho-PE 以及(G)b_PE。圖2 (A)-(H)顯示了研究下列脂質(zhì)體與Huh7. 5細(xì)胞中ER(內(nèi)質(zhì)網(wǎng))膜蛋白EDEM 共定位的共聚焦顯微圖像㈧PE CH(摩爾比3 2)脂質(zhì)體;⑶PE PC (3 2) 脂質(zhì)體;(C) PE CH PI(3 1 1)脂質(zhì)體;(D) PE PC PI (2 2 1)脂質(zhì) 體;(E) PE CH PS (3 1 1)脂質(zhì)體;(F) PE PC PS (2 2 1)脂質(zhì)體;(G) PE CH PI PS (3 1 0. 5 0. 5)月旨質(zhì)體;(H) PE PC PI PS (1. 5 1. 5 1 1) 脂質(zhì)體。圖3顯示了脂質(zhì)體遞送的rh-DOPE與EDEM抗體的計算的共定位。圖4顯示了由鏈霉親和素捕獲的標(biāo)記的病毒顆粒相對于相同樣品分泌的病毒體的總量(100% )的百分?jǐn)?shù),該百分?jǐn)?shù)作為脂質(zhì)體中b-PE摩爾百分?jǐn)?shù)的函數(shù)。圖5顯示了 Rh-PE標(biāo)記的JC-I HCVcc (紅色,左下小圖)的共聚焦顯微圖像,所述 Rh-PE標(biāo)記的JC-I HCVcc與原初Huh7. 5細(xì)胞一起孵育1小時(Μ0Ι = 0. 1),之后洗滌細(xì)胞 并在新鮮培養(yǎng)基中再孵育0、6或M小時。在各孵育時間之后,固定細(xì)胞并使用抗HCV核心 抗體(綠色,右上小圖)和DAPI (藍(lán)色,左上小圖)染色,然后將其固定至載玻片上并進(jìn)行 共聚焦顯微顯像。右下小圖中顯示了合并的圖像。顯示了各孵育階段的典型圖像。各圖像 的分辨率刻度條為10 μ m。圖6(A)_(C)顯示了熒光顯微圖像,該熒光顯微圖像研究摩爾比3 2的PE CH 脂質(zhì)體(A)、PE CH PI(3 1 1)脂質(zhì)體(B)和 PE CH PS (3 1 1)脂質(zhì)體 (C)摻入細(xì)胞膜中。圖7是表示Huh7. 5細(xì)胞內(nèi)靶向ER的脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取和脂質(zhì)滯留增加的曲線 圖。數(shù)據(jù)顯示了來自三個獨立實驗的一式三份樣品的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)。該曲線圖表示 兩組數(shù)據(jù),ER脂質(zhì)體(黑線)和pH敏感性脂質(zhì)體(紅線)的細(xì)胞生長(虛線)和rh-PE脂 質(zhì)體攝取(實線)。Y軸表示被標(biāo)準(zhǔn)化至100%的這兩組數(shù)據(jù)的最大值。100%細(xì)胞生長的最 大值為2. 4X 10e6個細(xì)胞/ml (ER脂質(zhì)體讀數(shù)72小時),rh-PE熒光的最大值為1. 5 X 10e-3 任意單位(AU) /細(xì)胞(ER脂質(zhì)體讀數(shù)96小時)。圖8(A)是表示從脂質(zhì)體釋放的鈣黃綠素相對于熒光最大值的百分?jǐn)?shù)的曲線圖, 所述熒光最大值通過在孵育階段結(jié)束時添加Triton X-100以破壞脂質(zhì)體膜而測定,所述百 分?jǐn)?shù)作為PE CH和PE PC PI PS脂質(zhì)體的時間的函數(shù)。圖8(B)顯示了在10%牛血清(FBQ或10%人血清的存在下或在無血清培養(yǎng)基中 與Huh7. 5細(xì)胞一起孵育M小時的Mi標(biāo)記的脂質(zhì)體(50 μ m的脂質(zhì)濃度)的實驗結(jié)果。在 孵育時間之后,收獲細(xì)胞,進(jìn)行計數(shù)并在λ ex = 550nm、Aem = 590nm檢測熒光。將結(jié)果表 示為所檢測的各樣品每個細(xì)胞的平均熒光。所有數(shù)據(jù)均表示來自三個獨立實驗的一式三份 樣品的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。圖9顯示了 Huh7. 5細(xì)胞與包裹IXPBS的不同脂質(zhì)體制劑一起孵育5天之后的活 力。培養(yǎng)基中脂質(zhì)終濃度的范圍為O至500 μ M。結(jié)果表示來自三個獨立實驗的一式三份樣 品的平均值。圖10顯示了 PBMC與包裹IXPBS的不同脂質(zhì)體制劑一起孵育5天之后的活力。培 養(yǎng)基中脂質(zhì)終濃度的范圍為0至500 μ Μ。結(jié)果表示來自三個獨立實驗的一式三份樣品的平 均值。圖11顯示了在使用脂質(zhì)體處理5天的過程中HIV從感染的PBMC分泌。圖12顯示了從脂質(zhì)體處理的HIV感染的PBMC分泌的HIV病毒體的感染性。圖13顯示了在完全DMEM/10% FBS中與Huh7. 5細(xì)胞一起孵育45分鐘的帶有自猝 滅鈣黃綠素的、rh-PE標(biāo)記的脂質(zhì)體(脂質(zhì)終濃度為50 μ M)的實驗結(jié)果。在Xex = 490nm、 λ em = 520nm檢測孵育之后脂質(zhì)體中的鈣黃綠素的細(xì)胞內(nèi)脫猝滅,通過在λ ex = 550nm、 λ em = 590nm熒光檢測來測定相同孵育階段過程中總的脂質(zhì)體攝取。在37°C和4°C下進(jìn)行 測定,為了校正在無細(xì)胞內(nèi)吞的情況下的脂質(zhì)體結(jié)合,從37°C的數(shù)值減去所有4°C的數(shù)值。 脂質(zhì)體在Huh7. 5細(xì)胞內(nèi)遞送包裹的鈣黃綠素的能力通過計算孵育后處理的細(xì)胞內(nèi)的鈣黃 綠素脫猝滅和rh-PE熒光的比值來檢測。數(shù)據(jù)表示來自三個獨立實驗的一式三份樣品的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。圖14顯示了在使用ImM NB-DNJ(游離和脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送)處理5天的過程中 HIV從感染的PBMC的分泌。圖15顯示了從NB-DNJ脂質(zhì)體或游離NB-DNJ處理的HIV感染的PBMC分泌的HIV 病毒體的感染性。圖16顯示了 PBMC與包裹ImM NB-DNJ的不同脂質(zhì)體制劑一起孵育5天后的活力。圖17顯示了 HCV從使用脂質(zhì)體處理5天之后的急性和慢性感染的Huh7. 5細(xì)胞的 分泌。圖18顯示了從脂質(zhì)體處理的HCV感染(急性和慢性感染)的Huh7. 5細(xì)胞分泌的 HCV病毒體的感染性。圖19顯示了未處理的Huh7. 5細(xì)胞(左小圖)和PE PC PI PS脂質(zhì)體處理 的Huh7. 5細(xì)胞的共聚焦顯微圖像,所述細(xì)胞在孵育16小時后用B0DIPW93/503 (綠色)來 標(biāo)記,使LD (脂質(zhì)小滴)顯像。圖20顯示了使用PE PC PI PS脂質(zhì)體處理2小時并使用LD染色劑(綠 色)標(biāo)記的Huh7.5細(xì)胞的共聚焦顯微圖像(左小圖)。將PE PC PI PS脂質(zhì)體添加 至細(xì)胞培養(yǎng)基至脂質(zhì)終濃度為50 μ M。DAPI (藍(lán)色)用作核染色劑。右下小圖為合并的圖 像。黃色鑒定細(xì)胞內(nèi)的共定位區(qū)域。圖2IA顯示了未處理的Huh7. 5細(xì)胞(左小圖)和PE PC PI PS脂質(zhì)體處 理的Huh7.5細(xì)胞(右小圖)的共聚焦顯微圖像,所述Huh7. 5細(xì)胞被孵育16小時并使用抗 HCV核心抗體(紅色)和LD染色劑(綠色)標(biāo)記。圖21B顯示了未處理的細(xì)胞(左)和 PE PC PI PS(右)細(xì)胞的合并圖像(圖21A中的白方框)的特寫。圖21C是存在 (右)和不存在(左)PE PC PI PS脂質(zhì)體的情況下HCV核心蛋白/LD相互作用的示 意圖。圖22A-22D顯示了示例的多不飽和脂質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)22 6PE(A) ;20 4PE(B); 22 6PC (C)以及 20 4PC(D)。圖23A-B分別顯示了(23A)在多種ER脂質(zhì)體制劑存在下孵育4天過程中JC-I HCVcc從感染的Huh7. 5細(xì)胞(Μ0Ι = 0. 5)的分泌,從500 μ 1細(xì)胞上清液對所述分泌進(jìn)行定 量。通過定量PCR對上清液中的JC-I HCVcc RNA進(jìn)行定量來檢測分泌。(23Β)從脂質(zhì)體處 理的JC-I感染的Huh7. 5細(xì)胞分泌的JC-I HCVcc的感染性。通過下列步驟來測定分泌的 HCVcc的感染性感染原初Huh7. 5細(xì)胞1小時,隨后孵育Huh7. 5細(xì)胞48小時,在該時間點 固定細(xì)胞,并使用抗HCV核心抗體染色以對感染的細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行定量,并用DAPI使所有 細(xì)胞顯像。
具體實施例方式術(shù)語定義除非另有說明,不指出具體數(shù)目(“a”或“an”)是指“一個(種)或一個(種) 以上”。本文所使用的術(shù)語“病毒感染”可指一種疾病狀態(tài),在該疾病狀態(tài)中病毒入侵健康 細(xì)胞,利用細(xì)胞的復(fù)制機(jī)制來使細(xì)胞增殖或復(fù)制,并最終使細(xì)胞裂解,導(dǎo)致細(xì)胞死亡,病毒顆粒釋放,并通過新產(chǎn)生的子代病毒來感染其他細(xì)胞。某些病毒導(dǎo)致的潛伏感染也可能是 病毒感染的結(jié)果。本文使用的術(shù)語“治療或預(yù)防病毒感染”可指抑制特定病毒復(fù)制,抑制病毒傳播, 或預(yù)防病毒在其宿主中建立自身,以及緩解或減輕由病毒感染引起的疾病癥狀。如果治療 方法導(dǎo)致病毒載荷減小、發(fā)病率和/或致死率下降,則可認(rèn)為該治療方法是治療性的。術(shù)語“治療劑”是指諸如分子或化合物之類的藥劑,該藥劑可輔助治療生理病癥, 例如病毒感染或由此引起的疾病。術(shù)語“脂質(zhì)體”可被定義為含有脂質(zhì)的雙層結(jié)構(gòu)顆粒,所述雙層結(jié)構(gòu)通常是球狀雙 層結(jié)構(gòu)。本文所述的脂質(zhì)體可包括由下列縮略語表示的一種或一種以上脂質(zhì)CHEMS表示膽甾醇半琥珀酸酯脂質(zhì)。DOPE表示二油?;字R掖及分|(zhì)。DOPC表示二油?;字D憠A脂質(zhì)。PE表示磷脂酰乙醇胺脂質(zhì)或其衍生物。PEG-PE表示與聚乙二醇(PEG)共軛的PE脂質(zhì)。PEG-PE的一個實例可為聚乙二 醇-二硬脂?;字R掖及分|(zhì)。PEG-PE中PEG組分的分子量可不同。Rh-PE表示麗絲胺若丹明B-磷脂酰乙醇胺脂質(zhì)。MCC-PE表示1,2- 二油?;?sn-甘油_3_磷脂酰乙醇胺_N_ [4- (ρ-馬來酰亞胺甲 基)環(huán)己烷-氨甲酰]脂質(zhì)。PI表示磷脂酰肌醇脂質(zhì)。PS表示磷脂酰絲氨酸脂質(zhì)。術(shù)語“細(xì)胞內(nèi)遞送”可指從脂質(zhì)體向任何細(xì)胞內(nèi)腔室遞送包裹的物質(zhì)。IC50或IC90 (抑制濃度50或90)可分別指代用于達(dá)到病毒感染降低50%或90% 的治療劑的濃度。PBMC表示外周血單核細(xì)胞。s⑶4表示可溶性⑶4分子。對于“可溶性⑶4”或“S⑶4”或“D1D2”是指位于水 溶液中并可通過改變HIV Env的構(gòu)象來模擬天然膜錨定CD4的活性的CD4分子或其片段, 這是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的??扇苄寓?的一個實例是在例如“Salzwedel等人, J. Virol. 74 :326 333,2000” 中描述的二結(jié)構(gòu)域可溶性 CD4 (sCD4 或 D1D2)。MAb表示單克隆抗體。DNJ表示脫氧野尻霉素。NB-DNJ表示N- 丁基脫氧野尻霉素。NN-DNJ表示N-壬基脫氧野尻霉素。BVDV表示牛病毒性腹瀉病毒。HBV表示乙型肝炎病毒。HCV表示丙型肝炎病毒。HIV表示人類免疫缺陷病毒。Ncp表示非細(xì)胞病變的。Cp表示細(xì)胞病變的。ER表示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。
CHO表示中國倉鼠卵巢細(xì)胞。MDBK表示馬-達(dá)氏牛腎細(xì)胞。PCR表示聚合酶鏈反應(yīng)。FOS表示游離低聚糖。HPLC表示高效液相色譜法。PHA表示植物血凝素。FBS表示胎牛血清。TCID50表示50%組織培養(yǎng)感染劑量。ELISA表示酶聯(lián)免疫吸附測定。IgG表示免疫球蛋白。DAPI表示4',6_ 二脒基_2_苯基吲哚。PBS表示磷酸鹽緩沖鹽水。LD表示脂質(zhì)小滴。NS表示非結(jié)構(gòu)的?!唉?Ι”是指感染復(fù)數(shù)。相關(guān)申請本發(fā)明公開內(nèi)容通過引用完整并入了第2008-0138351號美國專利申請公布。丙型肝炎全世界大約1億7千萬人(即世界人口的3% )感染丙型肝炎病毒(HCV,HepC) (參見例如,WHO,J. Viral. H印at. 1999 ;6 :35-47),美國大約4百萬人感染丙型肝炎病毒。 大約80%的HCV急性感染個體變成慢性感染。因此,HCV是慢性肝炎的主要原因。一旦慢 性感染,在不治療的情況下病毒幾乎不會被清除。在罕見的情況下,HCV感染導(dǎo)致臨床上的 急性疾病,甚至肝臟衰竭。慢性HCV感染在個體間可顯著不同,其中有些個體具有臨床上不 明顯的或最輕的肝臟疾病,且從不會發(fā)生并發(fā)癥,其他個體具有臨床上明顯的慢性肝炎并 且可繼續(xù)發(fā)展為肝硬化。約20%的確實發(fā)展為肝硬化的HCV個體會發(fā)生末期肝疾病,并且 發(fā)生原發(fā)性肝癌的危險增加??共《舅幬?例如,干擾素)單獨或與利巴韋林聯(lián)合,對于達(dá)80%的患者有效(Di Bisceglie, Α. M,和 Hoofnagle, J. H. 2002,Hepatology 36,S121-S127),但很多患者不耐受 這種形式的聯(lián)合治療。脂質(zhì)小滴脂質(zhì)小滴(LD)可以是一種可用于儲存中性脂質(zhì)的細(xì)胞器。LD可通過細(xì)胞質(zhì)動態(tài) 移動,與其他細(xì)胞器(包括ER)相互作用。這些相互作用被認(rèn)為促進(jìn)脂質(zhì)和蛋白質(zhì)向其他細(xì) 胞器運輸。HCV衣殼蛋白(核心)可與細(xì)胞LD結(jié)合,并將非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白和復(fù)制復(fù)合物活 躍募集至結(jié)合LD的膜,用于產(chǎn)生感染性病毒顆粒。已觀察到HCV顆粒與LD非常接近,這說 明病毒組裝的一些步驟可在LD周圍發(fā)生(Miyanari等人,Nature Cell Biology, 9 (2007) 第 1089-1097 頁)。人類免疫缺陷病毒(HIV)HIV是獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)及相關(guān)病癥的病原體。有至少兩種不同類 型的HIV=HIV-I和HIV-2。另外,在這些類型各自的群體中存在大量的遺傳異質(zhì)性。由于AIDS流行病的發(fā)作,已有大約2千萬人死亡,估計目前有超過4千萬人感染有HIV-1/AIDS, 全世界每天有14000人感染HIV-1/AIDS。已經(jīng)開發(fā)了許多抗病毒治療劑和診斷能力,至少對于那些使用者來說,已經(jīng)很大 程度上改進(jìn)了生命的數(shù)量和質(zhì)量。大多數(shù)這些藥物干擾病毒蛋白或進(jìn)程,例如干擾逆轉(zhuǎn)錄 和蛋白酶活性。不幸的是,這些治療不消除感染,許多療法的不利作用嚴(yán)重,目前使用的各 類型的抗病毒劑存在HIV抗藥性毒株。N- 丁基-1,5- 二脫氧-1,5-亞氨基-D-山梨醇NB-DNJ,也稱為N- 丁基_1,5_ 二脫氧_1,5_亞氨基-D-山梨醇,可抑制ER糖苷 酶I和II的加工,已顯示為有效的抗病毒劑,其引起Hiv和肝炎病毒(例如,乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒(HCV))、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)以及其他病毒的糖蛋白的錯折疊 和/或ER滯留。合成NB-DNJ和其他N-取代脫氧野尻霉素衍生物的方法在例如美國專利 第 5,622,972 號、第 4,246,345 號、第 4,266,025 號、第 4,405,714 號以及第 4,806,650 號 中描述。NB-DNJ對肝炎病毒的抗病毒作用在例如美國專利第6,465,487號、第6,545, 021 號、第6,689,759號、第6,809,083號中描述,NB-DNJ對HIV病毒的抗病毒作用在美國專利 第4,849,430號中描述。諸如NB-DNJ之類的糖苷酶抑制劑已顯示出在治療細(xì)胞培養(yǎng)物中和使用土撥鼠 動物模型中的HBV感染方面有效,參見,例如,T. Block, X. Lu,Α. S. Mehta,B. S. Blumberg, B. Tennant,M. Ebling,B. Korba,D. M. Lansky,G. S. Jacob 以及R. A. Dwek,Nat Med. 1998 May ; 4(5) :610-4。NB-DNJ抑制HBV顆粒的分泌并引起HBV DNA的細(xì)胞內(nèi)滯留。NB-DNJ已顯示是抗BVDV、HCV的細(xì)胞培養(yǎng)模型的強(qiáng)抗病毒劑,參見,例如, Branza-Nichita N, Durantel D, Carrouee-Durantel S, Dwek RA, Zitzmann N. , J Virol.2001 Apr ;75 (8) :3527-36 ;Durantel, D.等人,J. Virol,2001,75,8987-8998 ; N. Zitzmann等人,PNAS, 1999,96,11878-11882。使用NB-DNJ治療導(dǎo)致病毒子代的感染性 降低,對于分泌的病毒的實際數(shù)量的影響較小。NB-DNJ已顯示是抗HIV的抗病毒劑,治療導(dǎo)致對從HIV感染的細(xì)胞釋放的病毒顆 粒的數(shù)量影響較小,然而,所釋放的感染性病毒的數(shù)量大大減少,參見,例如,P. B.Fischer, Μ. Collin 等人,(1995),J. Virol 69 (9) :5791-7 ;P. B. Fischer, G. B. Kar Is son, Τ. Butters, R. Dwek 以及 F. Piatt, J. Virol. 70 (1996a),第 7143-7152 頁,P. B. Fischer, G. B. Kar Is son, R. Dwek 以及 F. Piatt, J. Virol. 70 (1996b),第 7153-7160 頁。在 HIV-I 感染的患者中進(jìn)行 了涉及NB-DNJ的臨床試驗,結(jié)果顯示抗病毒活性所需的濃度太高,導(dǎo)致患者中嚴(yán)重的副作 用,參見,例如,F(xiàn)ischl M. A. ,Resnick L. , Coombs R. , Kremer A. B. ,Pottage J. C. Jr, Fass R. J. , Fife K. H. , Powderly W. G. , Collier A. C. , Aspinall R. L.等人,J. Acquir. Immune. Defic. Syndr. 1994 Feb ;7 (2) :139-47 目前不存在對NB-DNJ治療具有抗藥性的突變的HIV 毒株。ER蛋白折疊以及糖苷酶I和II由糖苷酶抑制所呈現(xiàn)的抗病毒作用被認(rèn)為是ER中病毒糖蛋白錯折疊或滯留的結(jié) 果,這主要是通過阻斷病毒糖蛋白進(jìn)入鈣聯(lián)接蛋白/鈣網(wǎng)織蛋白循環(huán)而進(jìn)行的。在三糖基 化寡糖(G1 C3Man9GlcNAc2)轉(zhuǎn)移至生長中的多肽鏈的Asn-X-Ser/Thr共有序列之后,三個 α -連接的葡萄糖殘基在可發(fā)生進(jìn)一步加工成成熟的糖單元之前而被釋放是必要的。另外, 兩個外部葡萄糖殘基必須被修剪以使得進(jìn)入鈣聯(lián)接蛋白/鈣網(wǎng)織蛋白循環(huán),進(jìn)行合適的折疊,參見,例如,Bergeron, J. J.等人,Trends Biochem. Sci.,1994,19,124—128 ;Peterson, J. R.等人,Mol. Biol. Cell,1995,6,1173-1184。一開始的加工受到位于ER的具有內(nèi)腔定 向催化結(jié)構(gòu)域的整膜酶(糖苷酶I)的影響,該酶特異性切割α 1-2連接的葡萄糖殘基,這 之后發(fā)生糖苷酶II釋放兩個α 1-3連接的葡萄糖組分的作用。脂質(zhì)體脂質(zhì)體可繞過用作分子屏障的細(xì)胞膜在細(xì)胞內(nèi)直接遞送水溶性化合物。ρΗ敏感 性脂質(zhì)體制劑可涉及磷脂酰乙醇胺(PE)或其衍生物(例如DOPE)與用作中性ρΗ下的穩(wěn)定 劑的含有酸性基團(tuán)的化合物組合。由于膽留醇半琥珀酸酯(CHEMQ與其他兩性穩(wěn)定劑相比 其膽留醇基團(tuán)在體內(nèi)賦予含有PE的小囊泡較高的穩(wěn)定性,所以膽留醇半琥珀酸酯(CHEMS) 可為良好的穩(wěn)定分子。脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送的體內(nèi)功效很大程度上取決于與血清組分(調(diào) 理素)的相互作用,該相互作用影響血清組分的藥物代謝動力學(xué)和生物分布。PH敏感性脂 質(zhì)體可從血液循環(huán)被快速清除,在肝臟和脾臟中積累,然而包含具有共價連接的聚乙二醇 (PEG)的脂質(zhì)可通過穩(wěn)定DOPE CHEMS脂質(zhì)體上的凈負(fù)電荷而克服被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES) 清除,導(dǎo)致循環(huán)時間長。D0PE-CHEMS和D0PE-CHEMS-PEG-PE脂質(zhì)體及其制備方法在下述文 獻(xiàn)中描述例如,V. A. Sl印ushkin,S. Simoes,P. Dazin,Μ· S. Newman, L. S. Guo 以及 Μ· C. P. de Lima, J. Biol. Chem. 272(1997)2382-2388 ;和 S. Simoes, V.Sl印ushkin,N. Duzgunes 和 Μ. C. Pedroso de Lima, Biomembranes 1515 Q001) 23-37,這兩個文獻(xiàn)均在此通過引用完整 并入。包裹在D0PE-CHEMS (摩爾比6 4)中的NB-DNJ的遞送在美國專利申請?zhí)?US2003/0124160 中公開。公開內(nèi)容本發(fā)明的發(fā)明人認(rèn)為含有PI或PS脂質(zhì)中的至少一種脂質(zhì)的脂質(zhì)顆粒(例如,脂 質(zhì)體或膠束)可由細(xì)胞高效攝取并與該細(xì)胞的ER膜融合(見圖1)。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)含有PI 或PS脂質(zhì)中的至少一種脂質(zhì)的脂質(zhì)顆粒在血液或血液組分(例如血清)中可具有高穩(wěn)定 性。例如,含有PI或PS脂質(zhì)中的至少一種脂質(zhì)的脂質(zhì)體在血清中比D0PE/CHEMS(摩爾比 6 3)脂質(zhì)體或D0PE/CHEMS/PEG-PE (摩爾比6 3 0. 1)脂質(zhì)體具有更高的穩(wěn)定性。在一些實施方式中,脂質(zhì)顆??珊心枬舛葹橹辽?%或至少10%或至少15% 或至少20%或至少25%或至少30%或3%至60%或5%至50%或10%至30%的PI和/ 或PS脂質(zhì)。在一些實施方式中,脂質(zhì)顆粒中PS脂質(zhì)的摩爾濃度可為至少5%或至少10%或 至少15%或至少20%或至少25%或至少30%或3%至60%或5%至50%或10%至30%。 在一些實施方式中,脂質(zhì)顆粒中PI脂質(zhì)的摩爾濃度可為至少5%或至少10%或至少15%或 至少20%或至少25%或至少30%或3%至60%或5%至50%或10%至30%。在一些實施 方式中,脂質(zhì)顆粒中PI和PS脂質(zhì)的組合濃度可為至少5%或至少10%或至少15%或至少 20%或至少25%或至少30%或3%至60%或5%至50%或10%至30%。脂質(zhì)顆粒還可含有一種或一種以上磷酯酰乙醇胺(PE)脂質(zhì)或其衍生物,例如 DOPE。在一些實施方式中,PE脂質(zhì)可包括與標(biāo)記物共軛的PE脂質(zhì),所述標(biāo)記物可為,例如, 熒光團(tuán)標(biāo)記物、生物素標(biāo)記物或放射性標(biāo)記物。圖1A、1F以及IG顯示了 DOPE脂質(zhì)、Rho-PE 脂質(zhì)(與熒光團(tuán)標(biāo)記物共軛的PE脂質(zhì)的實例)以及b-PE脂質(zhì)(與生物素標(biāo)記物共軛的PE 脂質(zhì)的實例)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
在一些實施方式中,脂質(zhì)顆粒還可含有PC或CHEMS脂質(zhì)體中的至少一種。而在一 些其他實施方式中,脂質(zhì)顆??梢圆缓蠵C和/或CHEMS脂質(zhì)。在一些實施方式中,含有PE、PC、PI以及PS脂質(zhì)的脂質(zhì)顆??蔀閮?yōu)選。這樣的脂 質(zhì)顆??筛蓴_細(xì)胞LD,這可導(dǎo)致從使用這些脂質(zhì)顆粒處理的HCV感染的細(xì)胞分泌的HCV顆 粒的感染性顯著降低。含有PE、PC、PI以及PS脂質(zhì)的脂質(zhì)顆??捎糜趯⒅|(zhì)引入HCV感染 的細(xì)胞中以干擾LD/HCV核心蛋白相互作用。另外,含有PE、PC、PI以及PS脂質(zhì)的脂質(zhì)顆粒 可競爭與HCV相同的細(xì)胞受體,因此勝于病毒進(jìn)入細(xì)胞,降低病毒感染性。病毒感染脂質(zhì)顆??捎糜谥委?、預(yù)防和/或監(jiān)測受治療者體內(nèi)由病毒引起的或與病毒相關(guān) 的疾病或病癥,在許多情況下,所述受治療者可為溫血動物,例如哺乳動物或鳥類。在許多 情況下,所述受治療者可為人類。在許多情況下,所述疾病或病癥可為病毒感染。在一些 實施方式中,含有PI或PS脂質(zhì)中的至少一種脂質(zhì)的脂質(zhì)顆??捎糜谥委?、預(yù)防和/或監(jiān) 測由屬于黃病毒科的病毒引起的或與該病毒相關(guān)的疾病或病癥。所述黃病毒科包括黃病 毒屬、丙型肝炎病毒屬以及鼠疫病毒屬。黃病毒屬包括(Gadgets Gully病毒(GGYV),凱丹 姆病毒(KADV);科薩努爾森林病病毒(KFDV);蘭加特病毒(LGTV);鄂木斯克出血熱病毒 (OHFV);波瓦桑病毒(POWV);羅亞爾農(nóng)場病毒(RFV);蜱傳腦炎病毒(TBEV);羊跳躍病病 毒(LIV) ;Meaban病毒(MEAV);索馬里滋里夫病毒(SREV);為勒尼病毒(TYUV) ;Aroa病毒 (AROAV);登革熱病毒(DENV) 1-4 ;凱多各病毒(KEDV) ;Cacipacore病毒(CPCV);科坦戈病 毒(KOUV);日本腦炎病毒(JEV);墨萊溪谷腦炎病毒(MVEV);圣路易腦炎病毒(SLEV);尤蘇 它病毒(USUV);西尼羅病毒(WNV);雅溫德病毒(YAOV);科科貝拉病毒(KOKV);巴格扎病 毒(BAGV);伊利烏斯病毒(ILHV);以色列土耳其腦脊膜腦脊髓炎病毒(ITV);恩塔亞病毒 (NTAV);坦布蘇病毒(TMUV);寨卡病毒(ZIKV);斑齊病毒(BANV);博博衣病毒(BOUV);埃杰 山病毒(EHV);朱格拉病毒(JUGV);薩博亞病毒(SABV);塞皮克病毒(SEPV);烏干達(dá)S病毒 (UGSV);韋塞爾斯布朗病毒(WESSV);黃熱病病毒(YFV);恩特伯蝙蝠病毒(ENTV);橫瀨病 毒(YOKV);阿波衣病毒(APOIV);牛骨山脊病毒(CRV);朱蒂亞帕病毒(JUTV);摩多克病毒 (MODV) ;Sal Vieja病毒(SVV) ;San Perlita病毒(SPV);布卡拉沙蝙蝠病毒(BBV);卡勒島 病毒(CIV);達(dá)喀爾蝙蝠病毒(DBV);蒙大拿鼠耳蝙蝠白細(xì)胞腦炎病毒(MMLV);粉判蝙蝠病 毒(PPBV);里奧布拉伏病毒(RBV)。丙型肝炎病毒屬包括丙型肝炎病毒(HCV,Hep C)。鼠疫 病毒屬包括邊境病病毒;牛病毒性腹瀉病毒(BVDV);以及傳統(tǒng)豬瘟病毒。由黃病毒引起的 或與該病毒相關(guān)的疾病包括登革熱、日本腦炎,基亞薩努森林病,澳洲墨萊溪谷腦炎,圣路 易腦炎,蜱傳腦炎,西尼羅河腦炎以及黃熱病。由丙型肝炎病毒引起的或與該病毒相關(guān)的疾 病包括丙型肝炎病毒感染。由鼠疫病毒引起的或與該病毒相關(guān)的疾病包括經(jīng)典豬瘟(CSF) 和牛病毒性腹瀉(BVD)或牛病毒性腹瀉/粘膜病(BVD/MD)。在一些實施方式中,脂質(zhì)顆??捎糜谥委?、預(yù)防和/或監(jiān)測由屬于肝DNA病毒科的 病毒引起的或與該病毒相關(guān)的疾病或病癥。肝DNA病毒科包括正嗜肝DNA病毒屬和禽嗜肝 DNA病毒屬,正嗜肝DNA病毒屬包括乙型肝炎病毒,禽嗜肝DNA病毒屬包括鴨乙型肝炎病毒。 由肝DNA病毒科引起的或與該病毒相關(guān)的疾病包括乙型肝炎病毒感染。在一些實施方式中,脂質(zhì)顆??捎糜谥委煛㈩A(yù)防和/或監(jiān)測屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科的 病毒引起的或與該病毒相關(guān)的疾病或病癥。逆轉(zhuǎn)錄病毒科包括α逆轉(zhuǎn)錄病毒屬,包括禽類白細(xì)胞增生病毒;β逆轉(zhuǎn)錄病毒屬,包括小鼠乳腺瘤病毒;Y逆轉(zhuǎn)錄病毒屬,包括鼠白血 病病毒和貓白血病病毒4逆轉(zhuǎn)錄病毒屬,包括牛白血病病毒和人T淋巴細(xì)胞病毒;ε逆 轉(zhuǎn)錄病毒屬,包括大眼梭鱸皮膚肉瘤病毒;慢病毒屬,包括人類免疫缺陷病毒1,猿免疫缺 陷病毒以及貓免疫缺陷病毒;泡沫病毒屬,包括黑猩猩泡沫病毒。由屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科的病 毒引起的或與該病毒相關(guān)的疾病和病癥包括HIV 1感染。在一些實施方式中,脂質(zhì)顆??捎糜谥委?、預(yù)防和/或監(jiān)測由含糖蛋白的病毒引 起的或與該病毒相關(guān)的疾病或病癥。當(dāng)脂質(zhì)顆粒作為組合物的一部分給藥于受治療者(例 如人類)時,該脂質(zhì)顆??捎糜谥委熀皖A(yù)防感染,例如病毒感染。在一些實施方式中,這樣 的感染可為由含糖蛋白的病毒(即含有至少一種糖蛋白的病毒)引起的或與該病毒相關(guān)的 感染。而在一些實施方式中,這樣的感染可為肝炎感染,例如HCV感染或HBV感染。而在一 些實施方式中,這樣的感染可為逆轉(zhuǎn)錄病毒感染,例如HIV。而在一些實施方式中,所述感染 可為黃病毒感染,例如HCV。當(dāng)脂質(zhì)顆粒用于治療HIV感染時,它可減輕從HIV感染的細(xì)胞 分泌的HIV顆粒的感染性。當(dāng)脂質(zhì)顆粒用于治療HCV感染時,它可干擾細(xì)胞LD并降低從HCV感染的細(xì)胞分泌 的HCV顆粒的感染性。在這樣的情況下,含有PE、PC、PI以及PS脂質(zhì)的脂質(zhì)顆??蔀閮?yōu)選 的。盡管本發(fā)明受到其操作理論的限制,但發(fā)明人認(rèn)為含有PE、PC、PI以及PS脂質(zhì)的 脂質(zhì)顆粒可競爭與HCV相同的細(xì)胞受體,因此勝于病毒進(jìn)入細(xì)胞,降低病毒感染性?;钚詣┰谝恍嵤┓绞街?,諸如治療劑或顯像劑之類的至少一種藥劑可被包裹在脂質(zhì)顆 粒內(nèi)。這樣的藥劑可為例如水溶性分子、肽或氨基酸。包含具有包裹的活性劑的脂質(zhì)顆粒 的組合物可用于治療、預(yù)防或監(jiān)測已知所述活性劑對之有效的疾病或病癥。所述疾病或病 癥可為所述活性劑的細(xì)胞內(nèi)遞送對之有益的任何疾病或病癥。含有PI和/或PS脂質(zhì)的脂質(zhì)顆粒的使用可使得包裹的物質(zhì)遞送至細(xì)胞的ER內(nèi) 腔中。在一些實施方式中,包裹在脂質(zhì)顆粒內(nèi)的藥劑可為α-糖苷酶抑制劑。在一些實 施方式中,α -糖苷酶抑制劑可為ERα -糖苷酶抑制劑,ERa-糖苷酶抑制劑可為ERa -糖 苷酶I抑制劑或ERa -糖苷酶II抑制劑。通常,可使用ERa -糖苷酶抑制劑來靶向依賴于 與鈣聯(lián)接蛋白和/或鈣網(wǎng)織蛋白相互作用以進(jìn)行其病毒包膜糖蛋白合適折疊的任何病毒。所述α-糖苷酶抑制劑可為這樣的藥劑,即,與不存在該藥劑的情況下α-糖苷 酶的酶活性相比,該藥劑抑制宿主α-糖苷酶的酶活性至少約10%、至少約15%、至少約 20 %、至少約25 %、至少約30 %、至少約35 %、至少約40 %、至少約50 %、至少約60 %、至少 約70%、至少約80%或至少約90%或更多。術(shù)語“α-糖苷酶抑制劑”包括抑制宿主α-糖 苷酶活性的天然存在的藥劑和合成的藥劑。合適的α-糖苷酶抑制劑包括但不限于脫氧 野尻霉素和N-取代脫氧野尻霉素,例如通式I的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽
權(quán)利要求
1.一種藥物遞送方法,該方法包括對有相應(yīng)需要的受治療者進(jìn)行包含脂質(zhì)顆粒的組合 物的給藥,所述脂質(zhì)顆粒含有至少一種PS脂質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒是脂質(zhì)體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒還含有以下脂質(zhì)中的至少一種 PE、CHEMS、PI、PC 或 SP 月旨質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有PE脂質(zhì),所述PE脂質(zhì)和所述 PS脂質(zhì)之間摩爾比的范圍為0.5 1至20 1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒中所述PE脂質(zhì)和所述PS脂質(zhì)之間 摩爾比的范圍為1 1至10 1。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其中,所述PE脂質(zhì)包括DOPE脂質(zhì)和PEG-PE脂質(zhì)。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有PE、PI以及PC脂質(zhì)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,所述方法適用于治療或預(yù)防由病毒引起的或與病毒相 關(guān)的疾病或病癥。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中,所述疾病或病癥為病毒感染。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中,所述給藥導(dǎo)致所述脂質(zhì)顆粒的一種或一種以上 脂質(zhì)摻入受病毒感染的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中,所述病毒屬于黃病毒科。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法,其中,所述感染是丙型肝炎感染。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其中,所述給藥減少受丙型肝炎病毒感染的細(xì)胞中 脂質(zhì)小滴的產(chǎn)生。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其中,所述給藥抑制所述脂質(zhì)小滴與丙型肝炎病毒 的核心蛋白的相互作用。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其中,所述給藥減小丙型肝炎病毒的感染性。
16.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中,所述病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法,其中,所述病毒是HIV-I病毒。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述組合物還包含包裹在所述脂質(zhì)顆粒中的至 少一種活性劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述給藥導(dǎo)致所述至少一種活性劑遞送至導(dǎo) 致感染的病毒所感染的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括亞氨基糖。
21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括α糖苷酶抑制劑。
22.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括離子通道抑制劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括N-取代脫氧野尻霉ο
24.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括N-丁基脫氧野尻霉ο
25.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括至少一種抗HIV齊IJ。
26.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括至少至少一種抗肝 炎劑。
27.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括至少一種免疫刺激 劑或免疫調(diào)節(jié)劑和核苷酸或核苷抗病毒劑。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述組合物還包含抗病毒蛋白。
29.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法,其中,將所述抗病毒蛋白嵌入所述脂質(zhì)顆粒的脂質(zhì) 層或脂質(zhì)雙層或與所述脂質(zhì)顆粒共軛。
30.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述組合物包含與所述脂質(zhì)顆粒共軛或嵌入所 述脂質(zhì)顆粒的脂質(zhì)層或脂質(zhì)雙層中的靶向部分。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法,其中,所述靶向部分包括gpl20/gp41靶向部分。
32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法,其中,所述靶向部分包括sCD4分子。
33.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法,其中,所述靶向部分包括單克隆抗體。
34.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法,其中,所述靶向部分包括El或E2靶向部分。
35.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述受治療者是人類。
36.一種治療或預(yù)防HIV的方法,該方法包括對有相應(yīng)需要的受治療者進(jìn)行包含脂質(zhì) 顆粒的組合物的給藥,所述脂質(zhì)顆粒含有PS脂質(zhì)或PI脂質(zhì)中的至少一種,其中,所述脂質(zhì) 顆粒不含有CHEMS脂質(zhì)。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒為脂質(zhì)體。
38.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒還含有PE脂質(zhì)。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法,其中,所述PE脂質(zhì)包含DOPE脂質(zhì)或PEG-PE脂質(zhì)中 的至少一種。
40.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒還含有PC脂質(zhì)。
41.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法,其中,所述組合物包含包裹在所述脂質(zhì)顆粒中的至 少一種抗HIV劑。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法,其中,所述至少一種抗HIV劑包括亞氨基糖。
43.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法,其中,所述至少一種抗HIV劑包括α糖苷酶抑制劑。
44.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法,其中,所述至少一種抗HIV劑包括N-取代脫氧野尻毒素。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法,其中,所述至少一種抗HIV劑包括N-丁基脫氧野尻毒素。
46.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法,其中,所述組合物還包含與所述脂質(zhì)顆粒共軛或嵌 入所述脂質(zhì)顆粒的脂質(zhì)層或脂質(zhì)雙層中的靶向部分。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法,其中,所述靶向部分包括gpl20/gp41靶向部分。
48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法,其中,所述靶向部分包括sCD4分子。
49.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法,其中,所述靶向部分包括單克隆抗體。
50.一種藥物遞送方法,所述方法包括對有相應(yīng)需要的受治療者進(jìn)行包含脂質(zhì)顆粒的 組合物的給藥,所述脂質(zhì)顆粒含有至少一種多不飽和脂質(zhì)。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒是脂質(zhì)體。
52.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和PE脂質(zhì)或多不飽 和PC脂質(zhì)中的至少一種。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和PE脂質(zhì)和多不飽和PC脂質(zhì)。
54.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和22 6PE脂質(zhì)。
55.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和22 6PC脂質(zhì)。
56.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和22 6PC脂質(zhì)和 多不飽和22 6PE脂質(zhì)。
57.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法,所述方法適用于治療或預(yù)防由病毒引起的或與病毒 相關(guān)的疾病或病癥。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法,其中,所述病毒屬于黃病毒科。
59.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法,其中,所述疾病或病癥是丙型肝炎感染。
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法,其中,所述給藥減少HCVRNA復(fù)制。
61.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法,其中,所述病毒是ER出芽病毒。
62.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法,其中,所述病毒是含有糖蛋白的病毒。
63.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法,其中,所述組合物還包含包裹在所述脂質(zhì)顆粒中的 至少一種活性劑。
64.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括亞氨基糖。
65.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括α糖苷酶抑制。
66.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括離子通道抑制劑。
67.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括N-取代脫氧野尻霉ο
68.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括N-丁基脫氧野尻霉ο
69.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法,其中,所述至少一種活性劑包括至少一種抗肝炎劑。
70.根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法,其中,所述組合物還包含抗病毒蛋白。
71.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法,其中,所述組合物包含與所述脂質(zhì)顆粒共軛或嵌入 所述脂質(zhì)顆粒的脂質(zhì)層或脂質(zhì)雙層中的靶向部分。
72.根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法,其中,所述受治療者是人類。
73.一種包含脂質(zhì)顆粒的組合物,所述脂質(zhì)顆粒含有PS脂質(zhì)。
74.根據(jù)權(quán)利要求73所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒是脂質(zhì)體。
75.根據(jù)權(quán)利要求73所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒還含有以下脂質(zhì)中的至少一 種:PE、CHEMS、PI、PC 或 SP 脂質(zhì)。
76.根據(jù)權(quán)利要求75所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有PE脂質(zhì)且所述PE脂質(zhì)和 所述PS脂質(zhì)之間摩爾比的范圍為0.5 1至20 1。
77.根據(jù)權(quán)利要求76所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒中所述PE脂質(zhì)和所述PS脂質(zhì) 之間摩爾比的范圍為1 1至10 1。
78.根據(jù)權(quán)利要求75所述的組合物,其中,所述PE脂質(zhì)包括DOPE脂質(zhì)和PEG-PE脂質(zhì)。
79.根據(jù)權(quán)利要求75所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有PE、PI以及PC脂質(zhì)。
80.根據(jù)權(quán)利要求73所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒中所述PS脂質(zhì)的摩爾濃度為 至少10%。
81.根據(jù)權(quán)利要求80所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒中所述PS脂質(zhì)的摩爾濃度為至少20%。
82.根據(jù)權(quán)利要求73所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒還含有PI脂質(zhì),且其中所述脂 質(zhì)顆粒中所述PS脂質(zhì)和所述PI脂質(zhì)的組合摩爾濃度為至少10%。
83.根據(jù)權(quán)利要求82所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒中所述PS脂質(zhì)和所述PI脂質(zhì) 的組合摩爾濃度為至少20%。
84.—種包含脂質(zhì)顆粒的組合物,所述脂質(zhì)顆粒含有至少一種多不飽和脂質(zhì)。
85.根據(jù)權(quán)利要求84所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒是脂質(zhì)體。
86.根據(jù)權(quán)利要求84所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和PE脂質(zhì)或多不 飽和PC脂質(zhì)中的至少一種。
87.根據(jù)權(quán)利要求84所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和PE脂質(zhì)和多不 飽和PC脂質(zhì)。
88.根據(jù)權(quán)利要求84所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和22 6PE脂質(zhì)。
89.根據(jù)權(quán)利要求84所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和22 6PC脂質(zhì)。
90.根據(jù)權(quán)利要求84所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有多不飽和22 6PC脂質(zhì) 和多不飽和22 6PE脂質(zhì)。
91.根據(jù)權(quán)利要求84所述的組合物,其中,所述脂質(zhì)顆粒中所述多不飽和脂質(zhì)的摩爾 濃度為至少20%。
92.一種包括使細(xì)胞與脂質(zhì)顆粒接觸的方法,所述脂質(zhì)顆粒含有a)PI或PS脂質(zhì)中的至 少一種和b)至少一種標(biāo)記的脂質(zhì),所述標(biāo)記的脂質(zhì)包含至少一種標(biāo)記物。
93.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒是脂質(zhì)體。
94.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒還含有PE脂質(zhì)和CHEMS脂質(zhì)中 的至少一種。
95.根據(jù)權(quán)利要求94所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有PE脂質(zhì),且所述PE脂質(zhì)和 所述PS脂質(zhì)之間摩爾比的范圍為0.5 1至20 1。
96.根據(jù)權(quán)利要求95所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒中所述PE脂質(zhì)和所述PS脂質(zhì)之 間摩爾比的范圍為1 1至10 1。
97.根據(jù)權(quán)利要求94所述的方法,其中,所述PE脂質(zhì)包括DOPE脂質(zhì)和PEG-PE脂質(zhì)。
98.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法,其中,所述脂質(zhì)顆粒含有PS、PE、PI以及PC脂質(zhì)。
99.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法,其中,所述病毒是ER出芽病毒。
100.根據(jù)權(quán)利要求99所述的方法,其中,所述病毒是HCV病毒或HBV病毒。
101.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法,其中,所述至少一種標(biāo)記的脂質(zhì)含有熒光團(tuán)-脂質(zhì) 共軛物。
102.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法,其中,所述至少一種標(biāo)記的脂質(zhì)含有生物素-脂質(zhì) 共軛物。
103.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法,其中,所述接觸導(dǎo)致所述標(biāo)記物標(biāo)記所述細(xì)胞的ER膜。
104.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法,其中,所述細(xì)胞是被ER出芽病毒感染的細(xì)胞,且其 中,所述接觸導(dǎo)致所述標(biāo)記物標(biāo)記從所述細(xì)胞出芽的病毒顆粒。
105.根據(jù)權(quán)利要求104所述的方法,所述方法還包括純化所述標(biāo)記的病毒顆粒。
106.根據(jù)權(quán)利要求104所述的方法,所述方法還包括對所述標(biāo)記的病毒顆粒進(jìn)行顯像。
全文摘要
本發(fā)明提供了包含可與細(xì)胞ER(內(nèi)質(zhì)網(wǎng))膜融合的脂質(zhì)顆粒(例如脂質(zhì)體)的組合物。所述脂質(zhì)顆粒還可遞送諸如治療劑或顯像劑之類的載荷,所述載荷包裹在細(xì)胞ER內(nèi)腔中的顆粒內(nèi)。所述組合物可用于治療和/或預(yù)防由病毒引起的或與病毒相關(guān)的疾病,例如病毒感染,包括HIV(人類免疫缺陷病毒)和HCV(丙型肝炎病毒)感染。
文檔編號A61K9/127GK102046151SQ200980118645
公開日2011年5月4日 申請日期2009年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月26日
發(fā)明者妮科爾·齊茨曼, 斯蒂芬妮·波洛克, 雷蒙德·艾倫·德韋克 申請人:牛津大學(xué)