本發(fā)明涉及抗微生物組合物以及其用于治療或預(yù)防細(xì)菌、真菌或寄生蟲(chóng)感染的應(yīng)用和方法。
背景技術(shù)：
：細(xì)菌抗藥性的世界性難題已經(jīng)發(fā)展到了一些生物體(例如肺炎克雷伯桿菌(klebsiellapneumoniae)、大腸桿菌(escherichiacoli)和金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus))對(duì)多種不同抗生素產(chǎn)生了抗性的程度。根據(jù)疾病控制和預(yù)防中心(cdc)，在2013年有超過(guò)200萬(wàn)例的耐抗生素性微生物感染，超過(guò)23000人因這些感染而隨后死亡。其中一半以下的死亡(11,000例)由耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(mrsa)引發(fā)。2013年造成大量死亡(14,000例，甚至高于mrsa)的另一種生物體是艱難梭菌(clostridumdifficile.)。這種細(xì)菌已被證明非常耐抗生素。然而，艱難梭菌的抗性是由于其產(chǎn)生孢子的能力，而不是特異性菌株抗性(因此不包括在當(dāng)年的耐抗生素性感染死亡的總數(shù)內(nèi))。具有改善療效的抗微生物劑組合在目前的臨床行業(yè)中供不應(yīng)求。組合抗生素療法被用于嘗試擴(kuò)大細(xì)菌譜范圍，由此避免出現(xiàn)抗性或多重抗性，產(chǎn)生更好的臨床結(jié)果。對(duì)抗微生物作用機(jī)制的理解和對(duì)潛在抗微生物劑的研究對(duì)于開(kāi)發(fā)抗微生物劑的有效組合至關(guān)重要。鑒于日益增長(zhǎng)的耐抗生素性的問(wèn)題，需要有效抵抗多種微生物，特別是耐抗生素性微生物的新型抗生素組合物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種蒜化合物與生物類(lèi)黃酮和/或有機(jī)酸的新組合，其可對(duì)廣譜的微生物(包括細(xì)菌、真菌和寄生蟲(chóng))提供抗微生物效果，優(yōu)選協(xié)同的抗微生物效果。本發(fā)明提供了一種抗微生物組合物，其包含至少一種大蒜提取物，以及生物類(lèi)黃酮和/或有機(jī)酸中的一種或多種。所述組合物可包含至少一種大蒜提取物和至少一種生物類(lèi)黃酮，或至少一種大蒜提取物和至少一種有機(jī)酸。所述組合物還可包含至少一種大蒜提取物、至少一種生物類(lèi)黃酮和至少一種有機(jī)酸。大蒜提取物與生物類(lèi)黃酮的濃度比可為約1-16:16-1。例如，大蒜提取物與生物類(lèi)黃酮的濃度比為約1-4:4-1。類(lèi)似地，大蒜提取物與有機(jī)酸的濃度比可為約1-16:16-1，例如，大蒜提取物與有機(jī)酸的濃度比為約1-4:4-1。對(duì)于包含至少一種大蒜提取物、至少一種生物類(lèi)黃酮和至少一種有機(jī)酸的組合物，大蒜提取物與生物類(lèi)黃酮與有機(jī)酸的濃度比可為約1-16:1-16:1-16。作為另一選擇，大蒜提取物與生物類(lèi)黃酮與有機(jī)酸的濃度比可為約1-4:1-4:1-4。大蒜提取物可選自粗蒜、蒜素和大蒜烯中的一種或多種；同時(shí)，生物類(lèi)黃酮可選自由黃酮、黃酮醇、黃烷酮、黃烷酮糖苷、二氫黃酮醇、黃烷和花青素組成的組中的一種或多種。這些生物類(lèi)黃酮可以是金合歡素、野漆樹(shù)苷木樨草素、芹黃素、柑桔黃酮、槲皮黃酮、山柰酚、楊梅酮、非瑟酮、高良姜素、異鼠李素、霍香黃酮醇、鼠李秦素、橙皮素、柚苷配基、圣草酚、高圣草酚、柚苷、橙皮苷、新橙皮苷、兒茶酸、小豆蔻明、原花青素、水飛薊賓、染料木黃酮中的一種或多種或其任意組合。本發(fā)明中使用的有機(jī)酸可選自羧酸和磺酸中的一種或多種，例如乳酸、丁酸、丙酸、戊酸、己酸、乙酸、甲酸、檸檬酸、草酸、山梨酸、苯甲酸、辛酸和蘋(píng)果酸，或其任意組合。本發(fā)明提供了一種抗微生物組合物，其進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。所述組合物可配制用于口服、局部、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、直腸內(nèi)(栓劑)、吸入、輸注、經(jīng)皮、舌下、皮下或鼻內(nèi)施用?？刮⑸锝M合物可以是抗細(xì)菌組合物、抗真菌組合物或抗寄生蟲(chóng)組合物。所述組合物可視情況用于治療或預(yù)防細(xì)菌感染(如革蘭氏陰性或革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染)、真菌感染或寄生蟲(chóng)感染。本發(fā)明提供一種治療或預(yù)防細(xì)菌感染的方法，其中所述方法包括施用抗微生物組合物，所述組合物包含至少一種大蒜提取物以及生物類(lèi)黃酮和/或有機(jī)酸中的一種或多種。本發(fā)明還提供一種治療或預(yù)防真菌感染的方法，所述方法包括施用抗微生物組合物，所述組合物包含至少一種大蒜提取物以及生物類(lèi)黃酮和/或有機(jī)酸中的一種或多種。本發(fā)明還提供一種治療或預(yù)防寄生蟲(chóng)感染的方法，所述方法包括施用抗微生物組合物，所述組合物包含至少一種大蒜提取物以及生物類(lèi)黃酮和/或有機(jī)酸中的一種或多種。本發(fā)明還公開(kāi)了抗微生物組合物在制造用于治療或預(yù)防受試對(duì)象中細(xì)菌感染的藥物中的應(yīng)用、或在制造用于治療或預(yù)防受試對(duì)象中真菌感染的藥物中的應(yīng)用、或在制造用于治療或預(yù)防受試對(duì)象中寄生蟲(chóng)感染的藥物中的應(yīng)用，所述組合物包含至少一種大蒜提取物以及生物類(lèi)黃酮和/或有機(jī)酸中的一種或多種。具體實(shí)施方式已發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明的組合物中提供的大蒜提取物與生物類(lèi)黃酮和/或有機(jī)酸的組合對(duì)抵抗病原微生物產(chǎn)生了驚人且意想不到的協(xié)同作用。已基于組合物的抗微生物活性確定了本發(fā)明組合物的這種協(xié)同作用。具體而言，已確定了協(xié)同作用，其中含有兩種以上組分的混合物的組合物的抗微生物活性高于各組分單獨(dú)的抗微生物活性的和。不受理論的約束，據(jù)信各組分的抗微生物作用模式是當(dāng)組分組合時(shí)觀察到的抗微生物協(xié)同作用的原因。例如，如蒜素等蒜化合物對(duì)微生物的表面具有氧化作用。然而，大蒜烯通過(guò)影響酶功能而在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。生物類(lèi)黃酮被跨細(xì)胞膜攝入并在細(xì)胞內(nèi)起作用。生物類(lèi)黃酮已知具有酶抑制活性，它們抑制能量代謝，并且進(jìn)一步推測(cè)出它們對(duì)細(xì)胞膜造成損害，導(dǎo)致大分子的抑制。另一方面，有機(jī)酸能夠穿過(guò)細(xì)胞膜，它們改變細(xì)胞內(nèi)的ph。例如，甲酸抑制酶活性，特別是脫羧酶的酶活性；乙酸抑制酶活性并增加熱敏感性；丙酸影響膜轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)一些氨基酸合成的抑制；乳酸抑制酶活性；山梨酸和苯甲酸也抑制酶活性、氨基酸攝取、(誘導(dǎo)細(xì)胞膜損傷)和rna和/或dna的合成；辛酸由于其親脂性而與細(xì)胞壁結(jié)合并導(dǎo)致隨后的細(xì)胞漏泄。本發(fā)明組合物的協(xié)同抗微生物活性可以提供對(duì)病原微生物的改善的治療，并可在對(duì)抗日益增長(zhǎng)的抗生素耐藥性問(wèn)題中發(fā)揮重要作用。本發(fā)明的抗微生物組合物可殺滅和/或抑制包括細(xì)菌、真菌、藻類(lèi)、原生動(dòng)物、病毒和亞病毒劑在內(nèi)的微生物的生長(zhǎng)。所述組合物可以殺微生物或抑制微生物，并且可以是消毒劑、防腐劑或抗生素。本發(fā)明的抗微生物組合物可以是抗細(xì)菌組合物、抗真菌組合物或抗寄生蟲(chóng)組合物。大蒜(又稱(chēng)為蒜(alliumsativum))是蔥屬中的物種。本發(fā)明中使用的大蒜提取物可包含粗蒜、蒜素、大蒜烯或其組合中的一種或多種。大蒜提取物還可以是二烯丙基二硫化物(dads)或s-烯丙基半胱氨酸(sac)。粗蒜可以為例如新鮮或粉碎的形式，并且可包括大蒜汁、大蒜漿、浸泡物、切片、餾出物、殘留物、壓榨物或渣。蒜素(2-丙烯-1-硫代亞磺酸s-2-丙烯基)是來(lái)自于大蒜或其它蔥屬物種的高化學(xué)反應(yīng)性的含硫化合物。蒜素在大蒜中并非天然可見(jiàn)，但其在以下情況下產(chǎn)生：細(xì)胞受損并且蒜氨酸酶(蒜氨酸裂解酶)從液泡中釋放出，與化合物蒜氨酸((2r)-2-氨基-3-[(s)-丙-2-烯基亞磺?；鵠丙酸)接觸并使其轉(zhuǎn)化成蒜素。適用于本發(fā)明組合物的蒜素可從天然、合成或半合成的來(lái)源獲得。大蒜烯((e,z)-4,5,9-三硫雜十二烷-1,6,11-三烯9-氧化物)是另一種硫基化合物，其可形成兩種不同的異構(gòu)體(e和z)。其可作為兩種異構(gòu)體的混合物在本發(fā)明中使用，或者可以是純e-大蒜烯或z-大蒜烯。大蒜烯來(lái)源于特定條件下蒜素的熱降解。本發(fā)明的組合物優(yōu)選地包含至少一種大蒜提取物和至少一種生物類(lèi)黃酮，或至少一種大蒜提取物和至少一種有機(jī)酸，或至少一種大蒜提取物、至少一種生物類(lèi)黃酮和至少一種有機(jī)酸。本發(fā)明的組合物可包含特定比例的組分。例如，大蒜提取物與生物類(lèi)黃酮的比可為約1-16:1-16，優(yōu)選1-4:1-4。類(lèi)似地，大蒜提取物與有機(jī)酸的比可為約1-16:1-16，優(yōu)選1-4:1-4。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，大蒜提取物與生物類(lèi)黃酮與有機(jī)酸的比可以為約1-16:1-16:1-16，優(yōu)選約1-4:1-4:1-4。大蒜提取物、生物類(lèi)黃酮和有機(jī)酸中的組合物的一個(gè)實(shí)例具有1:4:2的濃度比。生物類(lèi)黃酮(也稱(chēng)為類(lèi)黃酮)是由植物產(chǎn)生的天然存在的多酚化合物。在化學(xué)上，生物類(lèi)黃酮具有由兩個(gè)苯環(huán)和雜環(huán)組成的15碳骨架的結(jié)構(gòu)，并基于其基本結(jié)構(gòu)而細(xì)分類(lèi)。適用于本發(fā)明的生物類(lèi)黃酮包括花黃素，例如黃酮、黃酮醇、黃烷酮(包括黃烷酮-糖苷)、二氫黃酮醇、黃烷、花青素或其任意組合。作為另一選擇，生物類(lèi)黃酮還可以為異類(lèi)黃酮或新類(lèi)黃酮。適用于本發(fā)明的黃酮包括金合歡素、野漆樹(shù)苷(芹黃素7-o-新橘皮糖苷)、木樨草素、芹黃素和柑桔黃酮。黃酮醇包括槲皮黃酮、山柰酚、楊梅酮、非瑟酮、高良姜素、異鼠李素、霍香黃酮醇、鼠李秦素、吡喃黃酮醇(pyranoflavonol)和呋喃黃酮醇(furanoflavonol)。黃烷酮包括橙皮素、柚苷配基、圣草酚和高圣草酚，以及黃烷酮-糖苷，如柚苷、橙皮苷和新橙皮苷。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物包含金合歡素、野漆樹(shù)苷木樨草素、芹黃素、柑桔黃酮、槲皮黃酮、山柰酚、楊梅酮、非瑟酮、高良姜素、異鼠李素、霍香黃酮醇、鼠李秦素、橙皮素、柚苷配基、圣草酚、高圣草酚、柚苷、橙皮苷、新橙皮苷、兒茶酸、小豆蔻明、原花青素、水飛薊賓、染料木黃酮或其組合中的一種或多種。本發(fā)明的組合物可包含蒜素以及黃酮、黃酮醇、黃烷酮、二氫黃酮醇、黃烷和花青素中的一種或多種或其組合。作為另一選自，本發(fā)明的組合物可包含大蒜烯以及黃酮、黃酮醇、黃烷酮、二氫黃酮醇、黃烷和花青素中的一種或多種或其組合。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，所述組合物可額外包含一種或多種有機(jī)酸。有機(jī)酸是具有酸性的有機(jī)化合物，包括羧酸和磺酸。適用于本發(fā)明組合物的有機(jī)酸包括但不限于乳酸、丁酸、丙酸、戊酸、己酸、乙酸、甲酸、檸檬酸、草酸、山梨酸、苯甲酸、辛酸和蘋(píng)果酸，或其任何組合。本發(fā)明的組合物可額外包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑，例如稀釋劑、佐劑、賦形劑、載質(zhì)、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、懸浮劑、增香劑、緩沖劑、分散劑、增稠劑、增溶劑、潤(rùn)滑劑和分散劑，這取決于使用模式和劑型的性質(zhì)。組合物可以采取例如固體制劑的形式，包括片劑、膠囊、糖丸(drageés)、錠劑、顆粒劑、粉劑、丸劑和扁囊劑；和液體制劑的形式，包括凝膠、洗劑、懸浮液、酏劑、糖漿、懸浮液、噴霧劑、乳劑和溶液。本發(fā)明的組合物可以以包含任何合適的附加成分的組合物的形式施用，附加成分例如為額外的抗微生物劑、營(yíng)養(yǎng)制劑或膳食補(bǔ)充劑。本發(fā)明的組合物還可含有添加劑，例如調(diào)味劑、著色劑、穩(wěn)定劑、防腐劑以及人造和天然甜味劑等。本發(fā)明的組合物可用于治療或預(yù)防細(xì)菌感染。細(xì)菌感染可以是革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染或革蘭氏陰性細(xì)菌感染，或其組合。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌包括例如鏈球菌(streptococci)如草綠色鏈球菌(s.viridans)，葡萄球菌(staphylococci)如金黃色葡萄球菌，和芽孢桿菌(bacillus)，如枯草芽孢桿菌(b.subtilis)、炭疽桿菌(b.anthracis)和蠟狀芽孢桿菌(b.cereus)。革蘭氏陰性細(xì)菌包括例如大腸桿菌(e.coli)，假單胞菌(pseudomonas)如銅綠假單胞菌(p.aeruginosa)和克雷伯菌(klebsiella)，例如肺炎克雷伯桿菌(k.pneumonia)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(k.aerogenes)和產(chǎn)酸克雷伯菌(k.oxytoca)。優(yōu)選地，感染是革蘭氏陰性細(xì)菌感染。所述組合物也可用于治療或預(yù)防革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染。本發(fā)明的組合物可用于治療或預(yù)防真菌感染。真菌感染可以是是念珠菌(candida)感染，例如被白色念珠菌(c.albicans)、近平滑念珠菌(c.parapsilosis)或熱帶念珠菌(c.tropicalis)或其組合感染。本發(fā)明還提供治療或預(yù)防細(xì)菌、真菌或寄生蟲(chóng)感染的方法，所述方法包括對(duì)有需要的受試對(duì)象施用本發(fā)明的抗微生物組合物。所述組合物可配制用于口服、局部、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、直腸內(nèi)(栓劑)、經(jīng)皮、舌下、皮下或鼻內(nèi)施用。優(yōu)選地，所述組合物配制用于口服或局部施用。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物可與食物或食物原料組合，然后口服消耗。固體或液體形式的制劑可以混合到食物或食物原料中或施加于受試對(duì)象的食物、食物原料或飼料。這種固體形式包括粉劑、顆粒劑和丸劑等。在某些實(shí)施方式中，受試對(duì)象是人、靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、牛、羊、馬、豬、禽、嚙齒動(dòng)物(例如小鼠或大鼠)、貓科動(dòng)物或犬。優(yōu)選地，受試對(duì)象是人。受試對(duì)象也可以是生產(chǎn)型動(dòng)物如牛、耕牛、鹿、山羊、綿羊和豬，勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)型動(dòng)物如狗、馬和矮種馬，伴侶動(dòng)物如狗和貓，以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如兔、大鼠、小鼠、倉(cāng)鼠、沙鼠或豚鼠。本發(fā)明還公開(kāi)了抗微生物組合物在制造用于治療或預(yù)防受試對(duì)象中細(xì)菌感染的藥物中的應(yīng)用、或在制造用于治療或預(yù)防受試對(duì)象中真菌感染的藥物中的應(yīng)用、或在制造用于治療或預(yù)防受試對(duì)象中寄生蟲(chóng)感染的藥物中的應(yīng)用，所述組合物包含至少一種大蒜提取物和生物類(lèi)黃酮和/或有機(jī)酸中的一種或多種。本發(fā)明中實(shí)施的抗微生物組合物可用于針對(duì)常見(jiàn)的病理性微生物進(jìn)行治療或預(yù)防，特別是廣泛分布的那些微生物，并且可以是人體或哺乳動(dòng)物體的共生體。這些微生物可以包括存在于人或哺乳動(dòng)物的上呼吸道、胃腸道、口腔、皮膚、泌尿道或雌性生殖道中的病原體。本發(fā)明包括所附權(quán)利要求中所含的以及前述描述的特征。雖然已經(jīng)以其特定程度的優(yōu)選形式描述了本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解，優(yōu)選形式的本公開(kāi)僅通過(guò)示例的方式進(jìn)行，并且在不脫離本發(fā)明的范圍的情況下，可以對(duì)構(gòu)造的細(xì)節(jié)和部件的組合和布置進(jìn)行許多變化。附圖說(shuō)明現(xiàn)將參照附圖在具體實(shí)施方式中描述本發(fā)明，其中：圖1示出了革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌(枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和草綠色鏈球菌)(1a)、革蘭氏陰性細(xì)菌(大腸桿菌、假單胞菌和肺炎克雷伯桿菌)(1b)和酵母菌(熱帶念珠菌)(1c)對(duì)蒜素的響應(yīng)，以及細(xì)菌(枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、草綠色鏈球菌、大腸桿菌、假單胞菌和肺炎克雷伯桿菌)(1d)和酵母菌(熱帶念珠菌)(1e)對(duì)大蒜烯的響應(yīng)。圖2示出了野漆樹(shù)苷(a)、金合歡素(b)、柚苷(c)、柚苷配基(d)、槲皮黃酮(e)、蒜素(f)和大蒜烯(g)的結(jié)構(gòu)。實(shí)施例提供以下實(shí)施例以闡明本發(fā)明的不同方面和實(shí)施方式。這些實(shí)施例不意圖以任何方式限制僅由權(quán)利要求限定的公開(kāi)的發(fā)明。實(shí)施例1蒜提取物和生物類(lèi)黃酮之間的協(xié)同測(cè)試進(jìn)行協(xié)同測(cè)試以檢驗(yàn)蒜素和大蒜烯的抗微生物效果是否可以被生物類(lèi)黃酮的黃酮(例如野漆樹(shù)苷)、黃酮醇(例如槲皮黃酮)、黃烷酮(例如柚苷配基)和黃烷酮糖苷(例如柚苷)組中的多酚協(xié)同增強(qiáng)。通過(guò)從相應(yīng)的化合物和濃度的混合抑制結(jié)果中減去每種化合物的個(gè)體抑制結(jié)果，確定協(xié)同作用的存在。任何大于0的結(jié)果被認(rèn)為具有協(xié)同性，因?yàn)榻M合具有比其單個(gè)部分的總和更大的效果。為了測(cè)定生物類(lèi)黃酮(bc)、蒜素(al)和大蒜烯(aj)對(duì)選取的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌、革蘭氏陰性細(xì)菌和酵母菌的最小抑菌濃度(mic)，根據(jù)wiegand,hilpert和hancock(2008)，使用96孔板進(jìn)行改進(jìn)的肉湯稀釋試驗(yàn)。實(shí)施例2微生物培養(yǎng)物的制備出于測(cè)試目的，使用革蘭氏陽(yáng)性物種(金黃色葡萄球菌)、三種革蘭氏陰性物種(大腸桿菌、銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯桿菌)和酵母菌(熱帶念珠菌)。研究用微生物從cardiff大學(xué)獲得。研究中使用的培養(yǎng)物通過(guò)將微生物從純平板培養(yǎng)物無(wú)菌接種到50ml無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯中制備。將培養(yǎng)物在37.0℃下溫育過(guò)夜而不攪拌。在使用前，通過(guò)在桌面離心機(jī)中以3000rpm離心分離15分鐘而洗滌培養(yǎng)物，并將沉淀重新懸浮在無(wú)菌鹽水(0.85％nacl)中。實(shí)施例3化合物的制備為了單獨(dú)和組合地確定化合物的活性，以雙倍稀釋使用一系列濃度的各化合物。所使用的最高濃度取決于研究中的生物體(革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌、革蘭氏陰性細(xì)菌或酵母菌)。從測(cè)試中使用的最高濃度，將樣品稀釋5倍，以便為各化合物得到6種不同濃度。所述化合物都單獨(dú)測(cè)試，也以濃度陣列進(jìn)行測(cè)試，濃度陣列包含al:bc、aj:bc和al:aj:bc的混合物。al和aj的稀釋梯度與bc相反(如圖1a-h所示)。使用校準(zhǔn)方法通過(guò)hplc分析確認(rèn)大蒜化合物的身份。生物類(lèi)黃酮購(gòu)自sigma-aldrich，并提供有分析證書(shū)以確認(rèn)其身份。蒜素樣品是水溶液，因此使用h2o直接稀釋。然而，大蒜烯為油狀，生物類(lèi)黃酮為粉末狀，二者其均不溶于水。在稀釋之前，使用80％dmso通過(guò)產(chǎn)生儲(chǔ)備溶液來(lái)溶解大蒜烯和生物類(lèi)黃酮。實(shí)施例4板的制備96孔板上的孔如下一式三份地準(zhǔn)備：以10×所需最終濃度將al、aj和bc預(yù)稀釋在eppendorf管中。對(duì)每個(gè)孔添加20μl的各稀釋液，從而得到每個(gè)孔最終200μl的1:10稀釋液。使用蒜素：生物類(lèi)黃酮、大蒜烯：生物類(lèi)黃酮和蒜素：大蒜烯：生物類(lèi)黃酮的混合物的濃度陣列，其中蒜素和大蒜烯的稀釋梯度與生物類(lèi)黃酮相反。使用的濃度為50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml和1.5625μg/ml。對(duì)每個(gè)孔添加130μl無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯(3號(hào)營(yíng)養(yǎng)肉湯(sigma70149))。對(duì)每個(gè)孔(除了陰性對(duì)照外)添加50μl懸浮在鹽水中的各微生物。對(duì)兩個(gè)板添加各微生物物種，第一個(gè)用于個(gè)體(對(duì)照)試驗(yàn)，第二個(gè)用于陣列研究。將板在37.0℃下孵育過(guò)夜而不攪拌。實(shí)施例5數(shù)據(jù)收集和分析使用tecan板讀數(shù)器在600nm處單獨(dú)掃描板，并以逗點(diǎn)隔開(kāi)的文件記錄吸光度以進(jìn)行分析。將各樣品的吸光度與對(duì)照培養(yǎng)物(不經(jīng)處理)的生長(zhǎng)(吸光度)進(jìn)行比較，以測(cè)定mic(所有值均對(duì)陰性對(duì)照減空白，以消除板和肉湯的吸光度)。測(cè)定一式三份實(shí)驗(yàn)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，并將平均值繪制在散點(diǎn)圖上以進(jìn)行比較。如圖1所示，微生物對(duì)大蒜提取物的單個(gè)化合物的響應(yīng)是劑量(濃度)依賴(lài)性的。如表1所示，在非常低的濃度達(dá)到mic。表1研究的一個(gè)實(shí)施例中所測(cè)定的al和aj的mic：生物體蒜素大蒜烯枯草芽孢桿菌9.2μg/ml24μg/ml金黃色葡萄球菌27.6μg/ml48μg/ml大腸桿菌18.4μg/ml24μg/ml銅綠假單胞菌9.2μg/ml12μg/ml肺炎克雷伯桿菌46μg/ml12μg/ml熱帶念珠菌9.2μg/ml24μg/ml由于任何抗微生物活性均大于單個(gè)化合物的累加效應(yīng)，因此確定抗微生物活性的協(xié)同作用?？稍诰哂兴馑氐?0個(gè)測(cè)試參數(shù)和具有大蒜烯的20個(gè)測(cè)試參數(shù)中看出協(xié)同作用。這表明對(duì)于測(cè)試的生物體，特別是選取的革蘭氏陰性生物體，大蒜和生物類(lèi)黃酮之間的協(xié)同率高。一些協(xié)同組合比其他組合的濃度依賴(lài)性更強(qiáng)，如表3所示，對(duì)于蒜素+柚苷和蒜素+柚苷配基，熱帶念珠菌都僅顯示出在一個(gè)濃度下的協(xié)同效應(yīng)。相比之下，大腸桿菌在與蒜素組合時(shí)對(duì)所有生物類(lèi)黃酮的所有濃度范圍都顯示出了協(xié)同效應(yīng)。此研究的結(jié)果表明，備選方案之間的協(xié)同作用可以是尋求解決日益增長(zhǎng)的抗生素耐藥問(wèn)題的好方面。此研究的結(jié)果可對(duì)這種威脅提供答案，因?yàn)閷?duì)測(cè)試的革蘭氏陰性生物體的協(xié)同效應(yīng)特別高。實(shí)施例6大蒜提取物、生物類(lèi)黃酮和有機(jī)酸間的協(xié)同測(cè)試構(gòu)建試驗(yàn)陣列以研究大蒜提取物、生物類(lèi)黃酮和有機(jī)酸間的協(xié)同作用。選擇的示例性化合物為：(a)大蒜提取物：蒜素(al)和大蒜烯(aj)；(b)生物類(lèi)黃酮：槲皮黃酮(q)和金合歡素(ac)；和(c)有機(jī)酸：檸檬酸(c)和蘋(píng)果酸(m)。用與實(shí)施例2至4中詳述的方法進(jìn)行行微生物培養(yǎng)物、化合物、平板的制備。收集和分析數(shù)據(jù)，如表4和5中所示。當(dāng)前第1頁(yè)12