相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求2014年9月16日提交的題為“用于治療急性輻射綜合癥的方法(methodsfortreatingacuteradiationsyndrome)”的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?2/051,077、2015年2月6日提交的題為“作為免疫調(diào)節(jié)異常的標(biāo)記物的pif結(jié)合(pifbindingasamarkerforimmunedysregulation)”的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?2/113,298及2015年8月28日提交的題為“用于治療神經(jīng)損傷的組合物及方法(compositionsandmethodsforthetreatmentofneurodamage)”的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?2/211,660的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益。各申請(qǐng)的內(nèi)容分別以引用的方式整體并入本文中。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

在一個(gè)實(shí)施例中，在受試者暴露于輻射之后治療有需要的受試者的急性輻射綜合癥的方法可以包括施用治療有效量的選自以下的植入前因子(preimplantationfactor，pif)肽：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

在一個(gè)實(shí)施例中，包括治療有效量的pif肽的藥物組合物可以用于治療急性輻射綜合癥，所述pif肽選自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

在一個(gè)實(shí)施例中，包含治療有效量的pif肽的藥物組合物可以用于制造供治療急性輻射綜合癥用的藥物，所述pif肽選自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

在一個(gè)實(shí)施例中，在輻射暴露之后治療急性輻射綜合癥的方法可以包括將一個(gè)或多個(gè)骨髓細(xì)胞移植至有需要的受試者體內(nèi)，其中所述骨髓在移植之前預(yù)先暴露于治療有效量的pif肽，并且其中所述pif肽選自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqedno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

在一個(gè)實(shí)施例中，治療和/或預(yù)防心臟病癥或心臟衰竭的方法可以包括將一個(gè)或多個(gè)心臟細(xì)胞移植至有需要的受試者體內(nèi)，其中所述心臟細(xì)胞在移植之前預(yù)先暴露于治療有效量的pif肽，并且其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

在一個(gè)實(shí)施例中，治療和/或預(yù)防腎上腺細(xì)胞病癥的方法可以包括將一個(gè)或多個(gè)腎上腺細(xì)胞移植至有需要的受試者體內(nèi)，其中所述腎上腺細(xì)胞在移植之前預(yù)先暴露于治療有效量的pif肽，并且其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqedno:29、其模擬物及其組合。

在一個(gè)實(shí)施例中，治療和/或預(yù)防血液病癥的方法可以包括將一個(gè)或多個(gè)造血細(xì)胞移植至有需要的受試者體內(nèi)，其中所述造血細(xì)胞在移植之前預(yù)先暴露于治療有效量的pif肽，并且其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

在一個(gè)實(shí)施例中，在將器官、組織或細(xì)胞移植至需要移植的受試者體內(nèi)之前增加所述器官、組織或細(xì)胞的活力的方法可以包括在移植之前，用治療有效量的pif肽處理所述器官、組織或細(xì)胞，其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqedno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

在一個(gè)實(shí)施例中，增加受試者體內(nèi)接受供體器官、組織或細(xì)胞移植的可能性的方法可以包括在將所述器官、組織或細(xì)胞移植至所述受試者體內(nèi)之前，使所述器官、組織或細(xì)胞暴露于包含至少一種pif肽或其突變體或其藥學(xué)上可接受的鹽的一種或多種組合物，其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

減小排斥移入組織的可能性的方法可以包括在將所述組織移植至受試者體內(nèi)之前，使移入的組織暴露于包括治療有效量的至少一種pif肽或其突變體或其藥學(xué)上可接受的鹽的一種或多種藥物組合物，其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

增加受試者體內(nèi)造血細(xì)胞的產(chǎn)生的方法可以包括施用包括治療有效量的至少一種pif肽或其突變體或其藥學(xué)上可接受的鹽的一種或多種藥物組合物，其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

增加移植的器官、組織或細(xì)胞成功移入的可能性的方法可以包括將器官、組織或細(xì)胞移植至有需要的受試者體內(nèi)，其中所述器官、組織或細(xì)胞在移植之前預(yù)先暴露于pif肽，其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqedno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

治療和/或預(yù)防成人或幼年型i型或ii型糖尿病的方法可以包括將一個(gè)或多個(gè)胰島細(xì)胞移植至有需要的受試者體內(nèi)，其中所述胰島細(xì)胞在移植之前預(yù)先暴露于治療有效量的pif肽，并且其中所述pif肽選自以下之一或其組合：seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物及其組合。

在以上所描述的實(shí)施例中的任一個(gè)中，受試者可以接受或可以不接受骨髓移植(bmt)。在以上所描述的實(shí)施例中的任一個(gè)中，急性輻射綜合癥可以由暴露于致死性或亞致死性輻射引起。在以上所描述的實(shí)施例中的任一個(gè)中，急性輻射綜合癥可以由暴露于約100rads至約6000rads的輻射劑量引起。在以上所描述的實(shí)施例中的任一個(gè)中，急性輻射綜合癥可以包括或可以不包括急性輻射暴露的遠(yuǎn)期效應(yīng)，包含對(duì)任何器官、組織或細(xì)胞的破壞。

在一個(gè)實(shí)施例中，增加移植受體接受供體組織的可能性的方法可以包括在將所述組織移植至受體體內(nèi)之前，使供體組織暴露于包括pif肽或其突變體的一種或多種組合物。

在一個(gè)實(shí)施例中，減小排斥移入組織的可能性的方法可以包括在移植所述組織之前，使所述組織暴露于包括治療有效量的pif肽或其突變體的一種或多種藥物組合物。

在一個(gè)實(shí)施例中，增加造血細(xì)胞數(shù)量消減的受試者體內(nèi)造血細(xì)胞的產(chǎn)生的方法可以包括施用包括治療有效量的pif肽或其突變體的一種或多種藥物組合物。在一些實(shí)施例中，造血細(xì)胞可以是紅細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，造血細(xì)胞可以是血小板。

在一些實(shí)施例中，向所述受試者施用至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的步驟包括施用治療有效劑量的至少一個(gè)pif分子、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一些實(shí)施例中，向所述受試者施用至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的步驟包括施用約0.001mg/kg至約200mg/kg的治療有效劑量的pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一些實(shí)施例中，向所述受試者施用至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的步驟包括施用約0.5mg/kg至約5mg/kg的治療有效劑量的pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一些實(shí)施例中，pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽包括化學(xué)靶向部分和/或放射性部分。

在一些實(shí)施例中，針對(duì)β-連環(huán)蛋白或其藥學(xué)上可接受的鹽的核轉(zhuǎn)位的至少一種抑制劑包括至少一個(gè)含以下同位素中的至少一種或其組合的放射性部分：²h、³h、^l3c、¹⁴c、^l5n、^l6o、^l7o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f及³⁶cl。

在一些實(shí)施例中，所述方法另外包括施用至少一種鎮(zhèn)痛劑和/或一種消炎化合物。

在一些實(shí)施例中，所述方法另外包括在施用治療有效劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之前、之后或同時(shí)，施用至少一種鎮(zhèn)痛劑和或一種消炎化合物。

在一些實(shí)施例中，治療有效劑量是約1.0mg/kg至約5.5mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且毫克是治療有效劑量的毫克數(shù)。

在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqedno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:1、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:2、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:3、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:4、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:5、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:6、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:7、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:8、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:9、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:10、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:11、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:12、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:13、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:14、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:15、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:16、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:17、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:18、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:19、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:20、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:21、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:21、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:22、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:23、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:24、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:25、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:26、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:27、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:28、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。在一些實(shí)施例中，pif肽包括seqidno:29、其模擬物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和/或其組合。

本公開還涉及一種治療或預(yù)防有需要的受試者的急性輻射綜合癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用至少一種藥物組合物，所述藥物組合物包括：植入前因子(pif)肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽；及藥學(xué)上可接受的載劑。

在一些實(shí)施例中，藥學(xué)上可接受的載劑是無(wú)菌并且無(wú)熱原質(zhì)的水。

在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.2mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.3mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.4mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.5mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.6mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.7mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.75mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.8mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約0.9mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約1.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約1.5mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約2.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約3.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約4.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約5.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約6.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約7.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約8.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約9.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。在一些實(shí)施例中，pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合的治療有效劑量是約10.0mg/kg，其中kg是受試者的公斤數(shù)并且mg是治療有效劑量的毫克數(shù)。

在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以在暴露于輻射之后約24小時(shí)內(nèi)施用。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約2-14天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約2天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約3天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約4天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約5天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約6天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約7天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約8天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約9天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約10天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約11天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約12天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約13天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地或連續(xù)地施用約14天。在一些實(shí)施例中，pif肽、其模擬物或其組合可以間歇地施用，給藥方案包含每天約1劑或每2天約1劑，持續(xù)至少約12周。

本公開還涉及一種藥物組合物，所述藥物組合物包括(i)治療有效劑量的pif肽或其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽之一或其組合；及(ii)藥學(xué)上可接受的載劑。

在一些實(shí)施例中，藥學(xué)上可接受的載劑是無(wú)菌并且無(wú)熱原質(zhì)的水或乳酸林格氏溶液(lactatedringer'ssolution)。

在一些實(shí)施例中，所述組合物另外包含治療有效劑量的一種或多種活性劑。

在一些實(shí)施例中，所述一種或多種活性劑是選自以下的化合物之一或其組合：消炎化合物、α-腎上腺素激動(dòng)劑、抗心律失常化合物、鎮(zhèn)痛化合物及麻醉化合物。

在一些實(shí)施例中，所述組合物另外包含一個(gè)或多個(gè)干細(xì)胞。

在一些實(shí)施例中，干細(xì)胞是自體干細(xì)胞。

在一些實(shí)施例中，所述藥物組合物是經(jīng)由不經(jīng)腸注射、皮下注射、靜脈內(nèi)注射、肌肉內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射、透皮、經(jīng)口、經(jīng)頰、眼部途徑、陰道內(nèi)、通過(guò)吸入、通過(guò)積存式注射或通過(guò)植入物施用。

在一些實(shí)施例中，所述組合物另外包括選自以下的活性劑之一或其組合：消炎化合物、α-腎上腺素激動(dòng)劑、抗心律失?；衔铩㈡?zhèn)痛化合物及麻醉化合物。

附圖說(shuō)明

圖1說(shuō)明pif防止致死性輻射。圖1a：從8gy輻射暴露之后2小時(shí)開始，每天2次用pif治療持續(xù)14天的小鼠(c57bl/6，n＝36)具有100％存活率。對(duì)照小鼠(n＝14)接受輻射(pbs，媒劑)但未治療，并且發(fā)生ars并在第23天死亡。圖1b：從8gy輻射暴露之后2小時(shí)開始，每天2次用pif治療(低劑量、高劑量：0.75mg/kg、1.25mg/kg)雌性小鼠(n＝18，雄性小鼠中具有類似結(jié)果)，持續(xù)14天。重要的是，pif治療組展現(xiàn)正常的血液指標(biāo)，表明pif對(duì)血細(xì)胞生成和免疫功能的保護(hù)作用。免疫保護(hù)作用由淋巴細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量的維持得到證實(shí)。此外，pif治療組中紅細(xì)胞壓積水平和血小板數(shù)量得到保持。圖1c、1d及1e：分別顯示從第0天到第19天對(duì)照組、低劑量pif治療組及高劑量pif治療組對(duì)免疫表型、rbc及血小板的影響。相關(guān)圖式縮寫：wbc＝白細(xì)胞；ne＝嗜中性粒細(xì)胞；ly＝淋巴細(xì)胞；mo＝單核細(xì)胞；eo＝嗜酸性細(xì)胞；ba＝嗜堿細(xì)胞；rbc＝紅細(xì)胞；hb＝血紅蛋白；hct＝紅細(xì)胞壓積；mcv＝平均紅細(xì)胞體積；mch＝平均紅細(xì)胞血紅蛋白量；mchc＝平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度；plt＝血小板；mpv＝平均血小板體積。

圖2a說(shuō)明在照射之后的存活率曲線。小鼠經(jīng)歷多種劑量的全身照射。在照射后監(jiān)測(cè)存活率30天。在6-7gy下，所有小鼠在30天時(shí)存活。圖2b說(shuō)明在亞致死性照射之后，pif改善血小板計(jì)數(shù)。在暴露于6gy-8gy照射劑量之后，起始用pif進(jìn)行的24小時(shí)連續(xù)治療，持續(xù)2周，隨后是1周的后治療。將pif治療的作用與pbs對(duì)照相比較。測(cè)定血小板計(jì)數(shù)并關(guān)于6gy、7gy及8gy照射進(jìn)行顯示。

圖3說(shuō)明在亞致死性照射之后，pif增強(qiáng)血液學(xué)恢復(fù)。用6gy劑量照射小鼠。從照射之后24小時(shí)開始，連續(xù)地施用每天1mg/kgpif或pbs，持續(xù)兩周。圖3a中描述實(shí)驗(yàn)方案。圖3b顯示經(jīng)照射小鼠的wbc復(fù)原情況跟蹤。圖3c顯示照射之后2周及4周的wbc計(jì)數(shù)。圖3d顯示照射后4周的淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞百分比。結(jié)果表示2-3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。*p<0.05，**p<0.01。

圖4說(shuō)明在亞致死性照射之后，pif減少炎癥并增進(jìn)b7h1表達(dá)。用6gy或7gy劑量照射小鼠。從照射之后24小時(shí)開始，一天兩次皮下施用0.75mg/kgpif或pbs，持續(xù)三天。圖4a描述實(shí)驗(yàn)方案。用flowcytomixmultiplex試劑盒測(cè)量6gy組及7gy組實(shí)驗(yàn)小鼠的血清中il-1α和il-2的含量。結(jié)果分別顯示于圖4b和4c中。對(duì)結(jié)腸中inos和b7h1mrna表達(dá)進(jìn)行qpcr分析。結(jié)果分別顯示于圖4d和4e中。結(jié)果表示2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。*p<0.05，**p<0.01

圖5a顯示實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)圖。圖5b說(shuō)明，測(cè)試spif對(duì)結(jié)腸隱窩組織結(jié)構(gòu)的影響，比較從亞致死性6gry照射后24小時(shí)與48小時(shí)開始的spif的作用及基因表達(dá)(宏觀)。圖5c說(shuō)明spif作用與pbs和正常小鼠相比較的圖表。圖5c說(shuō)明，相較于pbs，在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)spif的作用使隱窩深度明顯恢復(fù)到在正常結(jié)腸中所見的深度。圖5d的統(tǒng)計(jì)分析展現(xiàn)pif逆轉(zhuǎn)結(jié)腸損傷，并且與正常小鼠無(wú)差異。5e也通過(guò)b7h1相較于正常小鼠和pbs增加說(shuō)明qpcrb7h1表達(dá)相對(duì)于pbs保護(hù)增加。結(jié)果表示兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。*p<0.05，**p<0.01。

圖6說(shuō)明pif改善在致死性照射及半同種異體bmt之后的造血作用。用10gy劑量照射小鼠，隨后進(jìn)行半同種異體bmt。從照射之后24小時(shí)開始，連續(xù)兩周每天施用1mg/kgpif或pbs。圖6a描述實(shí)驗(yàn)方案。圖6b中顯示在照射和移植之后3周每一組的wbc計(jì)數(shù)。圖6c中顯示照射后3周的淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞百分比。圖6d、6e及6f分別顯示了針對(duì)正常小鼠、pbs治療的小鼠及pif治療的小鼠中bm的細(xì)胞性水平的股骨組織學(xué)檢查。一個(gè)代表性圖片出自12只小鼠。圖6g中顯示在一段0.75mm²的股骨骨髓中脂肪細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果概述2個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)(圖6d)。*p<0.05，****p<0.001。

圖7說(shuō)明在致死性照射及同種異體bmt之后，用pif預(yù)處理bm增進(jìn)血液學(xué)恢復(fù)。在移植之前，將供體bm細(xì)胞與pif一起培育2小時(shí)。用10gy劑量照射小鼠，隨后用pif預(yù)處理的bm移植物進(jìn)行同種異體bmt移植。未向小鼠提供額外治療。圖7a描述實(shí)驗(yàn)方案。顯示了在照射和移植之后3周(圖7b)和4周(圖7c)的wbc和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果表示3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。*p<0.05。圖3d示出股骨。圖3e、3f及3g說(shuō)明pif增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞(msc)的調(diào)控功能。將用抗cd3抗體活化的cfse染色的鼠類脾細(xì)胞與預(yù)先用pif或?qū)φ瘴锱嘤?2小時(shí))的msc一起培養(yǎng)四天(50:1比率)。使用流式細(xì)胞測(cè)量術(shù)分析細(xì)胞增殖情況。圖3g中的圖顯示相較于對(duì)照組(無(wú)msc的活化的脾細(xì)胞)的增殖細(xì)胞百分比(3個(gè)實(shí)驗(yàn)的匯總)。在移植之后，相較于pbs，hpif促進(jìn)體重恢復(fù)，*p<0.05。

圖8說(shuō)明pif將m1巨噬細(xì)胞分化轉(zhuǎn)變成m2樣表型。在存在或不存在pif情況下，將腹膜巨噬細(xì)胞與gm-csf(10ng/ml)和lps(10ng/ml)(對(duì)于m1分化)或與m-csf(10ng/ml)和il-4(10ng/ml)(對(duì)于m2分化)一起培養(yǎng)20小時(shí)。對(duì)分化細(xì)胞中inos(圖8a)、cox-2(圖8b)及精氨酸酶(圖8c)mrna表達(dá)進(jìn)行qpcr分析。顯示了由facs分析得到的m1巨噬細(xì)胞中f480(圖8d)和cd11b(圖8e)的gmfi百分比。結(jié)果表示5-6個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。*p<0.05，**p<0.01****p<0.001。

圖9說(shuō)明針對(duì)cd16/32(圖2a)和cd206(圖2b)的facs分析。將腹膜巨噬細(xì)胞與gm-csf(10ng/ml)和lps(10ng/ml)(對(duì)于m1分化)或與m-csf(10ng/ml)和il-4(10ng/ml)(對(duì)于m2分化)一起培養(yǎng)20小時(shí)。實(shí)線表示m1并且虛線表示m2巨噬細(xì)胞。一個(gè)代表圖出自4個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。

圖10說(shuō)明全結(jié)腸基因組的熱圖和聚類分析。深灰色表示相較于治療或條件對(duì)，表達(dá)相對(duì)較低。較淺的灰色表示相較于治療條件，表達(dá)增加。條柱1示出基因表達(dá)熱圖，比較了在輻射+spif存在下與用單獨(dú)輻射處理的基因的表達(dá)情況。條柱2描繪陰性對(duì)照(pbs)動(dòng)物與用輻射處理的動(dòng)物的基因表達(dá)的相對(duì)量的比較分析。條柱3描繪相較于未經(jīng)處理的小鼠，由輻射和spif引起的相對(duì)基因表達(dá)的變化。若干路徑受到影響。受spif影響最大的基因，并且是與線粒體功能有關(guān)的基因、與針對(duì)應(yīng)激的反應(yīng)有關(guān)的基因及與蛋白質(zhì)-rna相互作用有關(guān)的基因。

圖11說(shuō)明針對(duì)ide的pif突變體的差示移位分析的數(shù)據(jù)，ide是pif的結(jié)合搭配物。pif突變體1和pif突變體3結(jié)合胰島素降解酶(ide)。

圖12描繪針對(duì)kv1.3β的pif突變體的差示移位分析的數(shù)據(jù)，kv1.3β是pif的結(jié)合搭配物。下圖描繪10微摩爾濃度的pif突變體(左側(cè)與20微摩爾濃度的pif(右側(cè))的tm變化的比較。

圖13說(shuō)明在大鼠中使用pif注射液測(cè)試針對(duì)致死性50gy輻射的長(zhǎng)期作用的實(shí)驗(yàn)方案。圖中描繪方案的流程圖及給藥方案，描述了何時(shí)及如何評(píng)價(jià)器官移植。

圖14說(shuō)明在19周研究中，在致死性輻射之后進(jìn)行pif治療對(duì)大鼠體重的影響。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，相對(duì)于pbs，pif使大鼠體重增加，*<0.05。圖中描繪未處理小鼠、用x射線照射的小鼠及用pif治療的小鼠的單因素anova曲線。n＝9-12只小鼠。以置信區(qū)間<0.05進(jìn)行holmsidak事后檢驗(yàn)。pif治療的經(jīng)照射動(dòng)物體重評(píng)分高于僅經(jīng)過(guò)照射的動(dòng)物。

圖15描繪在22周時(shí)間內(nèi)測(cè)量的pif治療動(dòng)物與對(duì)照組的kaplanmeier曲線比較。圖中顯示了在致死性輻射之后pif治療的大鼠的存活率曲線。發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組無(wú)差異。

對(duì)照組，開始：n＝12，結(jié)束：n＝12

x射線，開始：n＝12，結(jié)束：n＝10

pif，開始：n＝10，結(jié)束：n＝9

圖16描繪小鼠左心室壁厚及直徑。圖中描繪了由超聲回波描記術(shù)檢查的心臟功能的圖像。

圖17描繪超聲心動(dòng)圖結(jié)果：針對(duì)體重正規(guī)化的左心室形態(tài)。結(jié)果顯示，在第5個(gè)月，pif改善左心室肥大。bw：體重；awt：前壁厚度-心臟收縮；awtd：前壁厚度-心臟舒張；pwt：后壁厚度-心臟收縮；pwtd：后壁厚度-心臟舒張；swt：隔膜壁厚度-心臟收縮；swtd：隔膜壁厚度-心臟舒張。雙因素重復(fù)測(cè)量anova都是逐對(duì)進(jìn)行多重比較。holmsidak事后檢驗(yàn)；相對(duì)于對(duì)照組，p<0,05，#相對(duì)于x射線，p<0,05，組別與時(shí)間因素之間存在顯著相互作用(n＝9-12)。圖中顯示在致死性輻射之后pif對(duì)心臟指標(biāo)的影響。相較于pbs壁厚度，pif改善心臟收縮和心臟舒張功能。

圖18描繪在第5個(gè)月時(shí)的器官重量和長(zhǎng)度—體重、心臟重量、脛骨長(zhǎng)度。分級(jí)的單因素anova，全部逐對(duì)進(jìn)行。holmsidak事后檢驗(yàn)。*相對(duì)于對(duì)照組，p<0.05；#相對(duì)于x射線，p<0.05，n＝9-12。圖中顯示在致死性輻射之后pif對(duì)大鼠體重指數(shù)的影響，展示大鼠的體重相對(duì)于pbs增加。

圖19描繪在第5個(gè)月時(shí)的器官重量—胸膜液、肺、腎、肝及胸腺重量，分級(jí)單因素anova，全部逐對(duì)進(jìn)行。holmsidak事后檢驗(yàn)，*相對(duì)于對(duì)照組，p<0.05，#相對(duì)于x射線，p<0.05，n＝9-12。圖中顯示在致死性輻射之后，pif對(duì)大鼠器官重量的影響。pif促進(jìn)腎生長(zhǎng)。

圖20描繪相較于未處理的細(xì)胞，pif對(duì)腎上腺細(xì)胞培養(yǎng)物的作用。當(dāng)預(yù)先暴露于pif時(shí)，用pif處理的bac細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)活力增加。顯示pif對(duì)牛腎上腺細(xì)胞(原代)活力、細(xì)胞凋亡及增殖的作用。

圖21顯示pif對(duì)牛腎上腺細(xì)胞(原代)分泌皮質(zhì)醇的影響；即，pif對(duì)bac腎上腺細(xì)胞的影響，因?yàn)樗鯾ac腎上腺細(xì)胞與基礎(chǔ)皮質(zhì)醇分泌有關(guān)。當(dāng)pif暴露于培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，皮質(zhì)醇水平增加。

圖22顯示pif對(duì)培養(yǎng)的ins-1(大鼠胰島產(chǎn)胰島素細(xì)胞)的影響。相較于未處理的ins-1細(xì)胞，培養(yǎng)的細(xì)胞的活力增加。使用每毫升培養(yǎng)基0.01、0.1及1.0微克劑量的pif進(jìn)行治療。圖中顯示，pif促進(jìn)胰島素瘤細(xì)胞存活，以及活力。

具體實(shí)施方式

急性輻射綜合癥(ars)，又稱為輻射病，是在全身或部分身體高劑量照射之后發(fā)生。輻射可能引起骨髓的完全損害、胃腸(gi)道的粘膜屏障及隱窩的破壞、皮膚燒傷及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，由此導(dǎo)致不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)和心血管破壞，并最終導(dǎo)致死亡。輻射對(duì)于如造血細(xì)胞等快速更新的細(xì)胞特別有害，其中淋巴細(xì)胞是將被消減的第一個(gè)亞譜系。盡管個(gè)別器官的破壞可以進(jìn)行監(jiān)測(cè)，但關(guān)于ars的較為適合的看法是由全身炎癥反應(yīng)引起的多器官功能不全綜合癥的概念。眾多報(bào)導(dǎo)顯示，輻射誘導(dǎo)產(chǎn)生促炎性細(xì)胞因子引起血液和周圍淋巴組織的放射療法相關(guān)病癥。

鑒于電離輻射誘導(dǎo)的損傷的復(fù)雜性，缺乏有效的ars療法。當(dāng)前的臨床治療方法是抑制炎性介體的產(chǎn)生并抑制炎癥反應(yīng)的起始。當(dāng)前管理方法包含輸血、流體和電解質(zhì)施用、抗生素及抗病毒療法。這些治療引起全身性免疫抑制并且使患者有機(jī)會(huì)性感染的風(fēng)險(xiǎn)。細(xì)胞減少癥患者在低等級(jí)輻射之后接受粒細(xì)胞集落刺激因子或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子以由殘留造血祖細(xì)胞有效重構(gòu)免疫系統(tǒng)。無(wú)應(yīng)答者及在致死性輻射之后需要造血干細(xì)胞移植(hsct)。然而，此類移植常常會(huì)由于使用免疫抑制藥物不足或過(guò)量而導(dǎo)致有害的移植物抗宿主疾病(graftvshostdisease，gvhd)以及減弱的移植物抗白血病(graftvs.leukemia，gvl)作用。當(dāng)前，ars僅具有有限的應(yīng)對(duì)措施。

骨髓移植(bonemarrowtransplantation，bmt)可以用作針對(duì)血液惡性病和遺傳性血細(xì)胞病癥，例如但不限于，淋巴瘤、淋巴細(xì)胞性白血病、骨髓瘤、白血病、貧血、血友病、地中海型貧血、鐮狀細(xì)胞疾病、多發(fā)性硬化、硬皮病、骨髓發(fā)育不良綜合癥及骨髓增生疾病的治療。骨髓移植有兩種類型：自體(自身)移植及同種異體(供體)移植。

除骨髓外的器官、組織或細(xì)胞的移植也可以用于治療移植受體的各種生理缺陷，包括可能因ars而發(fā)生的多器官功能不全。這些器官、組織或細(xì)胞可以包含但不限于，皮膚、腦、心臟、肺、腎、胃腸道、脾、肝、胰臟、胰島細(xì)胞、腎上腺及其組合。

如果受試者需要移植，那么可以使用自體移植、同種異體移植、半同種異體移植或異種移植。就異種移植而言，例如，由于當(dāng)前可用于移植的人類器官的嚴(yán)重短缺，可以移植來(lái)自豬供體的胰島細(xì)胞或其它細(xì)胞、器官或組織。為了防止移植排斥反應(yīng)，或在骨髓情況下防止無(wú)法移入或反之，防止發(fā)生移植物抗宿主疾病(gvhd)，特別需要供移植的器官、組織或細(xì)胞的完美匹配。然而，當(dāng)前療法是有限的，而且仍會(huì)發(fā)生移植物失效及其它嚴(yán)重并發(fā)癥。免疫抑制劑的引入明顯推動(dòng)了移植領(lǐng)域的發(fā)展，使患者能夠長(zhǎng)期恢復(fù)；不過(guò)，患者終生需要免疫抑制療法，并伴隨有毒副作用。

如果影響靶器官、組織或細(xì)胞的疾病處于緩解期，或者如果所治療的疾患不涉及靶器官、組織或細(xì)胞，那么自體移植是可能的。在自體移植，包括bmt中，在移植之前，從患者提取組織，并且可以“凈化”以移除存留的惡性細(xì)胞(在疾病影響靶器官、組織或細(xì)胞的情況下)。在患者經(jīng)歷化學(xué)療法或輻射之后，將干細(xì)胞移植回患者體內(nèi)。自體移植使患者能夠接受高劑量的化學(xué)療法和輻射。舉例來(lái)說(shuō)，高劑量化學(xué)療法或輻射療法加骨髓或末梢血液移植提高白血病和淋巴瘤的治愈率。一旦患者經(jīng)歷化學(xué)療法或輻射，則患者可能具有有限的產(chǎn)生血細(xì)胞的能力。自體移植將允許患者“快速啟動(dòng)(jumpstart)”血細(xì)胞和血小板的產(chǎn)生。

哺乳動(dòng)物妊娠是一種獨(dú)特的生理事件，在這一事件中，產(chǎn)婦免疫系統(tǒng)與胎兒以一種有益于雙方的極高效方式相互作用。妊娠是一種奇異的免疫現(xiàn)象，不展示移植物抗宿主效應(yīng)或宿主抗移植物效應(yīng)。此現(xiàn)象所涉及的因素尚未完全得到闡明，不過(guò)已經(jīng)對(duì)其展開廣泛研究。新穎的胚胎源性因子，即植入前因子(pif-1)可能通過(guò)在受精之后不久產(chǎn)生產(chǎn)婦妊娠識(shí)別來(lái)引起妊娠的免疫耐受性。

為了變換pif在妊娠外的治療效用，產(chǎn)生一種模擬天然肽活性的具有15個(gè)氨基酸(mvrikpgsankpsdd)的合成pif類似物(spif)(并升級(jí)至cgmp等級(jí))。由此能夠在臨床前自身免疫性、移植及急性輻射綜合癥模型中詳細(xì)檢查spif的作用，顯示整體的局部和全身功效。研究成功地檢查了spif針對(duì)人類免疫細(xì)胞的作用并測(cè)定其局部和全身作用機(jī)制的重要成分。有文獻(xiàn)記錄spif在半同種異體移植物抗宿主模型中預(yù)防和逆轉(zhuǎn)所述移植物抗宿主情形，同時(shí)保持有益的移植物抗白血病的功效。fda批準(zhǔn)的綜合毒理學(xué)研究展示在(超生理(400-4000x人類)劑量下的高安全型態(tài)(小鼠和狗)以及較短的循環(huán)半衰期(covance)。fda對(duì)spif授予fasttrack資格以進(jìn)行大學(xué)發(fā)起的針對(duì)孤兒病癥(immuneorphandisorder)的臨床試驗(yàn)。合成pif-1(spif)復(fù)制了天然肽的作用并且對(duì)末梢血液?jiǎn)魏思?xì)胞(pbmc)增殖和細(xì)胞因子分泌發(fā)揮強(qiáng)效免疫調(diào)節(jié)作用，經(jīng)由pbmc上的新穎位點(diǎn)起作用并具有不同于已知免疫抑制藥物的作用。因此，pif可以防止gvhd的發(fā)生，同時(shí)有效實(shí)現(xiàn)移植物抗白血病作用。不希望受理論束縛，pif可以結(jié)合至移植的骨髓干細(xì)胞并幫助其迅速整合，并且起始正常血細(xì)胞和血小板的產(chǎn)生。

移植理想地是用與受體完全匹配的供體器官、組織或細(xì)胞進(jìn)行；仍有約70％的患者發(fā)生各種強(qiáng)度的gvhd。因此，移植患者在移植后接受免疫抑制療法，并且可能其余生都需要如此。除急性gvhd以外，慢性gvhd和排斥反應(yīng)也是嚴(yán)重并發(fā)癥。然而，相較于急性gvhd，這些疾患較難治療并且具有高發(fā)病率和死亡率。因此，使用pif可以實(shí)現(xiàn)自體移植、同種異體移植、半同種異體移植或異種移植，由此改善移入，長(zhǎng)期預(yù)防gvhd或器官排斥反應(yīng)。

臨床上，在移植的細(xì)胞發(fā)揮功能之前的較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，會(huì)發(fā)生移植相關(guān)重大問(wèn)題。在這段時(shí)間期間，患者通常出現(xiàn)嚴(yán)重感染并且可能死亡。pif從根本上解決炎癥，不管損傷的來(lái)源如何或是哪種器官作為靶。施用pif可以減少移植之后的移入時(shí)間段和移入相關(guān)炎癥。pif可以引起移植物的成功移入。不希望受理論所束縛，相信類似于pif在妊娠中的活性，pif在妊娠之外也促進(jìn)移入并允許新并入的器官、組織或細(xì)胞能夠發(fā)揮功能。此外，施用pif可以使接受自體移植的小鼠的體重完全恢復(fù)，與未處理小鼠相當(dāng)。

如在鼠類同種異體骨髓移植(bmt)模型中所示，spef可以預(yù)防有害gvhd的發(fā)生，同時(shí)保留有益的gvl作用。在所述模型中，短期spif療法產(chǎn)生四個(gè)月的功效，由此防止皮炎、肝炎及結(jié)腸潰瘍，并且降低促炎性肝細(xì)胞因子和趨化因子基因以及循環(huán)促炎性il17a水平。另外，經(jīng)顯示，spif促進(jìn)同基因bmt。

spif調(diào)控整體免疫，并靶向作用于活化免疫的未處理的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞以阻止混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixedlymphocytereaction，mlr)，即，導(dǎo)致優(yōu)先th2細(xì)胞因子偏好，同時(shí)保留所需的th1反應(yīng)的增殖。在鼠類巨噬細(xì)胞中，已經(jīng)觀察到b7h1(連接至t細(xì)胞上的pd-1)增加及inos基因(nos2，一氧化氮合成酶)表達(dá)減少(azar等人,2013)。spif靶向蛋白質(zhì)-二異構(gòu)酶/硫氧還蛋白(pdi/t)和熱休克蛋白(hsp)以減少氧化應(yīng)激并防止蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊，由此提供對(duì)于在臨床前模型中所觀察到的pif保護(hù)的深刻理解。在體外和臨床前模型中的觀察結(jié)果支持了spif可以有效防止ars的觀點(diǎn)。

在描述本發(fā)明的組合物和方法之前，應(yīng)理解，本發(fā)明不限于所描述的具體工藝、組合物或方法，因?yàn)檫@些工藝、組合物或方法可能變化。還應(yīng)理解，說(shuō)明書中使用的術(shù)語(yǔ)只是出于描述具體形式或?qū)嵤├哪康?，并且不意圖限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍將僅由所附權(quán)利要求書限制。除非另有定義，否則本文中所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。盡管可以使用與本文中所描述類似或相當(dāng)?shù)娜魏畏椒ê筒牧蟻?lái)實(shí)踐或測(cè)試本發(fā)明的實(shí)施例，但現(xiàn)描述優(yōu)選的方法、裝置和材料。本文中所提及的所有出版物都以全文引用的方式并入本文中。不應(yīng)將本文中的任何內(nèi)容理解為承認(rèn)本發(fā)明無(wú)權(quán)先于在先發(fā)明的這些公開內(nèi)容。

還須注意，除非上下文另外明確規(guī)定，否則如本文中和所附權(quán)利要求書中所使用，單數(shù)形式“一個(gè)(種)”和“所述”包含多個(gè)(種)參考物。因此，舉例來(lái)說(shuō)，提到一種“肽”是提到本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的一種或多種肽及其等效物等等。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“約”意味著加上或減去所使用數(shù)字的數(shù)值的10％。因此，約50％意思指在40％-60％范圍內(nèi)。

“施用”當(dāng)結(jié)合治療使用時(shí)，意思指將治療劑直接施用至靶器官、組織或細(xì)胞中或其上，或?qū)⒅委焺┦┯媒o患者，由此使治療劑積極地影響其所靶向的器官、組織或細(xì)胞。因此，當(dāng)結(jié)合植入前因子(pif)使用時(shí)，如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“施用”可以包含但不限于，將pif提供至靶器官、組織或細(xì)胞中或其上；通過(guò)例如靜脈內(nèi)注射將pif全身性提供給患者，由此使治療劑到達(dá)靶器官、組織或細(xì)胞；將pif以編碼序列形式提供至靶組織(例如，通過(guò)所謂的基因療法技術(shù))?！笆┯谩笨梢酝ㄟ^(guò)不經(jīng)腸、口或表面施用，或通過(guò)這些方法與其它已知技術(shù)的組合實(shí)現(xiàn)。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”、“患者”及“受試者”包含但不限于，人類和非人類脊椎動(dòng)物，如野生動(dòng)物、家畜及農(nóng)畜。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”、“患者”及“受試者”可以指人類。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”、“患者”及“受試者”可以指非人類哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”、“患者”及“受試者”可以指以下任一種或其組合：狗、貓、豬、牛、馬、山羊、綿羊或其它家養(yǎng)的非人類哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施例中，受試者是被診斷患有或懷疑患有惡性形式癌癥的人類患者。在一些實(shí)施例中，受試者是被診斷患有或懷疑患有器官衰竭的人類患者。在一些實(shí)施例中，受試者是被診斷患有或懷疑患有肝衰竭、腎衰竭、與皮質(zhì)醇水平不平衡有關(guān)的任何疾病、幼年型或成人糖尿病(i型或ii型)或心臟衰竭的人類患者。在一些實(shí)施例中，受試者是被鑒別為需要或懷疑需要胰島細(xì)胞移植、腎移植或腎上腺細(xì)胞移植、血細(xì)胞移植、骨髓移植或心臟移植的人類患者。

“免疫調(diào)節(jié)”是指本發(fā)明化合物改變(調(diào)節(jié))免疫系統(tǒng)的一個(gè)或多個(gè)方面的能力。免疫系統(tǒng)通過(guò)涉及借助于多個(gè)細(xì)胞-細(xì)胞相互作用彼此調(diào)節(jié)的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及其它抗原呈遞細(xì)胞的細(xì)胞和體液機(jī)制，以及通過(guò)產(chǎn)生對(duì)免疫細(xì)胞具有自分泌、旁分泌及內(nèi)分泌作用的可溶因子(包括淋巴因子和抗體)而起到保護(hù)生物體免受感染和免受外來(lái)抗原影響的作用。

術(shù)語(yǔ)“改善”用于表示，本發(fā)明改變提供、應(yīng)用或施用其的受試者、器官、組織或細(xì)胞的外觀、形式、特征和/或生理特質(zhì)。舉例來(lái)說(shuō)，形式的變化可以通過(guò)以下任一者或其組合展示：ars的一或多種癥狀的減輕；移植的器官、組織或細(xì)胞的移入增加；對(duì)移植的器官、組織或細(xì)胞的接受性增加；與自體移植、同種異體移植、半同種異體移植或異種移植有關(guān)的宿主針對(duì)移植物的免疫反應(yīng)減少；移植物抗白血病作用增加；移植物抗白血病作用增加，不伴隨或伴隨極少移植物抗宿主疾??；對(duì)于免疫抑制劑的需求減少或消除；及更快自化學(xué)療法和輻射療法恢復(fù)。

術(shù)語(yǔ)“抑制”包含施用本發(fā)明化合物以預(yù)防癥狀的發(fā)作、緩解癥狀或消除疾病、疾患或病癥。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“肽”、“多肽”及“蛋白質(zhì)”可互換使用并且是指通過(guò)酰胺鍵或非酰胺等效物共價(jià)連接的兩個(gè)或多于兩個(gè)氨基酸。本發(fā)明的肽可以具有任何長(zhǎng)度。舉例來(lái)說(shuō)，所述肽的長(zhǎng)度可以是約兩個(gè)至約100個(gè)或更多個(gè)殘基，如5至12、12至15、15至18、18至25、25至50、50至75、75至100或更多個(gè)殘基。肽優(yōu)選是約2至約18個(gè)殘基。本發(fā)明的肽包含l-異構(gòu)體和d-異構(gòu)體，及l(fā)-異構(gòu)體與d-異構(gòu)體的組合。肽可以包含典型地與蛋白質(zhì)的翻譯后加工有關(guān)的修飾，例如環(huán)化(例如，二硫鍵或酰胺鍵)、磷酸化、糖基化、羧基化、泛素化、肉豆蔻?；蛑?/p>

“藥學(xué)上可接受”意味著載劑、稀釋劑或賦形劑必須與配制物或組合物的其它成分相容且對(duì)其接受者無(wú)害。

除非另外指明，否則術(shù)語(yǔ)“骨髓”意思指在骨骼的中空內(nèi)部發(fā)現(xiàn)的柔軟組織，由紅骨髓和黃骨髓組成并且含有干細(xì)胞。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“治療劑”意思指用于治療、對(duì)抗、減輕、預(yù)防或改善患者的不想要的疾患或疾病的藥劑。本發(fā)明的實(shí)施例部分是針對(duì)減輕ars的一種或多種癥狀，增加對(duì)自體移植、同種異體移植、半同種異體移植或異種移植中移植的器官、組織或細(xì)胞的接受性，和/或減少對(duì)自體移植、同種異體移植、半同種異體移植或異種移植的器官、組織或細(xì)胞的排斥反應(yīng)。

組合物(例如pif肽)的“治療有效量”或“有效量”是所計(jì)算的用以實(shí)現(xiàn)希望的作用，即，用以改善、增加或允許對(duì)自體移植、同種異體移植、半同種異體移植或異種移植的器官、組織細(xì)胞的接受性，和/或用以減輕ars的一種或多種癥狀，或在移植之前增加供體器官、組織或細(xì)胞的活力的預(yù)定量。適當(dāng)時(shí)，本發(fā)明方法所涵蓋的活性包含醫(yī)學(xué)治療和/或防治性治療兩者。當(dāng)然，根據(jù)本發(fā)明施用以獲得治療和/或防治作用的化合物的具體劑量將由特定個(gè)別情況決定，包括施用的化合物、施用途徑及所治療的疾患。所述化合物在較寬劑量范圍內(nèi)有效，并且例如，每天的劑量通常會(huì)在0.001至10mg/kg范圍內(nèi)，更通常是在0.01至1mg/kg范圍內(nèi)。在一些實(shí)施例中，pif或pdf類似物或肽的治療有效劑量是約0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg及1mg/kg。然而，應(yīng)了解，施用的有效量將由醫(yī)生根據(jù)相關(guān)情況決定，包括待治療的疾患、打算施用的化合物的選擇及所選施用途徑，并因此，以上劑量范圍并不打算以任何方式限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明實(shí)施例的化合物的治療有效量典型地是使得當(dāng)以生理上可耐受的賦形劑組合物施用時(shí)，足以獲得有效全身濃度或組織中的局部濃度的量。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“治療(treat/treated/treating)”是指治療性治療和防治性或預(yù)防性措施，其中目的是為了預(yù)防或減慢(減輕)不希望的生理疾患、病癥或疾病，或獲得有益的或所希望的臨床結(jié)果。出于本發(fā)明的目的，有益的或所希望的臨床結(jié)果包含但不限于，癥狀的緩解；所述疾患、病癥或疾病程度的減輕；所述疾患病癥或疾病狀態(tài)的穩(wěn)定化(即，未惡化)；所述疾患、病癥或疾病的發(fā)作延遲或發(fā)展減慢；所述疾患、病癥或疾病狀態(tài)的改善；及所述疾患、病癥或疾病的緩解(不管是部分的還是總體的)，不管是可檢測(cè)還是不可檢測(cè)的，或增強(qiáng)或改善。治療包含引起臨床顯著反應(yīng)而無(wú)過(guò)度副作用。治療還包括使存活期相較于不接受治療時(shí)的預(yù)期存活期延長(zhǎng)。

一般來(lái)說(shuō)，術(shù)語(yǔ)“組織”是指結(jié)合在一起以執(zhí)行特定功能的類似的特化細(xì)胞的任何聚集體。

本申請(qǐng)描述化合物。不受任何特定理論束縛，本文所描述的化合物用作pif經(jīng)由pif的一種或多種受體而介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的激動(dòng)劑。因此，這些化合物調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)路徑，由此在治療(但不限于)急性輻射綜合癥及急性輻射暴露的遠(yuǎn)期效應(yīng)方面提供顯著治療益處。本公開的化合物可以呈非溶劑化形式以及溶劑化形式(包括水合形式)存在。本公開的化合物還能夠形成藥學(xué)上可接受的鹽，包含但不限于酸加成鹽和/或堿加成鹽。此外，本公開的化合物可以呈各種固體狀態(tài)存在，包含非晶形式(非結(jié)晶形式)及包合物、前藥、多晶型物、生物可水解酯、外消旋混合物、非外消旋混合物形式，或呈純化的立體異構(gòu)體，包含但不限于光學(xué)純對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體形式存在。一般來(lái)說(shuō)，所有這些形式都可以作為如上文所描述的化合物的游離堿或游離酸形式的替代形式使用，并且意圖涵蓋在本公開的范圍內(nèi)。

“多晶型物”是指化合物的的固體結(jié)晶形式。同一化合物的不同多晶型物可以展現(xiàn)不同的物理、化學(xué)和/或光譜特性。不同物理特性包含但不限于，穩(wěn)定性(例如，對(duì)熱或光的穩(wěn)定性)、可壓縮性及密度(對(duì)于配制物和產(chǎn)品制造極為重要)，以及溶解速率(可以影響生物利用率)。多晶型物的不同物理特性會(huì)影響其處理。在一些實(shí)施例中，所述藥物組合物包括本文中所公開的任一組合物的至少一種多晶型物。

如上所述，本公開的化合物尤其可以呈藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酰胺或前藥形式施用。術(shù)語(yǔ)“鹽”是指本公開的化合物的無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽。這類鹽可以在化合物的最終分離和純化期間現(xiàn)場(chǎng)制備，或通過(guò)使呈游離堿或游離酸形式的純化的化合物分別與適合的有機(jī)或無(wú)機(jī)堿或酸反應(yīng)并且分離由此形成的鹽來(lái)制備。代表性鹽包含氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、順丁烯二酸鹽、反丁烯二酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽、甲磺酸鹽、葡萄糖酸鹽、乳糖酸鹽及月桂基磺酸鹽等。所述鹽可以包含如鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等堿金屬和堿土金屬類陽(yáng)離子，以及無(wú)毒銨、季銨及胺陽(yáng)離子，包含但不限于，銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。參見例如，s.m.berge等人,“藥用鹽(pharmaceuticalsalts)”,《藥學(xué)雜志(jpharmsci)》,66:1-19(1977)。術(shù)語(yǔ)“鹽”是指與無(wú)機(jī)酸和/或有機(jī)酸形成的酸性鹽，以及與無(wú)機(jī)堿和/或有機(jī)堿形成的堿性鹽。這些酸和堿的實(shí)例是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員眾所周知的。此類酸加成鹽通常是藥學(xué)上可接受的，不過(guò)非藥學(xué)上可接受的酸的鹽也可以用于制備和純化所討論的化合物。鹽包含由鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、甲烷磺酸及苯磺酸形成的鹽。

在一些實(shí)施例中，包括pif或pif類似物或pif突變體的組合物的鹽可以通過(guò)使游離堿或其鹽、對(duì)映異構(gòu)體或外消旋體與一當(dāng)量或多于一當(dāng)量的適當(dāng)酸反應(yīng)來(lái)形成。在一些實(shí)施例中，本公開的藥學(xué)上可接受的鹽是指具有至少一個(gè)堿性基團(tuán)或至少一個(gè)堿性自由基的類似物。在一些實(shí)施例中，本公開的藥學(xué)上可接受的鹽包括游離氨基、游離胍基、吡嗪基或吡啶基，由此形成酸加成鹽。在一些實(shí)施例中，本公開的藥學(xué)上可接受的鹽是指主題化合物與(例如)無(wú)機(jī)酸，如鹽酸、硫酸或磷酸，或者與適合有機(jī)羧酸或磺酸，例如脂肪族單羧酸或二羧酸，如三氟乙酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、琥珀酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸或草酸，或氨基酸如精氨酸或賴氨酸、芳香族羧酸如苯甲酸、2-苯氧基-苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、芳香族-脂肪族羧酸如杏仁酸或肉桂酸、雜芳族羧酸如煙堿酸或異煙酸、脂肪族磺酸如甲烷磺酸、乙烷磺酸或2-羥基乙烷磺酸，或芳香族磺酸，例如苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸或萘-2-磺酸形成的酸加成鹽。當(dāng)存在若干個(gè)堿性基團(tuán)時(shí)，可以形成單酸加成鹽或聚酸加成鹽。所述反應(yīng)可以在鹽不可溶的溶劑或介質(zhì)中或在鹽可溶的溶劑中進(jìn)行，例如水、二噁烷、乙醇、四氫呋喃或乙醚，或溶劑混合物，所述溶劑可以在真空中或通過(guò)冷凍干燥移除。所述反應(yīng)也可以是復(fù)分解方法或其可以在離子交換樹脂上進(jìn)行。在一些實(shí)施例中，鹽可以是患者生理上耐受的鹽。根據(jù)本公開的鹽可以呈無(wú)水形式或水合結(jié)晶形式(即，與一個(gè)或多個(gè)分子的水形成絡(luò)合物或結(jié)晶)。

本公開化合物的藥學(xué)上可接受的酯的實(shí)例包含c1-c8烷基酯?？山邮荃ミ€包含c5-c7環(huán)烷基酯，以及芳基烷基酯，如苯甲基酯。c1-c4烷基酯是常用的。本公開化合物的酯可以根據(jù)本領(lǐng)域中眾所周知的方法制備。本公開化合物的藥學(xué)上可接受的酰胺的實(shí)例包含衍生自氨、c1-c8烷基伯胺及c1-c8二烷基仲胺的酰胺。就仲胺來(lái)說(shuō)，胺也可以呈含有至少一個(gè)氮原子的5或6元雜環(huán)烷基的形式。常用衍生自氨、c1-c3烷基伯胺及c1-c2二烷基仲胺的酰胺。本公開化合物的酰胺可以根據(jù)本領(lǐng)域的技術(shù)人員眾所周知的方法制備。

如本文所使用，“保守”氨基酸取代可以如下表a、b或c中所陳述進(jìn)行定義。本發(fā)明的pif化合物包含通過(guò)修飾編碼本發(fā)明多肽的多聚核苷酸引入保守取代(來(lái)自核酸或氨基酸序列)的那些。氨基酸可以根據(jù)物理特性以及對(duì)二級(jí)和三級(jí)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的貢獻(xiàn)進(jìn)行分類。保守取代在本領(lǐng)域中被認(rèn)為是一種氨基酸被具有類似特性的另一種氨基酸取代。在一些實(shí)施例中，保守取代在本領(lǐng)域中被認(rèn)為是一個(gè)核酸被具有類似特性或當(dāng)編碼時(shí)具有類似結(jié)合親和力的另一核酸取代。示例性保守取代陳述于表1中。

表1--保守取代i

或者，可以根據(jù)lehninger(《生物化學(xué)(biochemistry)》,第二版；worthpublishers,inc.,紐約州紐約(ny,n.y.(1975),第71-77頁(yè))中所描述，如表2中所陳述對(duì)保守氨基酸進(jìn)行分組。

表2-保守取代ii

或者，示例性保守取代陳述于表3中。

表3-保守取代iii

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“肽”、“多肽”及“蛋白質(zhì)”可互換使用并且是指通過(guò)酰胺鍵或非酰胺等效物共價(jià)連接的兩個(gè)或多于兩個(gè)氨基酸。本公開的肽可以具有任何長(zhǎng)度。舉例來(lái)說(shuō)，所述肽的長(zhǎng)度可以是約兩個(gè)至約100個(gè)或更多個(gè)殘基，如5至12、12至15、15至18、18至25、25至50、50至75、75至100或更多個(gè)殘基。肽優(yōu)選是約2至約18個(gè)殘基長(zhǎng)度。本公開的肽還包含l-異構(gòu)體和d-異構(gòu)體，以及l(fā)-異構(gòu)體與d-異構(gòu)體的組合。肽可以包含典型地與蛋白質(zhì)的翻譯后加工有關(guān)的修飾，例如環(huán)化(例如，二硫鍵或酰胺鍵)、磷酸化、糖基化、羧基化、泛素化、肉豆蔻?；蛑Ｔ谝恍?shí)施例中，本公開的組合物或藥物組合物涉及表1中陳述的任何pif序列的類似物，所述pif序列類似物與表1中陳述的pif序列之一或其組合共有不低于約70％、約75％、約79％、約80％、約85％、約86％、約87％、約90％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％同源性。在一些實(shí)施例中，pif或pif肽可以指選自seqidno:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29的氨基酸序列或其與任一此類氨基酸序列約70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的功能片段，。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:20至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:21至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:22至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:23至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:24至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:25至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:26至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:27至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:28至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif可以指包括與seqid.no:29至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列，主要由所述序列組成或由所述序列組成的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，pif突變體包括選自以下的序列：xvzikpgsankpsd、xvzikpgsankpsxvzikpgsankpxvzikpgsankxvzikpgsan、xvzikpgsa、xvzikpgs、xvzikpg、xvzikp、xvzik、xvzi、xvz，其中x是非天然氨基酸或天然存在的氨基酸。在一些實(shí)施例中，pif突變體包括選自以下的序列：xvzikpgsankpsd、xvzikpgsankpsxvzikpgsankpxvzikpgsankxvzikpgsan、xvzikpgsa、xvzikpgs、xvzikpg、xvzikp、xvzik、xvzi、xvz，其中x是非天然氨基酸或天然存在的氨基酸，但如果z是精氨酸，則x不是甲硫氨酸，并且如果x是甲硫氨酸，則z不是精氨酸。在一些實(shí)施例中，pif類似物或突變體是合成的或以合成方式制造的。

本文中所公開的肽另外包含具有氨基酸結(jié)構(gòu)和功能類似物的化合物，例如具有合成或非天然氨基酸(如正亮氨酸)或氨基酸類似物或非天然側(cè)鏈的肽模擬物，只要所述模擬物具有本公開的化合物的一種或多種功能或活性。因此，本公開的化合物包含“模擬物”和“肽模擬物”形式。如本文所使用，“非天然側(cè)鏈”是原子通過(guò)共價(jià)鍵接合至α-碳原子、β-碳原子或γ-碳原子形成的修飾或合成鏈，所述鏈不構(gòu)成氨基酸多肽鏈的主鏈。肽類似物可以包括選自以下的非天然氨基酸之一或其組合：正纈氨酸、叔丁基甘氨酸、苯基甘氨酸、he、7-氮雜酪氨酸、4-氟苯丙氨酸、n-甲基-甲硫氨酸、n-甲基-纈胺酸、n-甲基-丙氨酸、肌氨酸、n-甲基-叔丁基甘氨酸、n-甲基-亮氨酸、n-甲基-苯基甘氨酸、n-甲基-異亮氨酸、n-甲基-色氨酸、n-甲基-7-氮雜酪氨酸、n-甲基-苯丙氨酸、n-甲基-4-氟苯丙氨酸、n-甲基-蘇氨酸、n-甲基-酪氨酸、n-甲基-纈氨酸、n-甲基-賴氨酸、高半胱氨酸及tyr；xaa2不存在或是選自由以下組成的群組的氨基酸：ala、d-ala、n-甲基-丙氨酸、glu、n-甲基-谷氨酸、d-glu、gly、肌氨酸、正亮氨酸、lys、d-lys、asn、d-asn、d-glu、arg、d-arg、phe、d-phe、n-甲基-苯丙氨酸、gin、d-gln、asp、d-asp、ser、d-ser、n-甲基-絲氨酸、thr、d-thr、n-甲基-蘇氨酸、d-prod-leu、n-甲基-亮氨酸、d-ile、n-甲基-異亮氨酸、d-val、n-甲基-纈氨酸、叔丁基甘氨酸、d-叔丁基甘氨酸、n-甲基-叔丁基甘氨酸、trp、d-trp、n-甲基-色氨酸、d-tyr、n-甲基-酪氨酸、1-氨基環(huán)丙烷甲酸、1-氨基環(huán)丁烷甲酸、1-氨基環(huán)戊烷甲酸、1-氨基環(huán)己烷甲酸、4-氨基四氫-2h-吡喃-4-甲酸、氨基異丁酸、(5)-2-氨基-3-(1h-四唑-5-基)丙酸、glu、gly、n-甲基-谷氨酸、2-氨基戊酸、2-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基辛酸、2-氨基壬酸、2-氨基癸酸、2-氨基十一烷酸、2-氨基十二烷酸、辛基甘氨酸、傳明酸(tranexamicacid)、氨基戊酸及2-(2-氨基乙氧基)乙酸。丙氨酸的天然側(cè)鏈或r基團(tuán)是甲基。在一些實(shí)施例中，所述組合物的非天然側(cè)鏈?zhǔn)且粋€(gè)或多個(gè)氫原子被氘原子置換的甲基。非天然側(cè)鏈公開于本領(lǐng)域以下公布中：wo/2013/172954、wo2013123267、wo/2014/071241、wo/2014/138429、wo/2013/050615、wo/2013/050616、wo/2012/166559、us申請(qǐng)?zhí)?0150094457，ma.z.和hartman,m.c,(2012).經(jīng)由mrna展示體外選擇非天然環(huán)肽文庫(kù)(invitroselectionofunnaturalcyclicpeptidelibrariesviamrnadisplay),j.a.douthwaits和r.h.jackson(編輯),《核糖體展示及相關(guān)技術(shù)：方法及實(shí)驗(yàn)方案(ribosomedisplayandrelatedtechnologies:methodsandprotocols)》(第367-390頁(yè)).springernewyork,全部以全文引用的方式并入本文中。

術(shù)語(yǔ)“模擬物”與“肽模擬物(peptidemimetic/peptidomimetic)”在本文中可互換地使用，并且一般是指模擬所選天然肽或蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)域(例如，結(jié)合基序或活性位點(diǎn))的三級(jí)結(jié)合結(jié)構(gòu)或活性的肽、部分肽或非肽分子。如下文進(jìn)一步描述，這些肽模擬物包含重組或化學(xué)修飾的肽，以及非肽試劑，如小分子藥物模擬物。術(shù)語(yǔ)“類似物”是指包括至少一個(gè)α-氨基酸和至少一個(gè)非天然氨基酸殘基的任何多肽，其中所述多肽結(jié)構(gòu)類似于天然存在的全長(zhǎng)pif蛋白質(zhì)并且共有作為所述類似物基礎(chǔ)的天然存在全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的生物化學(xué)活性或生物活性。在一些實(shí)施例中，組合物、藥物組合物及試劑盒包括與表4中闡述的pif序列之一或其組合共有共有不低于約70％、約75％、約79％、約80％、約85％、約86％、約87％、約90％約93％、約94％約95％、約96％、約97％、約98％、約99％同源性的肽或肽模擬物；并且其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是非天然氨基酸殘基或具有非天然側(cè)鏈的氨基酸殘基。在一些實(shí)施例中，提供肽或肽模擬物，其中在兩個(gè)半胱氨酸殘基之間形成環(huán)。在一些實(shí)施例中，肽模擬物可以與天然肽具有許多類似性，如：在已知的20種蛋白質(zhì)型氨基酸中未發(fā)現(xiàn)的氨基酸側(cè)鏈、用于實(shí)現(xiàn)分子末端或內(nèi)部部分之間的環(huán)化的非肽類連接子、酰胺鍵氫部分被甲基(n-甲基化)或其它烷基取代、肽鍵被對(duì)化學(xué)或酶處理具有抗性的化學(xué)基團(tuán)或鍵置換、n末端和c末端修飾，及與非肽延伸部分(如聚乙二醇、脂質(zhì)、碳水化合物、核苷、核苷酸、核苷堿、各種小分子或磷酸酯基或硫酸酯基)偶聯(lián)。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“環(huán)肽模擬物”或“環(huán)狀多肽模擬物”是指具有一種或多種環(huán)特征，如環(huán)、橋連部分和/或內(nèi)部鍵聯(lián)作為結(jié)構(gòu)的一部分的肽模擬物。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“橋連部分”是指將氨基酸上的一個(gè)原子或原子組合以化學(xué)方式連接至所述氨基酸殘基外的任何其它原子的化學(xué)部分。舉例來(lái)說(shuō)，在氨基酸三級(jí)結(jié)構(gòu)的情況下，橋連部分可以是以化學(xué)方式連接氨基酸側(cè)鏈與另一連續(xù)或非連續(xù)氨基酸側(cè)鏈的化學(xué)部分。

在一些實(shí)施例中，提供肽或肽模擬物，其中環(huán)包括選自由以下組成的群組的橋連部分：

其中x各自獨(dú)立地是n或ch，使得環(huán)不含超過(guò)2個(gè)n；z各自獨(dú)立地是一鍵、nr、o、s、ch2、c(o)nr、nrc(o)、s(o)vnr、nrs(o)v；m各自獨(dú)立地選自0、1、2及3；vis各自獨(dú)立地選自1和2；r各自獨(dú)立地選自h和c1-c6；及橋連部分各自通過(guò)獨(dú)立選擇的c0-c6間隔基連接至肽。

在一些實(shí)施例中，通過(guò)用其它側(cè)鏈，例如用如烷基、低級(jí)烷基、環(huán)狀4元烷基、5元烷基、6元烷基至7元烷基、酰胺、酰胺低級(jí)烷基、酰胺二(低級(jí)烷基)、低級(jí)烷氧基、羥基、羧基和其低級(jí)酯衍生物，以及4元雜環(huán)基團(tuán)、5元雜環(huán)基團(tuán)、6元雜環(huán)基團(tuán)至7元雜環(huán)基團(tuán)置換20種遺傳編碼的氨基酸(或d氨基酸)的天然存在的側(cè)鏈來(lái)修飾本公開的pif肽，由此產(chǎn)生肽模擬物。舉例來(lái)說(shuō)，可以制備脯氨酸殘基的環(huán)大小從5個(gè)成員變?yōu)?、6或7個(gè)成員的脯氨酸類似物。環(huán)狀基團(tuán)可以是飽和或不飽和的，并且如果是不飽和的，則可以是芳香族基團(tuán)或非芳香族基團(tuán)。雜環(huán)基團(tuán)可以含有一個(gè)或多個(gè)氮、氧和/或硫雜原子。此類基團(tuán)的實(shí)例包含呋吖基、呋喃基、咪唑烷基、咪唑基、二氫咪唑基、異噻唑基、異噁唑基、嗎啉基(例如，n-嗎啉基)、噁唑基、哌嗪基(例如，1-哌嗪基)、哌啶基(例如，1-哌啶基、n-哌啶基)、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基(例如，1-吡咯烷基)、吡咯啉基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、硫代嗎啉基(例如，n-硫代嗎啉基)及三唑基。這些雜環(huán)基團(tuán)可以被取代或未被取代的。在一個(gè)基團(tuán)被取代的情況下，取代基可以是烷基、烷氧基、鹵素、氧，或被取代或未被取代的苯基。肽模擬物還可以具有通過(guò)磷酸化、磺化、生物素化或者添加或移除其它部分進(jìn)行化學(xué)修飾的氨基酸殘基。

在另一實(shí)施例中，提供式r1-r2-r3-r4-r5-r6-r7-r8-r9-r10-r11-r12-r13-r14-r15的化合物，其中r1是met或met模擬物，r2是val或val模擬物，r3是arg或arg模擬物，或任何氨基酸，r4是ile或ile模擬物，r5是lys或lys模擬物，r6是pro或pro模擬物，r7是gly或gly模擬物，r8是ser或ser模擬物，r9是ala或ala模擬物，r10是asn或asn模擬物，r11是lys或lys模擬物，r12是pro或pro模擬物，r13是ser或ser模擬物，r14是asp或asp模擬物，及r15是asp或asp模擬物。在另一實(shí)施例中，提供包括式r1-r2-r3-r4-r5-r6-r7-r8-r9-r10的化合物，其中r1是ser或ser模擬物，r2是gln或gln模擬物，r3是ala或ala模擬物，r4是val或val模擬物，r5是gln或gln模擬物，r6是glu或glu模擬物，r7是his或his模擬物，r8是ala或ala模擬物，r9是ser或ser模擬物，及r10是thr或thr模擬物；包括式r1-r2-r3-r4-r5-r6-r7-r8-r9-r10-r11-r12-r13-r14-r15-r16-r17-r18的化合物，其中r1是ser或ser模擬物，r2是gly或gly模擬物，r3是ile或ile模擬物，r4是val或val模擬物，r5是ile或ile模擬物，r6是tyr或tyr模擬物，r7是gln或gln模擬物，r8是tyr或tyr模擬物，r9是met或met模擬物，r10是asp或asp模擬物，r11是asp或asp模擬物，r12是arg或arg模擬物，r13是tyr或tyr模擬物，r14是val或val模擬物，r15是gly一種gly模擬物，r16是ser或ser模擬物，r17是asp或asp模擬物，及r18是leu或leu模擬物；及包括式r1-r2-r3-r4-r5-r6-r7-r8-r9的化合物，其中r1是val或val模擬物，r2是ile或ile模擬物，r3是ile或ile模擬物，r4是ile或ile模擬物，r5是ala或ala模擬物，r6是gln或gln模擬物，r7是tyr或tyr模擬物，r8是met或met模擬物，及r9是asp或asp模擬物。在一些實(shí)施例中，r3不是arg或arg模擬物。

多種技術(shù)可用于構(gòu)建與相應(yīng)天然肽具有相同或類似的所希望的生物活性，但在溶解度、穩(wěn)定性和/或?qū)λ饣虻鞍姿獾拿舾行苑矫婊钚员人鲭挠欣碾哪M物(參見例如，morgan和gainor,《藥物化學(xué)年度報(bào)告(ann.rep.med.chem.)》,24,243-252,1989)。某些肽模擬物化合物是基于本公開的肽的氨基酸序列。通常，肽模擬物化合物是具有基于所選肽的三維結(jié)構(gòu)的三維結(jié)構(gòu)(即，“肽基序”)的合成化合物。所述肽基序提供具有所希望的生物活性，即結(jié)合至pif受體的肽模擬物化合物，其中所述模擬物化合物的結(jié)合活性基本上未降低，并且通常與作為所述模擬物的模型的天然肽的活性相同或更高。肽模擬物化合物可以具有增進(jìn)其治療應(yīng)用的額外特征，如增加的細(xì)胞滲透性、較高的親和力和/或親合力及延長(zhǎng)的生物半衰期。

肽模擬物設(shè)計(jì)策略是本領(lǐng)域中易于得到的(參見例如，ripka和rich,《化學(xué)生物學(xué)當(dāng)前觀點(diǎn)(curr.op.chem.bioi.)》,2,441-452,1998；hruby等人,《化學(xué)生物學(xué)當(dāng)前觀點(diǎn)》,1,114-119,1997；hruby和baise,《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)化學(xué)(curr.med.chem.)》,9,945-970,2000)。一類肽模擬物的主鏈?zhǔn)遣糠只蛲耆请牡?，但從原子看，模擬肽主鏈原子，并且包括同樣模擬天然氨基酸殘基的側(cè)鏈基團(tuán)的功能的側(cè)鏈基團(tuán)。本領(lǐng)域中已知若干類型的化學(xué)鍵，例如酯、硫酯、硫代酰胺、逆酰胺、還原羰基、二亞甲基及酮基亞甲基鍵一般可用于取代肽鍵構(gòu)建蛋白酶抗性肽模擬物。另一類肽模擬物包括結(jié)合到另一肽或蛋白質(zhì)但未必是天然肽的結(jié)構(gòu)模擬物的非肽小分子。又一類肽模擬物源自于組合化學(xué)性質(zhì)及大型化學(xué)文庫(kù)的產(chǎn)生。這些一般構(gòu)成新穎模板，所述模板雖然在結(jié)構(gòu)上與天然肽不相關(guān)，但在非肽骨架上安置有所需官能團(tuán)以充當(dāng)原始肽的“表面形狀”模擬物(ripka和rich，1998，同前述)。

最先鑒別的天然pif化合物，稱為npif(seqidno:1)是一種具有15個(gè)氨基酸的肽。這種肽的合成形式spif(seqidno:13)顯示de活性類似于天然肽npif(seqidno:i)。這種肽與環(huán)子孢子蛋白質(zhì)(一種瘧疾寄生蟲)的一個(gè)小區(qū)域同源。第二種pif肽(seqidno:7)包含13個(gè)氨基酸并且與一種被鑒別為受體相互作用因子的名為甲狀腺和視黃酸轉(zhuǎn)錄輔阻遏物的大型蛋白質(zhì)(smrt)的一小部分共有同源性；合成形式是spif-2(seqidno:14)。第三種不同的肽npif-3(seqidno:10)由18個(gè)氨基酸組成并且與逆轉(zhuǎn)錄酶的一小部分相配；此肽的合成形式spif-3是(seqidno:15)。npif-4(seqidno:12)與逆轉(zhuǎn)錄酶的一小部分共有同源性。

天然和合成pif肽的清單提供于下表4中。還提供了針對(duì)各種pif肽及亂序pif肽的抗體。

表4.pif肽

在本公開的一些實(shí)施例中，提供一種pif肽。此類pif肽可用于急性輻射綜合癥(ars)、急性輻射暴露的遠(yuǎn)期效應(yīng)或與其相關(guān)的疾患。

在另一個(gè)實(shí)施例中，提供包括pif肽的藥物組合物。在一些實(shí)施例中，所述藥物組合物包括治療有效量的pif肽或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，所述藥物組合物不含包括表4的序列標(biāo)識(shí)符中的任一個(gè)或多個(gè)的肽。在一些實(shí)施例中，所述藥物組合物不含包含seqidno:1或由其組成的肽。

在另一個(gè)實(shí)施例中，提供治療急性輻射綜合癥、急性輻射暴露的遠(yuǎn)期效應(yīng)或與其相關(guān)的疾患的方法。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的pif肽。

在另一實(shí)施例中，提供一種用于治療ars的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的pif肽與一種或多種免疫治療、抗癲癇、利尿或抗高血壓藥物或化合物的組合。此類組合可以增強(qiáng)任一單獨(dú)組分的治療有效性，或者可以提供較低副作用和/或能夠減少任一組分的劑量。

pif-1的作用看來(lái)與作為大部分免疫抑制劑的作用機(jī)制的tcr、鈣通道或pkc路徑，以及在各種自身免疫疾病中相關(guān)的cd4+/cd25+細(xì)胞(treg)細(xì)胞無(wú)關(guān)。另一方面，pif-1的作用可能涉及nfat-1抑制。

最后，在若干不同的重度自身免疫模型中，新穎的胚胎源性肽pif在低劑量下短期治療后建立耐受性狀態(tài)，由此產(chǎn)生長(zhǎng)期的保護(hù)作用。此作用的發(fā)揮無(wú)明顯毒性。

對(duì)于指定適應(yīng)癥的治療性治療，pif肽可以如此施用，或者可以混配并配制成呈單位劑型的藥物組合物以不經(jīng)腸、透皮、直腸、鼻、局部靜脈內(nèi)施用，或優(yōu)選經(jīng)口施用。這些藥物組合物是以本領(lǐng)域中眾所周知的方式制備并且包括至少一種活性pif肽以及藥用載劑。如本說(shuō)明書通篇所使用，術(shù)語(yǔ)“活性化合物”是指至少一種選自所述式的化合物的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在此類組合物中，所述活性化合物稱為“活性成分”。在制備組合物時(shí)，通常將活性成分與載劑混合，或用載劑稀釋，或封裝于呈膠囊、藥囊、紙或其它容器形式的載劑內(nèi)。當(dāng)載劑充當(dāng)稀釋劑時(shí)，其可以是充當(dāng)活性成分的媒劑、介質(zhì)的賦形劑的固體、半固體或液體材料。因此，所述組合物可以呈片劑、丸劑、散劑、口含錠、藥囊、扁膠劑、酏劑、乳液、溶液、糖漿、懸浮液、軟質(zhì)和硬質(zhì)明膠膠囊、無(wú)菌可注射溶液及無(wú)菌帶包裝的散劑的形式。

術(shù)語(yǔ)“藥物制劑”和“藥物組合物”包含適于施用給哺乳動(dòng)物，例如人類的制劑。當(dāng)將本公開的化合物作為藥物施用給哺乳動(dòng)物，例如人類時(shí)，其可以原樣給與或以含有例如約0.1至約99.5％的活性成分以及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物形式給與。

短語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指分子實(shí)體和組合物當(dāng)施用給人類時(shí)是生理上可耐受的并且典型地不會(huì)產(chǎn)生過(guò)敏或類似不良反應(yīng)，如反胃、頭昏眼花等。優(yōu)選地，如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”意思指得到聯(lián)邦監(jiān)管機(jī)構(gòu)或州政府批準(zhǔn)或在美國(guó)藥典或其它公認(rèn)的藥典中列出適用于動(dòng)物，并且更確切地說(shuō)適用于人類。在一些實(shí)施例中，所述藥物組合物包括pif肽、其模擬物或藥學(xué)上可接受的鹽及至少一種藥學(xué)上可接受的載劑。

短語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載劑”是技術(shù)公認(rèn)的并且包含適于將本公開的化合物施用給哺乳動(dòng)物的藥學(xué)上可接受的材料、組合物或媒劑。所述載劑包含將主題藥劑從一個(gè)器官或身體部分載運(yùn)或轉(zhuǎn)運(yùn)至另一器官或身體部分所涉及的液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料。每一載劑在與配制物的其它成分相容且對(duì)患者無(wú)害的意義上必須是“可接受的”?？梢猿洚?dāng)藥學(xué)上可接受的載劑的材料的一些實(shí)例包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素和其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；粉末狀黃芪膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，如可可脂和栓劑蠟；油，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無(wú)熱原質(zhì)水；等滲生理鹽水；林格氏溶液(ringer'ssolution)；乙醇；磷酸鹽緩沖溶液；以及藥物配制物中采用的其它無(wú)毒相容性物質(zhì)。適合藥物載劑描述于e.w.martin的《雷明頓藥物科學(xué)(remington'spharmaceuticalsciences)》中，所述文獻(xiàn)以全文引用的方式并入本文中。在一些實(shí)施例中，藥學(xué)上可接受的載劑是無(wú)菌并且無(wú)熱原質(zhì)的水。在一些實(shí)施例中，藥學(xué)上可接受的載劑是林格氏乳酸鹽，有時(shí)稱為乳酸林格氏溶液。

潤(rùn)濕劑、乳化劑及潤(rùn)滑劑(如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂)以及著色劑、脫模劑、包覆劑、甜味劑、調(diào)味劑及芳香劑、防腐劑和抗氧化劑也可以存在于所述組合物中。

藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實(shí)例包含：水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；油溶性抗氧化劑，如棕櫚酸抗壞血基酯、丁基化羥基大茴香醚(bha)、丁基化羥基甲苯(bht)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；及金屬螯合劑，如檸檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

本公開的配制物包含適于經(jīng)口、鼻、表面、經(jīng)頰、舌下、直腸、經(jīng)陰道和/或不經(jīng)腸施用的那些。這些配制物可以合宜地呈單位劑型，并且可以通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的任何方法來(lái)制備?？梢耘c載劑材料組合以制造單一劑型的活性成分的量一般將是產(chǎn)生治療作用的化合物的量。一般來(lái)說(shuō)，以百分之一百計(jì)，此量將在約1％到約99％，優(yōu)選約5％到約70％，最優(yōu)選約10％到約30％活性成分范圍內(nèi)。

適合載劑、賦形劑和稀釋劑的一些實(shí)例包含乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、海藻酸鹽、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、黃芪膠、明膠、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂、水以及礦物油。所述配制物可以另外包含潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑和懸浮劑、防腐劑、甜味劑或調(diào)味劑。所述組合物可以被配制成在采用本領(lǐng)域眾所周知的程序施用給患者之后，提供活性成分的快速、持續(xù)或延遲釋放。

對(duì)于經(jīng)口施用，可以將化合物與載劑和稀釋劑混合，模制成片劑，或封裝于明膠膠囊中?；蛘?，可以將混合物溶解于如10％葡萄糖水溶液、等滲生理鹽水、無(wú)菌水等液體中，并靜脈內(nèi)或通過(guò)注射施用。

可以利用在靶部位或靠近靶部位處施用化合物的多種技術(shù)局部遞送抑制量的活性化合物以治療免疫病癥。局部遞送技術(shù)的實(shí)例不打算作為限制，而是對(duì)可用技術(shù)的說(shuō)明。實(shí)例包含局部遞送導(dǎo)管、位點(diǎn)特異性載體、植入物、直接注射，或直接涂覆，如表面涂覆。

通過(guò)植入物局部遞送描述將含有藥劑的基質(zhì)手術(shù)放置于感染部位中。植入的基質(zhì)通過(guò)擴(kuò)散、化學(xué)反應(yīng)或溶劑活化劑釋放藥劑。

舉例來(lái)說(shuō)，在一些方面，本公開針對(duì)一種包括pif肽及藥學(xué)上可接受的載劑或稀釋劑的藥物組合物，或有效量的包括pif肽的藥物組合物。

具體施用方式將取決于適應(yīng)癥。具體施用途徑及劑量方案的選擇應(yīng)由臨床醫(yī)師根據(jù)臨床醫(yī)師已知的方法調(diào)整或滴定以便獲得最佳臨床反應(yīng)。欲施用的化合物的量是治療有效的量。欲施用的劑量將取決于所治療的受試者的特征，例如所治療的特定哺乳動(dòng)物或人類、年齡、體重、健康狀況、同時(shí)治療(如果存在的話)的類型及治療頻率，并且可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員(例如，臨床醫(yī)師)容易地確定。

含有本公開的化合物及適合載劑的藥物配制物可以是固體劑型，包含但不限于，片劑、膠囊、扁膠劑、團(tuán)粒、丸劑、散劑及顆粒劑；表面用劑型，包含但不限于，溶液、散劑、流體乳液、流體懸浮液、半固體、軟膏、糊劑、乳膏、凝膠劑及泡沫劑；及不經(jīng)腸劑型，包含但不限于，溶液、懸浮液、乳液及干粉；其包括有效量的本公開的聚合物或共聚物。另外，本領(lǐng)域中已知此類配制物中可以含有活性成分以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑、填充劑、崩解劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、表面活性劑、疏水性媒劑、水溶性媒劑、乳化劑、緩沖劑、保濕劑、增濕劑、增溶劑、防腐劑等。施用的方式和方法是本領(lǐng)域中已知并且從業(yè)者可以參考各種藥理學(xué)參考文獻(xiàn)的指導(dǎo)。舉例來(lái)說(shuō)，可以查詢《現(xiàn)代藥劑學(xué)(modernpharmaceutics)》,banker和rhodes,marceldekker,inc.(1979)；及《goodman&gilman治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)(goodman&gilman'sthepharmaceuticalbasisoftherapeutics)》,第6版,macmillanpublishingco.,紐約(1980)。

本公開的化合物可以被配制成通過(guò)注射，例如通過(guò)推注或連續(xù)輸注不經(jīng)腸施用。所述化合物可以通過(guò)經(jīng)預(yù)定時(shí)間段連續(xù)皮下輸注來(lái)施用。用于注射的配制物可以呈例如在安瓿或多劑量容器中的單位劑型，其中添加有防腐劑。所述組合物可以呈如于油性或水性媒劑中的懸浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑等配制劑。

對(duì)于經(jīng)口施用，可以通過(guò)將這些化合物與本領(lǐng)域中眾所周知的藥學(xué)上可接受的載劑組合，容易地配制所述化合物。此類載劑使本公開的化合物能配制成片劑、丸劑、糖衣藥丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等形式，以供待治療患者口服攝取。可以通過(guò)添加固體賦形劑，任選地研磨所得混合物，并處理顆?；旌衔铮匾獣r(shí)，改變添加適合助劑，以獲得片劑或糖衣藥丸核心，來(lái)獲得供口服使用的藥物制劑。適合賦形劑包含但不限于，填充劑，如糖，包含但不限于，乳糖、蔗糖、甘露糖醇及山梨糖醇；纖維素制劑，如但不限于，玉米淀粉、小麥淀粉、稻谷淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及聚乙烯吡咯烷酮(pvp)。必要時(shí)，可以添加崩解劑，如但不限于，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸，或其鹽，如海藻酸鈉。

糖衣藥丸核可以具有適合包衣。為此目的，可以使用濃糖溶液，其可以任選地含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波莫凝膠(carbopolgel)、聚乙二醇和/或二氧化鈦、亮漆溶液，及適合的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。片劑或糖衣藥丸包衣中可以添加染料或顏料以標(biāo)識(shí)或表征活性化合物劑量的不同組合。

可以口服使用的藥物制劑包含但不限于，明膠制成的推入配合膠囊，以及由明膠和塑化劑，如甘油或山梨糖醇制成的軟質(zhì)帶刻度膠囊。推入配合膠囊可以含有活性成分與填充劑(如乳糖)、粘合劑(如淀粉)和/或潤(rùn)滑劑(如滑石或硬脂酸鎂)以及任選使用的穩(wěn)定劑的混合物。在軟質(zhì)膠囊中，活性化合物可以溶解或懸浮于適合液體，如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中。此外，可以添加穩(wěn)定劑。經(jīng)口施用的所有配制物應(yīng)呈適于此類施用的劑量。

對(duì)于經(jīng)頰施用，組合物可以呈以常規(guī)方式配制的例如錠劑或口含錠形式。

對(duì)于經(jīng)吸入施用，根據(jù)根據(jù)本公開使用的活性成分宜使用適合推進(jìn)劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適合氣體，以自加壓包裝或噴霧器提供的氣霧劑噴霧形式遞送。在加壓氣霧劑的情況下，可以通過(guò)提供閥遞送計(jì)量數(shù)量來(lái)測(cè)定劑量單位?？梢耘渲坪兴龌衔锱c適合粉末基質(zhì)(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的例如明膠膠囊和藥筒以用于吸入器或吹入器中。

本公開的化合物還可以配制成例如含有常規(guī)栓劑基質(zhì)(如可可脂或其它甘油酯)的直腸組合物，如栓劑或保留灌腸劑形式。

除先前描述的配制物外，本公開的化合物也可以配制成積存式制劑形式。這類長(zhǎng)效配制物可以通過(guò)植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過(guò)肌肉內(nèi)注射施用。

積存式注射液可以按約1至約6個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間間隔施用。因此，舉例來(lái)說(shuō)，所述化合物可以用適合聚合材料或疏水性材料(例如于可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂，或呈微溶性衍生物形式，例如呈微溶性鹽形式配制。

在透皮施用時(shí)，本公開的化合物例如可以施加至硬膏劑中，或者可以通過(guò)透皮治療系統(tǒng)施加，由此供應(yīng)給生物體。

化合物的藥物組合物還可以包括適合固體或凝膠相載劑或賦形劑。此類載劑或賦形劑的實(shí)例包含但不限于，碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖淀粉、纖維素衍生物、明膠及聚合物，如聚乙二醇。

對(duì)于不經(jīng)腸施用，類似物可以例如與藥學(xué)上可接受的不經(jīng)腸媒劑結(jié)合，調(diào)配成溶液、懸浮液、乳液或凍干粉形式。這類媒劑的實(shí)例是水、生理鹽水、林格氏溶液、右旋糖溶液及5％人類血清白蛋白。還可以使用脂質(zhì)體和非水性媒劑，如不揮發(fā)性油。媒劑或凍干粉可以含有維持等滲性(例如氯化鈉、甘露糖醇)和化學(xué)穩(wěn)定性(例如緩沖劑和防腐劑)的添加劑。所述配制物通過(guò)常用技術(shù)殺菌。舉例來(lái)說(shuō)，適于通過(guò)注射施用的不經(jīng)腸組合物是通過(guò)將以重量計(jì)1.5％的類似物溶解于0.9％氯化鈉溶液中來(lái)制備。

本公開涉及施用途徑，包含肌肉內(nèi)、舌下、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、陰道內(nèi)、尿道內(nèi)、皮內(nèi)、頰內(nèi)、經(jīng)由吸入、經(jīng)由噴霧劑及經(jīng)由皮下注射施用?；蛘?，可以通過(guò)各種方式將藥物組合物引入自個(gè)體移除的細(xì)胞中。此類方式包含例如微彈轟擊及脂質(zhì)體或其它納米粒子裝置。

供經(jīng)口施用的固體劑型包含膠囊、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在固體劑型中，類似物一般與至少一種惰性藥學(xué)上可接受的載劑，如蔗糖、乳糖、淀粉或其它一般被認(rèn)為安全(gras)的添加劑混合。與常規(guī)實(shí)踐相同，此類劑型還可以包括除惰性稀釋劑外的額外物質(zhì)，例如潤(rùn)滑劑，如鎂狀態(tài)(magnesiumstate)。對(duì)于膠囊、片劑及丸劑，這些劑型還可以包括緩沖劑。片劑和丸劑可以另外使用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)，用腸溶包衣或以控制釋放形式制備。

供經(jīng)口施用的液體劑型包含藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液及糖漿，其中酏劑含有本領(lǐng)域中常用的惰性稀釋劑，如水。這些組合物還可以包含一種或多種佐劑，如潤(rùn)濕劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑或芳香劑。

在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，使用本發(fā)明的組合物治療患有或易患i型成人幼年型糖尿病、多發(fā)性硬化、克羅恩氏病(crohn's)或自身免疫性肝炎的患者。

本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，所述組合物和藥物組合物的適當(dāng)劑量可以取決于所治療的個(gè)體及目的而變化。舉例來(lái)說(shuō)，個(gè)別患者的年齡、體重及病史可能影響療法的治療功效。另外，可能需要較低劑量的組合物使癥狀短暫終止，而可能可以較大劑量使與疾病、病癥或適應(yīng)癥有關(guān)的癥狀完全終止。合格的醫(yī)生可以考慮這些因素并調(diào)整給藥方案以確保劑量實(shí)現(xiàn)所希望的治療結(jié)果，而無(wú)需過(guò)度實(shí)驗(yàn)。另外，應(yīng)注意，臨床醫(yī)師和/或治療醫(yī)師結(jié)合個(gè)別患者的反應(yīng)將了解如何并且何時(shí)中斷、調(diào)整和/或終止療法。劑量也可以取決于選擇用于藥物組合物的特定類似物的濃度。

所述組合物或藥物組合物的劑量可以變化。組合物的劑量可以是每天一次。在一些實(shí)施例中，可以向受試者每天施用多次劑量。在一些實(shí)施例中，總劑量是以至少兩個(gè)施加時(shí)間段施用。在一些實(shí)施例中，所述時(shí)間段可以是一小時(shí)、一天、一個(gè)月、一年、一周或兩周時(shí)間。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，總劑量是以兩個(gè)或多于兩個(gè)獨(dú)立施加時(shí)間段，或在一小時(shí)、一天、一個(gè)月、一年、一周或兩周時(shí)間段內(nèi)以獨(dú)立劑量施用。

在一些實(shí)施例中，可以向受試者施用組合物，其中所述組合物是以每公斤受試者體重約0.0001mg至約5000mg范圍內(nèi)的日劑量提供。施用給受試者的劑量也可以關(guān)于每天施用的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的總量度量。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用約0.001至約3000毫克pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約2000毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1800毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1600毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1400毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1200毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1000毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約800毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑約0.001毫克至約700毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約700毫克的pif肽或pif類似物。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約600毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約500毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約400毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約300毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約200毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約100毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約50毫克的pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一些實(shí)施例中，可以向受試者施用組合物，其中包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重約0.0001mg至約5000mg的日劑量范圍施用。在一些實(shí)施例中，包括pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約450mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約400mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約350mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約300mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約250mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約200mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約150mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約100mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約50mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約25mg的日劑量施用。

在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約10mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約5mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約1mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif肽或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約0.1mg的日劑量施用。

在一些實(shí)施例中，包括pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約0.01mg的日劑量施用。在一些實(shí)施例中，包括pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物是以每公斤受試者體重至多約0.001mg的日劑量施用。施用給受試者的劑量也可以關(guān)于每天施用的pif肽或pif類似物的總量度量。

在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約1ng至約500μg類似物或其藥用鹽在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約1ng至約10ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約10ng至約20ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約10ng至約100ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約100ng至約200ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約200ng至約300ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約300ng至約400ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約400ng至約500ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約500ng至約600ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約600ng至約700ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約800ng至約900ng類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約900ng至約1μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約1μg至約100μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約100μg至約200μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約200μg至約300μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約300μg至約400μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約400μg至約500μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約500μg至約600μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約600μg至約700μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約800μg至約900μg類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約900μg至約1mg類似物或其藥用鹽

在一些實(shí)施例中，每天向有需要的受試者施用約.0001至約3000毫克pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約2000毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1800毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1600毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1400毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1200毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約1000毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，每天向受試者施用至多約800毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑約0.0001毫克至約700毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約700毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約600毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約500毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約400毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約300毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約200毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約100毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約50毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約25毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約15毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。

在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約10毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約5毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約1毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約0.1毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。在一些實(shí)施例中，向受試者施用每劑至多約0.001毫克的pif肽或pif類似物或其藥用鹽。

施用給受試者的劑量也可以關(guān)于每盎司所知不多液體施用的pif肽或pif類似物或其藥用鹽的總量度量。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約2.5克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約2.25克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約2.25克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約2.0克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.9克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.8克。在一些實(shí)施例中，pif肽或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.7克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.6克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.5克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.4克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.3克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.2克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.1克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約1.0克。

在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.9克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.8克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.7克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.6克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.5克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.4克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.3克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.2克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.1克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司溶液約0.01克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司所制備的溶液約0.001克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司所制備的溶液約0.0001克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司所制備的溶液約0.00001克。在一些實(shí)施例中，pif肽或pif類似物或其藥用鹽的濃度是每盎司所制備的溶液約0.000001克。

劑量可以關(guān)于每升所知不多液體配制物類似物的質(zhì)量度量。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以取決于治療預(yù)防與治療有需要的受試者有關(guān)的任何以上提及的病癥所希望的生物活性強(qiáng)度增加或降低劑量中類似物的濃度。舉例來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的一些實(shí)施例可以包含每5ml液體配制物至多0.00001克類似物并且每5ml液體配制物至多約10克類似物。

在一些實(shí)施例中，除pif肽、其藥學(xué)上可接受的鹽的類似物外，所要求的發(fā)明的藥物組合物還包括至少一種或多種活性劑。在一些實(shí)施例中，活性劑任選地通過(guò)蛋白酶可裂解連接子(包含但不限于，pro-pro或瓜氨酸-纈氨酸二-α-氨基酸連接子)共價(jià)連接至本文中所公開的pif肽或pif類似物。在一些實(shí)施例中，所述一種或多種活性劑是選自以下的化合物之一或其組合：消炎化合物、α-腎上腺素激動(dòng)劑、抗心律失?；衔铩㈡?zhèn)痛化合物及麻醉化合物。

表5

消炎化合物的實(shí)例包含：

阿司匹林

塞內(nèi)昔布(celecoxib)

雙氯芬酸(diclofenac)

二氟尼柳(diflunisal)

依托度酸(etodolac)

布洛芬(ibuprofen)

吲哚美辛(indomethacin)

酮洛芬(ketoprofen)

酮咯酸萘丁美酮(ketorolacnabumetone)

萘普生(naproxen)

奧沙普嗪(oxaprozin)

吡羅昔康(piroxicam)

雙柳酸酯(salsalate)

舒林酸(sulindac)

托美丁(tolmetin)

α-腎上腺素能激動(dòng)劑的實(shí)例包含：

美速胺(methoxamine)

甲基去甲腎上腺素(methylnorepinephrine)

米多君(midodrine)

羥甲唑啉(oxymetazoline)

間羥胺(metaraminol)

苯腎上腺素

可樂(lè)定(clonidine)(混合的α2-腎上腺素能激動(dòng)劑和咪唑啉-i1受體激動(dòng)劑)

胍法新(guanfacine)(優(yōu)選α2a亞型腎上腺素受體)

胍那芐(guanabenz)(選擇性最強(qiáng)的α2-腎上腺素能激動(dòng)劑，與咪唑啉-i1相對(duì))

胍諾沙芐(guanoxabenz)(胍那芐的代謝物)

胍乙啶(guanethidine)(周圍α2-受體激動(dòng)劑)

甲苯噻嗪(xylazine)

替扎尼定(tizanidine)

美托咪啶(medetomidine)

甲基多巴(methyldopa)

法度咪定(fadolmidine)

右美托咪啶(dexmedetomidine)

抗心律失?；衔锏膶?shí)例包含：

胺碘酮(amiodarone)(cordarone、pacerone)

鹽酸芐普地爾(bepridilhydrochloride)(vascor)

丙吡胺(disopyramide)(norpace)

多非利特(dofetilide)(tikosyn)

決奈達(dá)隆(dronedarone)(multaq)

氟卡尼(flecainide)(tambocor)

伊布利特(ibutilide)(corvert)

利多卡因(lidocaine)(xylocaine)

普魯卡因胺(procainamide)(procan、procanbid)

普羅帕酮(propafenone)(rythmol)

普萘洛爾(propranolol)(inderal)

奎尼丁(quinidine)(許多商品名)

索他洛爾(sotalol)(betapace)

妥卡尼(tocainide)(tonocarid)

鎮(zhèn)痛化合物的實(shí)例包含：

可待因(codeine)

氫可酮(hydrocodone)(zohydroer)

羥考酮(oxycodone)(oxycontin、roxicodone)

美沙酮(methadone)

氫嗎啡酮(hydromorphone)(dilaudid、exalgo)

嗎啡堿(morphine)(avinza、kadian、msir、mscontin)及

芬太尼(fentanyl)(actiq、duragesic)

麻醉化合物的實(shí)例包含：

地氟烷(desflurane)

異氟烷(isoflurane)

氧化亞氮

七氟醚

氙

本公開的化合物也可以與其它活性成分，如例如佐劑或其它相容的藥物或化合物組合施用，其中發(fā)現(xiàn)此類組合在實(shí)現(xiàn)本文所描述的方法的所希望的作用方面是合乎需要的或有利的。當(dāng)在移植之前，使pif肽暴露于任何細(xì)胞、組織或器官時(shí)，暴露可以是從約1至約12小時(shí)的任何時(shí)間。在一些實(shí)施例中，在移植之前使pif暴露以預(yù)處理細(xì)胞的步驟是約2至約4小時(shí)。在一些實(shí)施例中，在移植之前暴露pif以預(yù)處理細(xì)胞的步驟是約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時(shí)，或更長(zhǎng)時(shí)間。在一些實(shí)施例中，在移植之前使pif暴露于器官、組織或細(xì)胞的步驟是在移植之前從約1至約48小時(shí)的任何時(shí)間發(fā)生。在一些實(shí)施例中，在移植之前使pif暴露于器官、組織或細(xì)胞的步驟是在發(fā)生移植之前約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、35、45或約50小時(shí)發(fā)生。在一些實(shí)施例中，pif肽暴露于器官、組織或細(xì)胞的時(shí)間和條件足以增加所述器官、組織或細(xì)胞的活力，增加成功移植的可能性，降低受體接受性。在一些實(shí)施例中，使所述器官、組織或細(xì)胞暴露于本文中所公開的藥物組合物之一或其組合不低于1、2、3、4、5、6、7、8、910小時(shí)和/或在約室溫下。在一些實(shí)施例中，使所述器官、組織或細(xì)胞暴露于本文中所公開的藥物組合物之一或其組合不低于1、2、3、4、5、6、7、8、910小時(shí)和/或在約4攝氏度下。在一些實(shí)施例中，在約4攝氏度至約40攝氏度下，使所述器官、組織或細(xì)胞暴露于本文中所公開的藥物組合物之一或其組合。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“急性輻射綜合癥”和“急性輻射疾病”可互換使用以指與暴露于致死性或亞致死性輻射有關(guān)的任何急性或慢性癥狀。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“胰島細(xì)胞”是指來(lái)自胰臟任何產(chǎn)激素區(qū)域的細(xì)胞。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“造血細(xì)胞”是指可以在生物體內(nèi)產(chǎn)生任何類型的血細(xì)胞的任何細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，造血細(xì)胞是造血干細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，造血細(xì)胞是能夠分化成血細(xì)胞的多能前驅(qū)細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，造血細(xì)胞是骨髓細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，造血細(xì)胞是由誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞、胚胎細(xì)胞或間充質(zhì)細(xì)胞分化的血細(xì)胞。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“腎上腺細(xì)胞”是指來(lái)自腎上腺任何產(chǎn)激素區(qū)域的任何細(xì)胞。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“心臟細(xì)胞”是指來(lái)自心臟或血管的任何部分的任何細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，造血細(xì)胞是由誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞或間充質(zhì)干細(xì)胞分化的心臟細(xì)胞。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“預(yù)處理”是指在移植或使用之前，處理器官、組織或細(xì)胞的方法。任何器官、組織或細(xì)胞可以被預(yù)處理一次或多次。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“腎上腺細(xì)胞病癥”是指任何腎上腺細(xì)胞的任何功能異常，和/或與此類功能異常有關(guān)的癥狀。在一些實(shí)施例中，腎上腺細(xì)胞病癥是需要腎上腺細(xì)胞移植的庫(kù)欣氏病(cushing'sdisease)。在一些實(shí)施例中，所述病癥是需要腎上腺細(xì)胞移植的任何疾病。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“血液病癥”是指任何血液或血液成分的任何功能異常，和/或與此類功能異常有關(guān)的癥狀。在一些實(shí)施例中，血液病癥是血液癌癥，如白血病。在一些實(shí)施例中，受試者可能患有或懷疑患有免疫病癥，如多發(fā)性硬化或克羅恩氏病，由此移植骨髓或循環(huán)免疫細(xì)胞群可以治療或預(yù)防所述疾病的發(fā)展。

如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“心臟病癥”是指任何心臟或心臟成分的任何功能異常，和/或與此類功能異常有關(guān)的癥狀。在一些實(shí)施例中，心臟病癥是充血性心臟衰竭。

本發(fā)明的實(shí)施例是針對(duì)使用pif治療急性輻射綜合癥(ars)。在某些實(shí)施方案中，治療ars的方法包括將pif肽施用給有需要的受試者、組織、器官或細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，ars可以由有意暴露于輻射引起，例如在用于治療癌癥的輻射療法的情況下。在一些實(shí)施例中，pif可以在輻射療法之前、之后或同時(shí)施用，或其組合。在一些實(shí)施例中，ars可以由無(wú)意暴露于輻射引起。在一些實(shí)施例中，在暴露于輻射之后治療ars的方法可以包括將pif施用給有需要的受試者組織、器官或細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，治療輻射誘導(dǎo)的器官破壞的方法可以包括將pif施用給有需要的受試者組織、器官或細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述器官破壞可以是針對(duì)體內(nèi)任何器官。在一些實(shí)施例中，器官破壞可以是針對(duì)體內(nèi)的重要器官。在一些實(shí)施例中，器官破壞可以是對(duì)皮膚、腦、心臟、肺、腎臟、脾、肝、胃腸道或胰臟的破壞。在一些實(shí)施例中，治療急性輻射暴露的遠(yuǎn)期效應(yīng)(deare)的方法可以包括將pif施用給有需要的受試者、組織、器官或細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，在暴露于輻射之后抑制或預(yù)防ars發(fā)生的方法可以包括將pif施用給有需要的受試者組織、器官或細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，治療ars的方法可以包括將骨髓移植至有需要的受試者中，其中使所述骨髓在移植之前暴露于pif。在一些實(shí)施例中，受試者不接受器官、組織或細(xì)胞移植。在一些實(shí)施例中，受試者不接受骨髓移植。

一些實(shí)施例是針對(duì)使用pif作為免疫調(diào)節(jié)劑以改善自體移植、同種異體移植、半同種異體移植或異種移植中骨髓或任何其它器官、組織或細(xì)胞的接受性。骨髓或其它器官、組織或細(xì)胞的接受性的改善可以使移植患者的存活率增加并使自體移植、同種異體移植、半同種異體移植及異種移植的應(yīng)用更廣泛。一些實(shí)施例是針對(duì)增加移植的器官、組織或細(xì)胞的移入的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用pif肽。一些實(shí)施例是針對(duì)一種增加移植的器官、組織或細(xì)胞的移入的方法，所述方法包括在移植之前，使所述器官、組織或細(xì)胞預(yù)先暴露于pif肽。在一些實(shí)施例中，所述受試者可能需要所述器官、組織或細(xì)胞移植以治療ars。

在一些實(shí)施例中，在暴露于輻射治療患有癌癥的受試者的ars的方法包括向所述受試者施用pif。在一些實(shí)施例中，受試者暴露于輻射可能是有意的，如當(dāng)使用輻射療法治療癌癥時(shí)。在一些實(shí)施例中，所述患有癌癥的受試者在施用pif之前、期間或之后將不會(huì)接受骨髓或任何其它器官的移植。

在一些實(shí)施例中，在暴露于輻射之后防止趨化因子和細(xì)胞因子的表達(dá)升高的方法包括向有需要的受試者施用pif。在一些實(shí)施例中，在暴露于輻射之后改善免疫細(xì)胞功能的方法包括向有需要的受試者施用pif。在一些實(shí)施例中，pif可以是自施用的。在一些實(shí)施例中，在暴露于輻射之后增加肝功能的方法包括向有需要的受試者施用pif。在一些實(shí)施例中，在暴露于輻射之后使肝酶水平正常化的方法包括向有需要的受試者施用pif。在一些實(shí)施例中，治療或預(yù)防輻射的隨機(jī)效應(yīng)的方法可以包括向有需要的受試者施用pif。在一些實(shí)施例中，輻射的隨機(jī)效應(yīng)可以包含癌癥、腫瘤、基因破壞或其組合。

在一些實(shí)施例中，pif可以作為預(yù)防來(lái)施用，作為伴隨藥物來(lái)施用，在暴露之后立即來(lái)施用，在器官破壞之后來(lái)施用或其組合。在此類實(shí)施例中pif可以是有效的ars/deare對(duì)策，涵蓋的破壞范圍從不存在事件前信息的情形，及擴(kuò)展到遲來(lái)的信息變得可用并且破壞已發(fā)生的情形。在一些實(shí)施例中，當(dāng)顯示pif防止作為常見的急性輻射暴露的遠(yuǎn)期效應(yīng)(deare)的移植物抗宿主(gvhd)以及移植物抗白血病(gvl)時(shí)，pif不僅可以解決免疫問(wèn)題，如ars中存在的那些，而且還可以解決一般由于此類輻射暴露并且甚至是在移植后的稍后時(shí)間發(fā)生的相關(guān)病理問(wèn)題(器官破壞)。在其它情形中，如果在可以預(yù)防性施用pif時(shí)存在虛假或非具體信息，則可以預(yù)期極少或無(wú)不良反應(yīng)，由此相信pif固有地?zé)o毒。

在前述實(shí)施例中，暴露于輻射可以包含暴露于致死性劑量的輻射。在前述實(shí)施例中，暴露于可以包含暴露于非致死性劑量的輻射。在前述實(shí)施例中，輻射劑量可以是約100rads至約3000rads、約200rads至約3000rads、約500rads至約3000rads、約800rads至約3000rads、約1000rads至約3000rads、100rads至約1000rads、約200rads至約1000rads、約500rads至約1000rads、約100rads至約5000rads或約100rads至約6000rads，及在這些值中的任一個(gè)之間的任何范圍，包含終點(diǎn)在內(nèi)。

在前述實(shí)施例中，pif肽可以在暴露于輻射之前、同時(shí)或之后施用。

在一些實(shí)施例中，pif肽是以治療有效量施用或預(yù)先暴露。在一些實(shí)施例中，pif肽是在受試者進(jìn)行移植之后、受試者進(jìn)行移植之前、受試者進(jìn)行移植的同時(shí)施用，或其組合。在一些實(shí)施例中，受試者可以接受二次治療，所述次級(jí)治療可以包含在受試者進(jìn)行移植之前、受試者進(jìn)行移植的同時(shí)二次施用肽，或其組合。

在前述實(shí)施例中，pif肽的施用劑量可以是每天約0.01mg/kg、每天約0.1mg/kg、每天約0.5mg/kg、每天0.75mg/kg、每天1mg/kg、每天2mg/kg、每天4mg/kg、每天6mg/kg、每天8mg/kg、每天10mg/kg、每天約20mg/kg，或在這些值中任一個(gè)之間的任何范圍，包含終點(diǎn)在內(nèi)。此類劑量可以在一天內(nèi)以單次劑量或以分次劑量施用。

在前述實(shí)施例中，pif可以一次施用，持續(xù)有限時(shí)間段，或作為維持療法施用(持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間段直至疾患得到改善、治愈，或持續(xù)受試者終生)。有限時(shí)間段可以是1周、2周、3周、4周并且至多一年，包含在這些值之間的任何時(shí)間段，包含終點(diǎn)在內(nèi)。在一些實(shí)施例中，pif肽可以施用約1天、約3天、約1周、約10天、約2周、約18天、約3周或在這些值中任一個(gè)之間的任何范圍，包含終點(diǎn)在內(nèi)。

在前述實(shí)施例中，pif可以每日一次、每日兩次、每日三次、每日四次或更頻繁地施用。

在前述實(shí)施例中，pif肽可以在暴露于輻射之前、暴露于輻射的約6小時(shí)內(nèi)、暴露于輻射的約12小時(shí)內(nèi)、暴露于輻射的約18小時(shí)內(nèi)、暴露于輻射的約24小時(shí)內(nèi)、暴露于輻射的約30小時(shí)內(nèi)、暴露于輻射的約36小時(shí)內(nèi)、暴露于輻射的約42小時(shí)內(nèi)、暴露于輻射的約48小時(shí)內(nèi)或在這些值中的任一個(gè)之間的任何范圍(包含終點(diǎn)在內(nèi))內(nèi)施用。

在一些實(shí)施例中，pif是以包括如上文所定義的pif肽和藥學(xué)上可接受的載劑或稀釋劑的藥物組合物，或有效量的包括如上文所定義的化合物的藥物組合物形式施用或提供。

本文中所公開的方法可以與本文中所公開的化合物、組合物、制劑及試劑盒中的任一種一起使用。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及用于治療急性輻射綜合癥的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的本文所描述的組合物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及用于在輻射暴露之后治療急性輻射綜合癥的方法，所述方法包括向有需要的受試者移植骨髓，其中所述骨髓預(yù)先暴露于有效量的本文所描述的組合物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及用于增加移植的器官、組織或細(xì)胞的移入的方法，所述方法包括將器官、組織或細(xì)胞移植至有需要的受試者體內(nèi)，其中所述器官、組織或細(xì)胞在移植之前預(yù)先暴露于有效量的本文所描述的組合物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種增加受試者體內(nèi)接受供體器官、組織或細(xì)胞移植的可能性的方法，所述方法包括在將所述器官、組織或細(xì)胞移植至受試者體內(nèi)之前，使所述器官、組織或細(xì)胞暴露于一種或多種本文所描述的組合物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種降低移入的組織排斥的可能性的方法，所述方法包括在將所述組織移植至受試者體內(nèi)之前，使所述組織暴露于一種或多種本文所描述的組合物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種增加造血細(xì)胞數(shù)量消減的受試者中造血細(xì)胞的產(chǎn)生的方法，所述方法包括施用一種或多種本文所描述的藥物組合物。

在一個(gè)實(shí)施例中，一天一次向有需要的受試者施用組合物。在另一個(gè)實(shí)施例中，每隔一天、每隔兩天或一周一次施用組合物。在另一實(shí)施例中，一天兩次施用組合物。在又另一實(shí)施例中，一天三次或一天四次施用組合物。在另一實(shí)施例中，一天至少一次施用組合物，持續(xù)至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周。在又另一個(gè)實(shí)施例中，一天至少一次施用組合物，持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，如至少4、6、8、10、12或24個(gè)月。在一些實(shí)施例中，施用包含但不限于，以每天最少1、2、3或4次的頻率施用10-50mg劑量的組合物。在一些實(shí)施例中，一周一次、每隔一周一次或一個(gè)月一次施用組合物。任選地，持續(xù)施用直至所有癥狀都被醫(yī)務(wù)人員解決和清除。

在一些實(shí)施例中，組合物是在暴露于輻射的1、2、3、5或7天內(nèi)施用。在其它實(shí)施例中，組合物是在出現(xiàn)ars癥狀的1、2、3、5或7天內(nèi)施用。

在一些實(shí)施例中，一天至少一次施用所述組合物，直至疾患改善達(dá)到不需要進(jìn)一步治療的情形。在另一個(gè)實(shí)施例中，施用組合物直至所述疾患的所有癥狀都得到解決。在其它實(shí)施例中，組合物在受試者無(wú)癥狀之后仍施用至少1、2、3、6、8、10或12或24個(gè)月。

本公開的組合物當(dāng)被施用以治療急性輻射綜合癥，以及在移植之前預(yù)處理器官、細(xì)胞或組織時(shí)是有用并且有效的。組合物中所存在的每一組分的量將是治療有效的量，即，當(dāng)施用時(shí)會(huì)引起對(duì)所述疾患(例如，ars)的有效治療的量。治療有效量將取決于受試者以及損傷的嚴(yán)重程度和性質(zhì)而變化并且可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員常規(guī)地確定。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種治療或預(yù)防美國(guó)專利號(hào)7,723,289、7,723,290、8,222,211、8,454,967、9,097,725(各自以全文引用的方式并入)中所闡述的任一種適應(yīng)癥的方法，所述方法包括施用包括本文中所公開的任一種或多種pif肽、類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物或藥物組合物。

在一些方法中，本公開涉及一種刺激有需要的受試者體內(nèi)的干細(xì)胞分化和/或增殖的方法，所述方法包括施用包括本文中所公開的任一種或多種pif肽、類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物或藥物組合物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及美國(guó)專利號(hào)7,273,708、7,695,977、7,670,852、7,670,851、7,678,582、7,670,850、8,012,700(各自以全文引用的方式并入)中所公開的方法中的任一種，所述方法包括施用包括本文中所公開的任一種或多種pif肽、類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物或藥物組合物。本公開還以全文引用的方式并入美國(guó)專利號(hào)7,789,289、7,723,290、8,222,211及8,454,967。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種用于治療急性輻射綜合癥的藥物組合物，所述藥物組合物包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及治療有效量或劑量的本文中所公開的任一種或多種組合物的用途，所述藥物組合物包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑，其用于制造在移植之前預(yù)處理器官、組織或細(xì)胞的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于制造供治療急性輻射綜合癥的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及當(dāng)受試者患有或懷疑患有急性輻射綜合癥時(shí)，在有需要的受試者中誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)作用的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的至少一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療急性輻射綜合癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用治療有效量或劑量的包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療急性輻射綜合癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物來(lái)治療急性輻射綜合癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種用于治療急性輻射綜合癥的藥物組合物，所述藥物組合物包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及治療有效量或劑量的任一種或多種本文中所公開的組合物的用途，所述組合物包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑，其用于制造供治療急性輻射綜合癥的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于制造供治療急性輻射綜合癥的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及當(dāng)受試者患有或懷疑患有急性輻射綜合癥時(shí)，在有需要的受試者中誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)作用的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的至少一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療移植物抗宿主疾病的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用治療有效量或劑量的包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療移植物抗宿主疾病的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物來(lái)治療移植物抗宿主疾病的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種用于治療移植物抗宿主疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及治療有效量或劑量的任一種或多種本文中所公開的組合物的用途，所述組合物包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑，其用于制造供治療移植物抗宿主疾病的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于制造供治療移植物抗宿主疾病的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及當(dāng)受試者患有或懷疑患有移植物抗宿主疾病時(shí)，在有需要的受試者中誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)作用的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的至少一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療炎癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用治療有效量或劑量的包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療炎癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑藥物組合物來(lái)治療炎癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種用于治療炎癥的藥物組合物，所述藥物組合物包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或模擬物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及治療有效量或劑量的任一種或多種本文中所公開的組合物的用途，所述組合物包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑，其用于制造供治療炎癥的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及包括治療有效量或劑量的至少一種肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于制造供治療炎癥的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及當(dāng)受試者患有或懷疑患有炎癥時(shí)，在有需要的受試者中誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)作用的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的至少一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療自身免疫疾病的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用治療有效量或劑量的包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療自身免疫疾病的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物來(lái)治療自身免疫疾病的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種用于治療自身免疫疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及治療有效量或劑量的任一種或多種本文中所公開的組合物的用途，所述組合物包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑，其用于制造供治療自身免疫疾病的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于制造供治療自身免疫疾病的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及當(dāng)受試者患有或懷疑患有自身免疫疾病時(shí)，在有需要的受試者中誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)作用的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的至少一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療炎癥病癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用治療有效量或劑量的包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療炎癥病癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物來(lái)治療炎癥病癥的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及一種用于治療炎癥病癥的藥物組合物，所述藥物組合物包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及治療有效量或劑量的任一種或多種本文中所公開的組合物的用途，所述組合物包括至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載劑，其用于制造供治療炎癥病癥的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及包括治療有效量或劑量的至少一種pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽及藥學(xué)上可接受的載劑的藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于制造供治療炎癥病癥的藥物。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及當(dāng)受試者患有或懷疑患有炎癥病癥時(shí)，在有需要的受試者中誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)作用的方法。

在一些實(shí)施例中，本公開涉及通過(guò)施用包括pif肽、其類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的至少一種或多種本文中所公開的組合物來(lái)治療重復(fù)性勞損的方法。

根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，可以提供配制物作為試劑盒的一部分。在一些實(shí)施例中，所述試劑盒包括包括pif肽和/或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述pif肽和/或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽包括非天然氨基酸或與seqidno:20至少70％同源。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑盒包括類似物的藥學(xué)上可接受的鹽與復(fù)水混合物。在另一個(gè)實(shí)施例中，類似物的藥學(xué)上可接受的鹽是在一個(gè)容器中，而復(fù)水混合物是在另一容器中。供應(yīng)的復(fù)水混合物可以是干燥形式，可以在施用之前向其中添加水或其它液體溶劑以形成懸浮液或溶液。復(fù)水混合物是被設(shè)計(jì)成在向受試者施用組合物利用至少一劑瀉劑之前溶解凍干、不可溶的本發(fā)明的鹽的混合物。在另一個(gè)實(shí)施例中，試劑盒包括呈口服可用的丸劑形式的藥學(xué)上可接受的鹽。

所述試劑盒可以含有兩個(gè)或多于兩個(gè)容器、包裝或施配器以及有關(guān)制備和施用的說(shuō)明。在一些實(shí)施例中，所述試劑盒包括至少一個(gè)含本文所描述的藥物組合物或組合物的容器及含用于遞送所述組合物的構(gòu)件，如注射器的另一容器。在一些實(shí)施例中，所述試劑盒包括含呈溶液或凍干或干燥形式的類似物及復(fù)水混合物的組合物。在一些實(shí)施例中，所述類似物和復(fù)水混合物可以在一個(gè)或多個(gè)額外容器中。

試劑盒中所包含的組合物可以提供于分類的容器中，由此保持不同組分的保存期，而且不會(huì)被容器的材料吸附或改變。舉例來(lái)說(shuō)，適合容器包含普通瓶子，所述瓶子可以由玻璃、有機(jī)聚合物，如聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、陶瓷、金屬或典型地用于保存試劑或食品的任何其它材料制造；封包，所述封包可以由襯箔內(nèi)部，如鋁或合金組成。其它容器包含試管、小瓶、燒瓶及注射器。所述容器可以具有由易于拆裝的膜分隔開的兩個(gè)隔室，當(dāng)移除所述膜時(shí)，允許所述組合物的各組分混合?？刹鹧b膜可以是玻璃、塑料、橡膠或其它惰性材料。

供應(yīng)的試劑盒還可以帶有說(shuō)明材料。說(shuō)明可以印刷于紙或其它襯底上，和/或可以通過(guò)電子裝置可讀媒體，如軟盤、cd-rom、dvd-rom、壓縮盤、錄像帶、錄音帶或其它可讀存儲(chǔ)器存儲(chǔ)裝置形式供應(yīng)。詳細(xì)說(shuō)明可能不是以物理方式與試劑盒相關(guān)聯(lián)；而是可以將用戶導(dǎo)引至試劑盒的制造商或經(jīng)銷商指定的互聯(lián)網(wǎng)網(wǎng)站，或以電子郵件形式供應(yīng)。

在另一個(gè)實(shí)施例中，提供一種帶包裝的試劑盒，所述試劑盒含有待施用的藥物配制物，即，含有pif肽和/或pif類似物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物配制物；用于在儲(chǔ)存期間及在使用之前容納所述配制物的任選密封的容器(例如，小瓶、瓶、小袋、封包、罐、管、霧化器、氣霧劑罐等)；及有關(guān)以有效治療任一種或多種本文中所公開的適應(yīng)癥的方式進(jìn)行藥物施用的說(shuō)明。所述說(shuō)明典型地是在包裝說(shuō)明書、標(biāo)簽和/或試劑盒其它組分上的書面說(shuō)明。

取決于配制物的類型以及預(yù)定施用模式，試劑盒還可以包含用于施用所述配制物的裝置(例如，透皮遞送裝置)。所述施用裝置可以是滴管、藥簽、藥棒，或霧化器或氣霧劑罐的噴嘴或出口所述配制物可以是如本文中所描述任何適合的配制物。舉例來(lái)說(shuō)，所述配制物可以是含有單位劑量的活性劑的口服劑型，或管內(nèi)所含的凝膠或軟膏。所述試劑盒可以含有不同劑量的同一藥劑的多種配制物。所述試劑盒也可以含有不同活性劑的多種配制物。

本發(fā)明的試劑盒典型地還包含用于包裝個(gè)別試劑盒組分(即，藥物劑型)的構(gòu)件；施用裝置(如果包含在內(nèi)的話)；及書面使用說(shuō)明。此類包裝構(gòu)件可以呈卡紙板或紙箱、塑料或箔制小袋等形式。

參照以下非限制性實(shí)例可以進(jìn)一步理解本公開及說(shuō)明所使用的方法和材料的實(shí)施例。

實(shí)例

材料與方法：

使用以下材料和方法進(jìn)行本文所描述的實(shí)驗(yàn)。

ars鼠類模型：c57bl/6小鼠(6-7或8-9周齡的雌性小鼠)及f1(c57bl/6xbalb/c)小鼠(10-11周齡雌性小鼠)是從harlanlaboratoriesltd(以色列)獲得。本研究是在耶路撒冷希伯來(lái)大學(xué)(hebrewuniversity)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利委員會(huì)(institutionalanimalwelfarecommittee)批準(zhǔn)的倫理?xiàng)l件下進(jìn)行。在無(wú)病原體條件下保持小鼠并進(jìn)行監(jiān)測(cè)。使用臨床6mev(linearvariancl-6；varianmedicalsystems，美國(guó)加利福尼亞州帕洛阿爾托(paloalto,ca,usa)，通過(guò)在劑量率(0.3gry/min)下用單次劑量的亞致死性(6gry)或致死性(10gry)全身照射對(duì)c57bl/6品系的小鼠進(jìn)行全身照射。

spif*：合成pif(mvrikpgsankpsdd)是從美國(guó)新澤西州路易斯維爾(lewisville,njusa)的biosynthesis獲得。如hplc/質(zhì)譜(spif專用)證實(shí)，所述肽被純化至>95％。

統(tǒng)計(jì)分析：由體內(nèi)研究得到的數(shù)據(jù)是以平均值±sem表示。由體外研究得到的數(shù)據(jù)是以平均值±sd表示。使用雙尾studentt檢驗(yàn)或mann-whitney檢驗(yàn)進(jìn)行與對(duì)照物的單一比較。對(duì)于多組設(shè)計(jì)，使用單因素重復(fù)測(cè)量anova，隨后bonferroni多項(xiàng)比較測(cè)試。p<0.05被視為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)處理是使用microsoftexcel和graphpadprism軟件進(jìn)行。基因表達(dá)是基于δδct方法測(cè)定并且由qbase+軟件計(jì)算。結(jié)果表示為相對(duì)于每次操作中所包含的標(biāo)準(zhǔn)參考樣品的倍數(shù)變化?；虮磉_(dá)分析是經(jīng)由非參數(shù)mann-whitneyu檢驗(yàn)計(jì)算。p<0.05被認(rèn)為顯著。結(jié)腸全基因分析是使用熱圖，隨后是決定分組情形間的差異的個(gè)別基因來(lái)進(jìn)行，p<0.05被視為顯著的。

在ars中進(jìn)行的長(zhǎng)期亞致死性spif實(shí)驗(yàn)：關(guān)于造血恢復(fù)的分析：小鼠經(jīng)歷全身照射(6gry)。24小時(shí)之后，使用皮下植入的alzet滲透泵(1002型，加利福尼亞州(ca)的durectcorp.)向c57bl/6小鼠連續(xù)地(0.25ml/hr)施用pif或pbs(每天1mg/kg)，持續(xù)兩周。隨后是兩周的治療后觀察，不添加任何療法。在任何實(shí)驗(yàn)中都不施用抗生素。在處死前每周檢查每只小鼠的造血概況。每周直至四周在處死時(shí)，從小鼠尾部抽血，并收集100μl血液放入涂有edta的毛細(xì)管中。使用經(jīng)驗(yàn)證的bc-2800vetauto血液學(xué)分析器(mindray，美國(guó)新澤西州莫沃(mahwah,njusa))進(jìn)行cbc與分類。將結(jié)果與正常小鼠相比較。

在ars中進(jìn)行的短期亞致死性spif實(shí)驗(yàn)：造血作用結(jié)腸和全身細(xì)胞因子：照射小鼠(6或7gry)。照射后24或48小時(shí)，每日兩次皮下注射0.75mg/kg的spif，持續(xù)三天。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死小鼠并移出結(jié)腸組織進(jìn)行組織學(xué)分析、illumina全基因組分析及rt-pcr。此外，取出血清進(jìn)行細(xì)胞因子分析。將結(jié)果與正常小鼠相比較。對(duì)于亞致死性長(zhǎng)期ars實(shí)驗(yàn)，注射spif(每天1mg/kg：alzet滲透泵；1002型，加利福尼亞州的durectcorp.)或pbs，持續(xù)14天，隨后是14天的療法后觀察。每周通過(guò)收集100μl尾部血液來(lái)檢查造血概況。使用經(jīng)驗(yàn)證的bc-2800vetauto血液學(xué)分析器(mindray，美國(guó)新澤西州莫沃)進(jìn)行cbc與分類。

spif誘導(dǎo)致死性照射和半同種異體bmt后長(zhǎng)期造血恢復(fù)：cbc和脛骨組織學(xué)分析：以致死劑量照射(10gry)小鼠。照射后一天，通過(guò)用pbs(biologicalindustries)沖洗股骨和脛骨，從供體小鼠f1(c57bl/6xbalb/c)收集骨髓(bm)單核細(xì)胞。使用lymphoprep方法分離單核細(xì)胞。將總計(jì)8*106個(gè)bm細(xì)胞施用至經(jīng)照射受體小鼠的尾靜脈。bmt之后，如先前所描述，每日監(jiān)測(cè)小鼠的體重減輕、起皺皮膚及存活率。一周一次直至四周在處死小鼠時(shí)，從尾部抽血，并收集100μl血液放入涂有edta的毛細(xì)管中。使用經(jīng)驗(yàn)證的bc-2800vetauto血液學(xué)分析器(mindray，美國(guó)新澤西州莫沃)進(jìn)行cbc與分類。將結(jié)果與正常小鼠相比較。

spif預(yù)處理同種異體bmt：確定在bmt之后用pif預(yù)處理bm是否能改善bmt移入，而無(wú)需進(jìn)一步療法。小鼠經(jīng)歷(10gry)全身照射。24小時(shí)之后，在移植之前使bm細(xì)胞暴露于spif僅2小時(shí)，隨后洗滌細(xì)胞，接著將其接種至受體小鼠的尾靜脈中。在移植之前，使bm細(xì)胞暴露于pbs，作為對(duì)照物。移植之后，跟蹤小鼠，不進(jìn)行任何進(jìn)一步療法，持續(xù)至多4周。在處死之后，獲得全wbc計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞濃度。將結(jié)果與pbs對(duì)照組相比較。

spif影響msc調(diào)控功能：用抗cd3抗體活化cfse染色的鼠類脾細(xì)胞，培養(yǎng)四天(以50:1比率)并使其暴露于預(yù)先與spif或?qū)φ瘴镆黄鹋嘤?2小時(shí))的msc。使用流式細(xì)胞測(cè)量術(shù)分析細(xì)胞增殖情況。通過(guò)將spif預(yù)處理的msc與對(duì)照物(不含msc的活化脾細(xì)胞)相比較來(lái)分析增殖細(xì)胞百分比數(shù)據(jù)。

spif處理的股骨的組織學(xué)分析：以10gry照射小鼠并在24小時(shí)之后，起始spif治療，持續(xù)14天(alzet泵)，隨后是14天的療法后觀察。另外，研究在無(wú)其它療法的情況下spif預(yù)處理的bmt。在研究結(jié)束時(shí)，從處死后的小鼠獲得wbc和股骨樣品并固定于4％中性緩沖福爾馬林中。使樣品脫鈣，接著包埋于石蠟中，切割成10微米厚的切片，并用蘇木精和伊紅(h&e)染色。將結(jié)果與pbs治療的小鼠和正常小鼠相比較。

spif處理的血清細(xì)胞因子評(píng)價(jià)：根據(jù)制造商的方案，使用小鼠th1/th210plexflowcytomix多工試劑盒(ebioscience，美國(guó)加利福尼亞州圣地亞哥(sandiego,ca,usa))測(cè)定末梢血液中的循環(huán)細(xì)胞因子水平。

spif處理的結(jié)腸的組織學(xué)分析和隱窩深度測(cè)定：在亞致死性照射(6gry)之后，在照射后24或48小時(shí)開始spif治療，持續(xù)2或3。處死之后，收集結(jié)腸并在pbs中充分洗滌以移除腸內(nèi)含物。將空腸固定于10％中性緩沖福爾馬林中，隨后石蠟包埋。通常將樣品加工成5mm切片用于蘇木精和伊紅(fisherscientific，賓夕法尼亞州匹茲堡(pittsburgh,pa))染色，并測(cè)定隱窩深度。應(yīng)注意，報(bào)導(dǎo)隱窩深度作為輻射暴露之后恢復(fù)的標(biāo)志。對(duì)于此分析，使用裝備有數(shù)碼相機(jī)的bx51顯微鏡(olympus，日本東京(tokyo,japan))并使用10×物鏡獲取圖像。如先前所報(bào)導(dǎo)，使用imagej軟件分析圖像。將在治療后24和48小時(shí)之后進(jìn)行spif治療的作用與pbs和正常小鼠相比較。

spif基因分析：rt-qpcr分析巨噬細(xì)胞和結(jié)腸組織：spif靶向巨噬細(xì)胞并且在gvhd模型中有效減少肝中的氧化應(yīng)激基因。因此，在暴露于spif之后，測(cè)定從亞致死性短期輻射(6gry)后24-48之后的小鼠得到的結(jié)腸樣品中的基因表達(dá)，并與pbs和正常小鼠相比較。這是分兩組獨(dú)立實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。此外，還暴露于spif24小時(shí)之后，通過(guò)在體外測(cè)定巨噬細(xì)胞極性來(lái)測(cè)定巨噬細(xì)胞中的多種基因。根據(jù)制造商的方案，使用微型試劑盒柱(qiagen，德國(guó)希爾登(hilden,germany))提取總rna。如先前所報(bào)導(dǎo)，根據(jù)制造商的說(shuō)明，使用1μg總rna，使用大容量cdna試劑盒(appliedbiosystems，美國(guó)紐約granisland)合成cdna。使用taqman基因表達(dá)分析試劑盒(applied(appliedbiosystems)進(jìn)行b7h1、nos2及arg-1轉(zhuǎn)錄物水平的檢測(cè)。使用hprt-1作為正規(guī)化的內(nèi)源性對(duì)照物的管家基因轉(zhuǎn)錄物。所有引物都購(gòu)自appliedbiosystems。使用abiprism7900測(cè)序系統(tǒng)(appliedbiosystems)進(jìn)行實(shí)時(shí)pcr反應(yīng)。利用2.2版stepone軟件(appliedbiosystems)分析數(shù)據(jù)。dataassist軟件v3.01。使用benjamini-hochberg方法調(diào)整數(shù)據(jù)集p值。

spif保護(hù)性信號(hào)傳導(dǎo)路徑：結(jié)腸iliumina基因陣列：為了概括性闡明spif的保護(hù)性信號(hào)傳導(dǎo)路徑，執(zhí)行全基因陣列。在亞致死性輻射(6gry)之后24小時(shí)，每日兩次注射spif，持續(xù)72小時(shí)。將輻射之后spif的作用與pbs處理的對(duì)照物相比較。未經(jīng)照射的正常小鼠充當(dāng)另外的對(duì)照。在處死之后，切除30mg的結(jié)腸組織(n＝4-5只/治療組)并在細(xì)胞溶解緩沖液(qiagen，瑞士洪布雷布蒂孔(hombrechtikon,switzerland))中用fastprep120組織均質(zhì)機(jī)(30秒，4.0m/sec)均質(zhì)化。使用purelinkrna微型試劑盒(ambion，目錄號(hào)12183018a)從細(xì)胞提取總rna。遵循制造商的說(shuō)明，使用totalpreprna擴(kuò)增試劑盒(amil1791，ambion)將總rna(250ng)擴(kuò)增成crna。擴(kuò)增之后，將1.5μgcrna與雜交對(duì)照物混合并將其與mouseref-8陣列(bd-202-0202，美國(guó)伊路米那(illumina,usa))雜交。在58℃下，在雜交爐中利用搖動(dòng)平臺(tái)使陣列雜交16小時(shí)。接著，對(duì)陣列芯片進(jìn)行一系列洗滌，隨后用抗生蛋白鏈菌素-cy3對(duì)其進(jìn)行染色。染色之后，對(duì)其進(jìn)行最終的洗滌和干燥。使用illuminahiscan掃描儀掃描陣列。

spif誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變極化：細(xì)胞分離及體外巨噬細(xì)胞分化：為了測(cè)定spif誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞從促炎性極化轉(zhuǎn)變成調(diào)控表型的能力，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。通過(guò)腹膜內(nèi)注射1ml3％的brewer硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(sigma-aldrich，美國(guó)密蘇里州圣路易斯(stlouis,mo,usa))從c57bl/6小鼠收集腹膜巨噬細(xì)胞。四天后，處死小鼠并通過(guò)用5mlpbs洗滌從腹腔收集腹膜細(xì)胞。將細(xì)胞(1.4×106個(gè)細(xì)胞/毫升)分配至6孔盤(corningcostar，美國(guó)紐約康寧(corning,nyusa))上并在37℃下于5％co2中培育75分鐘。丟棄非粘附細(xì)胞并添加含有10％胎牛血清(biologicalindustries，以色列拜特哈梅克(beithaemek,israel)的kibutz)的rpmi-1640(gibco，美國(guó)紐約格蘭德島(grandisland,ny,usa))。對(duì)于m1促炎性分化研究，將10ng/ml(gm-csf)和10ng/ml脂多醣(lps)(peprottech，美國(guó)新澤西州洛基山(rockyhill,nj,usa))添加至培養(yǎng)基中，隨后在37℃下于5％co2中培育20小時(shí)。或者，對(duì)于m2調(diào)控性分化，將10ng/mlxxxx(m-csf)和10ng/mlil-4(peprottech)添加至培養(yǎng)基中。將spif以及分化因子一起添加至所述培養(yǎng)基中。

流式細(xì)胞測(cè)量術(shù)分化的巨噬細(xì)胞分析：為了測(cè)定spif對(duì)m1分化成m2的影響，在培養(yǎng)20小時(shí)之后，使用胰蛋白酶-edta溶液(biologicalindustries，以色列)，在(il4和gmscf)存在下收集分化的巨噬細(xì)胞。在4℃下對(duì)細(xì)胞染色。對(duì)于細(xì)胞內(nèi)染色，將細(xì)胞固定于1％多聚甲醛(electronmicrocopyscienceshatfield，美國(guó)賓夕法尼亞州)中，并且接著利用皂角苷(編號(hào)sigma-aldrich，美國(guó)密蘇里州圣路易斯)進(jìn)行透性化。使用以下抗體：抗小鼠cd11bapc(southernbiotech，美國(guó)阿拉巴馬州伯明翰(birmingham,al,usa))、抗小鼠f4/80pacificblue(biolegend，美國(guó)加利福尼亞州圣地亞哥)、抗小鼠cd206fitc(abdserotec，美國(guó)北卡羅來(lái)納州羅利(raleigh,nc,usa))抗小鼠cd16/32pe及抗小鼠cd23efluor660(ebioscience)。使用分析儀(miltenyibiotech，美國(guó)加利福尼亞州圣地亞哥)進(jìn)行流式細(xì)胞測(cè)量術(shù)。

實(shí)例1：

已經(jīng)證實(shí)pif防止致死性輻射(圖1a)。從致死性8gy照射之后2小時(shí)開始，每天2次用低劑量pif(0.75mg/kg)或高劑量pif(1.25mg/kg)治療小鼠(c57bl/6，n＝36)，持續(xù)14天。在停止療法之后2周，此類暴露引起100％存活率。相比之下，接受輻射和(pbs，媒劑)，但未用pif治療的對(duì)照小鼠(n＝14，雄性；7只雌性)發(fā)生ars并在第23天死亡(0％存活率)。圖1b顯示，相較于在第12天時(shí)已經(jīng)具有極低全wbc計(jì)數(shù)的對(duì)照組，在兩個(gè)pif治療組中全wbc計(jì)數(shù)在第0天與第9天得以保持。圖1c顯示由從8gy輻射暴露之后2小時(shí)開始，每天2次用0.75mg/kg(低劑量、高劑量：0.75mg/kg)pif治療14天的雌性小鼠(n＝9，雄性小鼠中結(jié)果類似)得到的數(shù)據(jù)。頂圖顯示在0-19天測(cè)量的免疫表型。第二圖顯示以占總數(shù)的百分比表示的相同免疫特征。第三圖詳細(xì)顯示紅血球指標(biāo)(血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積及rbc體積。下圖具有血小板計(jì)數(shù)和體積。圖1d和1e顯示，在pif治療組中，當(dāng)在第29天，即停止施用pif之后兩周測(cè)量時(shí)，免疫表型、rbc及血小板計(jì)數(shù)得以保持。

實(shí)例2：

spif在照射情況下對(duì)c57bl/6小鼠存活率的影響：劑量探索實(shí)驗(yàn)：在本研究中使用的c57bl/6小鼠是相對(duì)耐輻射的品系。第一，通過(guò)評(píng)價(jià)暴露于各種劑量的全身照射(6-10gry)的小鼠的存活率曲線，確定實(shí)驗(yàn)所需的輻射強(qiáng)度(圖2)。所有小鼠(n＝10)在暴露于6gry之后30天存活，而所有小鼠(n＝10)在暴露于10gry之后30天內(nèi)死亡。b.顯示在7gy暴露之后，pif改善血小板計(jì)數(shù)。因此，6gry定義為亞致死劑量，用以測(cè)定spif對(duì)血液學(xué)特征、細(xì)胞因子表達(dá)及基因表達(dá)的影響，并且10gry作為致死劑量用于bm移植研究。此外，由于首次在ars環(huán)境中測(cè)試pif，故使用spif作為唯一療法，而不使用在預(yù)防輻射后感染方面具有重要作用的傳統(tǒng)抗生素來(lái)進(jìn)行以下研究。因此，可以清晰地剖析spif作用中所涉及的具體機(jī)制。

實(shí)例3：

spif在治療后較長(zhǎng)時(shí)間促進(jìn)亞致死性照射之后的血液學(xué)恢復(fù)：亞致死性照射的后果是長(zhǎng)期造血抑制以及恢復(fù)緩慢。測(cè)定spif恢復(fù)wbc特征的能力(圖3a)。相較于pbs對(duì)照，在6gry照射之后24小時(shí)早期spif施用(每天1mg/kg，持續(xù)2周)引起迅速恢復(fù)并顯著地改善總循環(huán)wbc的復(fù)原(圖3b)。這在照射之后2周明顯可見，此時(shí)wbc在spif治療組中達(dá)到600個(gè)細(xì)胞/微升的平均值，與pbs治療組中250個(gè)細(xì)胞/微升形成比較。此種600個(gè)wbc/μl的水平指示，這些小鼠在此時(shí)免疫受損情況已經(jīng)不太嚴(yán)重。應(yīng)注意，spif的保護(hù)作用擴(kuò)展到超過(guò)2周治療，并且還在照射之后4周，即在治療后2周時(shí)處死時(shí)觀察到顯著差異(圖3c)。此外，施用后2周，spif增加淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，同時(shí)降低循環(huán)粒細(xì)胞百分含量，接近在正常未治療組(對(duì)照組)中所觀察到的水平(圖3d)。相比之下，相較于spif治療組，在假pbs治療組中，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較低，并且粒細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加。嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)減少(即，與適應(yīng)性免疫反應(yīng)中所發(fā)現(xiàn)的淋巴細(xì)胞增加有關(guān)的炎癥反應(yīng))反映免疫特征有益地恢復(fù)至正常小鼠中所見的情形。由于在輻射之后淋巴細(xì)胞群長(zhǎng)期受到影響，導(dǎo)致對(duì)感染的高易感性，故此特別重要。這些結(jié)果展示了spif在亞致死性輻射后長(zhǎng)期恢復(fù)全身免疫細(xì)胞特征方面的有效性。

實(shí)例4：

在亞致死性照射后短期spif降低全身促炎性細(xì)胞因子水平：在電離輻射之后迅速地發(fā)生全身炎癥反應(yīng)。因此，檢查在6或7gy照射后24小時(shí)開始并施用僅3天的spif的作用。(圖4a)spif導(dǎo)致主要促炎性細(xì)胞因子il-2和il1α循環(huán)水平相較于pbs明顯減少。(圖4b和4c)。此外，當(dāng)與正常小鼠中的水平相比較時(shí)，觀察到兩種細(xì)胞因子水平無(wú)差異。對(duì)其它細(xì)胞因子的影響不顯著。這些結(jié)果表明，spif在照射后早期誘導(dǎo)全身炎性環(huán)境減輕在防止ars發(fā)生方面起到重要作用。

實(shí)例5：

spif局部和全身保護(hù)作用：在亞致死性輻射后促進(jìn)結(jié)腸隱窩恢復(fù)：在嚴(yán)格鼠類gvhd模型中，在致死性照射后，ars迅速地導(dǎo)致gi炎癥和損傷，并且spif長(zhǎng)期改善胃腸道潰瘍和肝炎癥。以上實(shí)驗(yàn)同時(shí)在體內(nèi)和體外證實(shí)，spif在減少全身炎性介體，引起長(zhǎng)期恢復(fù)方面的保護(hù)作用。然而，pif的作用是否也是局部的，靶向具有高細(xì)胞更新的器官，即結(jié)腸，以及哪種常常受ars影響尚不了解。如圖5a中所圖示，從輻射后24或48小時(shí)開始治療，在亞致死性輻射(6gry)后短期spif注射2或3天防止結(jié)腸炎癥。使用的模型顯示，spif明顯減輕結(jié)腸炎癥，由此恢復(fù)結(jié)腸隱窩形態(tài)(圖5b和5c)。值得注意的是，當(dāng)spif治療在照射后僅48小時(shí)開始時(shí)，也觀察到保護(hù)作用。d.顯示，pif隱窩恢復(fù)情況類似于正常小鼠的情形。e.pif減少inos氧化應(yīng)激基因，同時(shí)促進(jìn)結(jié)腸中的b7h1保護(hù)性基因(rtpcr)。當(dāng)pif治療在療法后48小時(shí)開始時(shí)，觀察到所述作用。由此支持以下觀點(diǎn)：spif同時(shí)發(fā)揮全身(造血、細(xì)胞因子)和局部保護(hù)作用。

實(shí)例6：

spif通過(guò)減少氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)線粒體功能、免疫反應(yīng)來(lái)促進(jìn)結(jié)腸恢復(fù)。以上數(shù)據(jù)指示，spif具有局部和全身雙重作用，減小輻射的破壞作用，恢復(fù)結(jié)腸結(jié)構(gòu)，同時(shí)減少全身促炎性免疫反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期造血作用。因此，同時(shí)使用針對(duì)nos2和b7h1的rtpcr(圖5d和5e)作用以及全基因組分析(圖10)，主要集中于檢查兩種插入物的局部保護(hù)作用和結(jié)腸功能。spif治療(相較于亞致死性)引起對(duì)若干路徑的顯著調(diào)節(jié)(圖10)。有趣的是，這些基因主要群集于三組中，這三組可以總體地涉及到免疫調(diào)控和細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞內(nèi)能量轉(zhuǎn)移，以及有效代謝功能所需的蛋白質(zhì)-rna相互作用。前兩個(gè)與保護(hù)作用相關(guān)，而后一個(gè)與修復(fù)機(jī)制有關(guān)。

下表5詳述全結(jié)腸基因組的聚類分析。所述分析將spif與pbs和正常小鼠相比較。若干路徑受到影響。上表4顯示鑒別的個(gè)別路徑及其分級(jí)。對(duì)重要路徑的線粒體功能、針對(duì)應(yīng)激的反應(yīng)及蛋白質(zhì)-rna相互作用進(jìn)行聚類分析。(“fluor”＝熒光度測(cè)量)?；蛎Q對(duì)應(yīng)于illuminamouseref-8陣列說(shuō)明手冊(cè)(bd-202-0202，美國(guó)伊路米那；以全文引用的方式并入本文中)中標(biāo)識(shí)的基因。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，在亞致死性輻射(6gry)之后24小時(shí)，每日兩次注射spif，持續(xù)72小時(shí)。將輻射之后spif的作用與pbs處理的對(duì)照組相比較。未經(jīng)照射的正常小鼠充當(dāng)另外的對(duì)照。處死之后，切除30mg的結(jié)腸組織(對(duì)于pif和pbs，n＝7；并且對(duì)于正常小鼠，n＝3)并在細(xì)胞溶解緩沖液(qiagen，瑞士洪布雷布蒂孔)中用fastprep120組織均質(zhì)機(jī)(30秒，4.0m/sec)均質(zhì)化。使用purelinkrna微型試劑盒(ambion，目錄號(hào)12183018a)從細(xì)胞提取總rna。遵循制造商的說(shuō)明，使用totalpreprna擴(kuò)增試劑盒(amil1791，ambion)將總rna(250ng)擴(kuò)增成crna。擴(kuò)增之后，將1.5μgcrna與雜交對(duì)照物混合并將其與mouseref-8陣列(bd-202-0202，美國(guó)伊路米那)雜交。在58℃下，在雜交爐中利用搖動(dòng)平臺(tái)使陣列雜交16小時(shí)。接著，對(duì)陣列芯片進(jìn)行一系列洗滌，隨后用抗生蛋白鏈菌素-cy3對(duì)其進(jìn)行染色。染色之后，對(duì)其進(jìn)行最終的洗滌和干燥。使用illuminahiscan掃描儀掃描陣列。

實(shí)例7：

spif防止結(jié)腸炎癥，下調(diào)一氧化氮(nos2)并上調(diào)hsp和b7h1表達(dá)以實(shí)現(xiàn)代謝功能：結(jié)腸組織學(xué)(圖5b)表明，spif通過(guò)使結(jié)腸隱窩恢復(fù)來(lái)防止炎癥。spif在防止肝和巨噬細(xì)胞中氧化應(yīng)激和經(jīng)由enos(nos2)路徑形成一氧化氮(no)方面起重要作用。spif還下調(diào)結(jié)腸中的nos2基因表達(dá)(圖5e)。通過(guò)促進(jìn)nosip基因，減少no的產(chǎn)生，因?yàn)閚os1和nos3轉(zhuǎn)位至肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架，使這些酶的活性衰減。pts(6-丙酮酰四氫蝶呤合成酶)、ddah1及spr增加及wasl(wiscott-aldrich綜合癥)基因減少進(jìn)一步限制nos2活性。此外，ndofa12和ndofa6調(diào)控性線粒體膜呼吸鏈nadh去氫酶非催化亞基的表達(dá)也減少。除氧化應(yīng)激減少以外，spif還通過(guò)增加hspala和hspa8基因防止蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊，另外已知這些基因是spif的靶并且在體內(nèi)也得到調(diào)控。如由b7h1表達(dá)顯示的局部結(jié)腸先天免疫系統(tǒng)與全身免疫和b7h1無(wú)關(guān)并且據(jù)報(bào)導(dǎo)是作為針對(duì)結(jié)腸炎癥的主要防護(hù)劑。值得注意的是，相較于對(duì)照組，spif促進(jìn)b7h1基因表達(dá)(圖5e)。b7h1的增加高于假治療組，指示強(qiáng)效的保護(hù)反應(yīng)。當(dāng)spif療法在輻射后僅48小時(shí)開始時(shí)，也觀察到顯著保護(hù)作用。表達(dá)最高的基因是cfd，即補(bǔ)體d因子，所述因子防止由結(jié)腸破壞引起的感染。此效應(yīng)與具有附加抗細(xì)胞凋亡作用的olfm4的作用相結(jié)合。為了促進(jìn)局部代謝，上調(diào)scd1和cyp3a11及atp5fi以提供這一重要任務(wù)所需的能量。上調(diào)的主要基因中有acaa2，所述基因涉及到脂肪酸和選擇性氨基酸代謝以及涉及果糖代謝的khk等。涉及溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的slc5a6表達(dá)也上調(diào)。此數(shù)據(jù)指示，spif誘導(dǎo)的結(jié)腸保護(hù)與促進(jìn)基因表達(dá)的代謝增強(qiáng)有關(guān)。

實(shí)例8：

spif增進(jìn)致死性照射后隨后半同種異體bmt的造血恢復(fù)：對(duì)于暴露于高(致死性)水平輻射的患者，通?？紤]造血干細(xì)胞移植。由于供體必須在臨時(shí)通知時(shí)可用，故半相合同種異體移植可能是唯一選擇。因此，決定評(píng)價(jià)spif對(duì)致死性全身照射后隨后半同種異體bmt(類似于父母向子女移植)的血液學(xué)恢復(fù)的作用。為了模擬會(huì)產(chǎn)生移植物抗宿主反應(yīng)的臨床環(huán)境，使f1(c57bl/6xbalb/c)小鼠暴露于10gry全身照射，隨后在次日靜脈內(nèi)施用c57bl/6bm細(xì)胞。(圖6a)從照射后24小時(shí)開始，使用alzet滲透泵連續(xù)地(0.25ml/h)施用spif(每天1mg/kg)或pbs，持續(xù)兩周。在照射后跟蹤臨床情況和血液學(xué)恢復(fù)4周。此實(shí)驗(yàn)旨在證實(shí)spif是否防止wbc減少和/或其還有效進(jìn)行bm重建，恢復(fù)造血作用。照射隨后bmt后三周，相較于pbs治療組，spif使末梢血液中總wbc恢復(fù)明顯增加(圖6b)。此外，相較于pbs治療的對(duì)照小鼠，spif治療改善淋巴細(xì)胞/粒細(xì)胞比率(圖6c)。此wbc比率類似于在亞致死性照射之后發(fā)現(xiàn)的比率。為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)spif對(duì)血液學(xué)恢復(fù)的影響，還進(jìn)行股骨的組織學(xué)檢查。在照射和bmt后4周，即在治療后2周，觀察到骨髓細(xì)胞性的顯著差異。來(lái)自正常小鼠、pbs治療的小鼠及pif治療的小鼠股骨的骨髓的代表性組織學(xué)圖像分別呈現(xiàn)于圖6d、6e及6f中。相較于pbs對(duì)照小鼠，spif治療組的股骨bm切片中脂肪細(xì)胞的數(shù)量明顯減少(圖6g)，指示spif治療組中bm細(xì)胞復(fù)原的改善。值得注意的是，spif治療組中脂肪細(xì)胞的數(shù)量類似于在正常小鼠中觀察到的數(shù)量。這些觀察結(jié)果指示，致死性照射后bmt結(jié)合pif可以幫助迅速地恢復(fù)循環(huán)以及骨髓儲(chǔ)備池。

實(shí)例9：

在致死性照射之后移植spif預(yù)處理的同種異體骨髓長(zhǎng)期增進(jìn)血液學(xué)復(fù)原：spif調(diào)控免疫反應(yīng)。因此，檢查spif是直接影響移植的骨髓細(xì)胞，從而改善其移入。還是可替代地，spif僅通過(guò)促進(jìn)bmt移入，對(duì)受體發(fā)揮其免疫調(diào)控特性來(lái)引起血液學(xué)復(fù)原。為了解答這一重要問(wèn)題，在移植之前，將供體bm細(xì)胞(同種異體)與spif一起在培養(yǎng)物中預(yù)培育2小時(shí)，并且接著洗滌細(xì)胞。用(10gry)致死性照射受體，并在24小時(shí)后，移植預(yù)處理的bm移植物。不施用額外治療。(圖7a)

盡管在移植之前，bm僅與spif一起培育2小時(shí)，但接受spif處理的細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組在移植之后三周和四周顯示總wbc計(jì)數(shù)，并且確切地說(shuō)淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)復(fù)原增加(圖7b和7c)。進(jìn)一步檢查此作用是否是通過(guò)改善骨髓細(xì)胞性引起(圖7d、e、f)。數(shù)據(jù)顯示，spif通過(guò)減少股骨中存在的脂肪細(xì)胞來(lái)恢復(fù)bm。由于在bmt之后，基于spif的預(yù)處理在體內(nèi)有效，故對(duì)此保護(hù)作用所涉及的可能機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步檢查。檢查spif預(yù)處理對(duì)bm抗原性的影響。將與msc一起預(yù)培育2小時(shí)的spif在培養(yǎng)物中添加至抗cd3抗體活化的cfse標(biāo)記的脾細(xì)胞中，評(píng)估對(duì)增殖的影響。(圖7g)流式細(xì)胞測(cè)量術(shù)數(shù)據(jù)證明，此類預(yù)處理具有顯著作用，使增殖細(xì)胞的數(shù)量減少。圖7f顯示，pif預(yù)處理msc使其分化成b細(xì)胞和t細(xì)胞。圖7h顯示，當(dāng)在移植之后5天檢查時(shí)，pif防止重量損失。

由此證實(shí)，bm細(xì)胞短期暴露于spif足以引起有效移入，無(wú)需在移植后長(zhǎng)期進(jìn)行其它療法。由此表明，培養(yǎng)時(shí)spif的短期直接作用可以在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成長(zhǎng)期的促移入作用。

實(shí)例10：

spif改變巨噬細(xì)胞分化：考慮到在ars中免疫反應(yīng)的重要性以及spif對(duì)單核細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用，在體外測(cè)試spif對(duì)巨噬細(xì)胞的作用。先前已顯示，pif上調(diào)巨噬細(xì)胞中的b7h1，反映了對(duì)于t細(xì)胞增殖的免疫調(diào)控作用。由于在與活化t細(xì)胞共培養(yǎng)之后spif預(yù)處理的巨噬細(xì)胞的增殖減少，進(jìn)一步證實(shí)此上調(diào)作用。當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)旨在檢查在亞致死性和致死性ars模型中spif的保護(hù)作用是否是由電離輻射之后巨噬細(xì)胞極性轉(zhuǎn)變，使得炎癥反應(yīng)減少所致。巨噬細(xì)胞是免疫反應(yīng)的關(guān)鍵介體并且可以分化成炎性巨噬細(xì)胞(m1)和調(diào)控性巨噬細(xì)胞(m2)。因此，從c57bl/6小鼠獲得腹膜巨噬細(xì)胞并使其在spif存在下向m1或m2表型分化(圖8和9)。預(yù)期spif在m1分化巨噬細(xì)胞中顯著地降低inos(nos2)和cox-2基因表達(dá)(分別是圖8a和8b)并增進(jìn)作為m2調(diào)控性巨噬細(xì)胞標(biāo)記物的精氨酸酶-1的表達(dá)(圖8c)。此外，facs分析證實(shí)巨噬細(xì)胞細(xì)胞表面cd11b和f4/80表達(dá)下調(diào)，與m2巨噬細(xì)胞表型類似(圖8d和8e)。圖9顯示，pif轉(zhuǎn)變cd16/32和cd206表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)向m2的轉(zhuǎn)變。總的說(shuō)來(lái)，這些結(jié)果表明，在照射的小鼠中，spif可以通過(guò)靶向m1/m2巨噬細(xì)胞調(diào)控免疫反應(yīng)。

pif保護(hù)致死性照射的心臟.i/1.在輻射療法期間，輻射誘發(fā)的心臟病(rihd)是值得關(guān)注的問(wèn)題。所涉及的發(fā)病機(jī)制是由內(nèi)皮破壞引起的冠狀動(dòng)脈的進(jìn)行性動(dòng)脈粥樣硬化，以及由于小血管和心肌細(xì)胞損失(被纖維化代替)引起的心肌彌漫性損傷。在鼠類模型中，評(píng)價(jià)大血管介導(dǎo)及彌漫性輻射心臟損傷的并行研究及心臟功能研究(心臟回波)、時(shí)間依賴性評(píng)價(jià)存活體重、皮膚愈合。使10-12只/組新生大鼠暴露于50gy致死性輻射，確切地說(shuō)，靶向心臟。隨后，使用alzet泵進(jìn)行spif連續(xù)遞送。所述泵每天釋放lmg/kgpif，持續(xù)2周。(方案簡(jiǎn)圖描述于圖13中)。相較于經(jīng)照射的大鼠，在spif治療動(dòng)物中于照射和手術(shù)部位上觀察到較快的毛發(fā)生長(zhǎng)。在植入alzet泵之后數(shù)天，在pif治療的動(dòng)物中在長(zhǎng)達(dá)2周的pif治療后瘢痕愈合較快。相較于照射組中的其它動(dòng)物，pif治療的動(dòng)物的每日活動(dòng)性更高，這些動(dòng)物要頑皮得多。

實(shí)例11：

pif核心肽序列調(diào)查：計(jì)算機(jī)模擬對(duì)接pifwt揭示，kcnab1(kv1.3β)四聚體的a鏈作為pif靶的可能性大于其它三條鏈。計(jì)算機(jī)模擬誘變對(duì)接的pifwt：kv1.3β界面也揭示m*rikp*n的重要性(m1、i4、k5、p6及n10的突變是最強(qiáng)的界面瓦解劑)，但在四聚體結(jié)構(gòu)域間未顯示相似性：a.flexpepdock服務(wù)器對(duì)接pif表明，pif當(dāng)結(jié)合至a鏈時(shí)較為穩(wěn)定；b.使用beatmusic服務(wù)器進(jìn)行計(jì)算機(jī)模擬誘變，以便預(yù)測(cè)pif序列中哪一氨基酸在突變后會(huì)產(chǎn)生能量較高的pif-kv1.3β:a-d復(fù)合物，并因此產(chǎn)生不太穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。因此，構(gòu)想2種推定的突變體，突變體-1：p6->e6，及突變體-3：i4->g4；c.表格表示所考慮的突變體，其中有2種是基于其推定的作為配體-受體瓦解劑的選擇的可用性而合成。突變體1(p6->e6)對(duì)于kv1.3β的d鏈的特異性較強(qiáng)，此形式還具有較高的結(jié)合能量和界面評(píng)分。預(yù)計(jì)突變體3(i4->g4)會(huì)破壞與kv1.3β的a鏈的結(jié)合。使用若干pif靶更詳細(xì)地進(jìn)行計(jì)算機(jī)模擬誘變的實(shí)例也表明，rikp是核心序列。對(duì)于pif-ide的另一靶，突變體的驗(yàn)證顯示于圖11中(顯示差示移位分析的數(shù)據(jù))。圖12中也顯示了突變體的驗(yàn)證，其顯示kv1.3β的差示移位分析數(shù)據(jù)。

靈活的計(jì)算機(jī)模擬對(duì)接(演算法#2：cabsdock—這是一種分子建模方法，其中僅提供pif序列，而不是模型，并且使用其分子動(dòng)力學(xué)和柔性的模擬來(lái)尋找肽將結(jié)合的位置)模型與將來(lái)自flexpepdock的pifwt投射至cabsdock中獲得的flag-gg-pif-ha模型上進(jìn)行的靈活的計(jì)算機(jī)模擬對(duì)接(演算法#1：flexpepdock)相比較。值得注意的是，兩種算法(本質(zhì)上截然不同)預(yù)測(cè)結(jié)合至kv1.3β中的同一“凹穴”，并且在兩類模型的界面中共有共同序列rikp，但方向相反。數(shù)據(jù)表明在大多數(shù)情況下，雙重標(biāo)記的pif將能夠結(jié)合pifwt靶。研究ide結(jié)合以及pifwt與pifmut-1/3結(jié)合至kv1.3β的比較。

實(shí)例12.

圖14顯示，在2周連續(xù)注射及隨后每周兩次注射之后，spif在19周研究之后使大鼠的體重相較于對(duì)照組有所改善。相對(duì)于媒劑治療的大鼠，所述作用是顯著的。生長(zhǎng)曲線類似于未被照射的大鼠。

圖15顯示，到研究結(jié)束時(shí)，在致死性照射后spif存活率仍保持，其略低于pbs治療的大鼠中的情形。

圖16描述在致死性照射之后spif會(huì)影響的心臟指標(biāo)。

圖17顯示，spif防止致死性輻射，影響其中多種心臟指標(biāo)。awt-在心臟收縮和心臟舒張時(shí)的前壁厚度。此外，在心臟舒張期間，其減小pwt厚度，p<0.05。

圖18顯示，相較于pbs治療的對(duì)照組，spif顯著地改善大鼠的體重。

圖19顯示，相較于pbs對(duì)照組，spif增加腎重量。p<0.05

pif注射防止異位心臟移植物排斥反應(yīng).將小鼠balb/c心臟同種移植物移植至受體(57b1/6)的腹腔中，將血管連接至腹主動(dòng)脈。移植之后，每日兩次注射spif，通過(guò)使用聽診器測(cè)定心臟脈動(dòng)來(lái)測(cè)定移植的心臟的搏動(dòng)。將spif的作用與pbs治療的對(duì)照組相比較。數(shù)據(jù)顯示，spif明顯延遲排斥反應(yīng)9+/-0.52se相對(duì)于7+/-0(n＝18spif及n＝5對(duì)照組)，p<0.002，(df17)。

pif促進(jìn)原代腎上腺細(xì)胞活力及皮質(zhì)醇分泌：生物人工腎上腺的基礎(chǔ).由于21-羥化酶缺乏引起的先天性腎上腺增生(cah)是人類中最常見的遺傳性內(nèi)分泌病癥，在日后的生活中呈現(xiàn)的臨床癥狀有神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂、雄性化及代謝疾病?；颊呖赡茉馐艿脱獕何ｋU(xiǎn)、低血糖、痤瘡及不孕癥。

當(dāng)前利用糖皮質(zhì)激素替代進(jìn)行的治療選擇只能部分逆轉(zhuǎn)這些癥狀，并且展現(xiàn)過(guò)度糖皮質(zhì)激素治療的不合意的副作用。盡管存在不同的治療算法，但cah的管理仍是重要的治療問(wèn)題，有時(shí)需要激進(jìn)的治療措施，如雙側(cè)腎上腺切除術(shù)(merke等人,1999)。腎上腺細(xì)胞移植對(duì)于這些患者來(lái)說(shuō)是一種可行的治療替代方案。然而，這一策略由于持久的缺乏人類供體器官及需要長(zhǎng)期免疫抑制而受到明顯限制。

解決這些問(wèn)題的方式之一可以是異種細(xì)胞移植。異種移植中的重大突破是基于微封裝于海藻酸鹽中的異種細(xì)胞的應(yīng)用。這種方法為細(xì)胞療法提供了有前景的平臺(tái)(dolgin等人,2014)。細(xì)胞微封裝旨在保護(hù)移植的細(xì)胞免受宿主免疫系統(tǒng)攻擊，無(wú)需免疫抑制劑(neufeld等人,2013)及對(duì)受體進(jìn)行免疫接種。一個(gè)未來(lái)的益處是，植入可以通過(guò)簡(jiǎn)單的注射程序而不是手術(shù)操作實(shí)現(xiàn)。pif暴露于原代牛腎上腺細(xì)胞可以是實(shí)現(xiàn)有效腎上腺移植的適合來(lái)源。

有關(guān)從四種牛腎上腺分離的原代牛腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞(bac)的實(shí)驗(yàn).對(duì)于活力、細(xì)胞凋亡及增殖分析，將bac接種于96孔盤中(1×10⁴個(gè)細(xì)胞/孔，一式六份)。對(duì)于皮質(zhì)醇產(chǎn)生分析，將細(xì)胞接種于24孔盤中(5×l0⁴個(gè)細(xì)胞/孔，一式三份)。將pif溶解于生理鹽水中并以0,1μg/ml濃度使用。一組細(xì)胞在細(xì)胞分離之后立即接受含有pif的培養(yǎng)基(pifd0)。另一組細(xì)胞在細(xì)胞分離后24小時(shí)接受含有pif的培養(yǎng)基(pifd1)。對(duì)照細(xì)胞不接受pif。在開始治療之后第3天，使用xtt細(xì)胞增殖分析(roche)評(píng)估活力。在開始治療之后第3天，使用brdu細(xì)胞增殖分析(millipore)測(cè)量增殖情況。在開始治療之后第3天，通過(guò)使用caspase-glo3/7分析(promega)測(cè)定半胱天冬酶3/7活性來(lái)分析細(xì)胞凋亡。對(duì)于刺激皮質(zhì)醇，使用3ng/ml濃度的acth(synacthen)。上清液中的皮質(zhì)醇將通過(guò)eia(ibl)測(cè)量。圖20中的數(shù)據(jù)顯示，培養(yǎng)的pif增加細(xì)胞活力，同時(shí)減少細(xì)胞凋亡。圖21中的數(shù)據(jù)顯示，pif明顯促進(jìn)這些細(xì)胞的皮質(zhì)醇分泌，其作用在添加至培養(yǎng)物之后一天最明顯。這些支持性數(shù)據(jù)指示，在移植之前進(jìn)行腎上腺細(xì)胞預(yù)處理對(duì)于宿主將是有意義的，因此，為開發(fā)生物人工腎上腺提供可能。

使用pif進(jìn)行的關(guān)于大鼠胰島素瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)-胰島移植的基礎(chǔ).pif同時(shí)在體外和體內(nèi)調(diào)控整體免疫反應(yīng)[15-17]。在nod小鼠中，pif長(zhǎng)期防止糖尿病(過(guò)繼轉(zhuǎn)移及自發(fā)地發(fā)生的疾病)發(fā)生。平行測(cè)試的pifscr無(wú)作用。保留的胰島結(jié)構(gòu)和胰島素表達(dá)與胰臟pdi/硫氧還蛋白和hsp蛋白質(zhì)水平增加有關(guān)。此與th1和th2細(xì)胞因子水平變化所反映的全身免疫調(diào)控相結(jié)合。近來(lái)顯示(barneaplosone2014)，pif經(jīng)由共有結(jié)合位點(diǎn)直接靶向pdi/t及hsp。因此，所觀察到的對(duì)于移植保護(hù)至關(guān)重要的針對(duì)氧化應(yīng)激和蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊的防護(hù)在機(jī)理上是講得通的。能夠?qū)⒂谢盍Φ囊葝u細(xì)胞移植至i型糖尿病患者中將是一項(xiàng)重大進(jìn)展，因?yàn)榈侥壳盀橹?，此類方法受限于供體細(xì)胞可用性以及在移植之后需要持續(xù)免疫抑制，而且盡管移入，但移植的細(xì)胞無(wú)法為這些患者長(zhǎng)期提供適當(dāng)胰島素。

在實(shí)驗(yàn)中使用了第24代ins-1細(xì)胞進(jìn)行pif施用。對(duì)于活力、細(xì)胞凋亡及增殖分析，將細(xì)胞接種于96孔盤中(1×10⁴個(gè)細(xì)胞/孔，一式六份)。使用三種濃度的pif：0,01μg/ml；0,1μg/ml及1μg/ml。每天更換含有底物的培養(yǎng)基。使用xtt細(xì)胞增殖分析(roche)評(píng)估活力。使用brdu細(xì)胞增殖分析(roche)測(cè)量增殖情況。通過(guò)使用caspase-glo3/7分析(promega)測(cè)定半胱天冬酶3/7活性來(lái)分析細(xì)胞凋亡。利用回歸分析對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，以評(píng)價(jià)在測(cè)試模型中發(fā)生的過(guò)程。為評(píng)價(jià)pif對(duì)細(xì)胞的作用，使用針對(duì)相關(guān)樣品的wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)以及spearman秩相關(guān)和studentt檢驗(yàn)。圖22顯示，pif在48小時(shí)的時(shí)候促進(jìn)胰島素瘤細(xì)胞活力及在0.lμg/ml的較低濃度下促進(jìn)增殖。細(xì)胞凋亡增加指示在培養(yǎng)條件下常常出現(xiàn)的質(zhì)量較差的細(xì)胞消除。

序列表

<110>倍奧英賽普特有限責(zé)任公司(bioincept,llc)

伊藤·r·巴尼(barnea,eytanr.)

<120>用于治療急性輻射綜合癥的組合物和方法

<130>120785.02502

<150>62/051077

<151>2014-09-16

<150>62/113298

<151>2015-02-06

<150>62/211660

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<170>patentinversion3.5

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<213>人工序列

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<400>1

metvalargilelysproglyseralaasnlysproseraspasp

151015

<210>2

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>2

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151015

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<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

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metvalargilelysproglyseralaasnlysproser

1510

<210>4

<211>9

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<220>

<223>合成肽

<400>4

metvalargilelysproglyserala

15

<210>5

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

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glyargvalaspproserasnlyssermetprolysaspileala

151015

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<212>prt

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<220>

<223>合成肽

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serglnalavalglngluhisalaserthr

1510

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<220>

<223>合成肽

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serglnalavalglngluhisalaserthrasnmetgly

1510

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

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gluvalalaglnhisserglnalaserthrmetasngly

1510

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

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glyglnalaserseralaglnmetasnserthrglyvalhis

1510

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<220>

<223>合成肽

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serglyilevaliletyrglntyrmetaspaspargtyrvalglyser

151015

aspleu

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<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

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glymetarggluleuglnargseralaasnlys

1510

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<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>12

valileileilealaglntyrmetasp

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

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metvalargilelysproglyseralaasnlysproseraspasp

151015

<210>14

<211>13

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>14

serglnalavalglngluhisalaserthrasnmetgly

1510

<210>15

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>15

serglyilevaliletyrglntyrmetaspaspargtyrvalglyser

151015

aspleu

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<211>9

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<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>16

metvalargilelysproglyserala

15

<210>17

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>17

valileileilealaglntyrmetasp

15

<210>18

<211>5

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<400>18

metvalargilelys

15

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<211>4

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

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proglyserala

1

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>xaa

<222>(3)..(3)

<223>xaa是除精氨酸外的任何氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是除精氨酸外的任何氨基酸

<400>20

metvalxaailelysproglyseralaasnlysproseraspasp

151015

<210>21

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>xaa是除精氨酸外的任何氨基酸

<400>21

xaavalargilelysproglyseralaasnlysproseraspasp

151015

<210>22

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>xaa是除精氨酸外的任何氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是除精氨酸外的任何氨基酸

<400>22

xaavalxaailelysproglyseralaasnlysproseraspasp

151015

<210>23

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(6)

<223>xaa是除精氨酸外的任何氨基酸

<400>23

metvalargilelysxaaglyseralaasnlysproseraspasp

151015

<210>24

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是除精氨酸外的任何氨基酸

<400>24

metvalargxaalysproglyseralaasnlysproseraspasp

151015

<210>25

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是除精氨酸外的任何氨基酸

<400>25

metxaaargilelysproglyseralaasnlysproseraspasp

151015

<210>26

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<213>人工序列

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<223>合成肽

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151015

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<213>人工序列

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<223>合成肽

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<213>人工序列

<220>

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alavalargilelysproglyseralaasnlysproseraspasp

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