本發(fā)明涉及由西洋蒲公英(taraxacumofficinalis)、蕎麥(fagopyrumesculentum)、假葉樹(ruscusaculeatus)、毛果一枝黃花(solidagovirgaurea)和貓須草(orthosiphonstamineus)組成的、或來自所述植物的提取物或者來自所述植物及其提取物的活性成分的混合物，包含所述混合物的組合物，和二者用途。本發(fā)明的混合物和組合物促進機體中的凈化生理過程(depurativephysiologicalprocess)，并且特別指出用于治療肥胖患者中的水潴留的病理生理學(xué)，特別是為了恢復(fù)淋巴內(nèi)皮的生理通透性。本發(fā)明還涉及本發(fā)明組合物的用途以及通過施用本發(fā)明組合物來治療肥胖患者中水潴留的病理生理學(xué)。
背景技術(shù)：
：淋巴系統(tǒng)除了保持組織中流體的穩(wěn)態(tài)外，在免疫防御和維持代謝中也具有關(guān)鍵作用。因此，它是生物體與周圍環(huán)境之間的界面，形成免疫系統(tǒng)的物理基礎(chǔ)，免疫系統(tǒng)通過其通道和淋巴結(jié)進行抗原呈遞和識別以及免疫應(yīng)答激活的過程。因此，通過組織中流體的穩(wěn)態(tài)，通過腸中脂肪的吸收，并且還通過從大部分組織中的間隙中除去脂肪，淋巴系統(tǒng)對于免疫功能是重要的。淋巴系統(tǒng)能夠吸收來自飲食的脂肪，促進攝入的脂質(zhì)的同化(吸收和積累)和代謝，同時表現(xiàn)為一種“垃圾場”，在這種“垃圾場”組織堆積死細胞、細菌、蛋白質(zhì)、基質(zhì)片段、脂質(zhì)和其它大分子，這些將被分配到旨在去除其的器官，例如肝、腎、皮膚、肺和大腸。淋巴系統(tǒng)具有以下功能：維持和調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)；吸收和再循環(huán)細胞外流體，以維持體液的穩(wěn)態(tài)；運輸大分子。在人體內(nèi)，水和溶質(zhì)(并且特別是存在于血液循環(huán)中的蛋白質(zhì))通過毛細血管過濾到間隙空間，并且為了平衡這種流動，間隙體液和其中存在的蛋白質(zhì)再次進入血液。每天約50％的血漿蛋白質(zhì)從毛細血管中過濾，并且不被小靜脈重新吸收，而是僅通過淋巴系統(tǒng)移動，淋巴系統(tǒng)具有將其返回到體循環(huán)的作用。血漿蛋白質(zhì)的血管外積聚導(dǎo)致水從血管流到間隙，產(chǎn)生水腫。如果存在于胸導(dǎo)管內(nèi)的淋巴液被轉(zhuǎn)移到合適的受器中而不是進入體循環(huán)，則所有血液將在短時間內(nèi)轉(zhuǎn)化成淋巴液。這是威脅生命的，并且表明淋巴系統(tǒng)在使從毛細血管丟失的蛋白質(zhì)和體液返回到血液中的重要性。在健康個體中，間隙體液占體重的約20％，并受多種臨時機制調(diào)節(jié)，包括結(jié)構(gòu)變化，通過血管作用的力(例如滲透壓、腫瘤和靜水壓)和淋巴流量的調(diào)節(jié)。在大多數(shù)組織中，淋巴管收集離開毛細血管的血漿和蛋白質(zhì)。除體液和蛋白質(zhì)之外，腸系膜淋巴結(jié)中的淋巴液含有從腸腔輸送并由位于腸絨毛中的中央毛細淋巴管(初始毛細淋巴管)收集的脂肪。腸淋巴液中脂質(zhì)的濃度為約1-2％，并且高度依賴于營養(yǎng)結(jié)構(gòu)。進食后，腸淋巴液的流量明顯增加。這種作用可以解釋為對脂質(zhì)負荷增加的調(diào)整，并且有助于引導(dǎo)其通過淋巴管以便分布在整個機體中。最近的研究表明，在存在氧化的低密度脂蛋白(ox-ldl)的情況下，腸系膜淋巴管的收縮性升高，表明脂質(zhì)對淋巴收縮性的直接影響。因此，腸系膜淋巴管對于去除由腸道吸收的脂質(zhì)和維持消化系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)是至關(guān)重要的。間隙空間中體液的增加導(dǎo)致皮膚和皮下組織的結(jié)構(gòu)的變化，通常是顯著的變化。由于淋巴液淤滯變成慢性并且由于所產(chǎn)生的水腫，所以存在在水腫中具有越來越多的成纖維細胞、脂肪細胞和角質(zhì)形成細胞的傾向。組織組成的這種變化導(dǎo)致皮膚的增厚和皮下組織的纖維化，然而這些事件尚未被很好地理解。在淋巴水腫的情況下，即逐步纖維化的階段，除了淋巴液淤滯和組織結(jié)構(gòu)的紊亂之外還有炎癥。文獻中記錄的測試數(shù)據(jù)已表明，組織中淋巴液的損失具有脂肪形成和炎性作用。淋巴水腫是淋巴液在間隙組織中的積聚，其造成嚴重腫脹，特別是四肢，例如胳膊和腿，并且在罕見的情況下也在機體的其它部位。淋巴水腫可以是原發(fā)性的，也就是說是由淋巴系統(tǒng)本身的變化引起的，或者可以繼發(fā)于外科手術(shù)干預(yù)后的淋巴結(jié)移除，例如乳房切除術(shù)，其中除了移除乳腺組織外，也切除了衛(wèi)星淋巴結(jié)。在淋巴系統(tǒng)嚴重惡化的情況下，存在淋巴液的強烈積累，其超過淋巴系統(tǒng)本身的排液能力，從而引起隨后的富含蛋白質(zhì)的流體的召回，如果未經(jīng)治療，則會降低組織氧化，干擾瘢痕形成過程，并且可以提供細菌生長的區(qū)域，使淋巴管炎的臨床表現(xiàn)復(fù)雜化。淋巴水腫不同于在靜脈功能不全的情況下發(fā)生的水腫，但是在這種情況下，如果未正確治療，也可能發(fā)展成特征為靜脈系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)的組合變化的疾病。淋巴水腫是一種病理狀態(tài)，其以所有上述脂肪在下肢的積聚為特征，并且一般向下顯露，也就是說，從肢體的上部，即從臀部向下建立，產(chǎn)生典型的“騎馬褲”外觀。隨著水腫-成纖維硬化脂膜炎直到形成皮下淋巴結(jié)的發(fā)展，淋巴水腫可能變得更加嚴重。在某些情況下，可以在膝蓋關(guān)節(jié)看到中間脂肪沉積物。具有淋巴水腫的受試者經(jīng)常報告組織疼痛，并且在小創(chuàng)傷后容易發(fā)生瘀傷。周圍微血管病在淋巴水腫組織中發(fā)展，并且誘導(dǎo)血管通透性的上升，以及具有高蛋白質(zhì)含量的體液在細胞外基質(zhì)中的積累。體液的積累引起了前淋巴通道的擴張，減少了其外流。也經(jīng)歷毛細淋巴管的形態(tài)和功能變化，例如微動脈瘤的形成。除此之外，還觀察到了淋巴管(其代表淋巴收集器的解剖功能單元，或設(shè)置在一個閥機構(gòu)和另一個閥機構(gòu)之間的段)的活動度的紊亂。皮膚傾向于失去色調(diào)，并且對于管和組織的作用較少，并且為了增加間隙壓力，需要更大量的間隙體液。以這種方式，淋巴液的排液功能也降低，因此，具有對水腫發(fā)展的不顯著的被動防御機制。歷史數(shù)據(jù)和最近的研究已經(jīng)證明，淋巴系統(tǒng)和脂肪組織在解剖和功能上是相關(guān)的。由解剖異常、病變、阻塞或感染引起的淋巴管功能不全導(dǎo)致疾病組織中間隙體液以及蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的積累。在原發(fā)性和繼發(fā)性淋巴水腫的情況下，如果沒有解決慢性炎癥，就會發(fā)生纖維化和脂肪組織的積累，甚至在19世紀(jì)，德國皮膚科醫(yī)生確認了組織中流體的淤滯能夠?qū)е轮镜姆e累。在最近的時代，已經(jīng)對chy小鼠進行了研究，并且已經(jīng)證明淋巴液是脂肪細胞分化的有效刺激物，并且當(dāng)提到促進脂肪形成時，淋巴液與胰島素具有協(xié)同作用。此外，淋巴淤滯增加了脂聯(lián)素的表達，已知脂聯(lián)素在脂肪積累期間增加并且在肥大和組織缺氧期間減少。淋巴管生成的升高也與炎性疾病如銀屑病和氣道慢性炎癥有關(guān)：1-慢性炎癥可以促進脂肪組織塊的出現(xiàn)，以滿足在信號事件期間由免疫細胞的活化引起的基本能量需求，以及2-慢性炎癥可以通過刺激淋巴管生成來促進更嚴重的脂肪形成，惡化了患病脂肪組織中淋巴液的釋放。圖10所示的圖解總結(jié)了與肥胖個體的水潴留相關(guān)的問題。從圖解可以看出，肥胖受試者傾向于積聚使病癥惡化的流體，導(dǎo)致淋巴排液的減少并且淋巴管和血管的通透性升高，和隨后細胞外基質(zhì)的惡化和隨后的炎癥和從腎排泄的na+減少，還通過存在于肥胖個體中的腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的惡化。雖然有許多產(chǎn)品用于治療肥胖個體的水潴留和水腫，但是考慮到與肥胖相關(guān)的復(fù)雜的病理生理表現(xiàn)的新組合物是期望的。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種組合物，其i)作用于肥胖個體的血管和淋巴管的通透性(其因此這些表現(xiàn)出這些組織的炎癥)，減少來自淋巴系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)的流體的滲漏(即與生理排放相比過度排放)，因此使淋巴內(nèi)皮返回到生理狀態(tài)；ii)恢復(fù)淋巴系統(tǒng)中的正確通道，允許正確地重新吸收流體和其中的炎性分子，從而也減少與淋巴脂肪生成相關(guān)的惡性循環(huán)；iii)具有利尿作用。本發(fā)明的組合物包含植物提取物，所述植物提取物單獨發(fā)揮一些有益效果和一些不利效果，并且適當(dāng)?shù)鼗旌蠒r能夠發(fā)揮滿足上述需求的一般效果。本發(fā)明的作者對內(nèi)皮的通透性進行了測試，以便評估許多植物提取物對淋巴細胞和血管細胞的健康細胞培養(yǎng)物的通透性的影響，以及用炎性因子如il-1β預(yù)處理的淋巴細胞和血管細胞的細胞培養(yǎng)物的影響，從而以模擬肥胖個體的淋巴管和靜脈血管(其中因此存在這些組織的慢性炎癥)的狀況。獲得的數(shù)據(jù)顯示，具有期望的利尿劑作用或刺激淋巴管濃度的作用的植物在恢復(fù)用il-1β預(yù)處理的淋巴細胞或血管的正確通透性(即與用安慰劑處理的這種類型的細胞所觀察到的生理通透性相比，管的通透性增加)上沒有活性，意味著個別考慮時，使用這樣的植物并不滿足上述需求。為了提供滿足上述要求的組合物，本發(fā)明的作者鑒定了一組植物，其混合的提取物滿足上述要求，盡管單個植物的提取物不符合上述要求，例如用炎性因子如il-1β預(yù)處理的細胞中血管和/或淋巴管的通透性的升高。在本發(fā)明的活性成分的混合物中，本發(fā)明的作者能夠通過適當(dāng)?shù)鼗旌蟻硎褂靡恍┲参镆詫崿F(xiàn)一些期望效果，并限制不符合上述要求的副作用，從而提供能夠使由炎性因子損傷的淋巴內(nèi)皮返回到生理通透性狀態(tài)的混合物。因此，本發(fā)明涉及由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草組成的混合物，由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物，和由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草以及西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物。本發(fā)明還涉及一種組合物，其包含作為唯一活性成分的由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草組成的混合物和至少一種載體或輔料。本發(fā)明還涉及一種組合物，其包含作為唯一活性成分的由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物和至少一種載體或輔料。本發(fā)明還涉及一種組合物，其包含作為唯一活性成分的由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草以及西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物。因此，本發(fā)明涉及在上文中定義并且在下文更詳細地定義的和在權(quán)利要求中的混合物或組合物在治療與淋巴通透性過高相關(guān)的病變中的用途。特別地，獲得的和報告的數(shù)據(jù)證實了本發(fā)明的混合物或組合物用于與淋巴通透性過高相關(guān)的病變(其表現(xiàn)出淋巴內(nèi)皮完整性的失調(diào))的適用性。然而，本發(fā)明還涉及本文所述和要求保護的混合物或組合物用于在與淋巴管通透性過高相關(guān)的病變中使用，其中所述病變選自特別是與肥胖相關(guān)的慢性炎癥、淋巴水腫、脂肪水腫和水潴留病變。換句話說，本發(fā)明還涉及所述混合物或所述組合物用于治療經(jīng)受炎性因子作用的淋巴內(nèi)皮，而且以便使淋巴內(nèi)皮返回至其生理通透性。本發(fā)明還涉及用于治療特別是與肥胖相關(guān)的水潴留病變的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草組成的混合物或其提取物組成的混合物或者由所述植物及其提取物組成的混合物，或者治療有效量的組合物，所述組合物包含作為唯一活性成分的由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草組成的混合物，或者由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物，或者由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草以及西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物，和至少一種藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料。附圖說明圖1示意性地示出了本發(fā)明作者使用的模型，以進行通透性測試和多種測試提取物對肥胖個體(和血管和淋巴管受炎性因子作用的個體)中血管或淋巴內(nèi)皮的影響的研究。在圖1的框a中，示出了模型，其中在半透膜上的培養(yǎng)物中測量淋巴或血管內(nèi)皮細胞，其中所述膜上方和下方存在培養(yǎng)基，以允許在細胞彼此未完全連接時培養(yǎng)基中存在的組分通過，并且fitch-葡聚糖分子插入在細胞上方的培養(yǎng)基中。通過fitc-葡聚糖復(fù)合物的熒光進行定量提供了對內(nèi)皮通透性的測量。為了檢查成分的活性，一旦細胞達到融合度，就移除培養(yǎng)基，加入樣品(粉末，混合物之一的提取物)并保持接觸18小時。不改變細胞培養(yǎng)基，加入il1β(10ng/ml，1h)。一旦刺激時間過去，移除培養(yǎng)基，加入3μm的fitch-葡聚糖。在圖1的方框b中可以看出，內(nèi)皮細胞暴露于炎性因子如il-1β誘導(dǎo)細胞之間的間隙，隨后內(nèi)皮通透性升高。在本發(fā)明的模型中，使用可從promocell,“humandermallymphaticendothelialcells(hdlec)adultdonor”目錄號c-12217購得的細胞。圖2示出了在用蕎麥提取物預(yù)處理然后用il1β處理的淋巴內(nèi)皮細胞上進行的通透性測試的結(jié)果。圖表明il-1β處理的內(nèi)皮細胞的通透性如何從100％(歸因于健康細胞的常規(guī)值)升高至約160％，以及單獨提取物如何僅在較高測試濃度下能夠?qū)⑼ㄍ感曰謴?fù)到接近基礎(chǔ)值的值，證明了本發(fā)明混合物的較弱的保護作用。圖3示出了在用貓須草提取物預(yù)處理然后用il1β處理的淋巴內(nèi)皮細胞上進行的通透性測試的結(jié)果。圖表明這種提取物是唯一能夠用較低濃度來恢復(fù)與健康細胞相同的通透性的提取物，但是利用較高濃度，其將細胞通透性降低到低于正常情況(常規(guī)定義為100％)，停留在80％左右。圖4示出了在用毛果一枝黃花提取物預(yù)處理然后用il1β處理的淋巴內(nèi)皮細胞上進行的通透性測試的結(jié)果。圖表明提取物如何不能恢復(fù)與健康細胞相等的通透性，并且對內(nèi)皮通透性基本上沒有任何影響。圖5示出了在用毛果一枝黃花和貓須草的共提取物(共提取前3:1)預(yù)處理然后用il1β處理的淋巴內(nèi)皮細胞上進行的通透性測試的結(jié)果。圖表明提取物如何不能恢復(fù)與健康細胞相等的通透性，并且在較高濃度下這種共提取物甚至對最初發(fā)炎的內(nèi)皮的通透性具有不利影響。圖6示出了在用西洋蒲公英提取物預(yù)處理然后用il1β處理的淋巴內(nèi)皮細胞上進行的通透性測試的結(jié)果。圖表明提取物如何不能恢復(fù)與健康細胞相等的通透性。圖7示出了在用假葉樹提取物預(yù)處理然后用il1β處理的淋巴內(nèi)皮細胞上進行的通透性測試的結(jié)果。圖表明提取物如何不能恢復(fù)與健康細胞相等的通透性，以及提取物在兩種濃度下如何最低限度地影響il1β的效果。圖8示出了在用根據(jù)本發(fā)明的提取物混合物預(yù)處理然后用il1β處理的淋巴內(nèi)皮細胞上進行的通透性測試的結(jié)果。圖表明混合物如何令人驚奇地能夠恢復(fù)與健康細胞相等的通透性。圖9示出了通過一式三份測試獲得的數(shù)據(jù)，并且證實了在大多數(shù)情況下在之前的圖中已經(jīng)顯示的結(jié)果，還顯示了在圖8中報告的結(jié)果在所有測試濃度如何對暴露于il-1β造成的損傷是顯著的，以及提取物的混合物如何不會顯著改變健康細胞的通透性(降低或升高)。在這些實驗中，除了關(guān)于用il-1β和待測產(chǎn)品處理的細胞的數(shù)據(jù)之外，還分析了關(guān)于不用il-1beta處理僅用待測產(chǎn)品(本發(fā)明的提取物或混合物)處理細胞的數(shù)據(jù)。特別地，在圖9a中報道了用或不用il-1β和蕎麥提取物處理的hdlec細胞獲得的數(shù)據(jù)。從圖9a可以看出，提取物如何能夠僅在最高測試濃度下將通透性恢復(fù)到接近基礎(chǔ)值的值，證明與本發(fā)明的混合物相比較弱的保護作用。然而，還似乎明顯的是，相同濃度具有降低未用il-1β處理的細胞的基礎(chǔ)通透性的效果，這是不期望的效果。圖9b示出了用西洋蒲公英獲得的數(shù)據(jù)(其與圖6中的數(shù)據(jù)相匹配)，并且還顯示了重要的數(shù)據(jù)，即在1微克/ml觀察到基礎(chǔ)通透性的顯著降低，這是不期望的效果。圖9c示出了用假葉樹獲得的數(shù)據(jù)，證明了這些提取物對細胞通透性的影響的合理變異性，并且在任何情況下都表明這些提取物不能以統(tǒng)計學(xué)顯著的方式恢復(fù)例如未經(jīng)處理的樣品的通透性，所述數(shù)據(jù)還顯示增加未用il-1β處理的淋巴內(nèi)皮的通透性的趨勢。圖9d示出了用毛果一枝黃花和貓須草獲得的數(shù)據(jù)，與圖5中報道的數(shù)據(jù)一致；該圖還顯示這樣的提取物顯著增加未用il-1β處理的淋巴內(nèi)皮的通透性，從而產(chǎn)生不期望的效果。圖9e示出了用本發(fā)明混合物獲得的數(shù)據(jù)，其具有在任何測試濃度下使暴露于白細胞介素的細胞的通透性的完全正?；男Ч?。該圖還表明混合物如何幾乎不誘導(dǎo)用單獨的混合物處理的淋巴內(nèi)皮的通透性的任何變化。圖9示出了用蘆丁(5微克/毫升)作為陽性對照處理細胞獲得的數(shù)據(jù)，圖9g示出了用本發(fā)明混合物處理hdbec細胞獲得的數(shù)據(jù)，證明了混合物的正?；饔?，甚至在血管內(nèi)皮細胞上。符號*表示基礎(chǔ)顯著性，符號#表示0+il1β顯著性。圖10是概括了與肥胖個體的水潴留相關(guān)的問題的圖解。圖11報告了用以下刺激處理的融合hdlec(a)和hdbec(b)細胞中閉合蛋白(上框)和蛋白質(zhì)zo-1(下框)的免疫熒光分析數(shù)據(jù)：無刺激，單獨il-1β(10ng/ml，1小時)，單獨本發(fā)明的混合物(10微克/ml，18小時)；本發(fā)明混合物(18小時)+il-1β(1小時)。用60倍放大獲得共焦圖像，比例尺＝10微米。閉合蛋白和zo-1作為代表緊密內(nèi)皮連接的標(biāo)記物進行評估。融合細胞表達這些標(biāo)記物，然而其在用il-1β處理后減少。與本發(fā)明的混合物的預(yù)孵育表明，該處理使得即使在用il-1β處理后也可以保持細胞間接觸完整。圖12示出了用nos抑制劑l-nmma處理hdlec細胞獲得的數(shù)據(jù)。圖12a示出了在具有和不具有本發(fā)明混合物(10微克/毫升，18小時)的情況下用il-1β(10ng/ml，1小時)，用l-nmma100μm，以及用il-1β+l-nmma處理后對hdlec細胞的通透性的影響。圖12b顯示了暴露于本發(fā)明混合物(10微克/ml18小時)后，hdlec細胞中enos產(chǎn)生的western印跡的分析數(shù)據(jù)。該圖表報道了與肌動蛋白相比目標(biāo)蛋白質(zhì)根據(jù)a.d.u.的定量。圖13示出了在暴露于本發(fā)明混合物之后的hdlec細胞中與inos和cox-2(分別為框a和b)的產(chǎn)生有關(guān)的數(shù)據(jù)。a.d.u.仍為10微克/毫升18小時。圖14在框a、b和c中分別報告了關(guān)于暴露于10微克/ml的本發(fā)明混合物18小時后hdlec細胞中sod-1、過氧化氫酶和p22phox的產(chǎn)生的數(shù)據(jù)。**p<0.01，與基礎(chǔ)相比。與肌動蛋白相比進行定量，數(shù)據(jù)以a.d.u.為單位報告?？騞，在具有和不具有本發(fā)明混合物(10微克/ml18小時)的情況下用il-1β(10ng/ml1小時)刺激的細胞中的ros產(chǎn)生。數(shù)據(jù)表示為相對熒光單位(rfu)/細胞數(shù)(n＝3)，*p<0.05和***p<0.001，與基礎(chǔ)相比。###p<0.001，與il-1beta相比。(對于圖12b、13和14中的所有實驗，數(shù)據(jù)以a.d.u.為單位，n＝3)。如圖2至9和11-14所示，結(jié)果是對于每種測試化合物一式三份進行的實驗的結(jié)果。在圖中和本文中使用的縮寫fbs胎牛血清，cox-2環(huán)氧合酶2，enos內(nèi)皮一氧化氮合酶，hdlec人皮膚淋巴內(nèi)皮細胞，hdbec人皮膚血管內(nèi)皮細胞，inos誘導(dǎo)型一氧化氮合酶，il-1β白介素β，l-nmmal-ng-單甲基精氨酸，ros活性氧，sod-1超氧化物歧化酶1，tnfα腫瘤壞死因子α，zo-1緊密連接蛋白1。具體實施方式本發(fā)明的作者已經(jīng)使用暴露于炎性因子(例如肥胖個體中存在的由炎性脂肪細胞產(chǎn)生的那些)的淋巴管和血管的細胞模型來評估具有期望活性的多種植物提取物，例如，利尿活性，如西洋蒲公英、蕎麥，或誘導(dǎo)淋巴管(lymphangion)的基本單位收縮的活性，如假葉樹，對淋巴管和血管的通透性的影響。事實上，已知的是在肥胖個體中觀察到這種管的通透性升高，隨后液體從這些管非生理性排出，并且其不能重新吸收和正確地引導(dǎo)從血管和淋巴管滲透出的流體和炎性分子，隨后是從淋巴管排出的流體的脂肪形成作用，以及因此建立與肥胖相關(guān)的水潴留的生理病理學(xué)有關(guān)的惡性循環(huán)。因此，本發(fā)明的作者將注意力集中在由植物提取物引起的對淋巴管和血管的通透性的影響上，所述植物提取物從刺激淋巴管收縮(淋巴管收縮和可能改善淋巴液的通道)或利尿的觀點是潛在有益的。因此，作者使用了圖1示意性示出的模型來研究多種植物提取物對血管或淋巴管內(nèi)皮的影響。如圖1所示，內(nèi)皮細胞暴露于細胞因子(如在肥胖個體中存在的炎癥條件下)改變血管內(nèi)皮的完整性，血管內(nèi)皮對流體的通過變得更加可滲透。已經(jīng)通過測量穿過內(nèi)皮屏障的熒光探針的量的實驗確定了通透性的程度，所述內(nèi)皮屏障分隔分別代表管內(nèi)腔(半透膜上方)和間隙(半透膜下方)的兩個隔室。將增加量的各種植物的提取物引入半透膜上的培養(yǎng)基中，并檢查其對內(nèi)皮通透性的影響。用本發(fā)明的混合物進行相同的實驗。將與不暴露于細胞因子的健康細胞中觀察的相等的值設(shè)定為等于100％的滲透性值，可以看到，僅貓須草在10μg/ml的濃度下成功地將淋巴內(nèi)皮的通透性降低至少至100％(圖3)，而在較高劑量下，這種通透性甚至降低得太多，而當(dāng)與毛果一枝黃花共提取時，其對淋巴內(nèi)皮的通透性具有非陽性的作用(圖5)，而無其它單個提取物能夠?qū)B透率恢復(fù)到100％(圖2、4、6和7)。然而，本發(fā)明作者獲得的數(shù)據(jù)令人驚奇地顯示出，本發(fā)明的混合物(其中貓須草和毛果一枝黃花也作為共提取物存在)如何能夠在任何測試濃度下將淋巴內(nèi)皮通透性恢復(fù)到100％(圖8和圖9e)。換句話說，本發(fā)明的作者已經(jīng)證明，本發(fā)明的混合物能夠在任何測試濃度下以優(yōu)于單獨測試的任何組分的方式降低淋巴內(nèi)皮的過高通透性，表明所選擇的組合最佳地并且以恒定的方式保護了淋巴內(nèi)皮的正確通透性。作者還證明，與大多數(shù)單個提取物相反，本發(fā)明的混合物在不存在細胞因子炎性因子的情況下不會對淋巴內(nèi)皮通透性產(chǎn)生任何改變，因此表明這樣的混合物如何不具有對健康內(nèi)皮不期望的副作用。本發(fā)明的作者還發(fā)現(xiàn)，與通過簡單添加兩種植物的單個提取物相比，貓須草和毛果一枝黃花的共提取提供了具有更好的利尿活性的共提取物。此外，本發(fā)明的作者已經(jīng)證明，如本文所述和要求保護的，由他們選擇的混合物通過促進緊密連接的完整性來提供其對細胞通透性的影響，并且所述混合物還降低了炎性成分如誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inos)和環(huán)氧合酶2(cox-2)的表達，而不改變內(nèi)皮nos(enos)，因此證明了混合物如何也可用于改善改良的淋巴循環(huán)狀況和支持淋巴內(nèi)皮的生理功能。因此，由本發(fā)明的作者進行的提取物的選擇提供了因此滿足下面列出的所有要求的混合物，即，i)作用于肥胖個體的血管和淋巴管的通透性(其這些個體因此表現(xiàn)出這些組織的炎癥)，減少來自淋巴系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)的流體的滲漏(即與生理排放相比過度排放)，因此使淋巴內(nèi)皮返回到生理狀態(tài)；ii)恢復(fù)淋巴系統(tǒng)中的正確通道，允許正確地重新吸收流體和其中的炎癥分子，從而也減少與淋巴脂肪生成相關(guān)的惡性循環(huán)；iii)具有利尿作用。并且同時不具有與形成本發(fā)明的混合物的植物的單個提取物相關(guān)的不期望的副作用，特別是關(guān)于淋巴內(nèi)皮的通透性。因此，本發(fā)明涉及由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草組成的混合物，由所述植物的提取物組成的混合物，或者由所述植物和所述植物的提取物組成的混合物。對于本發(fā)明的目的，術(shù)語西洋蒲公英是指所述植物的根，或者術(shù)語西洋蒲公英的提取物是指西洋蒲公英的根的水醇提取物(例如乙醇/水40-70％，例如60％)。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語蕎麥?zhǔn)侵杆鲋参锏娜~，或者術(shù)語蕎麥的提取物是指蕎麥的葉的水醇提取物(例如乙醇/水40-80％，例如70％)。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語毛果一枝黃花是指所述植物的頂部，或者術(shù)語毛果一枝黃花的提取物是指毛果一枝黃花的頂部的提取物(例如乙醇/水30-60％，例如40％)。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語貓須草是指所述植物的葉，或者術(shù)語貓須草的提取物是指貓須草的葉的提取物(例如乙醇/水40-70％，例如50％)。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語假葉樹是指所述植物的根莖和/或根，或者術(shù)語假葉樹的提取物是指假葉樹的根莖或根的提取物(例如乙醇/水40-80％，例如70％)。植物的部分可以是新鮮的或干燥的。為了本發(fā)明的目的，毛果一枝黃花和貓須草的共提取物是指毛果一枝黃花的頂部和貓須草的葉的提取物，其通過將每種植物的合適的部位，例如毛果一枝黃花的葉和貓須草的葉以1:1或2:1或3:1的比例放在同一溶劑中，并且根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法進行提取，以獲得水醇提取物(如乙醇/水40-70％，例如50％)來產(chǎn)生。上述每種提取物可以是凍干形式。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物，在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草組成的混合物，在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草和西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物，其中所有三種混合物用于在治療與淋巴通透性過高相關(guān)的病變中使用。特別地，獲得和報道的數(shù)據(jù)表明本發(fā)明混合物用于在與淋巴管通透性過高相關(guān)的病變中使用的適用性，特別是對于呈現(xiàn)淋巴內(nèi)皮完整性失調(diào)的病變，并且可以選自例如慢性炎癥、淋巴水腫、脂肪水腫和水潴留生理病變，特別是在所述病理生理學(xué)與循環(huán)停滯、淋巴水腫和/或組織的炎癥相關(guān)的情況下，例如在肥胖個體中。在本發(fā)明的一個實施方案中，混合物旨在用于在治療經(jīng)受炎性因子作用的淋巴內(nèi)皮中使用，以便使所述內(nèi)皮恢復(fù)到與健康(生理)淋巴內(nèi)皮的通透性相似或相等的滲透狀態(tài)。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)提及某些組分占本發(fā)明的混合物的x％至y％的事實時，這意味著所述組分占本發(fā)明的混合物的按重量計x％至y％，優(yōu)選干重。在一個實施方案中，西洋蒲公英占本發(fā)明混合物的12％至33％，假葉樹占本發(fā)明的混合物的6％至25％，并且毛果一枝黃花和貓須草整體占本發(fā)明混合物的35％至55％。毛果一枝黃花和貓須草優(yōu)選為1:1、2:1或3:1或4:1的比例，更優(yōu)選為3:1的比例。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述西洋蒲公英的提取物占本發(fā)明混合物的23％至33％，所述蕎麥的提取物占本發(fā)明混合物的12至25％，所述假葉樹的提取物占本發(fā)明混合物的6％至12％，并且所述毛果一枝黃花和貓須草的提取物整體占本發(fā)明混合物的35％至55％。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，通過將每種植物的合適的部位，例如毛果一枝黃花的葉和貓須草的葉以1:1或2:1或3:1的比例放在同一溶劑中，并且根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)方法進行提取，來提供毛果一枝黃花和貓須草的提取物。在這種情況下，在本發(fā)明中，所述提取物在本文中也定義為毛果一枝黃花和貓須草的共提取物。然而，在本發(fā)明的一個實施方案中，所述西洋蒲公英的提取物占本發(fā)明混合物的23％至33％，所述蕎麥的提取物占本發(fā)明混合物的12至25％，所述假葉樹的提取物占本發(fā)明混合物的6％至12％，并且所述毛果一枝黃花和貓須草的提取物為共提取物的形式，其占本發(fā)明混合物的35％至55％。在另一個實施方案中，活性成分可以包含如上所述的植物混合物和如上所述的提取物的混合物。根據(jù)本說明書，以百分比范圍表示的值精確地包括從范圍的一端到另一端的所有整數(shù)和所有小數(shù)，包括極值。因此，當(dāng)在本發(fā)明的本說明書中提及“23％至33％”時，這意味著在說明書的任何點以及在混合物或包含混合物的組合物的任何實施方案中：23％；23.5％；24％；24.5％；25％；25.5％；26％；26.5％；27％；27.5％；28％；28.5％；29％；29.5％；30％；30.5％；31％；31.5％；32％；32.5％；33％；以及其間包括的其它小數(shù)。類似地，當(dāng)在本發(fā)明的本說明書中提及“12％至25％”時，這意味著在說明書的任何點以及在混合物或包含混合物的組合物的任何實施方案中：12％；12.5％；13％；13.5％；14％；14.5％；15％；15.5％；16％；16.5％；17％；17.5％；18％；18.5％；19％；19.5％；20％；20.5％；21％；21.5％；22％；22.5％；23％；23.5％；24％；24.5％；25％，以及其間包括的其它小數(shù)。當(dāng)在本發(fā)明的本說明書中提及“6％至12％”時，這意味著在說明書的任何點以及在混合物或包含混合物的組合物的任何實施方案中：6％；6.5％；7％；7.5％；8％；8.5％；9％；9.5％；10％；10.5％；11％；11.5％；12％；以及其間包括的其它小數(shù)。最后，當(dāng)在本發(fā)明的本說明書中提及“35％至55％”時，這意味著在說明書的任何點以及在混合物或包含混合物的組合物的任何實施方案中：35％；35.5％；36％；36.5％；37％；37.5％；38％；38.5％；39％；39.5％；40％；40.5％；41％；41.5％；42％；42.5％；43％；43.5％；44％；44.5％；45％；45.5％；46％；46.5％；47％；47.5％；48％；48.5％；49％；39.5％；50％；50.5％；51％；51.5％；52％；52.5％；53％；53.5％；54％；54.5％；55，以及其間包括的其它小數(shù)。如已經(jīng)提及的，本發(fā)明還涉及組合物，其包含作為唯一活性成分的根據(jù)上述任一實施方案的混合物，所述混合物由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成，和至少一種載體或輔料，在一個可替換的實施方案中，本發(fā)明還涉及由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草組成的混合物和至少一種載體或輔料，在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及由西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草以及西洋蒲公英、蕎麥、假葉樹、毛果一枝黃花和貓須草的提取物組成的混合物。因此，這樣的組合物包含作為唯一的活性成分的形成本發(fā)明混合物的植物或提取物，并且在本發(fā)明的組合物中，貓須草和毛果一枝黃花的提取物可以是共提取物的形式。如上對于混合物所述，本發(fā)明的組合物適用于在治療與淋巴管通透性過高相關(guān)的病變。特別地，獲得和報道的數(shù)據(jù)表明本發(fā)明混合物用于在與淋巴管通透性過高相關(guān)的病變中使用的適用性，特別是對于呈現(xiàn)淋巴內(nèi)皮完整性失調(diào)的病變，并且可以選自例如慢性炎癥、淋巴水腫、脂肪水腫和水潴留生理病變，特別是在所述病理生理學(xué)與循環(huán)停滯、淋巴水腫和/或組織的炎癥相關(guān)的情況下，例如在肥胖個體中。因此，在本發(fā)明的一個實施方案中，所述和要求保護的組合物適用于在治療與肥胖相關(guān)的水潴留病變中使用。類似于本發(fā)明的混合物，本發(fā)明的組合物特別針對超重/肥胖個體，其希望通過重新平衡組織排液過程，并且特別是參與肥胖相關(guān)的水潴留的病理生理學(xué)的淋巴系統(tǒng)的正確功能來輔助體重減輕的生理過程，所述參與肥胖相關(guān)的水潴留病理生理學(xué)也由淋巴內(nèi)皮的炎癥造成和炎性因素造成的其裂隙形成(通透性過高)引起的通透性增加導(dǎo)致。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以是例如植物藥物組合物，用于特定醫(yī)療目的的食物或膳食補充劑。因此，根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的組合物可以是這樣的組合物，其中所述西洋蒲公英的提取物占混合物活性成分的23％至33％，所述蕎麥的提取物占混合物活性成分的12至25％，所述假葉樹的提取物占混合物活性成分的6％至12％，并且所述毛果一枝黃花和貓須草的提取物作為整體占混合物活性成分的35％至55％。如上所述，所述毛果一枝黃花和貓須草的所述提取物為共提取物的形式，其占本發(fā)明混合物的35％至55％。仍然根據(jù)本發(fā)明，組合物可以是這樣的組合物，其中所述西洋蒲公英占述混合物的12％至33％，所述蕎麥占所述混合物的12至25％，所述假葉樹占所述混合物的6％至25％，并且所述毛果一枝黃花和貓須草作為整體占所述混合物的35％至55％。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述組合物適合于口服施用，并且是流體、草藥茶、湯劑、浸離材料、懸浮劑、溶液劑、顆粒劑、散劑、片劑、蓋劑(operculum)、固體明膠、軟明膠的形式。根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明的組合物適合于局部使用，因此可以是流體、可蒸發(fā)溶液劑、霜劑、軟膏劑、凝膠劑或乳劑的形式。根據(jù)本發(fā)明，一種或多種以下成分可用作輔料和/或載體：天然樹膠，例如阿拉伯樹膠、瓜爾膠、黃原膠；天然和人造甜味劑(蜂蜜、紅糖和精制糖)；多糖(纖維素、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、玉米淀粉)；天然蠟，包括巴西棕櫚蠟、蜂蠟，天然油，如甜杏仁油、向日葵油，天然來源的乳液(蔗糖酯，硬脂酸酯)以及可由本領(lǐng)域技術(shù)人員在不需要創(chuàng)造性勞動的情況下從現(xiàn)有技術(shù)中選擇的任何其它輔料。此外，根據(jù)所描述的實施方案中的任一個，本發(fā)明的組合物還可以包含至少一種天然調(diào)味劑和/或天然防腐劑。所述天然調(diào)味劑和/或所述天然防腐劑可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適于提供用于口服使用組合物的任何天然調(diào)味劑和/或防腐劑，并且可以選自例如但不限于天然橙調(diào)味劑、天然黑莓調(diào)味劑、甘草提取物、橙皮、橙汁、橘汁、果汁、葡萄汁、黑莓汁、接骨木汁、藍莓汁、菠蘿汁、葡萄柚汁、醋栗汁、覆盆子汁、蘋果汁、檸檬汁。因此，到目前為止對于本發(fā)明混合物明確描述的那些適用于(加上必要的變更)本發(fā)明的組合物。實施例和方法本文將提供本發(fā)明組合物和用于其施用的合適劑量的組合物的實施方案的非限制性實例。1.組合物實施例1流體，單劑量約10-20克組分％天然調(diào)味劑/防腐劑93,2-96,3％毛果一枝黃花貓須草共提取物1.5-2.5％蕎麥凍干葉提取物1-1.5％假葉樹凍干根提取物0,2-0,8％西洋蒲公英凍干根提取物1-2％總計100上述組合物中的天然調(diào)味劑和/或防腐劑可以是例如橙汁、葡萄汁、蘋果汁、檸檬汁中的一種或多種(任選地一種或多種所述果汁可以是濃縮的)，橙粉、黑莓粉、檸檬粉、橘粉、柑橘粉、菠蘿粉、草莓粉、櫻桃粉、黑莓、混合漿果粉形式的天然調(diào)味劑。這種產(chǎn)品的日劑量等于10-20克?？商鎿Q地，上述組合物可以包含比例為約3:1的毛果一枝黃花的提取物和貓須草的提取物的混合物。2.組合物實施例2通過浸泡所使用的植物的粗略斬碎部分制備，單劑量為1.5-2.5g。組分％蕎麥粗略斬碎葉7-17毛果一枝黃花粗略斬碎頂部7-17貓須草粗略斬碎葉15-30西洋蒲公英粗略斬碎根5-25假葉樹粗略斬碎根3-20輔料和天然調(diào)味劑/防腐劑1-50總計100組合物2可以任選地包含約2％至8％的根據(jù)本說明書的提取物混合物。上述組合物中的天然調(diào)味劑和/或防腐劑可以是例如橙皮、甘草根、檸檬皮中的一種或多種。這種產(chǎn)品的日劑量等于1.5-2.5克。3.組合物實施例3口服固體(粉末、顆粒、膠囊、片劑)的形式，單劑量為80-100mg。上述組合物中的天然調(diào)味劑和/或防腐劑可以是例如橙粉、黑莓粉、檸檬粉形式的一種或多種天然調(diào)味劑。這種產(chǎn)品的日劑量等于1.0-1.4克實驗獲得的數(shù)據(jù)報道在下面并且示出在圖中，其表明除了保持正確的通透性之外，用本發(fā)明的混合物處理淋巴內(nèi)皮能夠正向調(diào)節(jié)提供內(nèi)皮保護的所有特征，而涉及細胞損傷和激活炎性表型的關(guān)鍵酶由混合物進行亞調(diào)節(jié)，從而使淋巴內(nèi)皮與炎性發(fā)作反應(yīng)。4.血管通透性測試材料和方法細節(jié)細胞培養(yǎng)使用從商業(yè)來源獲得(可從promocell,germany“humandermallymphaticendothelialcells(hdlec)”和“humandermalbloodendothelialcells(hdbec)”獲得)的淋巴內(nèi)皮細胞(真皮)和血管。在37℃、co25％下利用含有fbs10％完全內(nèi)皮細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基mv2(promocell,heidelberg,germany)根據(jù)供應(yīng)商推薦對細胞進行培養(yǎng)并將其保持在培養(yǎng)中，每周以1:3傳代兩次，直到第10次。處理在未用和用il1β(10ng/ml)處理的細胞培養(yǎng)物上，對2-3個濃度的樣品相對于單獨采用載體進行評估，以了解其本身對未損傷細胞是否具有任何影響，以及待測試物質(zhì)是否能夠逆轉(zhuǎn)由il1β引起的通透性升高。因此，對于每種細胞培養(yǎng)物和每種提取物，待評估的點如下：未處理的對照、用載體處理的對照、提取物劑量a、提取物劑量b、il1β、il1β+劑量a、il1β+劑量b，各重復(fù)3次。內(nèi)皮通透性(每次篩選)將保持在具有完全培養(yǎng)基(10％血清)的板中的內(nèi)皮細胞用胰蛋白酶/edta分離，并以8×104細胞/transwell的密度在適合于12孔多孔板的具有直徑為0.4微米的孔的pet中在transwell板上布板。使細胞生長72小時，以形成可在倒置顯微鏡下評估的完整單層。一旦達到融合，移除培養(yǎng)基，并加入提取物18h。在不改變細胞培養(yǎng)基的情況下，如方案指示的加入il1β(10ng/ml，1h)。一旦刺激時間過去，移除培養(yǎng)基，并將500μlfitch-葡聚糖(3kda，在pbs中稀釋的10μm)加入到transwell中，同時將1.5mlpbs引入下面的多板的孔中。每15分鐘，從多板的孔取樣100μl×3(一式三份)，并取得熒光分光光度法讀數(shù)(485nm激發(fā)，535nm發(fā)射)。這使得可以測量已經(jīng)通過由內(nèi)皮細胞形成的屏障的fitc-葡聚糖。結(jié)果表示為測量的熒光的相對值。對于形成本發(fā)明混合物的每種植物，使用每種植物的提取物以及比例為3:1的毛果一枝黃花和貓須草的共提取物進行如上所述的測試。還用根據(jù)本發(fā)明的提取物的混合物進行測試。如圖2至9所示，獲得的數(shù)據(jù)顯示暴露于細胞因子的淋巴管的通透性如何保持大于健康內(nèi)皮的通透性(因此是負面影響)，然而，除了最低測試濃度的貓須草(圖3)以外的所有單個提取物在較高濃度下將通透性水平降低到低于基礎(chǔ)值，并且蕎麥(圖9a)僅在最高測試濃度下使通透性恢復(fù)至接近基礎(chǔ)水平的值，表明與本發(fā)明的混合物相比較弱的保護性效果。相反，通過本發(fā)明的混合物，淋巴管的通透性被保持在與健康內(nèi)皮相等的水平。此外，數(shù)據(jù)顯示本發(fā)明的混合物對未暴露于測試炎性因子的內(nèi)皮不具有任何不良影響。特別地，提供了包含毛果一枝黃花和貓須草的共提取物的混合物的圖8和9顯示本發(fā)明混合物的組分的選擇如何使得可以獲得保持與健康淋巴內(nèi)皮相似的血管通透性水平的最佳協(xié)同效果。5.利尿活性檢驗將動物飼養(yǎng)在代謝籠(三只小鼠/籠)中，并允許自由進食和飲水(商業(yè)化的低礦質(zhì)水(oligomineralwater))。為了獲得類似的水合生理狀態(tài)，在實驗前2小時向所有動物組灌胃給予2.5％體重的低礦質(zhì)水。然后根據(jù)以下處理方案將動物隨機分組(9只小鼠/組)：1.untr：未處理組2.h2o：在t＝0時通過胃探針以100微升/小鼠給予低礦質(zhì)水(陰性對照)3.呋塞米：在t＝0時通過胃探針施以100微升/小鼠給予10mg/kg的溶解在低礦質(zhì)水中的呋塞米(陽性對照)4-金麒麟草(goldenrod)：在t＝0時通過胃探針以100微升/小鼠給予金麒麟草(200mg/kg體重在低礦質(zhì)水中)。5-貓須草(orthosiphon)：在t＝0時以100微升/小鼠施用貓須草提取物(200mg/kg體重在低礦質(zhì)水中)。6-金麒麟草:貓須草(3:1)：在t＝0時通過胃探針以100微升/小鼠施用金麒麟草+貓須草的共提取物(200mg/kg體重在低礦質(zhì)水中)。為了評估化合物的利尿活性，將尿液樣品收集在刻度筒中，并以2h的間隔記錄體積，直到共計8小時。尿排泄量與動物重量無關(guān)，計算為總尿液除以施用的總液體的體積。尿排泄量＝總尿液的體積(ml/100gbw)/消耗的總液體。獲得的數(shù)據(jù)顯示，8小時后的尿液排泄量為200mg/kg金麒麟草等于2ml，200mg/kg貓須草等于2.25ml，200mg/kg的3:1比例共提取的金麒麟草+貓須草等于3ml。未經(jīng)處理的小鼠中的尿排泄量為約1.9ml，僅用低礦質(zhì)水處理的小鼠為約2.25ml，用10mg/kg呋塞米處理的小鼠中為約3.9ml。6.ros分析如下進行ros分析，在無酚紅的培養(yǎng)基中將hdlec細胞以1.5×103置于96孔板中，在所述細胞貼壁后，用10μg/ml的本發(fā)明混合物預(yù)處理18小時，然后用il-1β(10ng/ml，1小時)。以10μm的量加入dcfh2-da(2.7-二氯二氫熒光素二乙酸酯invitrogen,米蘭,意大利)30分鐘，并使用微板讀數(shù)器(激發(fā)/發(fā)射495/527，spectrafluor,tecan)光度測定評估細胞內(nèi)ros水平。將結(jié)果記錄為對接觸細胞數(shù)量校正的rfu(相對熒光單位)。7.免疫熒光分析使用共焦分析使細胞表面表達的咬合緊密連接和緊密連接蛋白1(zo-1)的蛋白質(zhì)可視化。將細胞以5×104在1cm圓形玻璃載片上布板。24小時后，洗滌細胞并用所述的刺激劑處理。如monti等人pharmacolres2013；76:171-81的材料和方法中報道的進行免疫熒光分析。8.western印跡用或不用本發(fā)明的混合物(10μg/ml，18小時)處理90％融合度的細胞(3×105/板6cm)，。如terzuoli等人.2014.plosone9:e84358,monti等,2014jpharmacolexpther.；351(3):500-9的材料和方法所述，通過western印記評估炎性通路的標(biāo)記物(inos、enos、cox-2)表達和抗氧化/促氧化酶促系統(tǒng)的標(biāo)記物(sod-1、過氧化氫酶、p22phox)的表達。與用作對照的β-肌動蛋白相比，將數(shù)據(jù)記錄為靶蛋白的任意密度測定單位(arbitrarydensitometryunit,a.d.u.)。材料和試劑用于細胞培養(yǎng)的試劑(即蘆丁和l-nmma)購自sigmaaldrich(st.louis,mo,usa)。胎牛血清購自hyclone(euroclone,米蘭,意大利)。3kdafitc-葡聚糖購自lifetechnologies(carlsbad,ca,usa)?？箊o-1和抗enos購自bdtransductionlaboratories,米蘭,意大利?？归]合蛋白購自zymed-lifetechnologies(carlsbad,ca,usa)?？筰nos和抗p22phox購自santacruzbiotechnology,inc.(dallas,tx,usa)?？筩ox-2購自caymanchemicalcompany(annarbor,mi,usa)。aanti-sod-1購自millipore(temecula,ca,usa)。抗過氧化氫酶和抗β肌動蛋白購自sigma-aldrich(st.louis,mo,usa)。數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計程序結(jié)果代表對于每種樣品一式三份進行的三次獨立實驗或是其平均值。統(tǒng)計分析使用anova檢驗，隨后適當(dāng)時地進行bonferroni和studentt檢驗(graphpad)。p<0.05被認為是統(tǒng)計學(xué)顯著的。當(dāng)前第1頁12