概括地說，本發(fā)明涉及生物活性天然產(chǎn)品的領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及源自東革阿里(eurycomalongifolia)提取物的組合物及其用于增強(qiáng)和/或刺激免疫系統(tǒng)的用途。

背景技術(shù)：

東革阿里(通常稱為tongkatali或pasakbumi)是苦木科(simaroubaceae)的草本開花植物，產(chǎn)自東南亞地區(qū)，包括馬來西亞、印度尼西亞，并且泰國、越南和老撾也有較少量的分布。該植物是灌木樹，高度可生長至最高達(dá)10米，有綠色長葉。葉子呈羽狀(即小葉成對排列)。該樹的花是雌雄異體的，而其卵形果實(shí)在成熟時(shí)會(huì)變?yōu)樯钭厣?/p>

傳統(tǒng)上將東革阿里用于激發(fā)性欲、退熱及抗瘧的作用。也將它作為普通補(bǔ)藥食用?？诜哪举|(zhì)長根的煎劑來實(shí)現(xiàn)這些作用。還將它作為營養(yǎng)添加劑與常規(guī)食品和飲料產(chǎn)品混合。東革阿里的根的益處包括：在分娩后恢復(fù)能量和活力、增強(qiáng)血液流動(dòng)和機(jī)能。將葉子用作瘧疾、潰瘍、性傳播疾病、齒齦疾病及蚊蟲叮咬的治療用藥。

各個(gè)族群(ethnicgroup)均熟知東革阿里還用于治療疾病并增進(jìn)健康，特別是男性的性健康。由于對東革阿里的巨大健康益處的高需求，目前可在保健食品市場中廣泛獲得的東革阿里制品為未加工的粗制粉末形式，其中將根干燥并磨碎。也可獲得膠囊形式的東革阿里，所述膠囊中可能包含未加工的粗制粉末或標(biāo)準(zhǔn)化的提取物。東革阿里提取物是通過以下方式制備的：提取活性成分，將制品至確定的成分含量，然后將其濃縮至標(biāo)準(zhǔn)水平。除此之外，東革阿里可用作調(diào)制咖啡甚至罐裝加工飲料的添加劑。推薦口服給予東革阿里，因?yàn)槠渌绞?例如腹膜內(nèi))會(huì)使其毒性增強(qiáng)約100倍。

已經(jīng)分離出大量化合物(特別是從東革阿里它的根中)，包括寬纓酮(eurycomanone)、東革醇(eurycomanol)、東革內(nèi)酯(eurycomalactone)、鐵屎米-6-酮生物堿、9-羥基鐵屎米-6-酮、14,15β-二羥基克萊尼酮(dihydroxyklaineanone)、酚成分、單寧酸、苦木苦味素(quanissoid)及三萜。由于這些化合物的存在，東革阿里的根被報(bào)道在以下方面具有有效的藥用價(jià)值：男性性欲增強(qiáng)的性質(zhì)以及退熱、抗瘧、抗菌和抗腫瘤的性質(zhì)方面具有。已充分證明，東革阿里由于含有高濃度的超氧化物歧化酶(sod)而發(fā)揮抗氧化性質(zhì)。東革阿里因其激發(fā)性欲的作用而聞名，這是因?yàn)樗軌虼碳ば坌约に赜绕涫遣G丸素的產(chǎn)生或作用。因此，它可在各種相關(guān)病癥中用作睪丸素替代療法的備選療法，例如在因雄性激素缺乏導(dǎo)致的男性骨質(zhì)疏松癥的治療中。

美國專利第7,132,117號概括地要求保護(hù)東革阿里的水性提取物，它包含分子量為4,300道爾頓并有30-39個(gè)氨基酸和糖殘基的糖肽，具有增加睪丸素合成、增加睪丸素從睪丸間質(zhì)細(xì)胞釋放、增加精子計(jì)數(shù)并增加精子活力的活性。還要求保護(hù)該提取物的組合物用于治療性功能障礙或男性不育癥。

就本發(fā)明人所知，到目前，尚沒有關(guān)于東革阿里提取物對免疫系統(tǒng)的作用及其免疫刺激作用的可靠的公開內(nèi)容。因此，本發(fā)明關(guān)注的是東革阿里提取物對免疫系統(tǒng)的作用及其免疫刺激作用，這涉及使人類和/或動(dòng)物抵御可能因細(xì)菌或病毒感染引起的感染性疾病。

因此，東革阿里提取物可潛在地增強(qiáng)因缺乏睡眠的生活方式、壓力及失衡的飲食和衰老(aging)而導(dǎo)致免疫力下降的個(gè)體的免疫力。免疫調(diào)節(jié)和增強(qiáng)作用也適用于免疫受損的個(gè)體，例如癌癥患者，他們因以下原因而具有更容易且快速發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)：即因癌癥治療導(dǎo)致的免疫力下降而對疾病敏感。對于針對免疫系統(tǒng)的未來研究以及針對免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病的更全面的天然藥物療法的開發(fā)而言，該信息將是有用的并適用的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供包含有效量的東革阿里提取物的組合物用于制備刺激和/或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)/功能的制品的用途。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述提取物是水性提取物或溶劑提取物。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述提取物包含適宜量的以下活性成分：

·寬纓酮

·蛋白質(zhì)

·多糖

·糖元皂苷(glycosaponin)。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述提取物具有選自以下的活性：

·增加t細(xì)胞數(shù)量；

·改善免疫學(xué)活力評分(siv)——整體免疫功能的綜合指標(biāo)，包括t細(xì)胞、cd4+/cd8+比率、初始t細(xì)胞(naivetcell)、初始/記憶t細(xì)胞比率、b細(xì)胞、nk細(xì)胞及t增殖活性的最佳功能化；

·降低免疫學(xué)年齡——基于t細(xì)胞數(shù)量和增殖活性的免疫功能的易于理解的形式；

·減輕疲勞；以及

·緩解或減輕壓力。

以上活性表明東革阿里提取物增強(qiáng)和/或刺激免疫系統(tǒng)/功能并具有抗衰老作用，這可保護(hù)機(jī)體抵御感染性疾病，從而減少因免疫系統(tǒng)受損而導(dǎo)致的發(fā)病，例如在具有癌癥和衰老的疾病狀態(tài)中。

根據(jù)本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供了組合物，其包含有效量的東革阿里提取物及藥學(xué)或營養(yǎng)食品學(xué)上可接受的載體以刺激和/或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)。

優(yōu)選地，所述東革阿里提取物是水性提取物或溶劑提取物。

所述提取物包含適宜量的活性成分，所述活性成分包括寬纓酮、蛋白質(zhì)、多糖和糖元皂苷。

優(yōu)選地，所述組合物具有選自以下的活性：

·增加t細(xì)胞數(shù)量；

·改善免疫學(xué)活力評分(siv)——整體免疫功能的綜合指標(biāo)；

·降低免疫學(xué)年齡——基于t細(xì)胞數(shù)量和增殖活性的免疫功能的易于理解的形式；

·減輕疲勞；以及

·緩解或減輕壓力。

根據(jù)本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供治療個(gè)體以實(shí)現(xiàn)選自以下的結(jié)果的方法：增加t細(xì)胞數(shù)量、改善siv(即整體免疫功能的綜合指標(biāo))、降低免疫學(xué)年齡(即免疫功能的易于理解的形式)、減輕疲勞以及緩解或減輕壓力，所述方法包括給予所述個(gè)體有效量的東革阿里提取物。

上述結(jié)果增強(qiáng)免疫功能并具有抗衰老作用，這可所述個(gè)體的機(jī)體抵御感染性疾病。

本發(fā)明的制品可在可接受的載體中提供，并可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何方法來給藥，例如粉末、顆粒、片劑、膠囊、水性藥物(aqueousmedicine)或注射液。

可通過標(biāo)準(zhǔn)方法將上述東革阿里提取物的組合物配制為用于臨床使用的各種藥物制劑或營養(yǎng)食品制劑——例如膠囊(包括軟凝膠膠囊)、片劑、蓋倫制劑、粉末、顆粒、水性藥物及注射液等，其中存在活性成分，將活性成分作為活性組分通過各種給藥途徑(例如經(jīng)口、舌下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)等)以有效治療量(基于其功效和毒性)單獨(dú)地或與其它化學(xué)品組合地給予。所述有效量足以通過增加t細(xì)胞數(shù)量來增強(qiáng)和/或刺激免疫力。

能增強(qiáng)和/或刺激免疫力的有效量將取決于被治療病癥的嚴(yán)重程度；個(gè)體患者參數(shù)，包括年齡、身體狀況、身高及體重；同期治療(concurrenttreatment)及藥物相互作用；治療頻率；以及給藥方式。

優(yōu)選地，所述提取物的有效量是10mg至2000mg。更優(yōu)選地，所述有效量是200mg至400mg。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的研究群體的流程圖；以及

圖2示出了本發(fā)明ancova分析的siv分項(xiàng)評分(sub-score)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供包含東革阿里提取物的組合物用于增強(qiáng)和/或刺激免疫系統(tǒng)/功能的用途。

本文所述的東革阿里提取物包含來自東革阿里植物(優(yōu)選地來自東革阿里植物的根)的所需活性成分，可進(jìn)一步對其進(jìn)行分離和表征。

通過本領(lǐng)域中已知的提取過程獲得所述提取物，提取過程包括以下基本步驟：將植物材料(例如根)預(yù)先洗滌、干燥或冷凍干燥，研磨植物材料以獲得均質(zhì)的樣品并通常改善分析提取的動(dòng)力學(xué)，并且還增加樣品表面與溶劑體系的接觸。必需采取恰當(dāng)?shù)男袆?dòng)以確保在從東革阿里植物樣品制備提取物的過程中，潛在的活性成分/組分不會(huì)丟失、變形或被破壞。

可將由此獲得的提取物以其原本的干燥提取物形式、酊劑和流體提取物形式作為即用型藥劑，可將其進(jìn)一步加工以納入任何劑型(例如片劑或膠囊)，或可將其分級分離以分離出單個(gè)的化學(xué)實(shí)體。因此，提取過程的標(biāo)準(zhǔn)化對草本藥物的最終質(zhì)量具有重要貢獻(xiàn)。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述東革阿里提取物是水性提取物。所述水性提取物可通過任何已知的提取方法獲得，例如，將風(fēng)干的粉末狀的植物部分(例如根)在水中煮沸約10分鐘然后冷卻至室溫。然后將水性提取物過濾以除去顆粒物。然后可用含0.2％tween80的蒸餾水將每個(gè)濾液的終體積補(bǔ)足至100ml以補(bǔ)償煮沸期間蒸發(fā)的水。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述東革阿里提取物是溶劑提取物。所述溶劑提取物可使用有機(jī)溶劑通過已知提取過程獲得。采用所述溶劑提取過程，可根據(jù)多種植物物質(zhì)(例如活性成分、萜類和脂肪酸、化合物)在不同溶劑中的溶解度將它們分離?？墒褂玫奶崛∪軇┑膶?shí)例為例如丁烷、丙烷、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氧化碳和氧化亞氮。使用這些有機(jī)溶劑進(jìn)行的提取允許獲得全部的植物提取物或所需的具有食品和植物-藥物質(zhì)量的級分而無需過多的生產(chǎn)成本。

也可通過本領(lǐng)域已知的其他提取方法制備東革阿里提取物，例如超臨界流體萃取、冷壓等。

本發(fā)明所述的能夠增強(qiáng)和/或刺激免疫系統(tǒng)的東革阿里提取物包含以下活性成分：

表1

在一個(gè)實(shí)施方案中，通過用水提取東革阿里的根來制備東革阿里提取物。東革阿里提取物包括糖元皂苷和東革肽(eurypeptide)。在一些實(shí)施方案中，制備東革阿里提取物以使得所述提取物包含約40％重量的糖元皂苷和約22％重量的東革肽。本文中的東革肽定義為來源于東革阿里的肽。例如，這些肽可通過在水中煮沸粉末狀的東革阿里根來提取。

本發(fā)明的組合物可用于通過以下方式來刺激和/或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)或功能：增加t細(xì)胞數(shù)量、改善免疫學(xué)活力評分siv(即整體免疫功能的綜合指標(biāo))、降低免疫學(xué)年齡(免疫學(xué)年齡是基于t細(xì)胞數(shù)量和增殖活性的免疫功能的易于理解的形式)、減輕疲勞以及緩解或減輕壓力。

使用hirokawa的歐洲專利公開文本第ep2042867a1號記載的方法評價(jià)本發(fā)明的東革阿里提取物的刺激和/或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)/功能的作用。該評價(jià)方法——本文定義為“免疫學(xué)活力評分(siv)”——使用針對樣品血液中所含的免疫細(xì)胞的免疫細(xì)胞標(biāo)記物來評價(jià)免疫力，包括以下步驟：基于樣品血液中所含的各個(gè)免疫細(xì)胞標(biāo)記物測定兩種或更多種所選擇的免疫細(xì)胞標(biāo)記物中每一種的評價(jià)值，將所獲得的至少兩種所選擇的免疫細(xì)胞標(biāo)記物的評價(jià)值相加，根據(jù)相加的結(jié)果評價(jià)免疫力。特別地，該方法通過使用整體免疫功能的綜合指標(biāo)來評價(jià)免疫力，所述整體免疫功能的綜合指標(biāo)包括t細(xì)胞、cd4+/cd8+比率、初始t細(xì)胞、初始/記憶t細(xì)胞比率、b細(xì)胞、nk細(xì)胞及t增殖活性的最佳功能化。

本發(fā)明還提供治療個(gè)體以實(shí)現(xiàn)選自以下的結(jié)果的方法：增加t細(xì)胞數(shù)量、改善siv(即整體免疫功能的綜合指標(biāo))、降低免疫學(xué)年齡(即免疫功能的易于理解的形式)、減輕疲勞以及緩解或減輕壓力。

本方法的一個(gè)實(shí)施方案包括將有效量的東革阿里提取物給予所述個(gè)體。

所述東革阿里提取物可以是水性提取物或溶劑提取物。

增強(qiáng)和/或刺激免疫力的有效量將取決于被治療病癥的嚴(yán)重程度；個(gè)體患者參數(shù)，包括年齡、身體狀況、身高及體重；同期治療及藥物相互作用；治療頻率；以及給藥方式。

優(yōu)選地，所述提取物的有效量是10mg至2000mg。更優(yōu)選地，所述有效量是200mg至400mg。

上述結(jié)果增強(qiáng)免疫功能并具有抗衰老作用，這可保護(hù)所述個(gè)體的機(jī)體抵御感染性疾病。

本文所述的術(shù)語“感染性疾病”定義為傳染性疾病，包括因感染、個(gè)體宿主生物中病原生物劑的存在及生長導(dǎo)致的臨床上明顯的疾病(即典型的醫(yī)療指征和/或疾病癥狀)。

感染通常是由以下引起：感染因子(例如病毒、類病毒和阮病毒)、微生物(例如細(xì)菌)、線蟲(例如蛔蟲和蟯蟲)、節(jié)肢動(dòng)物(例如蜱、螨、蚤和虱)、真菌(例如癬)、以及其他大型寄生物(例如絳蟲)。

本文提及的感染性疾病可編組為(但不限于)以下六組接觸分類(exposurecategory)，并將它們按照典型的風(fēng)險(xiǎn)遞減的次序列出。但是必須注意，各個(gè)國家登記中所列的接觸分類的次序可能隨當(dāng)?shù)厍闆r而改變。

i.因與當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)有關(guān)的吃或喝而患的食品或水傳播疾病，例如甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、戊型肝炎、傷寒癥等。

ii.因被受感染的節(jié)肢動(dòng)物叮咬而患的媒介傳播疾病，例如瘧疾、登革熱、黃熱病、日本腦炎、非洲錐蟲病、皮膚利什曼病、瘟疫、克里米亞-剛果出血熱(crimean-congohemorrhagicfever)、里夫特裂谷熱(riftvalleyfever)、基孔肯雅病(chikungunya)等。

iii.因在淡水湖、溪流及河流中游泳或涉水而患的水接觸疾病，例如鉤端螺旋體病、血吸蟲病等。

iv.因吸入被嚙齒動(dòng)物的尿污染的氣溶膠而患的霧化粉塵或土壤接觸疾病，例如拉沙熱(lassafever)等。

v.因近距離接觸受感染的人而患的呼吸疾病，例如流行性腦脊髓膜炎、流行性感冒等。

vi.因傳染性微生物(例如尼帕病毒(nipahvirus)、冠狀病毒等)引起的呼吸相關(guān)疾病。

vi.因直接接觸當(dāng)?shù)貏?dòng)物而患的動(dòng)物接觸疾病，例如狂犬病。

為評價(jià)所述東革阿里提取物的性質(zhì)，使用提取物的制劑進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)。下文實(shí)施例提供了實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，除源自東革阿里的組合物(例如東革阿里提取物)外，本發(fā)明的制品還包含用于口服給藥的藥學(xué)上或營養(yǎng)食品學(xué)上可接受的載體。

為有助于口服給藥，可將源自東革阿里的組合物與多種用于口服給藥的藥學(xué)上可接受的載體中的任一種混合。術(shù)語“用于口服給藥的藥學(xué)上或營養(yǎng)食品學(xué)上可接受的載體”是指這樣的組合物，即其是無毒的，對人的腸胃系統(tǒng)沒有刺激性，并且其可與源自東革阿里的組合物混合以形成溶液、糖漿、乳劑、凝膠、粉末混合物或固體。也可通過本領(lǐng)域中已知的方法產(chǎn)生用于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或(通常)腸胃外給藥的制品。

用于口服給藥的藥學(xué)上或營養(yǎng)食品學(xué)上可接受的載體可包括但不限于糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉及馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及醋酸纖維素；粉末狀的黃芪膠；麥芽；明膠；滑石；硬脂酸；硬脂酸鎂；硫酸鈣；植物油，例如玉米油、棉籽油及橄欖油；多元醇，例如丙二醇、丙三醇、山梨糖醇、甘露醇及聚乙二醇；磷酸鹽緩沖液；可可油；乳化劑；以及藥物制劑中使用的其它無毒的相容性物質(zhì)。還可存在潤濕劑和潤滑油(例如硬脂酸鎂)、以及著色劑、調(diào)味劑、賦形劑、壓片劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑和防腐劑。其它相容性藥物添加劑和活性劑可包含在藥學(xué)上可接受的載體中以用于本發(fā)明的組合物中。

用于口服給藥的制品可以是以下形式：片劑、錠劑(caplet)、軟和硬明膠膠囊、丸劑(包括延遲或緩慢或改良的釋放的制劑)、可分散的粉末或顆粒、糖錠劑(lozenge)、小袋(sachet)、扁囊劑、懸浮液、乳劑、溶液、糖漿、氣溶膠等。

在其他實(shí)施方案中，除源自東革阿里的組合物(例如東革阿里提取物)外，本發(fā)明的制品還包含用于局部施用的藥學(xué)上或營養(yǎng)食品學(xué)上可接受的載體。這類藥學(xué)上或營養(yǎng)食品學(xué)上可接受的載體是本領(lǐng)域中公知的，基本上可包括任何目前使用的和市售的皮膚病學(xué)或美容的制品或其組合。因此，人們可簡單地通過以下方式來改變可獲得的皮膚病學(xué)或美容的制品，即加入源自東革阿里的組合物并調(diào)節(jié)(必要時(shí))其組分的比率以維持適于局部施用的稠度。

如本文所使用的，術(shù)語“用于局部施用的藥學(xué)上或營養(yǎng)食品學(xué)上可接受的載體”是指這樣的組合物：適于通過涂敷或按摩而局部施用于人的皮膚，其不對人的皮膚造成刺激，并且其可與源自東革阿里的組合物混合以形成溶液、乳劑、凝膠、洗液、軟膏、香膏、乳膏、或可涂敷的固體或糊狀物。這類藥學(xué)上可接受的載體可包括軟化劑、表面活性劑、濕潤劑、潤滑油、增稠劑、防水劑、殺菌劑、經(jīng)皮滲透劑和防腐劑。此外，多種美容劑(例如芳香劑和色素)可包含在用于局部施用的藥學(xué)上可接受的載體中。

一個(gè)實(shí)施方案——其中組合物用于治療個(gè)體以實(shí)現(xiàn)選自以下的結(jié)果的用途：增加t細(xì)胞數(shù)量、改善免疫學(xué)活力評分siv(即整體免疫功能的綜合指標(biāo))、降低免疫學(xué)年齡(即免疫功能的易于理解的形式)、減輕疲勞以及緩解或減輕壓力，如本文所述——是給予受試者源自東革阿里的提取物。

所述源自東革阿里的提取物可以是水性提取物或溶劑提取物。

上述結(jié)果增強(qiáng)和/或刺激免疫系統(tǒng)/功能并具有抗衰老作用，這可保護(hù)個(gè)體的機(jī)體低于感染性疾病。

如本文所使用的受試者是人、非人的靈長類動(dòng)物、牛、馬、豬、綿羊、山羊、狗、貓、魚、對蝦(prawn)、雞、嚙齒動(dòng)物等。在所有實(shí)施方案中，優(yōu)選人受試者。

本文所述的術(shù)語“感染性疾病”定義為傳染性疾病，包括因感染、個(gè)體宿主生物中病原生物劑的存在及生長導(dǎo)致的臨床上明顯的疾病(即典型的醫(yī)療指征和/或疾病癥狀)。

感染通常是由以下引起：感染因子(例如病毒、類病毒和阮病毒)、微生物(例如細(xì)菌)、線蟲(例如蛔蟲和蟯蟲)、節(jié)肢動(dòng)物(例如蜱、螨、蚤和虱)、真菌(例如癬)、以及其他大型寄生物(例如絳蟲)。

本文提及的感染性疾病可編組為(但不限于)以下六組接觸分類，并將它們按照典型的風(fēng)險(xiǎn)遞減的次序列出。但是必須注意，各個(gè)國家登記中所列的接觸分類的次序可能隨當(dāng)?shù)厍闆r而改變。

i.因與當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)有關(guān)的吃或喝而患的食品或水傳播疾病，例如甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、戊型肝炎、傷寒癥等。

ii.因被受感染的節(jié)肢動(dòng)物叮咬而患的媒介傳播疾病，例如瘧疾、登革熱、黃熱病、日本腦炎、非洲錐蟲病、皮膚利什曼病、瘟疫、克里米亞-剛果出血熱、里夫特裂谷熱、基孔肯雅病等。

iii.因在淡水湖、溪流及河流中游泳或涉水而患的水接觸疾病，例如鉤端螺旋體病、血吸蟲病等。

iv.因吸入被嚙齒動(dòng)物的尿污染的氣溶膠而患的霧化粉塵或土壤接觸疾病，例如拉沙熱等。

v.因近距離接觸受感染的人而患的呼吸疾病，例如流行性腦脊髓膜炎、流行性感冒等。

vi.因傳染性微生物(例如尼帕病毒、冠狀病毒等)引起的呼吸相關(guān)疾病。

vi.因直接接觸當(dāng)?shù)貏?dòng)物而患的動(dòng)物接觸疾病，例如狂犬病。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，公開了用于增加t細(xì)胞數(shù)量、改善免疫學(xué)活力評分siv(即整體免疫功能的綜合指標(biāo))、降低免疫學(xué)年齡(即免疫功能的易于理解的形式)、減輕疲勞以及緩解或減輕壓力的方法，所述方法采用包含源自東革阿里的組合物的制品，所述組合物包含生物活性劑并且被標(biāo)準(zhǔn)化為0.3-3.5％的寬纓酮、大于10％的總蛋白、大于20％的總多糖及大于30％的糖元皂苷。優(yōu)選地，所述源自東革阿里的組合物包含的生物活性劑被標(biāo)準(zhǔn)化為0.8-2.5％的寬纓酮、大于22％的總蛋白、大于30％的總多糖及大于40％的糖元皂苷。

在一個(gè)實(shí)施方案中，可將源自東革阿里的組合物的制品與本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它藥物聯(lián)合給藥以增加t細(xì)胞數(shù)量、改善siv、降低免疫學(xué)年齡、減輕疲勞以及緩解或減輕壓力。

可將有效量的源自東革阿里的組合物單獨(dú)地或以與其它化合物的混合物的形式配制或給藥。有效量是足以增加t細(xì)胞數(shù)量、改善siv、降低免疫學(xué)年齡、減輕疲勞以及緩解或減輕壓力的量。

當(dāng)然，有效量將取決于被治療病癥的嚴(yán)重程度；個(gè)體患者參數(shù)，包括年齡、身體狀況、身高及體重；同期治療；治療頻率；以及給藥方式。這些因素是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的，并且通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)即可解決。通常，優(yōu)選地使用最大劑量，最大劑量是根據(jù)合理的醫(yī)學(xué)判斷而確定的最高安全劑量。

通常，活性化合物的日劑量將為約10毫克/天至2000毫克/天。預(yù)期200至400毫克的口服劑量——每天一次或多次給藥——將產(chǎn)生合乎需要的結(jié)果。如果受試者在該劑量下響應(yīng)不足，則可在患者耐受性允許的范圍內(nèi)采用甚至更高的劑量(或通過不同的、更局部的遞送途徑來實(shí)現(xiàn)的有效的更高劑量)。對于個(gè)體患者的治療以及根據(jù)所治療的具體病癥，必要時(shí)可調(diào)整劑量范圍。預(yù)期每天多次劑量可實(shí)現(xiàn)化合物的適宜的全身水平。

可使用醫(yī)學(xué)上可接受、能產(chǎn)生有效水平的活性化合物而不引起臨床上不可接受的副作用的任何給藥方式來實(shí)施本發(fā)明的方法。這類給藥方式包括經(jīng)口、直腸、局部、鼻、經(jīng)皮或腸胃外途徑。術(shù)語“腸胃外”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或輸注。靜脈內(nèi)和肌肉內(nèi)途徑不太適合長期治療及預(yù)防。

所述組合物可方便地存在于單位劑型中并可通過本領(lǐng)域中公知的任何方法來制備。通常，所述組合物是通過以下方式來制備：將活性化合物均勻并緊密地與液體載體、細(xì)分散的固體載體或這兩者相接觸(association)，然后(如果必要)使產(chǎn)品成形。

適于口服給藥的組合物可作為獨(dú)立單位(例如膠囊、錠劑、軟凝膠或糖錠劑)存在，每個(gè)獨(dú)立單位包含預(yù)定量的活性化合物。其他組合物包括水性或非水性液體(例如糖漿或乳劑)中的懸浮液。

下面，將通過非限制性實(shí)施例更加詳細(xì)地描述本發(fā)明。

實(shí)施例1

東革阿里水性提取物的制備

制備東革阿里水性提取物，其特征在于包含0.8-2.5％寬纓酮，>22％總蛋白質(zhì)，>30％總多糖，以及>40％糖元皂苷，其被用于評價(jià)東革阿里的免疫刺激和/或免疫系統(tǒng)增強(qiáng)活性。

方法

在置于滲濾罐之前，將1000kg東革阿里木屑干燥且研磨。在所述罐中裝入5000l純凈水，然后加熱至最高達(dá)105℃±10℃。使加熱的水循環(huán)且滲濾穿過所述罐，持續(xù)約6小時(shí)。隨后將所述罐靜置數(shù)小時(shí)以允許其中包含的固體材料沉降。將所有內(nèi)容物(miscera)經(jīng)過過濾器排出到緩沖罐中以濃縮。通過薄層、加熱和真空使所述內(nèi)容物(miscera)濃縮。繼續(xù)該濃縮過程直至獲得20-30％的固體內(nèi)含物(content)濃度。然后將濃縮物通過滅菌器。在滅菌后，于凍干器中使?jié)饪s物干燥。隨后將干燥的濃縮物碾磨成細(xì)粉，并且在混合器中相應(yīng)地混合以用于標(biāo)準(zhǔn)化目的。然后如以下實(shí)施例所述在生物活性實(shí)驗(yàn)中使用該提取物。

實(shí)施例2

東革阿里水性提取物對免疫刺激作用

研究了東革阿里根的水性提取物對人的免疫刺激作用。參與者均為健康志愿者，其每日感覺疲勞且年齡為40-59歲。研究了4周口服所述提取物對于參與者的免疫力的作用。

具體而言，本研究的目的為研究東革阿里是否具有以下作用：

·增加t細(xì)胞數(shù)量

·提高免疫活力(siv)的評分，其已被建議作為綜合免疫力的表達(dá)的指標(biāo)。

·降低免疫年齡

·減少疲勞

·緩解或減小壓力

表2研究設(shè)計(jì)

材料和方法

1.研究場所

研究機(jī)構(gòu)，seishin-kaimedicalassociationtakara診所為日本的社區(qū)診所。數(shù)據(jù)由日本，orthomedicoinc.收集且分析。

2.參與者

·合格、篩選和分配的標(biāo)準(zhǔn)

i入選標(biāo)準(zhǔn)

a.對于招募時(shí)選擇“是/否”問題的“你每日都感覺疲勞嗎？”，回答“是”的健康成年人。

b.年齡為40-59歲的人。

c.在第0周的試驗(yàn)中低的免疫分?jǐn)?shù)(siv小于23).

ii排除標(biāo)準(zhǔn)

a.有心力衰竭和心肌梗塞既往病史的人。

b.正在接受以下一種疾病治療的患者：動(dòng)脈纖維性顫動(dòng)、心律失常、肝病、腎病、腦血管病、風(fēng)濕病、血脂異常、高血壓和其他慢性疾病

c.在之前30天內(nèi)服用過藥物、草藥或膳食添加物的人

d.患過敏癥的人

e.孕婦、哺乳期婦女、或想在試驗(yàn)期間懷孕的婦女

f.花粉癥的參與者

g.吸煙者

h.在同意參加本試驗(yàn)前的3個(gè)月內(nèi)，已經(jīng)參加其他臨床試驗(yàn)的人

i.被研究者判斷為不適合參加本試驗(yàn)的人

iii.篩選標(biāo)準(zhǔn)(在篩選試驗(yàn)中)

a.選擇與正常的免疫活力(siv)評分(參見表1)相比相對較低的人

iv.分配標(biāo)準(zhǔn)

a.ta和p組之間在基線時(shí)的siv平均值和sd沒有顯著差異。

表3免疫學(xué)級別和siv的臨床和生態(tài)定義

·隨機(jī)化

i.分配程序

使用“statlight#11(由yukms，co.ltd提供的excel擴(kuò)充)，用計(jì)算機(jī)生成的隨機(jī)數(shù)創(chuàng)建分層隨機(jī)化序列。本發(fā)明人設(shè)置并交叉以下2個(gè)分層：性別(男性或女性)和人口統(tǒng)計(jì)(40或50歲)。因此，創(chuàng)建了以下4層：男-40歲、男-50歲、女-40歲、女-50歲。為每層創(chuàng)建隨機(jī)序列。最后，本發(fā)明人將4個(gè)隨機(jī)化的結(jié)果合并，并將該合并結(jié)果(union)指定為該試驗(yàn)的最終隨機(jī)化序列。

這些登記和分配程序是由關(guān)鍵控制器(keycontroller)進(jìn)行。

ii.分配隱瞞

a.通過試驗(yàn)材料的相同外觀以及通過保密分配信息，參與者對于他們被分配于那一組并不知情。

b.通過保密分配信息，醫(yī)師和診所工作人員也不知情。為了處理動(dòng)態(tài)研究，他們無需知道分配信息。

c.通過保密分配信息，統(tǒng)計(jì)分析者也不知情，直至他們完成主要分析。

**如上所述，分配和分派程序由關(guān)鍵控制器進(jìn)行。分配信息直至統(tǒng)計(jì)分析者已經(jīng)完成主要分析才能公開。

·樣品量

i.樣品量的確定

在最終確定方案之前，使用ezr包版本1.11運(yùn)行具有以下設(shè)置的r2.13.0：統(tǒng)計(jì)功效為80％、顯著性水平為p<0.05、2組之間的siv變化的平均差為它們的標(biāo)準(zhǔn)偏差的2/3、分配比為1:1，本發(fā)明人利用我們先前的數(shù)據(jù)來進(jìn)行功效分析以確定足夠的樣品量。

功效分析計(jì)算出每組需要36名參與者。因此，考慮到中途退出研究方案和與研究方案的事后(post-hoc)偏離，本發(fā)明人為每組指派42名參與者。

·參與者的管理

i.日志

在攝入期間，參與者必須通過填寫本發(fā)明人的紙質(zhì)表格來保持記錄日志。他們每周把他們的日志寄送給操作管理機(jī)構(gòu)的聯(lián)絡(luò)人。

ii.在抽血之前，要先獲取歷史以了解參與者的健康狀況

iii.在獲得知情同意前，向參與者提出以下遵守規(guī)則。

a.參與者在抽血前6小時(shí)以內(nèi)不能進(jìn)食除水以外的任何食品和飲料。

b.參與者必須根據(jù)方案服用他們的試驗(yàn)材料。

c.參與者不應(yīng)過度飲食或飲水，并應(yīng)避免極端的性活動(dòng)；他們應(yīng)該繼續(xù)他們的日常生活和日常生活習(xí)慣。

d.參與者在研究期間必須避免服用除試驗(yàn)材料以外的任何健康食品、功能性食品和膳食添加物。

e.參與者必須向診所工作人員/研究者公開他們是否在服用任何藥物(伴隨藥物)^*

f.參與者必須避免可能影響研究結(jié)果的所有其他因素，例如在門診調(diào)查前一天的飲酒和過度運(yùn)動(dòng)。

g.如果參與者出現(xiàn)任何不良反應(yīng)，他們必須向本試驗(yàn)的操作者報(bào)告。

*注意：研究者將確定其是否會(huì)干擾研究

·退出本試驗(yàn)

參與者可以隨時(shí)退出試驗(yàn)。如果參與者被認(rèn)為健康狀況不佳或有行為問題，試驗(yàn)研究者可以停止他們的參與。

i.中途退出

a.參與者想中止參加本試驗(yàn)。

b.參與者停止參加本試驗(yàn)。

c.研究者停止繼續(xù)參與，因?yàn)閲?yán)重的不良事件。

d.參與者不遵守研究者和操作管理機(jī)構(gòu)的指示。

e.參與者在試驗(yàn)期間不遵守生活方式指南。

f.研究者決定將受試者視為中途退出。

ii.中止

a.研究者決定中止個(gè)人的參與，因?yàn)閲?yán)重的不良事件。

b.研究者決定中止繼續(xù)參與，因?yàn)榭陀^的癥狀。

c.研究者決定中止繼續(xù)參與，因?yàn)槠渌颉?/p>

3.干預(yù)

(1)試驗(yàn)材料(參見表2)

i.ta組：標(biāo)準(zhǔn)冷凍干燥的東革阿里水性提取物

ii.p組：安慰劑

(2)持續(xù)時(shí)間：4周

(3)劑量和給藥

每組中的參與者每日服用1粒膠囊的試驗(yàn)材料。

(4)供應(yīng)商和制造商

待研究的標(biāo)準(zhǔn)提取物是由biotropicsmalaysiaberhad生產(chǎn)，試驗(yàn)材料在watanabepharmaceuticalco.ltd制造。在watanabepharmaceutical中試驗(yàn)材料的批號為ta/306/8，所述臨床試驗(yàn)由orthomedico,inc(本試驗(yàn)的操作管理機(jī)構(gòu))管理。

表4試驗(yàn)材料中的成分

^**將這兩種材料裝填入相同的膠囊中，以便每組中的材料之間在外觀、味道和氣味上沒有差異。

^**n.d.＝未檢測

4.結(jié)果

(1)主要的結(jié)果：免疫學(xué)參數(shù)

i.免疫學(xué)參數(shù)

a.用流式細(xì)胞儀測定t細(xì)胞亞群的陽性和陰性率

cd3⁺、cd4⁺、cd8⁺、cd4⁺cd45ra⁺、cd4⁺cd45ra^-、cd8⁺cd28⁺、cd16⁺cd56⁺、cd3^-cd20⁺

b.t淋巴細(xì)胞亞組數(shù)(使用a.和白細(xì)胞的差異計(jì)數(shù))t細(xì)胞、cd4⁺t細(xì)胞、cd8⁺t細(xì)胞、cd4⁺初始t細(xì)胞、cd4⁺記憶t細(xì)胞、cd8⁺cd28⁺t細(xì)胞、b細(xì)胞、nk細(xì)胞

c.細(xì)胞培養(yǎng)

t細(xì)胞增殖活性

d.由以上和以下參數(shù)計(jì)算

cd4/cd8比、初始/記憶比、t細(xì)胞增殖指數(shù)、免疫學(xué)年齡^*、t淋巴細(xì)胞年齡、siv^*、免疫學(xué)級別

^*本發(fā)明人特別關(guān)注這兩項(xiàng)指標(biāo)。

(2)次要的結(jié)果：調(diào)查問卷

i.主觀癥狀

a.情緒狀態(tài)(profilesofmoodstates(poms))的日本版本，短版⁶⁾

b.likert量表，其原始開發(fā)的項(xiàng)目：“我感覺身體疲勞”，“我受到失眠的困擾”，“即使我有足夠的休息和睡眠，我也感覺沒有恢復(fù)精神”，“最近，我感覺不太快樂”，“我的喉嚨容易腫脹”，“在我的臉上容易長斑點(diǎn)，我的皮膚嚴(yán)重粗糙”，“我經(jīng)常因?yàn)楦械奖忝囟杏X不舒服”，“我經(jīng)常腹瀉”，“我很容易受刺激”，“我經(jīng)常感到臉紅”，“我的性欲較低”，“我感到缺乏動(dòng)力”。答案：這個(gè)項(xiàng)目...1：完全不適合我。2：幾乎不適合我。3：真的不適合我。4：稍微適合我。5：有點(diǎn)適合我。6：幾乎完全適合我。

(3)安全參數(shù)

i.體檢

身高^*、體重、身體質(zhì)量指數(shù)、身體脂肪百分比、收縮壓、舒張壓、脈搏率

^*在給予知情同意后，只測量一次身高。

ii.尿檢^**

尿蛋白、尿葡萄糖、尿膽素原、膽紅素、酮體、ph、隱血

^**收集量：約25ml。

iii.血液測試

a.收集條件

+參與者在抽血前空腹至少6小時(shí)。

+收集約25ml血液，包括用于免疫學(xué)測定的樣品。

b.血液學(xué)檢查

白細(xì)胞計(jì)數(shù)(wbc)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(rbc)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容、血小板計(jì)數(shù)、平均紅細(xì)胞體積(mcv)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(mch)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(mchc)、白細(xì)胞圖像

c.生物醫(yī)學(xué)檢查

天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ast)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alt)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-gtp)、堿性磷酸酶(alp)、乳酸脫氫酶(ldh)、亮氨酸氨基肽酶(lap)、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、膽堿酯酶、硫酸鋅混濁度試驗(yàn)(ztt)、總蛋白、尿素氮、肌酸酐、尿酸、肌酸激酶(ck)、鈣(ca)、鈉(na)、鉀(k)、氯化物(cl)、無機(jī)磷(ip)、血清鐵(fe)、血清淀粉酶、總膽固醇(t-cho)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-cho)、低密度脂蛋白膽固醇(ldl-cho)、甘油三酯(tg)、游離脂肪酸、血糖、血紅蛋白a1c(hba1c、ngsp)、糖白蛋白。

5.分析

(1)分析原則

本發(fā)明人應(yīng)用按照方案(per-protocol)原則而不是意向治療(intention-to-treat)原則，考慮到與事后披露的方案的偏差。

(2)主要的分析

進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以評價(jià)零假設(shè)“東革阿里在任何終末點(diǎn)(endpoint)均不具有任何作用”。進(jìn)行雙因素manova以評估以下2個(gè)因素的作用：干預(yù)(2組之間：東革阿里，安慰劑)以及試驗(yàn)期(2個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)：第0周，第4周)。

(3)額外的分析

i.對于變化的組間比較

為了闡明東革阿里提取物(ta)和安慰劑(p)組之間在從第0周到第4周的變化是否存在差異，本發(fā)明人使用獨(dú)立的t檢驗(yàn)比較了每個(gè)結(jié)果參數(shù)的變化。通過從相應(yīng)的第4周的值中減去每個(gè)結(jié)果的基線值來計(jì)算變化。

ii.anova

為了控制基線值和其它混雜因素對結(jié)果的影響，本發(fā)明人另外進(jìn)行了主要和次要結(jié)果的單因素ancova。盡管在開始該試驗(yàn)之前并未通過研究方案來定義ancova，但是在考慮到基線變化時(shí)，ancova在統(tǒng)計(jì)學(xué)上似乎比manova更合適。

在全分析集的ancova中，本發(fā)明人將干預(yù)設(shè)為獨(dú)立變量，將第4周的每個(gè)結(jié)果值作為因變量，以及每個(gè)結(jié)果的性別、年齡和基線值作為協(xié)變量。此外，在用于sex分層的ancova中，本發(fā)明人將每個(gè)結(jié)果的年齡和基線值設(shè)為協(xié)變量，并且獨(dú)立變量和因變量與全分析集中的相同。

(4)設(shè)置和軟件

ibmspssver.18.0用于分析。在雙側(cè)檢驗(yàn)中小于0.05的p值被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的。

結(jié)果

1.研究人群

84名參與者中共有83名完成了試驗(yàn)。一名參與者在開始攝入之前退出本試驗(yàn)，因?yàn)樵搮⑴c者在篩選試驗(yàn)之后開始節(jié)食(dieting)，并且這與本試驗(yàn)的遵守規(guī)則相矛盾。兩名參與者被從統(tǒng)計(jì)分析中排出。一名參加者恰好在第4周前感冒，這似乎會(huì)影響免疫學(xué)狀態(tài)。另一名參與者沒有按照試驗(yàn)方案攝入足夠的試驗(yàn)材料，并且她的攝入率低于總需求攝入量的90％。所述研究人群的流程圖如圖1所示。

因此，對81名參與者進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。人口統(tǒng)計(jì)學(xué)、體重、bmi、免疫學(xué)age、以及siv的基線數(shù)據(jù)示于表5中。

表5在基線(第0周)時(shí)主要終末點(diǎn)間的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和特別重要的指標(biāo)

sham：全職媽媽，siv：免疫學(xué)活力的評分

2.主要的分析

免疫學(xué)參數(shù)

免疫學(xué)參數(shù)的結(jié)果示于表6?？捎^察到許多顯著的組間差異。特別是，東革阿里提取物(ta)中siv和免疫學(xué)級別的增加量顯著大于安慰劑(p)的。類似地，ta中的免疫學(xué)年齡的降低顯著大于p中的。這些趨勢是在優(yōu)選的方向上。另外，ta中的若干個(gè)項(xiàng)目的改變值也顯著大于p中的值；t細(xì)胞數(shù)，初始t細(xì)胞數(shù)，n/m比，b細(xì)胞數(shù)和t細(xì)胞增殖活性。這些項(xiàng)目是組成siv的一些部分。

表6

^**通過獨(dú)立t檢驗(yàn)計(jì)算p值

h：越高越好，l:越低越好，ru:中間的更好(表示反u形曲線)

3.主觀癥狀

poms的結(jié)果示于表7，likert量表的結(jié)果示于表8。對于poms，東革阿里提取物(ta)中“緊張-焦慮”和“疲勞”的評分變化大于安慰劑(p)中的評分變化(具有邊際顯著性)，但是沒有觀察到顯著的組間差異。

至于likert量表，與主要的分析相比，已發(fā)現(xiàn)存在顯著性差異。在以下3個(gè)項(xiàng)目中觀察到顯著的組間差異：“我感覺身體疲勞”，“我受到失眠的困擾”和“最近，我感覺不太快樂”。東革阿里提取物(ta)中這些項(xiàng)目的變化大于在安慰劑(p)中的變化?！凹词刮矣凶銐虻男菹⒑退撸乙哺杏X沒有恢復(fù)精神”也顯示出與上述三個(gè)項(xiàng)目相似的趨勢，但是差異仍然是邊際顯著性的。

表7pmos評分中變化的比較

^**通過獨(dú)立t檢驗(yàn)計(jì)算p值

h：越高越好，l:越低越好

表8在likert量表評分中變化的比較

^*通過獨(dú)立t檢驗(yàn)計(jì)算p值

較低的評分表示參與者處于更優(yōu)選的狀態(tài)中。

4.使用全分析集根據(jù)ancova分析結(jié)果

雖然t檢驗(yàn)和ancova是額外的分析，但是申請人主要報(bào)告了組間比較的ancova的結(jié)果。原因是ancova被認(rèn)為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上比雙因素manova更合適，因?yàn)閍ncova考慮了基線變化。

4-1.免疫學(xué)參數(shù)

免疫學(xué)參數(shù)的結(jié)果示于表9，siv的分項(xiàng)評分示于圖2。在siv和免疫學(xué)級別中可觀察到顯著性組間差異。東革阿里提取物(ta)中的這些值高于安慰劑(p)中的值。此外，與安慰劑(p)的參與者相比，東革阿里提取物(ta)中的參與者顯示出相對較低的免疫學(xué)年齡，但是該差異仍然是邊際顯著性的。在8個(gè)項(xiàng)目中，ta中的t細(xì)胞數(shù)量和初始t細(xì)胞數(shù)量顯著大于在p中的。

表9使用ancova對于所有參與者的免疫學(xué)參數(shù)進(jìn)行組間比較

^**通過獨(dú)立t檢驗(yàn)計(jì)算p值

h：越高越好，l:越低越好，ru:中間的更好(表示反u形曲線)

4-2主觀癥狀

poms的結(jié)果示于表10，likert量表的結(jié)果示于表11。對于poms，沒有發(fā)現(xiàn)顯著性組間差異。東革阿里提取物(ta)中的緊張-焦慮的平均值低于安慰劑(p)中的(具有邊際顯著性)。至于likert量表，在“我受到失眠的困擾”和“最近，我感覺不太快樂”中顯示出顯著性差異。對于這兩個(gè)項(xiàng)目，ta中的參與者顯示比p中的參與者相對較低的評分，這表明ta組中的更好的睡眠和更快樂的精神狀態(tài)。

表10使用ancova對于所有參與者的pmos評分進(jìn)行組間比較

^**通過獨(dú)立t檢驗(yàn)計(jì)算p值

h：越高越好，l:越低越好

表11使用ancova對于所有參與者的likert量表評分的組間比較

^*通過獨(dú)立t檢驗(yàn)計(jì)算p值

較低的評分表示參與者處于更優(yōu)選的狀態(tài)中。

討論

本研究的主要目的是評估東革阿里提取物(ta)在人體中的免疫刺激作用。126名健康志愿者中共有84名通過了篩選試驗(yàn)，并且83名參與者完成了該試驗(yàn)。

申請人進(jìn)行三種統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以進(jìn)行組間比較。首先，進(jìn)行雙因素manova，作為本試驗(yàn)的研究方案中概述的預(yù)選統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。其次，記錄使用獨(dú)立t檢驗(yàn)時(shí)兩組之間在從第0周到第4周的變化。最后，考慮到每個(gè)指標(biāo)的年齡、性別和基線值作為協(xié)變量，比較使用單因素ancova時(shí)在第4周的平均值。盡管t檢驗(yàn)和ancova是額外的分析，但是申請人主要報(bào)告了組間比較的ancova的結(jié)果。原因是ancova被認(rèn)為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上比雙因素manova更合適，因?yàn)閍ncova考慮了基線變化。

東革阿里提取物(ta)的免疫刺激作用

本試驗(yàn)結(jié)果表明，東革阿里提取物在人體中具有免疫刺激作用。服用東革阿里提取物的參與者中的siv(總體免疫功能的綜合指數(shù))得以顯著性改善，并且即使考慮到siv的年齡、性別和基線值，在第4周時(shí)ta中的siv也顯著地高于安慰劑(p)中的siv。此外，免疫年齡(其為免疫功能的一種易于理解形式)在ta中比在p中低。這表明ta中的免疫功能比安慰劑(p)中的“更年輕”。

因此，所述東革阿里提取物(ta)可能具有抗衰老作用。這些結(jié)果表明，所述東革阿里提取物增強(qiáng)和/或刺激人體中的免疫系統(tǒng)/功能，并且其在免疫受損的個(gè)體(例如癌癥患者)中，可能涉及保護(hù)人體抵御感染性疾病和感染。

對于個(gè)體免疫學(xué)的組分，ta中參與者的t細(xì)胞和初始t細(xì)胞的數(shù)量顯著高于p中的那些。t細(xì)胞是適應(yīng)性免疫和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫的關(guān)鍵組分之一，因此，較高的t細(xì)胞數(shù)量表明人的高免疫能力，特別是在適應(yīng)性免疫、細(xì)胞介導(dǎo)的免疫中。適應(yīng)性免疫可有效地保護(hù)人體抵御感染性病原體抗原，所述感染性病原體抗原在過去侵襲過人體至少一次以獲得免疫記憶；細(xì)胞介導(dǎo)的免疫保護(hù)人體抵御病毒和突變細(xì)胞。初始t細(xì)胞是未暴露于任何抗原的未分化t細(xì)胞。換言之，初始t細(xì)胞與免疫記憶的“獲得”有關(guān)，并且它在適應(yīng)性免疫中發(fā)揮重要作用。初始t細(xì)胞保護(hù)人體抵御“新型”抗原或病原體，然而，它隨著衰老或壓力而惡化。由于公知這些細(xì)胞隨著衰老而惡化，因此東革阿里(ta)似乎對免疫學(xué)功能和受到壓力(stressed)的個(gè)體的衰老具有預(yù)防性作用。

主觀癥狀(pmos)

在兩組中的第0周和第4周之間，poms中的所有項(xiàng)目都發(fā)生了顯著地變化。在這兩組中的第4周，5個(gè)負(fù)面項(xiàng)目(緊張-焦慮、抑郁、憤怒-敵意、疲勞和意識(shí)錯(cuò)亂)的評分下降，一個(gè)正面項(xiàng)目(活力)的評分增加。所有這些變化都是優(yōu)選的。使用ancova時(shí)的組間比較顯示在全分析集中沒有差異，然而，東革阿里提取物(ta)中的緊張-焦慮低于安慰劑(p)中的(具有邊際顯著性)。這些結(jié)果表明即使考慮了年齡、性別及其基線值，東革阿里的攝入仍然可以比安慰劑更好地改善緊張-焦慮。

主觀癥狀(likert量表)

許多項(xiàng)目在各組內(nèi)均被顯著改善，但這些變化可更清楚地在東革阿里提取物(ta)中觀察到。至于組間比較，在全分析集中，與安慰劑(p)相比，關(guān)于失眠和快樂情緒的項(xiàng)目在ta中得以更好地改善?？傊c安慰劑相比，東革阿里(ta)改善了多個(gè)主觀癥狀。

本文獲得的結(jié)果表明東革阿里提取物(ta)在人體中具有免疫刺激作用，特別是在通過t細(xì)胞及其亞組所認(rèn)為的適應(yīng)性免疫、細(xì)胞介導(dǎo)的免疫中。盡管在東南亞，東革阿里在傳統(tǒng)上被用作復(fù)蘇劑或解熱劑，但是它與免疫功能的關(guān)系以前尚未被研究過。因此，本研究的結(jié)果是非常重要和富有意義的，因?yàn)槠涫状谓沂玖藮|革阿里在人體中的可能的免疫刺激作用，并且有可能允許將東革阿里納入到用于疲勞或感染性疾病的補(bǔ)充藥物組中。此外，由于其降低了免疫學(xué)年齡，因此它還可能具有抗衰老特性。