本發(fā)明涉及一種用于抗氧化的組合物，所述用于抗氧化的組合物含有如下有效成分：由撕裂蠟孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物。
背景技術：
：自由基(freeradical)是化學上非常不穩(wěn)定狀態(tài)的化合物，所以想從周圍的其他化合物奪取電子從而成為穩(wěn)定狀態(tài)的化合物的性質(zhì)強烈。其結(jié)果，不僅自由基周圍的分子容易失去電子從而受到氧化的損傷，而且會連續(xù)發(fā)生其本身再成為自由基從而攻擊周圍的化合物的一系列反應。所述自由基也在人體內(nèi)通過生命活動自然地生成，作為代表性的自由基，有如超氧自由基(superoxideradical(o2-))、羥基自由基(hydroxylradical(ho·))、過氧化氫(hydrogenperoxide(h2o2))以及單線態(tài)氧(singletoxygen(1o2))一樣的反應性非常強的自由基的活性氧簇(reactiveoxygenspecies,ros)，所述超氧自由基來自于生成能量(energy)所必須的氧(穩(wěn)定的分子狀態(tài)的基態(tài)三線態(tài)氧(groundstatetripletoxygen))，所述能量為維持生命所需要的。如此生成的活性氧簇使得構(gòu)成人體的脂肪和蛋白質(zhì)以及基因因氧化而受到損傷從而成為引起以老化和癌癥為首的腦卒中、帕金森病(parkinson’sdisease)等的腦病和心臟疾病、缺血、動脈硬化、皮膚損傷、炎癥、風濕病(rheumatism)、自身免疫病等的各種疾病的原因，作為用于保護人體不受所述活性氧簇的危害的手段，人體具有如超氧物歧化酶(sod:superoxidedismutase)、過氧物酶(peroxidase)、過氧化氫酶(catalase)以及谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase)一樣的抗氧化酶系統(tǒng)(antioxidantenzymesystem)。然而，最近，因為伴隨公害和環(huán)境污染的各種化學物質(zhì)、食品添加物、吸煙、飲酒、紫外線以及精神性壓力等的各種環(huán)境性要因，我們身體的平衡(balance)被打破的同時以過多地多于人體的正常的生命活動所需要的量的形式生成活性氧簇，從而脫離人體的自我抗氧化保護體系的能力，由此，各種疾病的發(fā)生以及老化速度正在增加?？寡趸钚允侵溉缦履芰Γ浩洳粌H如上所述能夠防止在生物體內(nèi)過多地生成活性氧，而且能夠防止引起細胞中不可恢復的損傷的氧化現(xiàn)象。具有所述抗氧化活性的物質(zhì)叫做抗氧化劑，所述抗氧化劑大致可分為由人為合成的合成抗氧化劑以及存在于自然界的天然抗氧化劑?？寡趸瘎┍粡V泛利用于醫(yī)藥品、食品、化妝品以及飼料領域等多種領域。到目前為止，作為開發(fā)的合成抗氧化劑，有bha(butylatedhydroxyanisole，叔丁基羥基茴香醚)、bht(butylatedhydroxytoluene，丁羥甲苯)以及ndga(nordihydroguaiareticacid，去甲二氫愈創(chuàng)木酸)等，作為天然抗氧化劑，有超氧物歧化酶、過氧物酶、過氧化氫酶以及谷胱甘肽過氧化物酶等的抗氧化酶和抗壞血酸(ascorbicacid)(維生素c)、生育酚(tocopherol)(維生素e)以及類胡蘿卜素(carotenoid)等的非酶性抗氧化物質(zhì)。然而，由于合成抗氧化劑具有如下缺點：其怕熱，如果加熱的話就容易被破壞，不僅如此，生物體內(nèi)的活性氧清除作用不充分且也能夠在人體內(nèi)誘發(fā)如過敏反應(allergy)或癌癥一樣的各種疾病，所以，限制對人體長期使用。因此，想從天然物中尋找抗氧化活性高且完全對人體無害的抗氧化物質(zhì)的嘗試正在積極地進行中。作為所述的天然抗氧化材料，綠茶、刺五加皮、臭椿、甘菊、柿葉、黃芩、海州常山、野薔薇、荸薺、蒲公英、紅花、樟樹等的植物提取物等的效果廣為人知，并且正在研究開發(fā)利用所述天然抗氧化材料的食品添加物、化妝品組合物以及藥學組合物等(韓國專利第1258696號以及韓國專利第0682319號)。然而，盡管有所述努力，但是自然界中仍然存在未被知道的無數(shù)的抗氧化物質(zhì)，因此，針對具有更加優(yōu)秀的抗氧化活性的天然抗氧化材料的研究以及開發(fā)的必要性正在日漸增加。眾所周知，撕裂蠟孔菌作為白腐菌(white-rotfungi)的一種，為了在生態(tài)界利用纖維素(cellulose)、半纖維素(hemicellulose)、其他多糖以及甘油(glycerol)等的碳源，執(zhí)行被稱為木質(zhì)素(lignin)分解的共代謝(cometabolism)。然而，并未報告過撕裂蠟孔菌有優(yōu)秀的抗氧化活性，也未報告過它們的提取物也具有抗氧化活性。對此，本發(fā)明的發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物具有抗氧化效果，并完成了本發(fā)明，本發(fā)明涉及含有所述物質(zhì)作為有效成分的用于抗氧化的組合物。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于，提供一種含有由撕裂蠟孔菌生成的藥理活性成分的用于抗氧化的組合物。本發(fā)明的又另外的目的在于，提供一種含有由撕裂蠟孔菌生成的藥理活性成分的具有抗氧化效能的添加劑。為了達成所述目的，本發(fā)明提供一種含有如下成分作為有效成分的用于抗氧化的組合物：由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物。為了達成所述目的，本發(fā)明提供一種含有如下成分作為有效成分的具有抗氧化效能的添加劑：由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物。為了達成所述目的，本發(fā)明提供一種抗氧化方法，所述抗氧化方法包括將如下成分用藥于需要抗氧化能力的對象：由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物。為了達成所述目的，本發(fā)明提供一種用來制造用于抗氧化的藥劑的由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物的用途。根據(jù)本發(fā)明的含有由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物作為有效成分的組合物因為抗氧化活性非常優(yōu)秀，所以能夠有效地用作以抗氧化活性為基礎的用于各種疾病的預防或者治療的藥學組合物、健康功能食品組合物、功能性化妝品組合物或者動物用飼料，或者用作所述組合物的抗氧化用添加劑。附圖說明圖1是表示由撕裂蠟孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖的dpph(1，1-diphenyl-2-pycrylhydrazyl；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)清除活性的圖表(graph)。圖2是表示由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖的abts(2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)；2,2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽)清除活性的圖表。具體實施方式以下，對本發(fā)明進行詳細說明。本發(fā)明提供一種用于抗氧化的組合物，所述用于抗氧化的組合物含有如下有效成分：由撕裂蠟孔菌(ceriporialacerata)生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物。本發(fā)明的用于抗氧化的組合物能夠用于醫(yī)藥品、食品、化妝品以及飼料領域等的多種領域。就根據(jù)本發(fā)明的組合物而言，所述胞外多糖可以包含約40～60重量％的糖和約30～40重量％的蛋白質(zhì)、約40～50重量％的糖和約32～38重量％的蛋白質(zhì)、或者約43～47重量％的糖和約33～36重量％的蛋白質(zhì)，優(yōu)選地，可以包含約45重量％的糖和約34重量％的蛋白質(zhì)。所述糖可以含有甘露糖(mannose)、半乳糖(galactose)以及葡萄糖(glucose)。所述胞外多糖可以具有約100～150kda、約110～140kda或者約115～125kda的分子量，優(yōu)選地，可以具有約120kda的分子量。作為一個優(yōu)選的具體例子，所述胞外多糖可以通過包括如下步驟的制造方法制造：(a)對撕裂蠟孔菌菌絲體進行液體培養(yǎng)，從而制造撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液；(b)使得撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液干燥從而進行粉末化；以及(c)通過溶劑提取撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液粉末后，對其進行過濾并減壓濃縮。在所述(a)步驟中的用于撕裂蠟孔菌菌絲體的液體培養(yǎng)的培養(yǎng)基包含糖、葡萄糖、淀粉、高粱粉、大麥粉、大豆粉、硫酸鎂(mgso4)、磷酸二氫鉀(kh2po4)、磷酸氫二鉀(k2hpo4)以及水，氫離子濃度可以是4.5～6.0。作為一個優(yōu)選的具體例子，所述培養(yǎng)基可以包含糖0.2～3重量％、葡萄糖0.2～3重量％、淀粉0.2～4重量％、高粱粉0.1～0.5重量％、大麥粉0.1～0.5重量％、大豆粉0.2～3重量％、硫酸鎂(mgso4)0.05～0.1重量％、磷酸二氫鉀(kh2po4)0.05～0.25重量％、磷酸氫二鉀(k2hpo4)0.05～0.25重量％，剩余為水。在所述(a)步驟中的液體培養(yǎng)可以在藍色led光源下進行，并可以在將二氧化碳的濃度保持在1,000～2,000ppm的狀態(tài)下進行。此時，就液體培養(yǎng)而言，例如，在20～25℃下、氫離子濃度(ph)為4.5～6.0、光源為藍色led、光照度保持0.5lux，并且空氣以0.5～1.5kgf/cm2注入，二氧化碳的濃度保持為1,000～2,000ppm的同時可以進行8～13天，在22℃、ph5.0、1.0kgf/cm2、1,500ppm的條件下進行10天，此時胞外多糖的含量高，所以是優(yōu)選的。作為所述(a)步驟的親株(parentstrain)能夠使用經(jīng)過如下培養(yǎng)過程的物質(zhì)：將以馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potatodextroseagar，pda)培養(yǎng)基狀態(tài)在4℃下保管中的1個優(yōu)良菌株，在錐形瓶中使用馬鈴薯葡萄糖肉湯(potatodextrosebroth，pdb)培養(yǎng)基，并在振蕩培養(yǎng)器中保持25℃的恒溫，培養(yǎng)7～9天。此時，作為接種體(inoculum)要投入的菌絲體的量以將要培養(yǎng)的溶液的量為基準，優(yōu)選為0.5％(w/v)左右。不是說菌絲體量(％/100ml)多，胞外多糖的含量也一起升高，因此優(yōu)選地，培養(yǎng)基的組成適用使得胞外多糖的含量形成得最高的選擇性培養(yǎng)條件，而不是適用對菌絲體的生長最良好的營養(yǎng)比例以及環(huán)境條件。所述培養(yǎng)液能夠分離精制為菌絲體和水溶液。為了所述分離精制，可以通過多片壓濾機(multi-sheetfilterpress)和振動離心膜分離機(pallsep)對通過離心分離機去除菌絲體的溶液進行反復精制后，進行1分鐘紫外線(uv)照射。此外，溶液需要在去除氧后進行密封保管，這是因為，溶液中存在菌絲的情況下，氧使得菌絲生長，并致使有效成分的含量發(fā)生變化。在所述(b)步驟中，使得在所述(a)步驟制造出的菌絲體培養(yǎng)液得到真空干燥或者冷凍干燥，從而能夠進行粉末化。為了防止有效物質(zhì)的消失，所述干燥在40℃以下的溫度，優(yōu)選地，在30℃以下的溫度下進行48～96小時。并且，就在(b)步驟的干燥而言，與將蒸發(fā)溫度設置為相對較高的真空干燥機相比，使用真空冷凍干燥機使得有效物質(zhì)含量變化最小化，所以是優(yōu)選的。在所述(c)步驟中，通過溶劑對在(b)步驟中得到的菌絲體培養(yǎng)液干燥粉末進行提取后，對作為根據(jù)本發(fā)明的組合物的有效成分的胞外多糖進行分離、制造。具體地，將蒸餾水100ml添加于干燥粉末5g，充分懸浮后，進行離心分離(8,000rpm,20min)，并將相當于分離出的上清液的量的2～3倍的提取溶劑添加于分離出的上清液，放進冰箱(4℃)，可以靜置12小時。僅對所述的靜置物中的上清液重新進行離心分離(8,000rpm,20min)后，回收沉淀物，從而能夠制造粗制(crude)胞外多糖。優(yōu)選地，在30℃以下對所述粗制胞外多糖進行真空冷凍干燥。所述提取溶劑可以是從由如下物質(zhì)組成的組中選出的溶劑或者它們的混合溶劑：水、乙醇(ethanol)、甲醇(methanol)、丙酮(acetone)、丁醇(butanol)以及乙酸乙酯(ethylacetate)，優(yōu)選地，可以是水或者50％(w/w)～80％(w/w)的乙醇水溶液。在根據(jù)本發(fā)明的含有由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物作為有效成分的用于抗氧化的藥學組合物中還可以包括通常使用的適當?shù)妮d體、賦形劑以及稀釋劑。相對于組合物總重量，所述胞外多糖可以包含0.1至80重量％，優(yōu)選地，可以包括0.1至50重量％，并且撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物能夠以相當于所述胞外多糖的含量的量適當?shù)乇话?。然而，最為?yōu)選的胞外多糖或者包含胞外多糖的培養(yǎng)液、培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物的有效含量能夠根據(jù)藥學組合物的使用方法以及目的得到適當?shù)卣{(diào)節(jié)。能夠根據(jù)通常的方法分別對根據(jù)本發(fā)明的藥學組合物進行劑型化并得以使用。適合的劑型有片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、糖衣片劑、硬質(zhì)或軟質(zhì)的膠囊(capsule)、溶液劑、懸浮劑或者乳化液劑、注射劑、栓劑等，但并非限定于此。根據(jù)本發(fā)明的藥學組合物能夠利用藥學上非活性的有機或者無機載體來制造適當?shù)膭┬?。換句話說，劑型是片劑、被包層的(coating)片劑、糖衣片劑以及硬膠囊劑的情況，可以使用乳糖(lactose)、蔗糖(sucrose)、淀粉或者淀粉衍生物、滑石(talc)、碳酸鈣(calciumcarbonate)、明膠(gelatin)、硬脂酸(stearicacid)或者硬脂酸鹽。此外，劑型是軟膠囊劑的情況，能夠使用植物性油(oil)、蠟(wax)、脂肪、半固體以及液體的多元醇(polyol)。此外，劑型是溶液或者糖漿(syrup)形態(tài)的情況，可以使用水、多元醇、甘油、以及植物性油等。根據(jù)本發(fā)明的藥學組合物除了所述的載體外，也還能夠包括保存劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、溶解劑、甜味劑、著色劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑等。根據(jù)本發(fā)明的藥學組合物的用藥方法能夠根據(jù)劑型而易于選擇，并且能夠進行口服或非口服用藥。用藥量雖然根據(jù)患者的年齡、性別、體重、病情、用藥途徑而可以不同，但是通常以有效成分胞外多糖為基準，可以將5至500mg/kg的量，優(yōu)選地，100至250mg/kg的量分成一天一次至三次進行服用。然而，所述用藥量無論從任何方面來講都不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成限定。根據(jù)本發(fā)明的藥學組合物不僅提供優(yōu)秀的抗氧化效果，而且也幾乎沒有由藥物導致的毒性及副作用，從而作為抗氧化劑而長期服用時也能夠放心服用。由此，就預防或者治療而言，本發(fā)明的藥學組合物能夠用于預防以及治療需要抗氧化效果的多種疾病，例如，老化、癌癥、腦卒中、帕金森病、心臟疾病、缺血、動脈硬化、皮膚損傷、炎癥、風濕病、自身免疫病等。此外，本發(fā)明提供具有抗氧化效能的健康功能食品，所述健康功能食品含有如下有效成分：由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或提取物。根據(jù)本發(fā)明的健康功能食品可以是粉末、顆粒、片劑、膠囊或飲料的形態(tài)，可以是糖果、巧克力、飲料、口香糖、茶、維他命復合劑、健康輔助食品等。此時，所述食品中的根據(jù)本發(fā)明的胞外多糖或者包含胞外多糖的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或提取物通常以整體食品重量的0.01至50重量％，優(yōu)選地，以0.1至20重量％的形式被包含，健康飲料組合物的情況，以100ml為基準，能夠以0.02至10g，優(yōu)選地，以0.3至1g的比例被包含。所述食品中，與根據(jù)本發(fā)明的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或提取物一起，還可以包括食品學上能夠允許使用的食品輔助添加劑。根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物除了包括顯示抗氧化活性的有效成分的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物以外，化妝品組合物一般所利用的成分可以包含如下所述的通常的輔助劑以及載體，例如：穩(wěn)定劑、溶解劑、表面活性劑、維生素、色素以及香料。所述化妝品組合物能夠被制造為在該
技術領域：
一般所制造的任何劑型，例如，可以劑型化為：溶液、懸浮液、乳狀液、膏(paste)、凝膠、霜、乳液、粉末(powder)、肥皂、含有表面活性劑的清潔(cleansing)產(chǎn)品、油、粉末粉底(foundation)、乳狀液粉底、蠟粉底以及噴霧(spray)等。更為詳細地，可以制造為柔軟化妝水、營養(yǎng)化妝水、營養(yǎng)霜、按摩霜、精華、眼霜、潔面霜(cleansingcream)、洗面乳(cleansingfoam)、潔膚水(cleansingwater)、面膜(pack)、噴霧或者粉末的劑型，但并非限定于此。根據(jù)本發(fā)明的飼料組合物可以單獨服用給動物或在食用載體中與其它飼料組合物相混合后給動物服用。此外，所述飼料組合物作為追肥(top-dressing)或者將飼料組合物直接混合于動物飼料或者用飼料和另外的口服劑型易于向動物用藥。將所述飼料組合物和動物飼料區(qū)分開進行用藥的情況，正如該
技術領域：
眾所周知的，可以與藥劑學上能夠允許使用的食用載體相調(diào)和，從而制造為立刻釋放或者放出性劑型。所述食用載體可以是固體或者液體，例如：玉米粉、乳糖、蔗糖、豆片(flake)、花生油、橄欖油(oliveoil)、芝麻油以及丙二醇(propyleneglycol)。使用固體載體的情況，飼料添加劑可以是片劑、膠囊劑、散劑、糖錠劑(troche)或者含糖片劑或者未分散形態(tài)的追肥，使用液體載體的情況，飼料添加劑可以是明膠(gelatin)軟膠囊、或者糖漿劑或懸浮劑、乳劑、或者溶液劑的劑型。本發(fā)明的由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物，以用于表示抗氧化效果為目的，可以作為添加劑用于各種醫(yī)藥品、食品、化妝品以及飼料等，此時，使用量以及使用形態(tài)可以根據(jù)目的進行適當?shù)卣{(diào)節(jié)。本發(fā)明提供抗氧化方法，所述方法包括將由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物用藥于需要抗氧化能力的對象。所述需要抗氧化能力的對象可以是哺乳動物，具體地可以是人類。此外，本發(fā)明提供用于制造抗氧化藥劑的由撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物的用途。由所述撕裂蠟孔菌生成的胞外多糖或者包含胞外多糖的撕裂蠟孔菌的菌絲體培養(yǎng)液、菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末或者提取物同所述一樣。此外，所述抗氧化能力可以用于預防以及治療需要抗氧化效果的多種疾病，例如：老化、癌癥、腦卒中、帕金森病、心臟疾病、缺血、動脈硬化、皮膚損傷、炎癥、風濕病、自身免疫病等。以下，通過以下實施例對本發(fā)明進行更加詳細的說明。但是，以下實施例只是用于對本發(fā)明進行示例，本發(fā)明的范圍并非只限定為此?！緦嵤├恐圃炖?.撕裂蠟孔菌培養(yǎng)液、其的干燥粉末、提取物及胞外多糖(exopolysaccharide；以下稱“eps”)的制造1.1撕裂蠟孔菌培養(yǎng)液的制造使得從柞樹活組織中分離的撕裂蠟孔菌通過傳代培養(yǎng)而培養(yǎng)的毛霉菌在-80℃進行冷凍保管，所述柞樹采集于慶尚北道尚州市，并將保管中的菌株在pda(potatodextroseagar)培養(yǎng)基(87塑料培養(yǎng)皿；difco，bectondickinsonandcompany)中傳代2～3次后，僅將充分數(shù)量的完整菌株在4℃冰箱中保管后進行使用。并且在錐形瓶中形成pdb(potatodextrosebroth)培養(yǎng)基(difco，bectondickinsonandcompany)600ml后，放入一個pda培養(yǎng)菌株，并在25℃下進行8天振蕩培養(yǎng)，從而獲得pdb培養(yǎng)菌株。之后，將液體培養(yǎng)培養(yǎng)基在800l發(fā)酵槽中以121℃、1.5kgf/cm2殺菌20分鐘后，在冷卻至23℃的狀態(tài)下，接種作為起子(starter)進行使用的pdb培養(yǎng)菌株600ml，并以0.5～1.5kgf/cm2進行通氣的同時，在光源為藍色led、光照度保持0.5lux、二氧化碳的濃度為2,000ppm的條件下使得撕裂蠟孔菌菌絲體在23℃的恒溫下進行10天的液體培養(yǎng)，從而制造撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液，所述液體培養(yǎng)培養(yǎng)基包括：糖1.5重量％、葡萄糖0.5重量％、土豆淀粉0.5重量％、高粱粉0.25重量％、大麥粉0.25重量％、大豆粉0.75重量％、硫酸鎂(mgso4)0.05重量％、磷酸二氫鉀(kh2po4)0.05重量％、磷酸氫二鉀(k2hpo4)0.05重量％，剩余為水。1.2撕裂蠟孔菌培養(yǎng)液干燥粉末的制造利用真空冷凍干燥機使得在制造例1.1中所制造的撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液在25℃下進行72小時的冷凍干燥，并使其粉末化，因此，制造了撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末。1.3撕裂蠟孔菌培養(yǎng)液提取物的制造向在制造例1.2中所制造的撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液的干燥粉末5g中添加蒸餾水100ml，進行充分懸濁后，以8,000rpm進行20分鐘離心分離后，向離心分離所得的上清液中加入相當于其量的2～3倍的乙醇，并在4℃下靜置12小時。從所述的靜置物中提取上清液，從而制造了撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液的提取物。1.4從撕裂蠟孔菌培養(yǎng)液制造eps對在制造例1.3中所制造的撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液的提取物重新以8,000rpm進行20分鐘離心分離后，回收沉淀物，從而獲得粗制(crude)的eps。使得所述粗制的eps在真空冷凍干燥機中在25℃下進行72小時真空冷凍干燥，從而獲得了由撕裂蠟孔菌生成的eps。實施例1.eps的特性評價1.1利用凝膠滲透色譜法(gelpermeationchromatography，gpc)進行的eps的分子量測定使得制造例1中所制造的eps在0.1mna2so4/0.05mnan3(通過冰醋酸(glacialaceticacid)將ph調(diào)整為4)溶液中以成為1％(w/v)的形式溶解后，進行離心分離，之后通過0.45μm針筒式過濾器(syringefilter)僅過濾上清液，從而通過gpc進行分析。具體地，gpc分析條件通過檢測器利用折射指數(shù)，gpc柱(column)利用ohpaksb805hq(shodex，japan)，流動相使用0.1mna2so4/0.05mnan3(通過冰醋酸將ph調(diào)整為4)，流動相的流速以1.0ml/分進行流動。標準曲線利用具有各自不同的分子量(130、400、770、1200kda)的葡聚糖(dextran)(americanpolymercorporation，usa)來制作，并且利用折射指數(shù)(refractivityindex，ri)測定器knauerk-2310(germany)來測定eps的分子量。對測定條件進行整理如下表1所示?！颈?】分子重的測定hplc系統(tǒng)knauerk-501系統(tǒng)柱ohpaksb805hq(shodex，japan)流動相0.1mna2so4/0.05mnan3/ph4流速1.0ml/min測定器ri(knauerk-2310)結(jié)果顯示，本發(fā)明的eps的分子量約為120kda。1.2eps的糖及蛋白質(zhì)含量測定對制造例1中所制造的eps進行二次精制后，用蛋白質(zhì)水解酶進行處理，從而測定糖及蛋白質(zhì)含量。具體而言，將一次精制的eps重新溶入蒸餾水后，以8,000rpm進行20分鐘離心分離，從而分離上清液后，向所分離的上清液添加相當于其量的2～3倍的乙醇，并放進4℃的冰箱，靜置12小時。之后，在靜置物中再次以8,000rpm僅對上清液進行20分鐘離心分離后，回收沉淀物，從而獲得2次精制的eps。使得所述2次精制的eps溶解于蒸餾水后，用作為蛋白質(zhì)水解酶的堿性蛋白酶(alcalase)以0.5％(w/v)的濃度在50℃下進行30分鐘處理。糖含量通過酚-硫酸法(phenol-sulfuricacidmethod)進行測定。具體地，向按照不同濃度稀釋的樣品1ml中添加80％酚25μl后，添加硫酸2.5ml，從而在室溫下進行冷卻，并在465nm下測定吸光度，從而計算糖含量。此外，蛋白質(zhì)含量通過bca方法(smithpk等，analyticalbiochemistry，150(1)：76-85，1985)得到測定，并作為標準物質(zhì)使用牛血清白蛋白(albumin)。如上所述，測定的糖含量以及蛋白質(zhì)含量如以下表2所示，糖含量表現(xiàn)為45～51重量％，蛋白質(zhì)含量表現(xiàn)為33～34重量％?！颈?】*酶處理：堿性蛋白酶(alcalase(0.5％，50℃，30分鐘各數(shù)值為平均±se(n≥3)此外，eps的糖構(gòu)成分析結(jié)果顯示，eps主要含有甘露糖、半乳糖及葡萄糖。實施例2.eps的抗氧化效果驗證2.1.dpph自由基清除活性測定為了驗證從撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液分離的eps的抗氧化效果，對利用dpph(1，1-diphenyl-2-picryhydrazyl)的自由基清除活性進行了測定(關聯(lián)文獻：thaipongkriengsak.等，journaloffoodcompositionandanalysis，vol.19，pp669～675，2006)。具體地，dpph自由基的清除活性通過利用如下所述的方法進行測定：dpph自由基通過樣品的抗氧化物質(zhì)得到去除，從而自由基特有的顏色紫色得以脫色。將eps按照不同濃度(100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm及1,000ppm)每2ul地放入96孔板(wellplate)的孔后，添加100um的dpp溶液198ul并充分混合后，在常溫下進行30分鐘溫育(incubation)。接下來，為了掌握剩余的dpph的量，測定540nm中的吸光度，從而確認不同濃度的dpph自由基清除活性。之后，表3及圖1表示出將根據(jù)本實施例的樣品的吸光度與未放入dpph的對照組的吸光度進行比較的自由基清除率(％)。所述自由基清除率(％)計算為[1-(樣品的吸光度/對照組的吸光度)]x100。【表3】如表3所示，能夠確認隨著根據(jù)本發(fā)明的eps的濃度從100ppm增加至1,000ppm，dpph自由基清除活性漸漸增加。尤其，eps的濃度為1,000ppm時，表示為平均52.64％的dpph自由基清除率。因此，所述結(jié)果顯示根據(jù)本發(fā)明的eps具有強烈的抗氧化活性。2.2.abts自由基清除活性測定為了驗證從撕裂蠟孔菌菌絲體培養(yǎng)液分離的eps的抗氧化效果，對利用abts(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate)的自由基清除活性進行了測定(關聯(lián)文獻：thaipongkriengsak.等,journaloffoodcompositionandanalysis,vol.19,pp669～675,2006)。具體地，abts自由基清除活性通過利用如下所述的方法進行測定：由和過硫酸鉀(potassiumpersulfate)的反應生成的深的青綠色的abts自由基通過樣品的抗氧化物質(zhì)得以去除，從而使得自由基特有的顏色青綠色得以脫色。使得2.6mm過硫酸鉀混合于7.4mmabts溶液后，使得其在暗室中反應約24小時。用磷酸鹽緩沖鹽水(phosphatebufferedsaline)進行稀釋，以便使其在732nm中的吸光度為0.700±0.030，之后和100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm及1,000ppm濃度的eps混合，使其在暗處反應10分鐘。接下來，為了掌握剩余的abts的量，測定732nm中的吸光度。之后，表4及圖2表示出將根據(jù)本實施例的樣品的吸光度與未放入abts的對照組的吸光度進行比較的自由基清除率(％)。所述自由基清除率(％)計算為[1-(樣品的吸光度/對照組的吸光度)]x100。【表4】如表4所示，能夠確認隨著根據(jù)本發(fā)明的eps的濃度從100ppm增加至1,000ppm，樣品的吸光度減少的同時abts自由基清除活性漸漸增加。尤其，eps的濃度為1,000ppm時，表示平均37.67％的abts自由基清除率，從而表示出了具有強烈的抗氧化活性。因此，所述結(jié)果顯示根據(jù)本發(fā)明的eps具有強烈的抗氧化活性。當前第1頁12