發(fā)明背景

現(xiàn)有技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于識別在皮膚的色素過度沉著病損中抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖并刺激其分化的材料的模型。此類材料降低了色素過度沉著病損與周圍皮膚之間的顏色對比度，由此勻化膚色。

現(xiàn)有技術(shù)描述

全球消費者（尤其是女性）普遍關(guān)注的問題是膚色不勻。某些皮膚細(xì)胞——黑素細(xì)胞——負(fù)責(zé)產(chǎn)生決定皮膚顏色的色素。黑素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素，并向表皮中周圍的角質(zhì)形成細(xì)胞排放黑色素。細(xì)胞更新的自然過程使得角質(zhì)形成細(xì)胞朝向皮膚表面向上驅(qū)動。

隨著皮膚老化，其經(jīng)歷直接影響其外觀的轉(zhuǎn)變。環(huán)境因素（主要是暴露于來自太陽的紫外（uv）輻射）以及激素因素（其導(dǎo)致皮膚變薄和細(xì)胞更新速率降低）的影響可能導(dǎo)致不均勻的膚色。暴露于uv輻射（其已經(jīng)顯示引起dna損傷）還影響皮膚中黑色素的分布。uv輻射可以產(chǎn)生活性氧物類（ros），其通過活化黑素細(xì)胞中的酪氨酸酶和其它酶來刺激黑色素產(chǎn)生。此外，隨著細(xì)胞更新的放緩，角質(zhì)形成細(xì)胞和黑素細(xì)胞更長時間地保持接觸。由于這種增長的接觸時間，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移至角質(zhì)形成細(xì)胞的黑色素的量增加。由于表皮損失其厚度，這些黑素細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞（含有增加量的深色色素）更接近于皮膚表面并因此更為明顯。

日光性斑痣（solarlentigines）或老年斑是扁平、褐色的良性皮膚病損，通常發(fā)生在老化的皮膚中，特別是在手、臉和前臂的上表面上。這些病損的外觀與累積性和間歇性的uv暴露相關(guān)，并被認(rèn)為是皮膚光損傷的臨床標(biāo)志。日光性斑痣還與暴露于污染空氣中的顆粒物水平相關(guān)。這些病損在白種人群和亞洲人群中很常見，但是似乎在亞洲人的皮膚中更早發(fā)生且更為顯著。

組織學(xué)研究已表明，病損皮膚的特征在于表皮的基底層（即表皮的最下層，與真皮相鄰，含有黑素細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞）的色素沉著過度、增加量的黑素細(xì)胞、以及在表面上突入表皮區(qū)域，與相鄰的表皮向下突起互鎖的真皮乳頭的伸長（mehregan,a.h.,lentigosenilisanditsevolutions.investdermatol.1975;65(5):429-433；montagna,w.等人.areinvestigationofsolarlentigines.archdermatol1980;116:1151-1154）。已經(jīng)提出，這些復(fù)雜的結(jié)構(gòu)修飾可能是由于提高的表皮細(xì)胞增殖率與真皮-表皮接合處的擾動（noblesse,e.,等人.ultrastructureinsenilelentigo.skinpharmaco.physiol.2006;19:95-100）。還已經(jīng)指出，釋放角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子和白介素-1α導(dǎo)致日光性斑痣的色素沉著過度（chen,n.等人.theroleofkeratinocytegrowthfactorinmelanogenesis:apossiblemechanismfortheinitiationofsolarlentigines.exp.dermatol.19(10),865-872,2010）。著色斑（lentigo）中的基因表達(dá)分析也表明與微炎癥反應(yīng)相關(guān)的基因上調(diào)（goyarts,e.等人.morphologicalchangesassociatedwithaging:agespotsandthemicroinflammatorymodelofskinaging.ann.n.yacad.sci.1119:32-39,2007）。這與作為炎性反應(yīng)的一部分在著色斑中觀察到的角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增殖一致。

本發(fā)明人對白種人女性的老年斑的臨床研究顯示了與相鄰皮膚相比與這些斑點相關(guān)的更高的表皮細(xì)胞增殖率。反射式共聚焦顯微鏡法（rcm）顯示了真皮乳頭的深度結(jié)構(gòu)變形，因為高折光基底細(xì)胞的對準(zhǔn)圖形（alignmentpattern）由圓形（與非病損皮膚相關(guān)）向不規(guī)則的非圓形形狀（典型的日光性斑痣）推移。此外，觀察到真皮乳頭數(shù)量的增加。在經(jīng)歷五年時期進(jìn)行的研究中還顯示，隨時間的推移，日光性斑痣變得更深且增大，并且真皮乳頭變得更加變形（pollefliet,c.等人.morphologicalcharacterizationofsolarlentiginesbyinvivoreflectanceconfocalmicroscopy:alongitudinalapproach.intjcosmetsci.apr:35(2):149-55,2013）。

不均勻的色素沉著是許多人（更特別是女性）關(guān)注的問題。具體而言，許多人認(rèn)為老年斑在視覺上不美觀。膚色的不均勻，尤其是皮膚中色素沉著過度區(qū)域或深色（老年）斑的外觀，已經(jīng)導(dǎo)致市場上出現(xiàn)許多皮膚美白（lightening）劑。粉底和遮瑕膏常用于覆蓋或掩飾膚色差異。此外，影響黑素生成級聯(lián)反應(yīng)的化妝品治療，特別是抑制酶（酪氨酸酶）的那些，已經(jīng)顯示出降低了日光性斑痣中存在的黑色素的量，導(dǎo)致淡化的色素斑。此類試劑包括但不限于氫醌（其據(jù)說對黑素細(xì)胞具有細(xì)胞毒性）及其衍生物，包括熊果苷；酪氨酸酶抑制劑，如維生素c（抗壞血酸）及其衍生物；曲酸；多酚；苯甲醛和苯甲酸鹽衍生物；以及類視黃醇，其是維生素a的衍生物。

盡管氫醌總體上是安全的，但其潛在的副作用，包括紅斑、皮膚刺激、接觸性皮炎以及周圍皮膚的色素沉著不足，引起了人們尋找其它更安全的皮膚美白劑的興趣。

本發(fā)明人目前的發(fā)現(xiàn)是，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖并刺激它們的分化的材料令人驚訝和預(yù)料不到地改善了老年斑的外觀，并使皮膚看起來色調(diào)更均勻。更令人驚訝的是，這些材料并非經(jīng)典的皮膚美白（whitening）活性物（即已知影響黑素生成級聯(lián)反應(yīng)的那些活性物）。

發(fā)明概述

本發(fā)明提供了識別促進(jìn)膚色均勻的新型美白劑的模型。含有這些新型美白劑的制劑與經(jīng)典的美白制劑一樣好地起作用以降低老年斑與老年斑周圍的皮膚之間的顏色對比度，而不具有傳統(tǒng)美白活性物可能導(dǎo)致的潛在副作用。

根據(jù)本發(fā)明，提供了識別具有降低色素沉著過度的皮膚病損與色素沉著過度的皮膚病損周圍的皮膚之間的顏色對比度而不直接影響黑素細(xì)胞或黑素生成的功效的材料的方法，所述方法包括：

（a）向色素沉著過度的皮膚病損施加含有待測試材料的組合物；和

（b）在一段時間間隔后，例如在至少大約一個月，如兩個、三個或四個月之后，觀察該組合物是否在皮膚的色素沉著過度病損中在表皮的基底層中已實現(xiàn)以下至少一項：抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖、刺激角質(zhì)形成細(xì)胞的分化、以及改善真皮乳頭的壓縮變形。

優(yōu)選地，使用反射式共聚焦顯微鏡法（rcm）來評估測試制劑用于改善抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖、刺激角質(zhì)形成細(xì)胞的分化、以及改善真皮乳頭的壓縮變形中的至少一種的功效。

還提供了用于美白皮膚的方法，包括向需要所述美白的皮膚施加局部組合物，所述局部組合物包含至少一種活性物，所述活性物在皮膚的色素沉著過度病損中在表皮的基底層中實現(xiàn)以下至少一項：抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖、刺激角質(zhì)形成細(xì)胞的分化、以及改善真皮乳頭的壓縮變形，其中該活性物能夠相對于色素沉著過度病損周圍的皮膚美白色素沉著過度病損中的皮膚，而不直接影響黑素細(xì)胞或黑素生成。在一些實施方案中，該局部組合物進(jìn)一步包含直接影響黑素細(xì)胞或黑素生成的皮膚美白劑。

本發(fā)明還涉及用于降低色素沉著過度的皮膚病損與色素沉著過度病損周圍的皮膚之間的顏色對比度的經(jīng)改善的局部化妝品組合物，所述組合物為此在化妝品可接受的媒介物中包含至少一種第一活性物，其直接影響黑素細(xì)胞或黑素生成，其中所述改善包括將第二活性物包含在所述組合物中，所述第二活性物用于在皮膚的色素沉著過度病損中在表皮的基底層中實現(xiàn)以下至少一項：抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖、刺激角質(zhì)形成細(xì)胞的分化、以及減小真皮乳頭的壓縮變形，而不直接影響黑素細(xì)胞或黑素生成。

本發(fā)明進(jìn)一步涉及降低皮膚的色素沉著過度病損與色素沉著過度病損周圍的皮膚之間的顏色對比度的方案，包括：

（a）向需要這樣的顏色對比度降低的皮膚施加第一化妝品組合物，所述第一化妝品組合物為此在化妝品可接受的媒介物中包含第一皮膚美白活性物，其用于在皮膚的色素沉著過度病損中在表皮的基底層中抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖、刺激角質(zhì)形成細(xì)胞的分化、以及改善真皮乳頭的壓縮變形中的至少一項，而不直接影響黑素細(xì)胞或黑素生成；和

（b）向需要這樣的顏色對比度降低的皮膚施加第二化妝品組合物，所述第二化妝品組合物為此在化妝品可接受的媒介物中包含直接影響黑素細(xì)胞或黑素生成的第二皮膚美白活性物；其中（a）和（b）可以以任何順序發(fā)生。

附圖概述

圖1a是表示在基線處和在使用含有phytofix但不含傳統(tǒng)美白活性物的分化刺激制劑的四個月治療期后色素沉著過度病損中真皮乳頭環(huán)的圓度指數(shù)的柱狀圖。

圖1b是表示在基線處和在使用不含phytofix或傳統(tǒng)美白活性物的制劑的四個月治療期后色素沉著過度病損中真皮乳頭環(huán)的圓度指數(shù)的柱狀圖。

圖1c是顯示圖1a和圖1b中所示的圓度指數(shù)差異的柱狀圖。

圖2a是表明使用含有phytofix的分化刺激制劑治療過的色素沉著過度病損中真皮乳頭數(shù)量的柱狀圖。

圖2b是顯示使用不含phytofix或傳統(tǒng)美白活性物的制劑治療過的色素沉著過度病損中真皮乳頭數(shù)量的柱狀圖。

圖2c是顯示在圖2a和圖2b中所示在真皮乳頭數(shù)量方面觀察到的差異的柱狀圖。

圖3是表示在皮膚治療后1、2、3和4個月之后日光性著色斑的皮膚與周圍皮膚之間的顏色對比度數(shù)據(jù)的圖。

圖4a是使用本發(fā)明的分化刺激制劑治療過的日光性斑痣的一組皮膚鏡照片。

圖4b是使用本發(fā)明的分化刺激制劑后接含有常規(guī)美白活性物的制劑治療過的日光性斑痣的一組皮膚鏡照片。

圖5是顯示與使用分化刺激制劑的媒介物/基料（base）治療相比，對使用本發(fā)明的分化刺激制劑或使用分化刺激制劑后接含有常規(guī)美白活性物的制劑治療過的日光性斑痣中乳頭環(huán)的圓度指數(shù)的影響的一組柱狀圖。

圖6是在真皮-表皮界面處記錄的一組日光性斑痣的皮膚鏡照片和日光性斑痣的反射式共聚焦顯微鏡法（rcm）圖像，表示用本發(fā)明的分化刺激制劑治療后在圓度指數(shù)方面的改善。

圖7是表示與使用分化刺激制劑的媒介物/基料治療相比，在使用本發(fā)明的分化刺激制劑或使用分化刺激制劑后接含有常規(guī)美白活性物的制劑治療過的日光性斑痣中存在的真皮乳頭數(shù)量的一組柱狀圖。

圖8是在真皮-表皮界面處記錄的一組日光性斑痣的皮膚鏡照片和日光性斑痣的rcm圖像，表示用本發(fā)明的分化刺激制劑治療后在真皮乳頭環(huán)數(shù)量方面的改善。

圖9a是顯示與使用分化刺激制劑的媒介物/基料治療相比，對使用本發(fā)明的分化刺激制劑或使用分化刺激制劑后接含有常規(guī)美白活性物的制劑治療過的日光性斑痣的表皮厚度的影響的一組柱狀圖。

圖9b是顯示與使用分化刺激制劑的媒介物/基料治療相比，對使用本發(fā)明的分化刺激制劑或使用分化刺激制劑后接含有常規(guī)美白活性物的制劑治療過的日光性斑痣的角質(zhì)層厚度的影響的一組柱狀圖。

圖10是顯示表皮細(xì)胞增殖的一組柱狀圖，所述表皮細(xì)胞增殖通過與使用分化刺激制劑的媒介物/基料治療相比，使用本發(fā)明的分化刺激制劑或使用分化刺激制劑后接含有常規(guī)美白活性物的制劑治療過的日光性斑痣的自發(fā)熒光測得。

本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的詳述

通常在光老化皮膚中觀察到日光性著色斑。其特征在于在受到長期照射的皮膚中出現(xiàn)日光性斑痣或色素沉著過度的老年斑或病損。這些斑點是良性的，通常出現(xiàn)在50歲后的個體的皮膚中。由顯微鏡研究可知，與相鄰的正常皮膚相比，病損皮膚存在顯著改變，包括具有黑色素積累的色素沉著過度的基底層以及黑色素過度產(chǎn)生的排出方面的減少、表皮網(wǎng)狀脊（epidermisreteridges）的伸長、以及與角質(zhì)形成細(xì)胞基底微絨毛的增加相關(guān)的表皮-真皮接合處的混亂和擾亂（降低的屏障質(zhì)量）。

本發(fā)明人以前的研究表明，這些病損表現(xiàn)出增加的經(jīng)表皮失水量（transepidermalwaterloss,tewl）和降低的半胱天冬酶-14活性，這支持了其他人的意見：老年斑的特征在于受損的屏障功能。本發(fā)明人（使用rcm）進(jìn)行的研究證實了日光性斑痣中真皮乳頭的深度結(jié)構(gòu)變形，并引導(dǎo)他們考慮該變形是否可逆。如下文所討論的那樣研究了各種局部化妝品制劑改善或逆轉(zhuǎn)該變形的能力。

實施例

1.化妝品原料對日光性斑痣形態(tài)的影響

四十一位志愿者參加了一項為期四個月的臨床研究。僅有在她們的手上具有清晰可見的老年斑的組員才可參與。組員的平均年齡為61歲，最小和最大年齡分別為47歲和74歲。所有志愿者均為白種人，并表現(xiàn)出fitzpatrickii型或iii型皮膚。測試區(qū)域是在雙手各自的背側(cè)上的日光性著色斑?；加腥魏晤愋偷钠つw病或?qū)σ掖己?或化妝品的超敏反應(yīng)或過敏癥的組員不參與該研究。在進(jìn)入該研究之前，從各志愿者處征得書面知情同意書。

phytofix——一種衍生自向日葵、大麥和黃瓜提取物的含有鞘脂類、甘油三酯類和甾醇類的活性物——據(jù)稱模仿皮膚膜的結(jié)構(gòu)，并因其皮膚屏障修復(fù)特性而廣泛使用。對不含傳統(tǒng)美白活性物的多種制劑評估了它們的老年斑淡化功效。在下表1中顯示了含有phytofix的制劑1-3和不含phytofix的制劑4和5。

對12名組員（一塊老年斑/組員，總計12塊老年斑）測試制劑1。由13名組員（一塊老年斑/組員，總計13塊老年斑）施用制劑2，由16名組員（兩塊老年斑/組員，總計32塊老年斑）使用配方3，對14名組員（一塊老年斑/組員，總計14塊老年斑）測試制劑4，由10名組員（一塊老年斑/組員，總計10塊老年斑）使用制劑5。各組員自由地在她的手的整個背側(cè)表面上施加制劑，每天兩次（早晚），持續(xù)4個月。組員被指示在該臨床研究期間不得在她們的手上使用任何其它化妝品。每個月對研究者選擇的在每只手上的一塊老年斑進(jìn)行評估。

如下制備配方1：

在該批次開始時通過在容器中將3%丁二醇加熱至70℃，加入1%carbowax并在2000rpm下混合來制備預(yù)混物b（序列10）

在一個單獨的輔助釜（supportkettle）中：

序列1：向輔助釜中添加10%透明質(zhì)酸并在8rpm下側(cè)掃（sidesweep）。

序列2：向輔助釜中添加0.5%tween20。

序列3：向輔助釜中添加23%gransiltmg-5并在2500rpm下混合，

向輔助釜中添加10%gransilids，

向輔助釜中添加5%dm-fluid，

向輔助釜中添加2%permethyl，

向輔助釜中添加0.5%phytofix，并

將溫度調(diào)節(jié)至25℃。

序列4：向輔助釜中添加1%kf-6017，并混合直到均勻和平滑。

序列5：向主釜（mainkettle）中添加38%去離子水，

在50°下加熱，

在531rpm下混合，

在5rpm下側(cè)掃，

向主釜中添加0.05%edeta，

向主釜中添加0.1%核糖核酸鈉，

將溫度調(diào)節(jié)至25℃。

序列6：向主釜中添加0.6%aristoflex（50-3214）。

通過向容器中引入3%丁二醇，在70℃下加熱，隨后添加0.3%barguardcp來制備預(yù)混物a（序列9）。

序列7：向主釜中添加0.2%phenoxetol，并由輔助釜引入批料（batch）。

序列8：向主釜中添加0.2%vitamine。

序列9：向主釜中添加預(yù)混物a。

序列10：向主釜中添加預(yù)混物b。

序列11：向主釜中添加1.5%simulgel600。

序列12：向主釜中添加0.026%fd&cyellowno5，

向主釜中添加0.009%fd&cyellowno6，并混合直到均勻。

如下制備配方2：

通過向容器中添加2.5%tween40，在3000rpm下混合，添加0.5%phytofix，加熱至80℃并隨后關(guān)閉加熱來制備預(yù)混物b（序列3）。

通過向單獨的容器中添加5%去離子水，在2500rpm下混合，并添加0.1%核糖核酸來制備預(yù)混物c（序列5）。

通過向單獨的容器中添加2%hydrolite，在2000rpm下混合，將該容器加熱至40℃并添加0.7%bronidox來制備預(yù)混物d（序列6）。

序列1：向主釜中添加47.87%去離子水，

將溫度調(diào)節(jié)至60℃，隨后在12rpm下側(cè)掃，并在910rpm下混合，

向主釜中添加0.02%edeta，

向主釜中添加0.75%蔗糖，

向主釜中添加10%透明質(zhì)酸，

向主釜中添加0.1%germazide，

向主釜中添加0.5%山梨糖醇，

向主釜中添加0.75%rhodasurf，和

向主釜中添加0.05%檸檬酸，

序列2：向輔助釜中添加5%xiameter，

在1000rpm下混合，

在60℃下加熱，

向輔助釜中添加10%xiameter，

向輔助釜中添加3%dm-fluid，

向輔助釜中添加1%肉豆蔻醇，

向輔助釜中添加0.5%玉米油，

向輔助釜中添加0.75%kf-6017，和

向輔助釜中添加0.01%bht。

序列3：向主釜中添加預(yù)混物b，隨后由輔助釜添加批料。

序列4：在30℃下冷卻主釜。靜置（setting）。當(dāng)溫度達(dá)到40℃時，向主釜中添加0.1%grasnowae，

向主釜中添加2.5%catezomes，

向主釜中添加2%酵母提取物，

向主釜中添加0.5%生物轉(zhuǎn)化的白樺（bio-convertedwhitebirch），在1220rpm下混合，隨后在15rpm下側(cè)掃。

序列5：向主釜中添加預(yù)混物c。

序列6：向主釜中添加預(yù)混物d。

序列7：向主釜中添加0.2%maskent共混物。

序列8：通過向主釜中添加0.197%苛性鈉將ph調(diào)節(jié)至5。

序列9：向主釜中添加3.4%sepigel305。

如下制備配方3：

通過向容器中添加2.5%tween40，在3000rpm下混合，添加0.5%phytofix，加熱至80℃并隨后關(guān)閉加熱來制備預(yù)混物b（序列3）。

通過向單獨的容器中添加5%去離子水，在2500rpm下混合，并添加0.1%核糖核酸來制備預(yù)混物c（序列6）。

通過向單獨的容器中添加2%hydrolite，在2000rpm下混合，加熱至40℃并添加0.7%bronidox來制備預(yù)混物d（序列8）。

序列1：向主釜中添加47.87%去離子水，

將溫度調(diào)節(jié)至60℃，

在12rpm下側(cè)掃，

在910rpm下混合，

向主釜中添加0.02%edeta，

向主釜中添加0.75%蔗糖，

向主釜中添加10%透明質(zhì)酸，

向主釜中添加0.1%germazide，

向主釜中添加0.5%山梨糖醇，

向主釜中添加0.75%rhodasurf，和

向主釜中添加0.05%檸檬酸。

序列2：向輔助釜中添加5%xiameter（68-0451）；

在1000rpm下混合，

加熱至60℃，

向輔助釜中添加10%xiameter，

向輔助釜中添加3%dm-fluid，

向輔助釜中添加1%肉豆蔻醇，

向輔助釜中添加0.5%玉米油，

向輔助釜中添加0.75%kf-6017（60-0031），和

向輔助釜中添加0.01%bht（51-0669）。

序列3：向主釜中添加預(yù)混物b，并添加輔助釜的內(nèi)容物。

序列4：關(guān)閉加熱，并在30℃下冷卻主釜。靜置。當(dāng)溫度達(dá)到40℃時，向主釜中添加0.1%grasnowae，

向主釜中添加2.5%catezomes，

向主釜中添加2%酵母提取物，

向主釜中添加0.5%生物轉(zhuǎn)化的白樺，

在1220rpm下混合，隨后在15rpm下側(cè)掃。

序列5：向主釜中添加預(yù)混物c。

序列6：向主釜中添加預(yù)混物d。

序列7：向主釜中添加0.2%maskent共混物。

序列8：通過向主釜中添加0.197%苛性鈉將ph調(diào)節(jié)至5。

序列9：向主釜中添加3.4%sepigel305。

如下制備配方4：

序列1：向輔助釜中添加10%透明質(zhì)酸并在8rpm下側(cè)掃。

序列2：向輔助釜中添加0.5%tween20。

序列3：向輔助釜中添加23%gransiltmg-5，

在2500rpm下混合，

向輔助釜中添加10%gransilids，

向輔助釜中添加5%dm-fluid，

向輔助釜中添加2%permethyl，并

將溫度調(diào)節(jié)至25℃。

序列4：向輔助釜中添加1.5%kf-6017并混合直到均勻和平滑。

序列5：向主釜中添加38%去離子水，

在50℃下加熱，

在481rpm下混合，

在5rpm下側(cè)掃，

向主釜中添加0.05%edeta，和

關(guān)閉加熱。

序列6：將主釜冷卻至25℃。當(dāng)溫度達(dá)到25℃時，向主釜中添加0.6%aristoflex。

通過向容器中添加3%丁二醇并加熱至70℃，添加0.3%barguardcp，隨后添加1%carbowax30，并在2000rpm下混合來制備預(yù)混物a（序列8）。

序列7：向主釜中添加0.2%phenoxetol。向主釜中添加來自輔助釜的配料（ingredients）。

序列8：向主釜中添加預(yù)混物a。

序列9：向主釜中添加1.5%simulgel600。

序列10：向主釜中添加0.026%fd&cyellowno.5，

向主釜中添加0.009%fd&cyellowno.6，并混合直到均勻。

如下制備配方5：

序列1：向輔助釜中添加10%透明質(zhì)酸并在8rpm下側(cè)掃。

序列2：向輔助釜中添加0.5%tween20。

序列3：向輔助釜中添加23%gransiltmg-5，

在2500rpm下混合，

向輔助釜中添加10%gransilids，

向輔助釜中添加5%dm-fluid，

向輔助釜中添加2%permethyl，并將溫度調(diào)節(jié)至25℃。

序列4：向輔助釜中添加1.5%kf-6017并混合直到均勻和平滑。

序列5：向主釜中添加38%去離子水，

將主釜加熱至50℃，

在481rpm下混合，隨后在5rpm下側(cè)掃，

向主釜中添加0.05%edeta，并關(guān)閉加熱。

序列6：將主釜冷卻至25℃，當(dāng)溫度達(dá)到25℃時，向主釜中添加0.6%aristoflex。

通過向容器中添加3%丁二醇并在70℃下加熱，隨后添加0.3%barguardcp，添加1%carbowax30，并在2000rpm下混合來制備預(yù)混物a（序列8）。

序列7：向主釜中添加0.2%phenoxetol；隨后向主釜中添加輔助釜的內(nèi)容物。

序列8：向主釜中添加預(yù)混物a。

序列9：向主釜中添加1.5%simulgel600。

序列10：向主釜中添加0.026%fd&cyellowno.5，

向主釜中添加0.009%fd&cyellowno.6，并混合直到均勻。

在本研究中，在治療前和隨后在治療4個月后通過使用vivascope（lucid1500）的反射式共聚焦顯微鏡法（rcm）來評估化妝品原料對日光性斑痣形態(tài)的影響。rcm是用于皮膚“體內(nèi)”檢查的非侵入性技術(shù)。將vivascope放置在手的背側(cè)。超聲凝膠（折射率1.36）用作物鏡與皮膚之間的浸沒介質(zhì)（immersionmedium）。rcm獲取500×500微米視野的水平組織圖像，并具有自動步進(jìn)器，在水平面（xy-軸）上的相同點處獲得從角膜層（corneallayer）至淺表真皮（z-軸疊層）間隔3微米的依次更深的單獨圖像。由每個老年斑獲得從角膜層至淺表真皮的皮膚的六個光學(xué)切面。

在共聚焦顯微鏡中，來自二極管激光器的近紅外光聚焦在微觀皮膚靶上。當(dāng)所述光通過具有不同折射率的細(xì)胞結(jié)構(gòu)之間時，其被自然反射，這種反射光隨后被捕捉并通過計算機(jī)軟件重組成二維灰度圖像。顯微鏡的聚焦（也就是說，調(diào)節(jié)z-軸上的焦點）能夠獲得皮膚中不同層次的圖像。檢測需要存在由黑色素、血紅蛋白和細(xì)胞器提供的內(nèi)在微觀結(jié)構(gòu)特異性對比度。黑色素是在色素沉著的皮膚中最好的內(nèi)源性造影劑，因其高折射率而能夠檢測含有黑色素的細(xì)胞。這種類型的市售顯微鏡系統(tǒng)可以生成具有足以用于組織學(xué)分析的細(xì)節(jié)的圖像（calzavara-pintonp.,longoc.,venturinim.,salar.,pellacanig.photochempholobiol.2008nov-dec;84(6):1421-30）。vivascope1500系統(tǒng)是一種反射式共聚焦顯微鏡，其具有穿過活體組織逐層實時使細(xì)胞成像的能力。這些圖像可用于測量皮膚及其不同層的厚度和真皮乳頭環(huán)的形狀。vivascope1500使用在小于20mw的功率下運行的830納米的近紅外激光器，并裝備有數(shù)值孔徑0.9的30x物鏡。

由rcm圖像計算高折光真皮乳頭的圓度指數(shù)和數(shù)量（每平方毫米）。正圓的圓度指數(shù)等于100；因此，更低的指數(shù)對應(yīng)于距圓形更顯著的偏離。由于與皮膚的非病損區(qū)域相比，提高數(shù)量的真皮乳頭環(huán)也與病損的變形形態(tài)相關(guān)，環(huán)數(shù)量的降低被認(rèn)為是形態(tài)的改善。使用配對的student’st測試評估時間依賴性效應(yīng)。對于未配對樣品使用student’st測試評估治療之間的差異。結(jié)果呈現(xiàn)在圖1a、b、c；和圖2a、b、c中。

圖1a表示在基線處和在使用含有或不含phytofix的制劑的四個月治療期后的圓度指數(shù)，并且各制劑不含傳統(tǒng)的美白活性物。使用各自含有0.5%phytofix的制劑1、2和3的治療顯示出病損（老年斑）的真皮乳頭的圓度指數(shù)（由72.33至73.69）的統(tǒng)計學(xué)顯著增加（p<10^-4），表明色素沉著過度斑點的基底膜的變形形態(tài)的改善（即減少）。發(fā)現(xiàn)非病損皮膚的真皮乳頭的圓度指數(shù)為大約80（未顯示）。如圖1b中所示，使用不含phytofix的制劑4和5的四個月治療顯示對圓度指數(shù)（其范圍為75.24至74.71）沒有影響。

對于使用或不使用phytofix的治療計算治療前后觀察到的圓度指數(shù)的差異（圖1c）。含有phytofix的制劑顯示出1.4的圓度指數(shù)的提高，表明變形形態(tài)的改善，而對于不含phytofix的制劑，則沒有改善（即0.5的降低）。兩組制劑之間的差異是統(tǒng)計上顯著的，表明phytofix有助于觀察到的效果。

本發(fā)明人此前已經(jīng)觀察到，隨著時間的推移（沒有治療），老年斑中的平均圓度指數(shù)在5年內(nèi)降低了1.7（pollefliet,c等人.morphologicalcharacterizationofsolarlentiginesbyinvivoreflectanceconfocalmicroscopy:alongitudinalapproach.intjcosmetsci.apr:35(2):149-55,2013）。

如圖2a中所示，用含有phytofix的制劑1、2和3治療過的色素沉著過度病損中真皮乳頭的數(shù)量從160.7降低至151.7。如圖2b中所示（其中真皮乳頭數(shù)量從138.7提高至153.3），對于用制劑4和5（其不含phytofix）治療過的病損沒有觀察到這一現(xiàn)象。

還計算了治療前后的真皮乳頭數(shù)量的差異。這種差異，如圖2c中所示，對于含有phytofix的制劑是負(fù)的（-9.0），表明乳頭環(huán)數(shù)量的降低。用不含phytofix的制劑治療病損顯示出相反的趨勢（+14.6），治療之間的差異達(dá)到了統(tǒng)計學(xué)顯著。

發(fā)明人此前已經(jīng)觀察到，隨著時間的推移（沒有治療），老年斑中真皮乳頭的平均數(shù)量在5年內(nèi)傾向于提高18.7（pollefliet,c.等人.morphologicalcharacterizationofsolarlentiginesbyinvivoreflectanceconfocalmicroscopy:alongitudinalapproach.intjcosmetsci.apr:35(2):149-55,2013）。

發(fā)明人此前的研究表明，在制劑中以大約0.001重量%至大約2重量%的范圍使用的phytofix在改善色素沉著過度病損中基底膜的形態(tài)方面表現(xiàn)出功效（結(jié)果未顯示）。

要理解的是，對色素沉著過度病損的基底膜形態(tài)表現(xiàn)出積極效果的各制劑除phytofix之外還含有核糖核酸鈉。但是，由于使用含有核糖核酸鈉但不含phytofix的制劑沒有觀察到基底膜形態(tài)的改善，本發(fā)明人得出結(jié)論，對形態(tài)的積極效果并非由核糖核酸鈉導(dǎo)致（結(jié)果未顯示）。

發(fā)明人還觀察到，在一些情況下，含有經(jīng)典美白活性物，例如up302（即二甲氧基甲苯基丙基間苯二酚，衍生自dianellaensifolia植物）或糖蜜提取物并結(jié)合phytofix的制劑導(dǎo)致對日光性斑痣形態(tài)的積極效果（通過含有phytofix但不含經(jīng)典美白活性物的制劑來展現(xiàn)）消失（結(jié)果未顯示）。另一方面，采用含有phytofix與已知美白活性物（包括酵母提取物xp、赤糖糊糖蜜、phytoclarii、as-g（抗壞血酸葡糖苷）粉末和雜色栓菌（trametesversicolor））的組合的某些制劑，或采用含有phytofix與已知美白活性物（包括黑桑（桑樹）根提取物、黃芩提取物和歐洲葡萄（葡萄）提取物）的組合的制劑的治療表現(xiàn)出改善的基底膜的形態(tài)（結(jié)果未顯示）。但是，與采用含有phytofix但不含已知美白活性物的制劑的用途相比，采用除phytofix之外還含有這些已知的美白活性物的制劑的治療不會導(dǎo)致在形態(tài)方面的任何更大的改善。

數(shù)據(jù)表明，通常，含有phytofix的局部制劑1、2和3能夠改善日光性斑痣中基底膜的形態(tài)，而不含phytofix的制劑4和5做不到這一點。此外，在不存在傳統(tǒng)美白活性物的情況下使用含有材料phytofix的制劑的皮膚治療對老年斑的皮膚中變形的基底膜具有積極的效果，并傾向于使這種變形正?；?。當(dāng)用不含phytofix的制劑治療色素沉著過度病損時沒有觀察到這一效果。此外，向含有phytofix的制劑中添加一些傳統(tǒng)美白活性物對phytofix在老年斑的基底膜形態(tài)方面實現(xiàn)積極變化的能力沒有明顯的影響，而在含有phytofix的制劑中其它傳統(tǒng)美白活性物的組合看起來中和了phytofix對形態(tài)的積極效果。仍然需要研究這種不相容性以避免將可能不利地影響phytofix改善色素沉著過度病損的基底膜形態(tài)的功效的成分混合到制劑中。

2.分化刺激活性物對膚色和日光性斑痣中真皮乳頭形態(tài)的影響

在本研究中，評估了各種制劑（顯示在下表2中）在改善不均勻膚色和/或日光性斑痣中真皮乳頭形態(tài)方面的能力。用（1）含有下列活性物的分化刺激制劑：水楊酸（抗增殖功能）、白藜蘆醇（sirt-1活化功能）、mpc（遷移功能）、香紫蘇內(nèi)酯（sclareolide）（即快樂鼠尾草（clarysage）發(fā)酵提取物，在香紫蘇內(nèi)酯中滴定——熟化功能）和phytofix（皮膚屏障恢復(fù)功能），或（2）分化刺激制劑后接含有下列已知美白活性物的美白配方：酵母提取物xp、雜色栓菌提取物（trametesextract）、as-g粉末、phytoclarii；nivitolup-302和viapurelicorice，或（3）對照制劑（即水溶性活性物的基料或媒介物）來治療三個組員的組各自的日光性斑痣。

如下制備配方6：

序列1：向輔助釜中添加10%透明質(zhì)酸，并在8rpm下側(cè)掃。

序列2：向輔助釜中添加0.5%tween20。

序列3：向輔助釜中添加23%gransiltmg-5，并在2500rpm下混合，

向輔助釜中添加10%gransilids，

向輔助釜中添加5%dm-fluid，

向輔助釜中添加2%permethyl，并將溫度調(diào)節(jié)至25℃。

序列4：向輔助釜中添加1.5%kf-6017，并混合直到均勻和平滑。

序列5：向主釜中添加38.35%去離子水，并在50℃的設(shè)定（setting）下加熱主釜，

在481rpm下混合，隨后在5rpm下側(cè)掃，

向主釜中添加0.05%edeta，并隨后關(guān)閉加熱。

序列6：將主釜冷卻至25℃，向主釜中添加0.6%aristoflex，并隨后添加輔助釜的內(nèi)容物。

通過向容器中添加3%丁二醇，加熱至70℃，添加0.2%phenoxetol，隨后添加0.3%barguardcp，接著添加1%carbowax30，并在2000rpm下混合來制備預(yù)混物a（序列7）。

序列7：向主釜中添加預(yù)混物a。

序列8：向主釜中添加1.5%simulgel600并混合直到均勻。

如下制備配方7：

序列1：向輔助釜中添加10%透明質(zhì)酸，并在8rpm下側(cè)掃。

序列2：向輔助釜中添加0.5%tween20。

序列3：向輔助釜中添加23%gransiltmg-5，并在2500rpm下混合，

向輔助釜中添加10%gransilids，

向輔助釜中添加5%dm-fluid，

向輔助釜中添加2%permethyl，并將溫度調(diào)節(jié)至25℃。

序列4：向輔助釜中添加1.5%kf-6017，并混合直到均勻和平滑。

序列5：向主釜中添加35.25%去離子水，

加熱至50℃，

在481rpm下混合，隨后在5rpm下側(cè)掃，

向主釜中添加0.05%edeta，

向主釜中添加0.5%mpc，

向主釜中添加1%phytofix，并隨后關(guān)閉加熱。

序列6：將主釜冷卻至25℃；隨后向主釜中添加0.6%aristoflex；并隨后向主釜中添加輔助釜的內(nèi)容物。

通過向容器中添加3%丁二醇，加熱至70℃，隨后一次一樣地加入下列成分：0.2%phenoxetol、0.3%barguardcp、1%carbowax30、0.25%水楊酸、0.05%clarysage和0.1%白藜蘆醇，并在2000rpm下混合來制備預(yù)混物a（序列7）。

序列7：向主釜中添加預(yù)混物a。

通過在容器中組合1%去離子水和0.2%trisaminoultra來制備預(yù)混物b（序列8）。

序列8：向主釜中添加預(yù)混物b。

序列9：向主釜中添加1.5%simulgel600并混合直到均勻。

如下制備配方8：

通過向容器中引入3%丁二醇并在70℃下加熱，接著在150rpm下混合，添加0.3%barguardcp，隨后添加0.1%四氫姜黃素類化合物來制備預(yù)混物b（序列11）。

通過向容器中引入3%丁二醇，添加1%carobowax，加熱至70℃，在2000rpm下混合，添加0.18%nivitolup-302，隨后添加0.1%viapurelicorice，并隨后添加0.03%viapurecitrus來制備預(yù)混物c（序列12）。

通過向容器中引入4%去離子水，在150rpm下混合，添加1.8%as-g粉末并隨后添加0.645%trisaminoultra來制備預(yù)混物d（序列13）。

序列1：向輔助釜中添加10%透明質(zhì)酸并在15rpm下側(cè)掃。

序列2：向輔助釜中添加0.5%tween20。

序列3：向輔助釜中添加23%gransiltmg-5并在2500rpm下混合。

向輔助釜中添加10%gransilids。

向輔助釜中添加5%dm-fluid。

向輔助釜中添加2%permethyl。

將溫度調(diào)節(jié)至25℃。

序列4：向輔助釜中添加1.5%kf-6017并混合直到均勻和平滑。

序列5：向主釜中添加17.46%去離子水（53-0061），

加熱至30℃。

當(dāng)溫度達(dá)到30℃時，在530rpm下混合，隨后在12rpm下側(cè)掃，

向主釜中添加0.2%咖啡因，

向主釜中添加0.05%edeta，

向主釜中添加0.1%核糖核酸鈉，

關(guān)閉加熱，并冷卻至25℃。

序列6：當(dāng)主釜溫度達(dá)到25℃時，向主釜中添加5%酵母提取物xp，

向主釜中添加2%酵母提取物nag，

向主釜中添加0.5%ricedefensecomplex，

向主釜中添加1%phytoclar，和

向主釜中添加0.5%生物轉(zhuǎn)化的白樺。

序列7：向主釜中添加2%雜色栓菌提取物，在1800rpm下混合直到均勻，隨后在10rpm下側(cè)掃。

序列8：向主釜中添加0.6%aristoflex。

序列9：向主釜中添加0.2%phenoxetol，隨后向主釜中添加輔助釜的內(nèi)容物。

序列10：向主釜中添加0.2%vitamine。

序列11：向主釜中添加預(yù)混物b。

序列12：向主釜中添加預(yù)混物c。

序列13：向主釜中添加預(yù)混物d，在830rpm下混合直到均勻，隨后在12rpm下側(cè)掃。

序列14：向主釜中添加2.5%catezomes。

序列15：向主釜中添加1.5%simulgel600。

序列16：向主釜中添加0.026%fd&cyellowno.5，隨后向主釜中添加0.009%fd&cyellowno.6。

四十六位志愿者參加了一項為期四個月的臨床研究。僅有在她們的手上具有清晰可見的老年斑的組員才可以參與。組員的平均年齡為62歲，最小和最大年齡分別為44歲和82歲。所有志愿者均為白種人，并表現(xiàn)出fitzpatrickii型或iii型皮膚。測試區(qū)域是在雙手各自的背側(cè)上的日光性著色斑?；加腥魏晤愋偷钠つw病或?qū)σ掖己?或化妝品的超敏反應(yīng)或過敏癥的組員不參與該研究。在進(jìn)入該研究之前，從各志愿者處征得書面知情同意書。

第一治療組包括14名組員（兩塊老年斑/組員，總計28塊老年斑）。各組員用充當(dāng)對照物的媒介物制劑（配方6）自行治療每只手上的一塊老年斑。16名組員的第二組（兩塊老年斑/組員，總計32塊老年斑）用分化刺激配方（配方7）自行治療每只手上的一塊老年斑。對于第3組，提供兩種制劑：分化刺激配方（配方7）和美白配方（配方8）。該組中的16名志愿者（兩塊老年斑/組員，總計32塊老年斑）被要求在每只手上的一塊老年斑上施加分化刺激配方，隨后在5分鐘后，在分化刺激配方的頂上施加美白配方。在所有三組中，組員每天施用（一種或多種）制劑兩次，持續(xù)4個月。各組員自行治療雙手。組員在手的整個背側(cè)表面上自由地施用配方，每天兩次，持續(xù)4個月：在早上和晚上施用。組員被指示在該臨床研究期間不得在她們的手上使用任何其它化妝品。在每只手上，由研究者選擇一塊老年斑，并且每個月對這一塊老年斑進(jìn)行評估。

在該臨床研究開始時（即治療之前）和1、2、3和4個月之后，用皮膚鏡照相機(jī)（與olympussp-510uz數(shù)碼相機(jī)連接的dermaliteproii）拍攝老年斑的皮膚鏡照片。使用dermaliteproii雙偏振皮膚鏡（dual-polarizationdermatoscope），以交叉偏振模式拍攝老年斑的照片。交叉偏振光加強(qiáng)了皮膚的更深層的色素沉著。

這些照片用于計算色素沉著過度的斑點與周圍皮膚之間的對比度。將該照片轉(zhuǎn)換成黑白圖片，由此計算灰度值。對各個斑點計算顏色對比度（定義為周圍皮膚的灰度值減去老年斑處的灰度值）。

還通過具有vivascope（lucid1500）的體內(nèi)rcm來評估色素沉著過度的斑點，以便實現(xiàn)在皮膚的天然狀態(tài)下皮膚的實時可視化。該分析集中于在基底膜處拍攝的共聚焦圖像。由這些圖像，對每平方毫米的真皮乳頭數(shù)量進(jìn)行計數(shù)，并計算超折光真皮乳頭的圓度指數(shù)。該圓度指數(shù)是形狀因子，指的是超折光基底細(xì)胞至圓形的對準(zhǔn)圖形。根據(jù)該等式，正圓的圓度指數(shù)等于100；更低的指數(shù)對應(yīng)于距圓形更顯著的偏離，并指示通常在日光性斑痣中觀察到的超折光細(xì)胞的對準(zhǔn)圖形的變形。還計算了表皮的厚度。

在1個月和4個月的治療后，使用skinskan（horiba）測量皮膚的自發(fā)熒光（即皮膚的內(nèi)源性熒光）以評估表皮細(xì)胞增殖（λex/λem=295/345納米；反射率350-700納米）。用在350納米下測得的相應(yīng)的反射率數(shù)據(jù)來校準(zhǔn)表皮細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)。使用熒光光譜法，可以檢測變化的激發(fā)和發(fā)射的效果。一些體內(nèi)熒光帶可以歸因于特定的氨基酸或蛋白質(zhì)修飾。已經(jīng)提出了歸因于色氨酸的熒光帶（λex/λem=295/345納米）作為表皮細(xì)胞增殖或細(xì)胞更新的標(biāo)志。

使用重復(fù)測量anova計算來評估時間依賴性效果。另外通過用于多次比較的posthoctuckey測試確定了在時間點之間的顯著差異。使用配對student'st測試來統(tǒng)計學(xué)評估vivascope數(shù)據(jù)。

結(jié)果圖示在圖3、4a、4b、5、6-8、9a、9b和10中。

圖3表示作為治療結(jié)果獲得的日光性著色斑與周圍皮膚之間的膚色對比度數(shù)據(jù)。與未治療的皮膚相比，采用分化刺激制劑的治療在1、2、3和4個月后分別導(dǎo)致2%（p=0.96）、6%（p=0.24）、20%（p<10^-4）和26%（p<10^-4）的對比度降低。當(dāng)分化刺激治療與美白治療結(jié)合時，在1個月治療后已經(jīng)觀察到統(tǒng)計學(xué)顯著的降低。這種組合治療在1、2、3和4個月后分別導(dǎo)致7%（p=0.02）、17%（p=0.0001）、19%（p=0.0001）和28%（p=0.0001）的對比度降低。作為使用媒介物制劑治療的結(jié)果，經(jīng)過相同的時間段沒有觀察到對比度的變化。

在圖4a中顯示了使用分化刺激配方治療過的日光性斑痣的皮膚鏡照片。在頂部的一組照片顯示了在治療后在顏色對比度方面的典型改善，底部的一組照片顯示了在當(dāng)前測試設(shè)置中發(fā)現(xiàn)的最大改善。

用分化刺激配方后接美白制劑治療過的日光性斑痣的皮膚鏡照片顯示在圖4b中。在頂部的一組照片顯示了在治療后在顏色對比度方面的典型改善，底部的一組照片顯示了在當(dāng)前測試設(shè)置中發(fā)現(xiàn)的最大改善。對于兩種治療，提供了顯示平均改善的一個實例，并提供了展現(xiàn)出最大改善的另一實例。對于組合治療，在一個月的治療后已經(jīng)達(dá)到了顯著性，因此與單獨采用分化刺激配方的治療相比，存在顏色對比度的更快降低。

使用rcm（vivascope）研究了日光性斑痣中真皮乳頭的形態(tài)（即圓度指數(shù)和真皮乳頭環(huán)的數(shù)量）。在圖5中給出了圓度指數(shù)的結(jié)果。在使用分化刺激制劑的四個月治療后，觀察到圓度指數(shù)的統(tǒng)計學(xué)顯著提高，這指示了基底膜的改善。當(dāng)正圓的圓度指數(shù)等于100時，更低的指數(shù)對應(yīng)于距圓形更顯著的偏離。發(fā)現(xiàn)非病損皮膚的真皮乳頭的圓度指數(shù)為大約92（數(shù)據(jù)未顯示）。

對于媒介物和組合治療組，在4個月的治療后沒有觀察到真皮乳頭的圓度指數(shù)的變化。

圖6描繪了在日光性斑痣的真皮-表皮界面處記錄的rcm（vivascope）圖像的實例。這些圖像表示在用分化刺激制劑治療4個月后的平均改善和最大改善。

如圖7中所示，與治療前水平相比。在用含有分化刺激活性物的制劑治療的組中以及在用含有分化刺激活性物的制劑與美白制劑治療的組中觀察到在4個月的治療后真皮乳頭數(shù)量的統(tǒng)計學(xué)顯著降低。觀察到非病損皮膚中真皮乳頭的數(shù)量為每平方毫米大約20個乳頭（未顯示）。

如圖8中所示，在真皮-表皮界面處拍攝的rcm（vivascope）圖像表示在用分化刺激配方治療四個月后乳頭環(huán)的平均減少和最大減少。

所記錄的vivascope圖像進(jìn)一步用于表皮厚度的量化。如圖9a中所示，在用分化刺激配方治療四個月后，觀察到表皮厚度（不含角質(zhì)層）的統(tǒng)計學(xué)顯著增加。此外，如圖9b中所示，發(fā)現(xiàn)角質(zhì)層變厚。在用媒介物治療或組合治療后沒有發(fā)現(xiàn)差異。

皮膚自發(fā)熒光（在295/345納米下測得）結(jié)果顯示在圖10中。這些波長下的信號與色氨酸（一種表皮細(xì)胞增殖的標(biāo)志）相關(guān)。采用分化刺激配方的治療在4個月后導(dǎo)致表皮細(xì)胞增殖的統(tǒng)計學(xué)顯著減少。用其它治療沒有發(fā)現(xiàn)改變。

經(jīng)過四個月用分化刺激制劑的治療導(dǎo)致改善了日光性斑痣的可見外觀和形態(tài)。當(dāng)在施加分化刺激配方后5分鐘施加含有經(jīng)典美白成分的美白制劑時，在4個月的治療后注意到膚色的類似改善。然而，與單獨使用分化刺激配方相比，組合治療在改善基底膜方面稍微不那么有效。盡管真皮乳頭環(huán)的數(shù)量更少，但在圓度指數(shù)方面沒有檢測到改善。