相關(guān)申請的引證本申請要求2014年10月23日提交的美國臨時(shí)申請?zhí)?2/067,642的權(quán)益，該申請通過引用以其全部內(nèi)容(包括任何附圖)結(jié)合在此。序列表的引用本申請是連同電子格式的序列表提交的。序列表被提供為題為“nkg2a-hn_st25”的文件，創(chuàng)建于2015年10月20日，大小是27kb。將在電子格式的序列表中的信息通過引用以其全文結(jié)合在此。本發(fā)明涉及nkg2a靶向劑用于治療癌癥(特別是頭頸癌)的用途。本發(fā)明還提供了與nkg2a靶向劑一起用于治療癌癥的有利組合方案。
背景技術(shù)：
：nk細(xì)胞的活性通過一種既包括活化信號又包括抑制信號的復(fù)雜機(jī)制進(jìn)行調(diào)節(jié)。已經(jīng)鑒定了多種不同的nk特異性受體，這些受體在nk細(xì)胞介導(dǎo)的缺乏hlai類的靶細(xì)胞的識別和殺滅中起著重要的作用。自然細(xì)胞毒性受體(ncr)是指一類活化受體蛋白和表達(dá)它們的基因，這些基因在nk細(xì)胞中特異性表達(dá)。ncr的實(shí)例包括nkp30、nkp44和nkp46(參見例如蘭妮爾(lanier)(2001)自然免疫學(xué)(natimmunol)2:23-27，彭德(pende)等人(1999)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(jexpmed.)190:1505-1516，甘托尼(cantoni)等人(1999)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(jexpmed.)189:787-796，斯沃瑞(sivori)等人(1997)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(jexpmed.)186:1129-1136，裴妮思(pessino)等人(1998)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(jexpmed.)188(5):953-60；曼德勒鮑姆(mandelboim)等人(2001)自然(nature)409:1055-1060，將其全部披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)。這些受體是ig超家族的成員，并且它們通過特異性mab誘導(dǎo)的交聯(lián)導(dǎo)致強(qiáng)的nk細(xì)胞活化以及針對許多類型的靶細(xì)胞的nk細(xì)胞毒性的活化，該強(qiáng)的nk細(xì)胞活化導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ca++水平增加，觸發(fā)細(xì)胞毒性和淋巴因子釋放。cd94/nkg2a是在自然殺傷細(xì)胞(nk細(xì)胞)、自然殺傷t細(xì)胞(nkt細(xì)胞)和t細(xì)胞(α/β和γ/δ)的亞群中發(fā)現(xiàn)的抑制性受體。cd94/nkg2a限制前述淋巴細(xì)胞對表達(dá)cd94/nkg2a-配體hla-e的細(xì)胞的細(xì)胞因子釋放和細(xì)胞毒性反應(yīng)(參見例如wo99/28748)。還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)hla-e通過某些腫瘤細(xì)胞(德爾(derre)等人，免疫學(xué)雜志(jimmunol)2006；177:3100-7)和活化的內(nèi)皮細(xì)胞以可溶的形式分泌(庫佩爾(coupel)等人，血液(blood)2007；109:2806-14)。抑制cd94/nkg2a信號傳導(dǎo)的抗體可以增加淋巴細(xì)胞對hla-e陽性靶細(xì)胞的細(xì)胞因子釋放和細(xì)胞溶解活性，例如cd94/nkg2a陽性nk細(xì)胞對病毒感染細(xì)胞的應(yīng)答。因此，抑制cd94/nkg2a但不引起殺死表達(dá)cd94/nkg2a的細(xì)胞的治療性抗體(即非消耗性抗體)可以誘導(dǎo)對在癌癥患者中的腫瘤生長的控制。此外，某些淋巴瘤(例如如nk淋巴瘤)的特征在于cd94/nkg2a表達(dá)。在這些患者中，靶向并殺死表達(dá)cd94/nkg2a的細(xì)胞(即消耗性抗體)的治療性抗體能夠通過抗體依賴性細(xì)胞毒性(adcc)或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)來根除腫瘤細(xì)胞。抗nkg2a抗體也已被建議用于治療自身免疫性或炎性疾病(參見例如us20030095965、wo2006070286)。本領(lǐng)域已經(jīng)描述了針對nkg2a的各種抗體。wo2008/009545描述了人源化抗nkg2a抗體z270，而wo2009/092805描述了人源化抗nkg2a抗體z199。萬斯(vance)等人(實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(jexpmed)1999；190:1801-12)提到大鼠抗鼠nkg2抗體20d5(現(xiàn)在可經(jīng)由美國bd生物科學(xué)pharmingen公司(bdbiosciencespharmingen)，目錄號550518商購獲得)；并且美國專利申請公開20030095965描述了鼠抗體3s9，據(jù)稱其與nkg2a、nkg2c和nkg2e結(jié)合。頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(hnscc)發(fā)病率為每年約600,000例且死亡率約為50％。hnscc的主要危險(xiǎn)因素是煙草使用、酒精消耗和人乳頭狀瘤病毒(hpv)感染。盡管在其流行病學(xué)和發(fā)病機(jī)理的知識方面取得了進(jìn)展，但是許多類型的hnscc的存活率在過去四十年中幾乎沒有改善。hnscc患者的總體5年生存率僅為約50％。煙草、酒精消耗和病毒劑是hnscc發(fā)展的主要危險(xiǎn)因素。這些危險(xiǎn)因素與遺傳易感性共同導(dǎo)致在癌癥發(fā)展的多步驟過程中多種遺傳和外遺傳改變的累積，并且對hnscc的這種分子致癌作用的理解正被用于治療hnscc的靶向試劑的中。將免疫治療作為hnscc治療的想法已經(jīng)存在了幾十年，并且針對治療hnscc的嘗試涉及腫瘤特異性抗原的靶向。盡管在對各種實(shí)體癌使用這種免疫刺激治療策略方面已經(jīng)進(jìn)行了改進(jìn)，但是對于患有頭頸鱗狀細(xì)胞癌(hnscc)的患者，這些策略的使用滯后。hnscc的免疫治療方法特別復(fù)雜的是由hnscc誘導(dǎo)的深度免疫抑制，其潛在地降低免疫刺激作用的有效性。hnscc逃避抗腫瘤免疫應(yīng)答(例如hlai類的下調(diào))的機(jī)制綜述提供于戴瑞(duray)等人(2010)臨床綜述免疫(clin.dev.immunol.)文章編號701657；2010:1-15中。因此，在本領(lǐng)域中存在著對于患有頭頸癌的患者的改進(jìn)益處的需要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明尤其源自諸位發(fā)明人的如下發(fā)現(xiàn)：使用抗nkg2a抗體阻斷抑制性受體nkg2a能夠使nk細(xì)胞有效地消除頭頸癌細(xì)胞。特別地，在頭頸癌中，hla-e作為腫瘤逃避機(jī)制，即使當(dāng)正在用其他治療劑治療癌癥時(shí)，并且包括在hpv陽性患者中。本文顯示，頭頸癌細(xì)胞以引起nkg2a表達(dá)nk和/或t細(xì)胞抑制的水平表達(dá)hla-e，并且抗nkg2a抗體可逆轉(zhuǎn)這種抑制。此外，即使當(dāng)用egfr抑制劑處理頭頸癌細(xì)胞時(shí)，腫瘤細(xì)胞表達(dá)的hla-e繼續(xù)抑制nk和/或t細(xì)胞的裂解，并且可以使用抗nkg2a抗體來逆轉(zhuǎn)這種抑制。因此，在一個(gè)實(shí)施例中，提供了用于治療或預(yù)防個(gè)體中的頭頸癌的方法，該方法包括向患有頭頸癌的個(gè)體給予治療活性量的化合物，該化合物中和人類nkg2a多肽的抑制活性。在一個(gè)方面，提供了一種組合物，該組合物包括中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物，其用于治療或預(yù)防頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(hnscc)。在一個(gè)方面，中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物是能夠以二價(jià)方式結(jié)合nkg2a的抗體。在一個(gè)方面，中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物是非消耗性抗體(例如缺乏fc結(jié)構(gòu)域或具有對一種或多種fcγ受體具有最小結(jié)合或無結(jié)合的fc結(jié)構(gòu)域的抗體)。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了抑制nk和/或t細(xì)胞上的nkg2a多肽并且使這類nk和/或t細(xì)胞裂解表達(dá)hla-e的hnscc細(xì)胞的化合物，其用于在個(gè)人中治療或預(yù)防hnscc。任選地，該所述治療或預(yù)防包括向患有hnscc的個(gè)體給予抑制nkg2a多肽的化合物。在一個(gè)實(shí)施例中，癌癥是口咽腫瘤、喉腫瘤、口腔腫瘤或下咽腫瘤。在一個(gè)實(shí)施例中，hnscc是口腔scc(ocscc)。ocscc包括唇、舌的前2/3、口底、口腔粘膜、齒齦、硬腭和磨牙后三角的鱗狀細(xì)胞癌。在一個(gè)實(shí)施例中，hnscc是轉(zhuǎn)移性癌癥。在一個(gè)實(shí)施例中，個(gè)體是人乳頭狀瘤病毒(hpv)陽性的(例如，其特征在于存在人乳頭瘤病毒，對于與高癌風(fēng)險(xiǎn)或不良癌癥預(yù)后相關(guān)的hpv基因型是陽性的，對于hpv16基因型是陽性的和/或?qū)τ趐16inka表達(dá)是陽性的)。在一個(gè)實(shí)施例中，個(gè)體患有特征在于在腫瘤環(huán)境中(例如在腫瘤組織內(nèi)和/或在腫瘤鄰近組織內(nèi))存在淋巴細(xì)胞的頭頸癌。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a抗體以導(dǎo)致人類患者(體內(nèi))中人類cd94/nkg2a的抑制活性得以中和的量給予，任選地其中抗nkg2a抗體以下述劑量給予：導(dǎo)致周圍血液nk和t淋巴細(xì)胞上的nkg2a多肽飽和持續(xù)至少兩周，任選地至少四周。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a抗體以1mg/kg至10mg/kg之間(任選以約4mg/kg、任選以約10mg/kg)的劑量給予。在一個(gè)實(shí)施例中，在手術(shù)前向患有頭頸癌的個(gè)體給予中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物(例如抗體)的治療方案或療程(即作為術(shù)前治療)，以除去癌細(xì)胞。任選地，可以在用抗nkga試劑治療之前評估癌癥的hla-e狀態(tài)。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了一種方法，該方法結(jié)合了hla-e檢測步驟以鑒定患有hla-e+hnscc的患者；這些患者此后可以用中和nkg2a多肽的抑制活性的試劑進(jìn)行治療。在一個(gè)方面，提供了一種方法，該方法用于評估患有hnscc的個(gè)體是否適合用中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物進(jìn)行治療，該方法包括測定來自患有hnscc的個(gè)體的惡性細(xì)胞的hla-e多肽狀態(tài)，其中確定患者h(yuǎn)la-e多肽在惡性細(xì)胞中表達(dá)(例如，顯著地表達(dá)；以與參考水平相比增加的水平；以與來自健康個(gè)體的相關(guān)組織中的水平相比增加的水平，和/或以對應(yīng)于(至少)從抗nkg2a試劑獲益的患者的水平)表明這類個(gè)體適合用中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物進(jìn)行治療。在此的任何治療用途或hnscc治療或預(yù)防方法的一個(gè)實(shí)施例中，個(gè)體中hnscc的治療或預(yù)防包括：a)確定來自患有hnscc的個(gè)體的惡性細(xì)胞的hla-e多肽狀態(tài)，并且b)在測定患者h(yuǎn)la-e多肽由惡性細(xì)胞(例如至少在腫瘤細(xì)胞的值或比例，至少中度或強(qiáng)染色等)表達(dá)時(shí)，向該個(gè)體給予中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物。在此的任何治療用途或hnscc治療或預(yù)防方法的一個(gè)實(shí)施例中，個(gè)體中hnscc的治療或預(yù)防包括：a)確定患有hnscc的個(gè)體內(nèi)惡性細(xì)胞的hla-e多肽狀態(tài)，并且b)在測定惡性細(xì)胞以處于參考水平的水平或相比于參考水平增加的水平(例如與健康個(gè)體的參考水平相比升高，或者是不從抗nkg2a試劑獲益的個(gè)體的參考水平；至少以對應(yīng)于從抗nkg2a試劑獲益的患者的參考水平)表達(dá)hla-e多肽時(shí)，向個(gè)體給予中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物。在任何方法的一個(gè)實(shí)施例中，在步驟(a)中確定hla-e多肽狀態(tài)包括確定生物樣品中惡性細(xì)胞的hla-e多肽的表達(dá)水平，并將該水平與對應(yīng)于健康個(gè)體或不從抗nkg2a試劑獲益的個(gè)體的參考水平(例如值、hla-e陽性惡性細(xì)胞的比例、和/或染色弱或不存在等)進(jìn)行比較。生物樣品以比參考水平更高的水平表達(dá)hla-e多肽的測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。在任何方法的一個(gè)實(shí)施例中，在步驟(a)中確定hla-e多肽狀態(tài)包括確定生物樣品中惡性細(xì)胞的hla-e多肽的表達(dá)水平，并將該水平與參考水平(例如值、hla-e陽性惡性細(xì)胞的比例、和/或中度或強(qiáng)細(xì)胞表面染色等)進(jìn)行比較。生物樣品以至少處于參考水平的水平表達(dá)hla-e多肽的測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。在任何方法的一個(gè)實(shí)施例中，在步驟(a)中確定hla-e多肽狀態(tài)包括確定生物樣品中惡性細(xì)胞的hla-e多肽的表達(dá)水平，并將該水平與對應(yīng)于從抗nkg2a試劑治療獲益的個(gè)體(例如患有癌癥、頭頸癌)的參考水平(例如值、hla-e陽性惡性細(xì)胞的比例、和/或中度或強(qiáng)細(xì)胞表面染色等)進(jìn)行比較。生物樣品以至少等于參考水平的水平表達(dá)hla-e多肽的測定，該參考水平對應(yīng)于從用抗nkg2a試劑治療獲益的個(gè)體，該測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。在任何實(shí)施例的一個(gè)方面，來自個(gè)體的惡性細(xì)胞具有中等或強(qiáng)的hla-e多肽表達(dá)(例如在免疫組織化學(xué)檢測測定中的中度或強(qiáng)染色)的測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。在任何實(shí)施例的一個(gè)方面，來自個(gè)體的相當(dāng)大比例(例如至少約25％，任選地至少50％)的惡性細(xì)胞具有hla-e多肽表達(dá)(例如在免疫組織化學(xué)檢測測定中的中度或強(qiáng)染色)的測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。在任何實(shí)施例的一個(gè)方面，來自個(gè)體的相當(dāng)大比例(例如至少約25％，任選地至少50％)的惡性細(xì)胞具有hla-e多肽表達(dá)(例如在免疫組織化學(xué)檢測測定中的中度或強(qiáng)染色)，并且個(gè)體具有不良癌癥預(yù)后(例如，轉(zhuǎn)移性疾病、hpv基因型、侵襲性或晚期疾病)的測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。在任何實(shí)施例的一個(gè)方面，來自個(gè)體的惡性細(xì)胞具有高h(yuǎn)la-e表達(dá)(如通過在具有hla-e多肽表達(dá)的細(xì)胞亞型中的所有細(xì)胞中擴(kuò)散表達(dá)的強(qiáng)信號所證實(shí)的(例如在免疫組織化學(xué)檢測測定中的中度或強(qiáng)染色))的測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a試劑可以有利地用于人乳頭瘤病毒(hpv)陽性的患者中(例如其特征在于患者中存在人乳頭狀瘤病毒，對于與高癌風(fēng)險(xiǎn)或不良癌癥預(yù)后相關(guān)的hpv基因型是陽性的，對于hpv16基因型是陽性的和/或?qū)τ趐16inka表達(dá)是陽性的)。在一個(gè)實(shí)施例中，hpv感染導(dǎo)致配體的腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)增加，該配體通過在nk細(xì)胞和/或t細(xì)胞上的活化受體識別(例如nkg2d配體(例如mica或micb)的上調(diào))，以及在腫瘤細(xì)胞表面上hla-e表達(dá)增加，使得nkg2a阻斷療法在hpv陽性個(gè)體中特別有效。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了用于治療或預(yù)防hpv陽性的個(gè)體中的癌癥的方法，該方法包括向患有癌癥的hpv陽性個(gè)體給予治療活性量的化合物，該化合物中和人類nkg2a多肽的抑制活性。在一個(gè)實(shí)施例中，該癌癥是實(shí)體瘤(例如晚期實(shí)體瘤)。在一個(gè)實(shí)施例中，該癌癥是頭頸癌。任選地，在治療之前，可以用抗nkg2a試劑評價(jià)個(gè)體的hpv狀態(tài)。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了用于治療患有頭頸癌的個(gè)體的方法，該方法包括：(a)確定患有頭頸癌的個(gè)體是否是hpv陽性的；(b)如果該個(gè)體是hpv陽性，用治療活性量的化合物治療該個(gè)體(例如給予該個(gè)體)，該化合物中和人類nkg2a多肽的抑制活性。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了用于治療患有癌癥的個(gè)體的方法(例如使用化合物治療或預(yù)防個(gè)體中的癌癥，該化合物中和人類nkg2a多肽的抑制活性)，該方法包括：a)確定個(gè)體是否具有特征在于腫瘤環(huán)境(例如腫瘤組織內(nèi)和/或腫瘤鄰近組織內(nèi))中存在淋巴細(xì)胞的腫瘤；以及b)當(dāng)測定個(gè)體具有特征在于腫瘤環(huán)境中存在淋巴細(xì)胞的腫瘤時(shí)，向個(gè)體給予中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物。任選地，該腫瘤是實(shí)體瘤；任選地該腫瘤是頭頸癌。在另一個(gè)實(shí)施例中，患有頭頸癌的個(gè)體是hpv陰性的。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了治療患有頭頸癌的hpv陰性患者的方法，該方法包括向該個(gè)體給予中和nkg2a多肽的抑制活性的化合物。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a抗體作為單個(gè)試劑治療給予。在一個(gè)實(shí)施例中，在與一種或多種其他抗癌劑的組合治療中給予抗nkg2a抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了用于治療或預(yù)防個(gè)體中的癌癥的方法，該方法包括向個(gè)體給予(a)治療活性量的化合物，該化合物抑制人類nkg2a多肽和(b)治療活性量的化合物，該化合物結(jié)合和/或抑制人類egfr多肽。在一個(gè)實(shí)施例中，該癌癥是hnscc。在一個(gè)實(shí)施例中，該結(jié)合和/或抑制人類egfr的化合物是抗egfr抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a抗體以導(dǎo)致人類患者(體內(nèi))中人類cd94/nkg2a的抑制活性得以中和的有效量給予，任選地其中抗nkg2a抗體以下述劑量給予：導(dǎo)致周圍血液nk和t淋巴細(xì)胞上的nkg2a多肽飽和持續(xù)至少兩周，任選地至少四周。在一個(gè)實(shí)施例中，該抗egfr抗體以有效量給予，該有效量引起針對人類患者(體內(nèi))中表達(dá)人egfr的腫瘤細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞毒性。在一個(gè)實(shí)施例中，該抗egfr抗體以有效量給予，該有效量導(dǎo)致人類患者(體內(nèi))中人類egfr活性的中和。在一個(gè)方面，根據(jù)特定的臨床劑量方案，特別是以特定的劑量量并根據(jù)特定的給藥方案(例如劑量量和/或根據(jù)在此提供的具體給藥方案)給予該組合(或用于給予)。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了用于在個(gè)體中治療或預(yù)防癌癥的方法，該方法包括：a)確定患有癌癥的個(gè)體內(nèi)惡性細(xì)胞的hla-e多肽狀態(tài)，b)確定患有癌癥的個(gè)體內(nèi)惡性細(xì)胞的egfr多肽狀態(tài)，并且c)當(dāng)測定hla-e和egfr多肽在來自個(gè)體的惡性細(xì)胞的表面以處于參考水平的水平或相比于參考水平增加的水平表達(dá)時(shí)，向個(gè)體給予治療方案，該治療方案包括中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物以及結(jié)合和/或抑制egfr的試劑。在此的任何治療用途或hnscc治療或預(yù)防方法的一個(gè)實(shí)施例中，個(gè)體中hnscc的治療或預(yù)防包括：a)確定患有hnscc的個(gè)體內(nèi)惡性細(xì)胞的hla-e多肽狀態(tài)，b)確定患有hnscc的個(gè)體內(nèi)惡性細(xì)胞的egfr多肽狀態(tài)，并且c)當(dāng)測定hla-e和egfr多肽在來自個(gè)體的惡性細(xì)胞的表面以處于參考水平的水平或相比于參考水平增加的水平表達(dá)時(shí)，向個(gè)體給予治療方案，該治療方案包括中和人類nkg2a多肽的抑制活性的化合物以及結(jié)合和/或抑制egfr的試劑。在本文的任何方法中，可以通過直接(通過檢測多肽)或間接(例如通過檢測編碼多肽的核酸)進(jìn)行確定多肽狀態(tài)或表達(dá)(例如hla-e、nkg2a或egfr)。中和nkg2a多肽的抑制活性的化合物(抗nkg2a試劑)是增加表達(dá)nkg2a的nk細(xì)胞和/或t細(xì)胞引起hla-e表達(dá)細(xì)胞死亡的能力的化合物。任選地，中和nkg2a多肽的抑制活性的化合物是結(jié)合nkg2a多肽的多肽，任選是抗體(例如單克隆抗體)。在一個(gè)實(shí)施例中，該抗nkg2a試劑通過阻斷其配體hla-e的結(jié)合來降低nkg2a的抑制活性，即抗nkg2a試劑干擾nkg2a與hla-e的結(jié)合。分別具有seqidno:2-6中任一個(gè)的重鏈和seqidno:7的輕鏈的抗體是此類抗體的實(shí)例。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a試劑降低nkg2a的抑制活性而不阻斷其配體hla-e的結(jié)合，即抗nkg2a試劑是非競爭性拮抗劑，并且不干擾nkg2a與hla-e的結(jié)合。具有seqidno:16和17的重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體分別是此類抗體的實(shí)例。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a試劑是以比對一種或多種激活性nkg2受體顯著更高的親和力結(jié)合nkg2a的抗體。例如，在一個(gè)實(shí)施例中，該試劑是以比對nkg2c顯著更高的親和力結(jié)合nkg2a的抗體。在另外的或可替代的實(shí)施例中，該試劑是以比nkg2e顯著更高的親和力結(jié)合nkg2a的抗體。在另外的或可替代的實(shí)施例中，該試劑是以比nkg2h顯著更高的親和力結(jié)合nkg2a的抗體。分別具有seqidno:2-6中任一個(gè)的重鏈和seqidno:7的輕鏈的抗體結(jié)合nkg2a而基本上不結(jié)合nkg2c、nkg2e或nkg2h。在另外的或可替代的實(shí)施例中，該抗nkg2a試劑與具有seqidno:2-6中任一個(gè)的重鏈和seqidno:7的輕鏈的抗體，和/或具有seqidno:16和17的重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體分別競爭與cd94/nkg2a的結(jié)合。該試劑可以是例如人類或人源化抗nkg2a抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，該抗nkg2a抗體是具有seqidno:2-6中任一個(gè)的重鏈和seqidno:7的輕鏈的人源化抗體。提供了這樣的人源化抗體的框架區(qū)(fr)中的氨基酸取代的示例性互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)殘基或序列和/或位點(diǎn)，該人源化抗體具有改進(jìn)的性質(zhì)例如像更低的免疫原性、改善的抗原結(jié)合或其他功能特性、和/或改善的物理化學(xué)性質(zhì)例如更好的穩(wěn)定性。在其他的實(shí)施例中，提供了藥物組合物和試劑盒，以及使用它們的方法。將這些方面更詳細(xì)地披露于在此提供的本發(fā)明的說明書中，并且另外的方面、特征和優(yōu)點(diǎn)將從該說明書中顯而易見。附圖說明圖1a和1b顯示抗nkg2a增強(qiáng)nk細(xì)胞對hnscc細(xì)胞系的識別的能力。nkg2a-nk(左)或nkg2a+nk細(xì)胞(右)上的cd107(上)和cd137(下)facs讀數(shù)表明，在指定的靶標(biāo)hnscc細(xì)胞系的存在下和在存在或不存在抗nkg2a的情況下的飽和劑量為10μg/ml。細(xì)胞系根據(jù)hla-e表面表達(dá)水平從左到右排序。每個(gè)點(diǎn)代表來自健康志愿者的pbmc。圖1a顯示具有低或高水平的表面hla-e的對照和k562靶，并且圖1b顯示抗nkg2a可以恢復(fù)具有內(nèi)源性hla-e表達(dá)的hnscc的裂解。該作用僅在nkg2a陽性nk細(xì)胞上觀察到，并且依賴于hla-e的表達(dá)水平。圖2顯示了增強(qiáng)adcc的抗nkg2a的飽和劑量，通過nk細(xì)胞對由次優(yōu)劑量的抗egfr、西妥昔單抗(ctx)誘導(dǎo)的hnsccfadu細(xì)胞的作用。圖3a和3b顯示增加劑量的抗nkg2a和增加劑量的抗egfr(西妥昔單抗)的效果。圖3a顯示在沒有靶標(biāo)并具有k562-hla-e轉(zhuǎn)染子的對照上的cd107讀出。每個(gè)健康志愿者由不同的符號表示：正方形或圓形。交叉打開的符號對應(yīng)于其中抗nkg2a被與0.1μg/ml西妥昔單抗共孵育的10μg/mlhigg4同種型對照取代的情況。圖3b顯示了在hnscc細(xì)胞系上的cd107讀出。對于西妥昔單抗的每種濃度，抗nkg2a的每種濃度的符號(正方形或圓形)從左到右對應(yīng)于0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml。圖4顯示在不同腫瘤位置/類型的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中從1+到3+的hla-e染色。有趣的是，在來自通常認(rèn)為具有最差預(yù)后(扁桃體)的腫瘤類型的所有樣品中染色為3+。圖5顯示了不同腫瘤患者的hpv16和p16狀態(tài)的細(xì)節(jié)。圖6顯示了隨hpv16和p16inka而變化的腫瘤類型(轉(zhuǎn)移性或原發(fā)性腫瘤)。圖7顯示hpv-陽性腫瘤以強(qiáng)淋巴細(xì)胞浸潤為特征。具體實(shí)施方式定義如在說明書中使用的，“一種/一個(gè)(a/an)”可以意指一種/一個(gè)或多于一種/一個(gè)。如在權(quán)利要求中使用的，當(dāng)與詞“包括(comprising)”結(jié)合使用時(shí)，這些詞“一種/一個(gè)(a/an)”可以意指一種/一個(gè)或多于一種/一個(gè)。如在此所使用的，“另一個(gè)”可以意指至少第二個(gè)或更多個(gè)。當(dāng)使用“包括”時(shí)，這可以任選地被“基本上由......組成”或通過“由......組成”代替。nkg2a(omim161555，將其全部公開內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)是nkg2轉(zhuǎn)錄物組的成員(霍施因斯(houchins)等人(1991)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志173:1017-1020)。nkg2a由跨越25kb的7個(gè)外顯子編碼，顯示一些差異剪接。與cd94一起，nkg2a形成在nk細(xì)胞、α/βt細(xì)胞、γ/δt細(xì)胞和nkt細(xì)胞的亞群的表面上發(fā)現(xiàn)的異二聚體抑制受體cd94/nkg2a。與抑制性kir受體類似，它在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中具有itim。如本文所使用的，“nkg2a”是指nkg2a基因或編碼蛋白的任何變體、衍生物或同種型。還涵蓋的是與野生型、全長nkg2a共享一種或多種生物學(xué)性質(zhì)或功能并且共享至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的核苷酸或氨基酸一致性的任何核酸或蛋白質(zhì)序列。人類nkg2a在3個(gè)結(jié)構(gòu)域中包含233個(gè)氨基酸，其中包含殘基1-70的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域、包含殘基71-93的跨膜區(qū)和包含殘基94-233的胞外區(qū)，具有以下序列：mdnqgviysdlnlppnpkrqqrkpkgnkssilateqeityaelnlqkasqdfqgndktyhckdlpsapeklivgilgiiclilmasvvtivvipstliqrhnnsslntrtqkarhcghcpeewitysnscyyigkerrtweesllactsknssllsidneeemkflsiispsswigvfrnsshhpwvtmnglafkheikdsdnaelncavlqvnrlksaqcgssiiyhckhkl(seqidno:1)。nkg2c(omim602891，將其全部公開內(nèi)容通過引用并入本文)和nkg2e(omim602892，將其全部內(nèi)容通過引用并入本文)是nkg2轉(zhuǎn)錄物組的另外兩個(gè)成員(吉爾恩科(gilenke)等人，(1998)免疫遺傳學(xué)(immunogenetics)48:163-173)。cd94/nkg2c和cd94/nkg2e受體是在淋巴細(xì)胞(例如nk細(xì)胞和t細(xì)胞)亞群表面上發(fā)現(xiàn)的活化受體。hla-e(omim143010，將其全部公開內(nèi)容通過引用并入本文)是在細(xì)胞表面上表達(dá)并受肽的結(jié)合調(diào)節(jié)的非經(jīng)典mhc分子，例如衍生自其他mhci類分子的信號序列的片段。也已經(jīng)鑒定了hla-e的可溶性形式。除了其t細(xì)胞受體結(jié)合性質(zhì)，hla-e通過特異性結(jié)合cd94/nkg2a、cd94/nkg2b、和cd94/nkg2c而結(jié)合自然殺傷(nk)細(xì)胞、自然殺傷t細(xì)胞(nkt)和t細(xì)胞(α/β和γ/δ)的亞組(參見例如布羅(braud)等人(1998)自然(nature)391:795-799，其全部披露內(nèi)容通過引用在此結(jié)合)。hla-e的表面表達(dá)保護(hù)靶細(xì)胞免受cd94/nkg2a+nk、t細(xì)胞或nkt細(xì)胞克隆的裂解。如在此所使用的,“hla-e”是指hla-e基因或編碼的蛋白質(zhì)的任何變體、衍生物或同種型。還涵蓋的是與野生型、全長hla-e共享一種或多種生物學(xué)性質(zhì)或功能并且共享至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的核苷酸或氨基酸一致性的任何核酸或蛋白質(zhì)序列。在本披露的上下文中，“cd94/nkg2a陽性淋巴細(xì)胞”是指在細(xì)胞表面上表達(dá)cd94/nkg2a的淋巴譜系(例如nk細(xì)胞、nkt細(xì)胞和t細(xì)胞)的細(xì)胞，這些細(xì)胞可以通過例如使用特異性識別cd94和nkg2a上的組合表位或單獨(dú)nkg2a上的表位的抗體的流式細(xì)胞術(shù)來檢測?！癱d94/nkg2a陽性淋巴細(xì)胞”還包括淋巴來源的無限增殖細(xì)胞系(例如nkl、nk-92)。在本披露的上下文中，“降低nkg2a的抑制活性”、“中和nkg2a”或“中和nkg2a的抑制活性”是指這樣的過程，其中cd94/nkg2a在其對造成淋巴細(xì)胞反應(yīng)(如細(xì)胞因子釋放和細(xì)胞毒反應(yīng))的細(xì)胞內(nèi)過程產(chǎn)生負(fù)面影響的能力方面受到抑制。這可以例如在基于nk細(xì)胞或t細(xì)胞的細(xì)胞毒性測定中測量，其中測量治療化合物刺激通過cd94/nkg2a陽性淋巴細(xì)胞殺死hla-e陽性細(xì)胞的能力。在一個(gè)實(shí)施例中，抗體制品導(dǎo)致cd94/nkg2a限制性淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性增加至少10％，優(yōu)選地淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒性增加至少40％或50％，或更優(yōu)選地nk細(xì)胞毒性增加至少70％，并涉及所述的細(xì)胞毒性測定。如果抗nkg2a抗體減少或阻斷cd94/nkg2a與hla-e的相互作用，則其可增加cd94/nkg2a限制性淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性。這可以例如在標(biāo)準(zhǔn)的4小時(shí)體外細(xì)胞毒性測定中使用例如表達(dá)cd94/nkg2a的nk細(xì)胞和表達(dá)hla-e的靶細(xì)胞進(jìn)行評價(jià)。此類nk細(xì)胞不能有效地殺死表達(dá)hla-e的靶標(biāo)，因?yàn)閏d94/nkg2a識別hla-e，導(dǎo)致阻止淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞溶解的抑制性信號傳導(dǎo)的啟動和傳播。此類體外細(xì)胞毒性測定可以通過本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行，例如描述在克里甘(coligan)等人編輯，當(dāng)代免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(currentprotocolsinimmunology)，格林出版聯(lián)盟和威力跨學(xué)科出版公司(greenepublishingassoc.andwileyinterscience)，紐約，(1992，1993)。評估抗體刺激淋巴細(xì)胞殺死靶細(xì)胞(例如p815、k562細(xì)胞或合適的腫瘤細(xì)胞)的能力的鉻釋放和/或其他參數(shù)也披露于斯沃瑞(sivori)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(j.exp.med.)1997；186:1129-1136；維泰勒(vitale)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(j.exp.med.)1998；187:2065-2072；佩斯諾(pessino)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(j.exp.med.)1998；188:953-960；奈瑞(neri)等人，臨床診斷實(shí)驗(yàn)室免疫(clin.diag.lab.immun.)2001；8:1131-1135；佩德(pende)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(j.exp.med.)1999；190:1505-1516中，其每個(gè)的全部披露通過引用結(jié)合在此。在添加nk細(xì)胞之前，用51cr標(biāo)記靶細(xì)胞，然后殺傷被估計(jì)為與從細(xì)胞到培養(yǎng)基的51cr釋放成比例，作為殺傷的結(jié)果。添加防止cd94/nkg2a與hla-e結(jié)合的抗體導(dǎo)致經(jīng)由cd94/nkg2a的抑制性信號傳導(dǎo)的啟動和傳播的預(yù)防。因此，添加此類試劑導(dǎo)致淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的靶細(xì)胞殺傷的增加。該步驟由此鑒定為試劑，該試劑通過例如阻斷配體結(jié)合來阻止cd94/nkg2a誘導(dǎo)的負(fù)信號傳導(dǎo)。在特別的51cr釋放細(xì)胞毒性測試中，表達(dá)cd94/nkg2a的nk效應(yīng)細(xì)胞可殺死hla-e陰性lcl721.221靶細(xì)胞，但較少能殺死表達(dá)hla-e的lcl721.221-cw3對照細(xì)胞。相反地，缺乏cd94/nkg2a的yts效應(yīng)細(xì)胞有效殺死兩種細(xì)胞系。因此，由于hla-e誘導(dǎo)的經(jīng)由cd94/nkg2a的抑制性信號，nk效應(yīng)細(xì)胞更低效地殺死hla-e+lcl721.221-cw3細(xì)胞。當(dāng)在這此類51cr釋放細(xì)胞毒性測定中，nk細(xì)胞與根據(jù)本發(fā)明的封閉抗cd94/nkg2a抗體預(yù)孵育時(shí)，以抗體濃度依賴性方式更有效地殺死表達(dá)hla-e的lcl721.221-cw3細(xì)胞?？筺kg2a抗體的抑制活性(即細(xì)胞毒性增強(qiáng)潛能)也能以任何其他方法中的任一種(例如通過其對細(xì)胞內(nèi)游離鈣的影響)來評估，例如描述在斯沃瑞(sivori)等人，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(j.exp.med.)1997；186:1129-1136(將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)中。nk細(xì)胞細(xì)胞毒性的活化可以是例如通過測量細(xì)胞因子產(chǎn)生(例如ifn-γ產(chǎn)生)或細(xì)胞毒性標(biāo)記物(例如cd107或cd137轉(zhuǎn)移)的增加來評價(jià)的。在一個(gè)示例性方案中，通過細(xì)胞表面和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)染色以及通過流式細(xì)胞術(shù)在培養(yǎng)4天后的分析來評估來自pbmc的ifn-γ產(chǎn)生。簡而言之，在培養(yǎng)物的最后4小時(shí)以5μg/ml的最終濃度添加布雷非德菌素a(西格瑪奧德里奇公司(sigmaaldrich))。然后在透化(intrapreptm；貝克曼庫爾特公司(beckmancoulter))和用pe-抗ifn-γ或pe-igg1(pharmingen)染色之前用抗cd3和抗cd56mab孵育細(xì)胞。使用elisa(gm-csf：duosetelisa，r&d系統(tǒng)公司，明尼阿波里斯，明尼蘇達(dá)州，ifn-γ：optelaset，pharmingen)在上清液中測量來自多克隆激活的nk細(xì)胞的gm-csf和ifn-γ產(chǎn)生。無論何時(shí)當(dāng)提及抗nkg2a粘結(jié)劑(例如抗體)的整個(gè)說明書中提及“治療hnscc”等時(shí)，是指：(a)治療hnscc的方法，所述方法包括向需要此類治療的個(gè)體、哺乳動物(特別是人類)給予(至少一種治療)抗nkg2a粘結(jié)劑(優(yōu)選地以藥學(xué)上可接受的載體材料)的步驟，以其允許治療hnscc的劑量(治療有效量)，優(yōu)選以如本文所述的劑量(量)；(b)抗nkg2a粘結(jié)劑用于治療hnscc或抗nkg2a粘結(jié)劑用于所述治療(特別是在人類中)的用途；(c)抗nkg2a粘結(jié)劑在制備用于治療hnscc的藥物制劑中的用途，使用抗nkg2a粘結(jié)劑用于制備用于治療hnscc的藥物制劑的方法，該方法包括：將抗nkg2a粘結(jié)劑與藥學(xué)上可接受的載體、或包含有效劑量的適于治療hnscc的抗nkg2a結(jié)合劑的藥物制劑混合；或(d)a)、b)和c)的任何組合，這是根據(jù)本主題，本主題允許在提交本申請的國家取得專利權(quán)。如在此所使用的術(shù)語“活檢樣品”被定義為去除組織用于檢查例如以建立診斷的目的?；罱M織檢查的類型的實(shí)例包括通過施加抽吸(例如通過連接到注射器的針)；通過器械移除組織片段；通過內(nèi)窺鏡用適當(dāng)?shù)钠餍狄瞥煌ㄟ^手術(shù)切除(例如整個(gè)病變)；和類似物。如在此所使用，術(shù)語“抗體”是指多克隆和單克隆抗體。根據(jù)重鏈恒定區(qū)的類型，可將抗體歸入以下五種主要類別之一：iga、igd、ige、igg和igm。將這些類別中的幾種進(jìn)一步分為亞類或同種型，例如igg1、igg2、igg3和igg4等。一種示例性的免疫球蛋白(抗體)結(jié)構(gòu)單元包括一種四聚物。每個(gè)四聚體由兩對相同的多肽鏈構(gòu)成，每對具有一條“輕”鏈(約25kda)和一條“重”鏈(約50-70kda)。每個(gè)鏈的n端定義了具有約100至110個(gè)或更多個(gè)氨基酸的一個(gè)可變區(qū)，主要負(fù)責(zé)抗原識別。術(shù)語可變輕鏈(vl)和可變重鏈(vh)分別指這些輕鏈和重鏈。對應(yīng)于不同類別的免疫球蛋白的重鏈恒定區(qū)被對應(yīng)地稱為“α”、“δ”、“ε”、“γ”以及“μ”。不同類別的免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是熟知的。igg是在此使用的示例性抗體類別，因?yàn)樗鼈兪巧頎顩r下最常見的抗體且在實(shí)驗(yàn)室條件下最容易制備。任選地，該抗體是單克隆抗體?？贵w的具體實(shí)例是人源化的、嵌合的、人的或其他適合人的抗體?！翱贵w”還包括任何一種抗體的任何一種片段或衍生物。術(shù)語“特異地結(jié)合到”意指優(yōu)選地在競爭性結(jié)合測定中抗體可以結(jié)合到結(jié)合配偶體(例如nkg2a)上，正如使用重組體形式的蛋白、其中的表位、或存在于分離的靶細(xì)胞的表面上的天然蛋白所評估。用于確定特異性結(jié)合的競爭性結(jié)合測定法以及其他方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。例如，可以經(jīng)由放射性標(biāo)記、物理方法(如質(zhì)譜法)、或使用例如細(xì)胞熒光分析(例如facscan)檢測的直接或間接熒光標(biāo)記檢測結(jié)合。結(jié)合高于用對照看到的量，非特異性試劑指示試劑結(jié)合靶。特異性結(jié)合nkg2a的試劑可以單獨(dú)地結(jié)合nkg2a或作為與cd94的二聚體結(jié)合nkg2a。當(dāng)一種抗體被稱為與一種具體的單克隆抗體競爭時(shí)，它意指在使用重組分子(例如nkg2a)或表面表達(dá)的分子(例如nkg2a)結(jié)合測定中，該抗體與該單克隆抗體競爭。例如，如果測試抗體在結(jié)合測定中降低具有seqidno:2中任一個(gè)的重鏈和seqidno:7的輕鏈的抗體與nkg2a多肽或表達(dá)nkg2a的細(xì)胞的結(jié)合，則稱該抗體分別與這樣的抗體“競爭”。如在此使用的術(shù)語“親和力”意指一種抗體與一種表位結(jié)合的強(qiáng)度。一種抗體的親和性通過解離常數(shù)kd(定義為[ab]x[ag]/[ab-ag])給出，其中[ab-ag]是抗體-抗原復(fù)合體的摩爾濃度，[ab]是未結(jié)合的抗體的摩爾濃度，并且[ag]是未結(jié)合的抗原的摩爾濃度。親和力常數(shù)ka是由1/kd定義的。用于確定mab的親和力的方法可以發(fā)現(xiàn)于哈洛(harlow)等人，抗體：實(shí)驗(yàn)室手冊(antibodies:alaboratorymanual)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社(coldspringharborlaboratorypress)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室(coldspringharbor)，紐約(n.y.)，1988)，科爾根(coligan)等人編著，當(dāng)代免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(currentprotocolsinimmunology)，格林出版聯(lián)盟和威力跨學(xué)科(greenepublishingassoc.andwileyinterscience)，紐約，(1992，1993)，以及馬勒(muller)，酶學(xué)方法(meth.enzymol.)92:589-601(1983)，將這些文獻(xiàn)通過引用完全結(jié)合在此。本領(lǐng)域中熟知的用于確定mab親和力的一種標(biāo)準(zhǔn)的方法是使用表面等離子體共振(spr)篩選(例如通過用biacoretmspr分析裝置分析)。在本文的上下文中，“決定簇”指明多肽上相互作用或結(jié)合的位點(diǎn)。術(shù)語“表位”是指一種抗原決定簇，并且是在抗原上與抗體結(jié)合的面積或區(qū)域。一個(gè)蛋白質(zhì)表位可以包括直接參與結(jié)合的氨基酸殘基連同通過特異性抗原結(jié)合的抗體或肽被有效地阻斷的氨基酸殘基，即，抗體“足跡”內(nèi)的氨基酸殘基。它是可以與例如一種抗體或一種受體組合的復(fù)雜抗原分子上的最簡單形式或最小結(jié)構(gòu)區(qū)域。表位可以是直鏈或構(gòu)象性的/結(jié)構(gòu)性的。術(shù)語“線性表位”被定義為一種由在氨基酸的線性序列(一級結(jié)構(gòu))上連續(xù)的氨基酸殘基構(gòu)成的表位。術(shù)語“構(gòu)象或結(jié)構(gòu)表位”被定義為一種由并非都是連續(xù)的氨基酸殘基構(gòu)成的表位，并且因此代表通過分子的折疊(二級、三級和/或四級結(jié)構(gòu))彼此進(jìn)入接近狀態(tài)的氨基酸的線性序列的分開的部分。構(gòu)象表位依賴于三維結(jié)構(gòu)。因此，術(shù)語‘構(gòu)象的’經(jīng)常與‘結(jié)構(gòu)的’互換使用。在此使用術(shù)語“試劑”來表示化合物、化合物混合物、生物大分子、或由生物學(xué)材料制備的提取物。術(shù)語“治療劑”是指一種具有生物活性的試劑。出于本文的目的，“人源化”或“人”抗體是指一種抗體，其中一種或多種人免疫球蛋白的恒定和可變框架區(qū)與動物免疫球蛋白的結(jié)合區(qū)(例如cdr)相融合。這類抗體被設(shè)計(jì)成保持衍生出這些結(jié)合區(qū)的非人類抗體的結(jié)合特異性，但是卻要避免對抗非人類抗體的免疫反應(yīng)。此類抗體可獲自轉(zhuǎn)基因小鼠或其他動物，所述動物已經(jīng)被“工程化”以產(chǎn)生響應(yīng)于抗原激發(fā)的特異性人類抗體(參見，例如，格林(green)等人(1994)自然遺傳學(xué)(naturegenet)(7:13；朗伯格(lonberg)等人(1994)自然(nature)368:856；泰勒(taylor)等人(1994)國際免疫學(xué)(intimmun)6:579，將其全部傳授內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)。完全的人抗體還可通過基因或染色體轉(zhuǎn)染法連同噬菌體展示技術(shù)來構(gòu)建，這些技術(shù)在本領(lǐng)域中已知(參見，例如麥卡弗蒂(mccafferty)等人(1990)自然(nature)348:552-553)。人抗體還可以通過體外激活的b細(xì)胞生成(參見，例如美國專利號5,567,610和5,229,275，將其全部內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)。一種“嵌合抗體”是一種抗體分子，其中(a)恒定區(qū)或其一部份被改變、替換或交換，這樣使得抗原結(jié)合位點(diǎn)(可變區(qū))被連接至不同的或改變的類別、效應(yīng)子功能和/或種類的一個(gè)恒定區(qū)，或連接至賦予該嵌合抗體新特性的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生長因子、藥物等；或者(b)可變區(qū)或其一部份被具有不同的或改變的抗原特異性的可變區(qū)改變、替換或交換。術(shù)語“fc結(jié)構(gòu)域”、“fc部份”、以及“fc區(qū)域”是指抗體重鏈的c-末端片段，例如人類γ(伽馬)重鏈的從大約氨基酸(aa)230至約aa450或其他類型的抗體重鏈(例如針對人類抗體的α、δ、ε和μ)中的其對應(yīng)序列、或其一種天然存在的同種異型。除非另外指明，貫穿本披露使用普遍接受的免疫球蛋白卡巴特氨基酸編號(參見卡巴特(kabat)等人(1991)免疫學(xué)上感興趣的蛋白的序列(sequencesofproteinofimmunologicalinterest)，第5版，美國公共衛(wèi)生署(unitedstatespublichealthservice)，美國國立衛(wèi)生研究院(nationalinstituteofhealth)，貝塞斯達(dá)，馬里蘭州)。術(shù)語“分離的”、“純化的”或“生物學(xué)純的”是指實(shí)質(zhì)上或基本上不含在天然狀態(tài)下發(fā)現(xiàn)的通常伴隨其的組分的物質(zhì)。純度和均質(zhì)性典型地是使用分析化學(xué)技術(shù)(例如聚丙烯酰胺凝膠電泳或高效液相色譜法)來確定的。制劑中存在的主要種類的蛋白實(shí)質(zhì)上是純化的。術(shù)語“多肽”、“肽”以及“蛋白”在此可互換地使用，是指氨基酸殘基的聚合物。這些術(shù)語應(yīng)用到氨基酸聚合物上，其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是對應(yīng)的天然發(fā)生氨基酸的一種人工化學(xué)模擬物，并且應(yīng)用到天然發(fā)生的氨基酸聚合物以及非天然發(fā)生的氨基酸聚合物上。術(shù)語“重組”當(dāng)用于指例如一種細(xì)胞、核酸、蛋白或載體時(shí)表明該細(xì)胞、核酸、蛋白或載體已經(jīng)通過導(dǎo)入異源核酸或蛋白或者改變天然的核酸或蛋白進(jìn)行修飾，或者表明該細(xì)胞衍生自這樣修飾的細(xì)胞。因此，例如，重組細(xì)胞表達(dá)在天然(非重組)形式的細(xì)胞內(nèi)部找不到的基因，或表達(dá)天然基因然而卻異常表達(dá)、低表達(dá)或根本不表達(dá)。在此上下文中，“結(jié)合”多肽的或表位的術(shù)語抗體指定一種結(jié)合所述具有特異性和/或親和性決定簇的抗體。術(shù)語“一致性”或“一致的”當(dāng)用于兩種或更多種多肽的序列之間的關(guān)系時(shí)，是指多肽之間的序列關(guān)聯(lián)程度，如通過兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基鏈之間匹配的數(shù)目來確定的?！耙恢滦浴笔褂糜梢环N具體數(shù)學(xué)模型或計(jì)算機(jī)程序(即，“算法”)解決的空位比對(如果有的話)測量兩種或更多種序列中較短序列之間的一致匹配的百分比。相關(guān)多肽的一致性可以通過已知方法容易地計(jì)算出。此類方法包括但不限于在以下文獻(xiàn)中描述的那些：計(jì)算分子生物學(xué)(computationalmolecularbiology)，萊斯克(lesk)，a.m.編輯，牛津大學(xué)出版社(oxforduniversitypress)，紐約，1988；生物計(jì)算：信息學(xué)與基因組計(jì)劃(biocomputing:informaticsandgenomeprojects)，史密斯(smith)，d.w.編輯，學(xué)術(shù)出版社(academicpress)，紐約，1993；序列數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)分析(computeranalysisofsequencedata)，部分1，格里芬(griffin)，a.m.和格里芬(griffin.)，h.g.編輯，胡馬納出版社(humanapress)，新澤西州，1994；分子生物學(xué)中的序列分析(sequenceanalysisinmolecularbiology)，馮·海因切(vonheinje)，g.編輯，學(xué)術(shù)出版社，1987；序列分析入門(sequenceanalysisprimer)，哥博斯科夫(gribskov)，m.和德弗羅(devereux)，j.編輯，斯托克頓出版社(m.stocktonpress)，紐約，1991；以及卡里略(carillo)，等人，工業(yè)和應(yīng)用數(shù)學(xué)學(xué)會應(yīng)用數(shù)學(xué)雜志(siamj.appliedmath.)48,1073(1988)。用于確定一致性的方法被設(shè)計(jì)為在測試的序列之間給出最大的匹配。確定一致性的方法描述于可公開獲得的計(jì)算機(jī)程序中。用于確定在兩個(gè)序列之間的一致性的計(jì)算機(jī)程序方法包括gcg程序包，包括gap(德弗羅(devereux)等人，核酸研究(nucl.acid.res.)12,387(1984)；遺傳學(xué)電腦集團(tuán)(geneticscomputergroup)，威斯康辛大學(xué)(universityofwisconsi)，麥迪遜(madison)，威斯康辛(wis.))、blastp、blastn、以及fasta(阿特休爾(altschul)等人，分子生物學(xué)雜志(j.mol.biol)，215:403-410(1990))。blastx程序可以公開地從美國國家生物技術(shù)信息中心(ncbi)以及其他來源(blast手冊，阿爾丘爾(altschul)等人ncb/nlm/nih貝塞斯達(dá)(bethesda)，馬里蘭州20894；阿爾丘爾等人，同上)得到。熟知的史密斯-沃特曼算法(smithwatermanalgorithm)也可以用來確定一致性?？贵w的產(chǎn)生抗nkg2a試劑結(jié)合人類cd94/nkg2a受體的細(xì)胞外部分，并降低在cd94/nkg2a陽性淋巴細(xì)胞表面上表達(dá)的人類cd94/nkg2a受體的抑制活性。在一個(gè)實(shí)施例中，試劑與hla-e競爭結(jié)合cd94/nkg2a，即該試劑阻斷cd94/nkg2a與其配體hla-e之間的相互作用。在另一個(gè)實(shí)施例中，試劑不與hla-e競爭結(jié)合cd94/nkg2a；即該試劑能夠與hla-e同時(shí)結(jié)合cd94/nkg2a。抗體可以結(jié)合cd94和nkg2a上的組合表位或單獨(dú)結(jié)合nkg2a上的表位。在一個(gè)實(shí)施例中，抗體結(jié)合nkg2a上的表位，其至少部分地與hla-e結(jié)合位點(diǎn)重疊。在一方面中，該抗nkg2a試劑是選自完全人抗體、人源化抗體和嵌合抗體的抗體。在一個(gè)方面，該試劑包含衍生自人類igg1、igg2、igg3或igg4抗體的恒定區(qū)。在一個(gè)方面，該試劑是選自以下抗體的片段：iga、igd、igg、ige和igm抗體。在一個(gè)方面，該試劑是選自以下的抗體片段：fab片段、fab'片段、fab'-sh片段、f(ab)2片段、f(ab')2片段、fv片段、重鏈ig(美洲駝或駱駝ig)、vhh片段、單結(jié)構(gòu)域fv和單鏈抗體片段。在一方面中，該試劑是選自以下各項(xiàng)的合成的或半合成的抗體衍生的分子：scfv、dsfv、微小抗體、雙抗體、三抗體、κ體、ignar、以及多特異性抗體。優(yōu)選地，抗nkg2a抗體不顯示與fcγ受體(例如cd16)的實(shí)質(zhì)性特異性結(jié)合。此類抗體可以包含已知不結(jié)合fc受體的各種重鏈的恒定區(qū)。一個(gè)此類實(shí)例是igg4恒定區(qū)?？商娲?，不包含恒定區(qū)的igg4抗體片段(例如fab或f(ab')2片段)可用于避免fc受體結(jié)合?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域已知的方法評估fc受體結(jié)合，包括例如在biacore測定中測試抗體與fc受體蛋白的結(jié)合。此外，可以使用任何人抗體類型(例如igg1、igg2、igg3或igg4)，其中fc部分被修飾以最小化或消除與fc受體的結(jié)合(參見例如wo03101485，將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)。用于評估fc受體結(jié)合的測定(例如基于細(xì)胞的測定)是本領(lǐng)域熟知的，并且描述于例如wo03101485中。本披露因此涉及結(jié)合nkg2a的抗體或其他試劑。在一個(gè)方面，抗體以低于人類nkg2c和/或nkg2e至少100倍的kd結(jié)合nkg2a。在本披露的一個(gè)方面，試劑通過干擾cd94/nkg2a信號傳導(dǎo)來減少cd94/nkg2a介導(dǎo)的對表達(dá)cd94/nkg2a的淋巴細(xì)胞的抑制，例如通過干擾nkg2a與hla-e的結(jié)合、阻止或誘導(dǎo)cd94/nkg2a受體的構(gòu)象變化、和/或影響cd94/nkg2a受體的二聚化和/或聚集。在本披露的一個(gè)方面，試劑以比nkg2c低至少100倍的kd結(jié)合nkg2a的細(xì)胞外部分。在另一個(gè)優(yōu)選的方面，試劑以比nkg2c低至少150、200、300、400或10,000倍的kd結(jié)合nkg2a的細(xì)胞外部分。在披露的另一方面，試劑以比nkg2c、nkg2e和/或nkg2h分子低至少100倍的kd結(jié)合nkg2a的細(xì)胞外部分。在另一個(gè)優(yōu)選的方面，試劑以比nkg2c、nkg2c和/或nkg2h分子低至少150、200、300、400或10,000倍的kd結(jié)合nkg2a的細(xì)胞外部分。這可以例如在biacore實(shí)驗(yàn)中測量，其中測量試劑結(jié)合固定化的cd94/nkg2a的細(xì)胞外部分(例如從表達(dá)cd94/nkg2的細(xì)胞中純化的或在生物系統(tǒng)中產(chǎn)生的)的能力，并與同一測定中試劑與類似產(chǎn)生的cd94/nkg2c和/或其他cd94/nkg2變體的結(jié)合進(jìn)行比較?？商娲?，可測量試劑與天然表達(dá)或過表達(dá)(例如在瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后)cd94/nkg2a的細(xì)胞的結(jié)合，并與表達(dá)cd94/nkg2c和/或其他cd94/nkg2變體的細(xì)胞的結(jié)合進(jìn)行比較?？筺kg2a抗體可以任選地結(jié)合nkg2b，該nkg2b是與cd94一起形成抑制性受體的nkg2a剪接變體。在一個(gè)實(shí)施例中，可以使用在美國專利號8,206,709中披露的方法測量親和力，例如通過如在美國專利號8,206,709的實(shí)例8中所示的biacore評估與共價(jià)固定的nkg2a-cd94-fc融合蛋白的結(jié)合，將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此?？贵w可以例如具有與表達(dá)nkg2a的細(xì)胞的結(jié)合(高親和力)的ec50為0.5-10ng/ml之間，任選地1-5ng/ml，任選地1-10ng/ml，任選地1-20ng/ml，例如約4ng/ml。表達(dá)nkg2a的細(xì)胞可以是例如人類pbmc中表達(dá)nkg2a的細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施例中，表達(dá)nkg2a的細(xì)胞是表達(dá)cd94/nkg2a的細(xì)胞，例如如美國專利號8,206,709的實(shí)例13所示的穩(wěn)定過表達(dá)cd94/nkg2a的ba/f3細(xì)胞，將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此。在一個(gè)實(shí)施例中，抗體對人類nkg2a多肽的結(jié)合親和力(kd)，任選地其中結(jié)合親和力是二價(jià)的，小于10-9m，任選地小于10-10m，或任選地小于10-11m，任選地介于10-10m和10-12m之間，任選介于10-10m和10-11m之間?？梢栽u估親和力，例如如美國專利號7,932,055中所述，結(jié)合單鏈nkg2a-cd94-mfc構(gòu)建體，將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此。抗nkg2a抗體以是人類或人源化抗體，例如包含下表中所示的抗體的相應(yīng)vh和vl區(qū)?？贵wvhvlvh6seqidno:2seqidno:7vh1seqidno:3seqidno:7vh5seqidno:4seqidno:7vh7seqidno:5seqidno:7vh8seqidno:6seqidno:7z199seqidno:16seqidno:17抗nkg2a抗體可以是人類或人源化抗體，例如包括來自選自例如vh1_18、vh5_a、vh5_51、vh1_f和vh1_46的人類受體序列的vh人類受體框架和jh6j-區(qū)段，或本領(lǐng)域已知的其他人類種系vh框架序列。vl區(qū)人類受體序列可以是例如vki_o2/jk4。在一個(gè)實(shí)施例中，抗體是基于抗體z270的人源化抗體。不同的人源化z270vh鏈?zhǔn)居趕eqidno:2-6(加下劃線的可變區(qū)結(jié)構(gòu)域氨基酸)中。人源化z270vh輕鏈?zhǔn)居趕eqidno:7中。humz270抗體也披露在美國專利號8,206,709(將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)中。humz270vh6(seqidno:3)基于vh5_51；humz270vh1(seqidno:2)基于vh1_18；humz270vh5(seqidno:4)基于vh5_a；humz270vh7(seqidno:5)基于vh1_f；并且humz270vh8(seqidno:6)基于vh1_46；都具有jh6j-區(qū)段。這些抗體中的每一種保持與nkg2a結(jié)合的高親和力，具有針對該抗體的宿主免疫應(yīng)答的低可能性，因?yàn)槊總€(gè)人源化構(gòu)建體的卡巴特cdr-h2的6個(gè)c-末端氨基酸殘基與人受體框架相同。使用比對程序vectornti，獲得humz270vh1和humz270vh5、-6、-7和-8之間的以下序列同一性：78.2％(vh1對vh5)、79.0％(vh1對vh6)、88.7％(vh1對vh7)和96.0％(vh1對vh8)。在一個(gè)方面，該試劑包含(i)seqidno：2-6中任一個(gè)、或與其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，和(ii)seqidno：7、或與其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。在一個(gè)方面，該試劑包含(i)含有seqidno：2-6中任一個(gè)的氨基酸序列、或與其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的重鏈，和(ii)含有seqidno：7的氨基酸序列、或與其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的輕鏈。具有包含seqidno：2-6中任一個(gè)序列的重鏈和包含seqidno：7的序列的輕鏈的抗體中和nkg2a的抑制活性，但基本上不結(jié)合活化受體nkg2c、nkge或nkg2h。此抗體還與hla-e競爭結(jié)合細(xì)胞表面上的nkg2a。在一方面中，該試劑包含hcdr1、hcdr2和/或hcdr3序列，這些序列來源于具有seqidno：2-6中任一個(gè)的氨基酸序列的重鏈。在本發(fā)明的一方面中，該試劑包含lcdr1、lcdr2和/或lcdr3序列，這些序列來源于具有seqidno：7的氨基酸序列的輕鏈。重鏈(可變區(qū)，加下劃線的)vh1：qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsywmnwvrqapgqglewmgridpydsethya-qklqgrvtmttdtststaymelrslrsddtavyycarggydfdvgtlywffdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglys-lssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk(seqidno：2)vh6：evqlvqsgaevkkpgeslkisckgsgysftsywmnwvrqmpgkglewmgridpyd-sethyspsfqgqvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarggydfdvgtlywffdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflgg-psvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk(seqidno：3)vh5：evqlvqsgaevkkpgeslrisckgsgysftsywmnwvrqmpgkglewmgridpyd-sethyspsfqghvtisadksistaylqwsslkasdtamyycarggydfdvgtly-wffdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk(seqidno：4)vh7：evqlvqsgaevkkpgatvkisckvsgytftsywmnwvqqapgkglewmgridpydsethyaekfqgrvtitadtstdtaymelsslrsedtavyycatggydfdvgtlywffdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk(seqidno：5)vh8：qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsywmnwvrqapgqglewmgridpydsethyaqkfqgrvtmtrdtststvymelsslrsedtavyycarggydfdvgtlywffdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk(seqidno：6)輕鏈diqmtqspsslsasvgdrvtitcraseniysylawyqqkpgkapklliynaktlaegvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqhhygtprtfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno：7)在一個(gè)方面，抗nkg2a抗體是包含對應(yīng)于seqidno：2-6中任一個(gè)的殘基31-35(氨基酸序列sywmn(seqidno：8))的cdr-h1的抗體、對應(yīng)于seqidno：2-6中任一個(gè)殘基50-60(氨基酸序列ridpydsethy(seqidno：9))(任選地50-66，當(dāng)包括人起源的6個(gè)末端氨基酸時(shí)，即vh6重鏈的序列ridpydsethyspsfqg(seqidno：10)、vh1重鏈的序列ridpydsethyaqklqg(seqidno：11)等)的cdr-h2的抗體、以及對應(yīng)于seqidno：2-6中任一個(gè)的殘基99-114(95-102，根據(jù)卡巴特)的cdr-h3(氨基酸序列g(shù)gydfdvgtlywffdv(seqidno：12))的抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，cdr-h2對應(yīng)于seqidno：2-6中任一個(gè)的殘基50-66。任選地，cdr可以包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或更多個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)方面，抗nkg2a抗體是包含對應(yīng)于seqidno：7的殘基24-34(氨基酸序列raseniysyla(seqidno：13))的cdr-l1的抗體、對應(yīng)于seqidno：7的殘基50-56(氨基酸序列naktlae(seqidno：14))的cdr-l2的抗體、以及對應(yīng)于seqidno：7的殘基89-97(氨基酸序列qhhygtprt(seqidno：15))的cdr-l3的抗體。任選地，cdr可以包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或更多個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)方面，抗nkg2a抗體是包含以下各項(xiàng)的抗體：對應(yīng)于seqidno：2-6中任一個(gè)的殘基31-35的cdr-h1、對應(yīng)于seqidno：2-6的殘基50-60(任選地50-66)的cdr-h2、對應(yīng)于seqidno：2-6中任一個(gè)的殘基99-114(95-102，根據(jù)卡巴特)的殘基cdr-h3、對應(yīng)于seqidno：7的殘基24-34的cdr-l1、對應(yīng)于seqidno:7的殘基50-56的cdr-l2、以及對應(yīng)于seqidno:7殘基89-97的cdr-l3。在一個(gè)方面，試劑是針對任何上述抗體結(jié)合的cd94/nkg2a表位產(chǎn)生的完全人抗體。應(yīng)當(dāng)理解地是，雖然可以使用上述抗體，但是可以制備其他抗體。例如，nkg2a的任何片段(優(yōu)選但不排他地是人類nkg2a)或nkg2a片段的任何組合，可以用作免疫原以產(chǎn)生抗體，并且這些抗體可以識別在nkg2a多肽之內(nèi)的任何位置的表位，只要它們能在如此處描述的表達(dá)nkg2a的nk細(xì)胞上這樣做。最優(yōu)選地，該表位是由具有seqidno:2-6中任一個(gè)的重鏈和seqidno:7的輕鏈的抗體特異性識別的表位。在一方面中，該試劑包含hcdr1、hcdr2和/或hcdr3序列，這些序列來源于具有seqidno:16的氨基酸序列的vh。在本披露的一方面中，該試劑包含lcdr1、lcdr2和/或lcdr3序列，這些序列來源于具有seqidno:17的氨基酸序列的vl。在一個(gè)方面，試劑包含衍生自具有seqidno:16的氨基酸序列的vh的hcdr1、hcdr2和/或hcdr3序列，以及衍生自具有seqidno:17的氨基酸序列的vh的lcdr1、lcdr2和/或lcdr3序列。具有seqidno:16的重鏈和包含seqidno:17的輕鏈的抗體中和nkg2a的抑制活性，并且還結(jié)合活化受體nkg2c，nkge或nkg2h?？贵w不與hla-e競爭結(jié)合細(xì)胞表面上的nkg2a(即它是nkg2a的非競爭性拮抗劑)。evqlvesggglvkpggslklscaasgftfssyamswvrqspekrlewvaeissggsytyypdtvtgrftisrdnakntlyleisslrsedtamyyctrhgdyprffdvwgagttvtvss(seqidno:16)qivltqspalmsaspgekvtmtcsasssvsyiywyqqkprsspkpwiyltsnlasgvparfsgsgsgtsysltissmeaedaatyycqqwsgnpytfgggtkleikr(seqidno:17)在一個(gè)方面，試劑包括可變重鏈(vh)結(jié)構(gòu)域(seqidno:16)的氨基酸殘基31-35、50-60、62、64、66和99-108，以及可變輕鏈(vl)結(jié)構(gòu)域(seqidno:17)的氨基酸殘基24-33、49-55和88-96，任選地具有1、2、3、4或更多個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)方面，試劑是針對任何上述抗體結(jié)合的cd94/nkg2a表位產(chǎn)生的完全人抗體。應(yīng)當(dāng)理解的是，盡管可以使用上述抗體，但是其他抗體可以識別并且針對nkg2a多肽的任何部分產(chǎn)生，只要該抗體導(dǎo)致nkg2a的抑制活性的中和。例如，nkg2a的任何片段(優(yōu)選但不排他地是人類nkg2a)或nkg2a片段的任何組合，可以用作免疫原以產(chǎn)生抗體，并且這些抗體可以識別在nkg2a多肽之內(nèi)的任何位置的表位，只要它們能在如此處描述的表達(dá)nkg2a的nk細(xì)胞上這樣做。在一個(gè)實(shí)施例中，該表位是由具有seqidno:2-6中任一個(gè)的重鏈和seqidno:7的輕鏈的抗體特異性識別的表位。在一個(gè)方面，試劑與美國專利號8,206,709(將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)中披露的humz270抗體競爭結(jié)合人類cd94/nkg2a受體的細(xì)胞外部分。在一個(gè)方面，試劑與美國專利號8,796,427(將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此)中披露的人源化z199抗體競爭結(jié)合人類cd94/nkg2a受體的細(xì)胞外部分。競爭性結(jié)合可以例如在biacore實(shí)驗(yàn)中測量，其中測量試劑的能力，用于結(jié)合固定化的cd94/nkg2a受體的細(xì)胞外部分(例如從表達(dá)cd94/nkg2的細(xì)胞純化，或在生物系統(tǒng)中產(chǎn)生)用humz270飽和?？商娲?，測量試劑與天然表達(dá)或過表達(dá)(例如在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后)cd94/nkg2a受體并且已經(jīng)用飽和劑量的z270預(yù)孵育的細(xì)胞的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施例中，可以使用美國專利號8,206,709中披露的方法測量競爭性結(jié)合，例如通過如美國專利號8,206,709的實(shí)例15中所示的流式細(xì)胞術(shù)評估與ba/f3-cd94-nkg2a細(xì)胞的結(jié)合，將其披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此?？贵w配制品可以將抗nkg2a試劑例如抗體摻入包含濃度從1mg/ml至500mg/ml的藥物配制品中，其中所述配制品具有從2.0至10.0的ph。該配制品可以進(jìn)一步包含緩沖系統(tǒng)、一種或多種防腐劑、一種或多種張度基、一種或多種螯合劑、穩(wěn)定劑和表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施例中，該藥物配制品是水性溶液，即包含水的配制品。此類配制品典型地是溶液或懸浮液。在另外的實(shí)施例中，該藥物配制品是水性溶液。術(shù)語“水性溶液”定義為包含至少50％w/w水的配制品。同樣，術(shù)語“水性溶液”定義為包含至少50％w/w水的溶液，并且術(shù)語“水性懸浮液”定義為包含至少50％w/w水的懸浮液。在另一個(gè)實(shí)施例中，該藥物配制品是冷凍干燥的配制品，醫(yī)生或患者在使用前添加溶劑和/或稀釋劑。在另一個(gè)實(shí)施例中，該藥物配制品是干燥配制品(例如冷凍干燥的或噴霧干燥的)，可立即使用而不經(jīng)任何預(yù)先溶解。在另外的方面，該藥物配制品包含此類抗體的水性溶液和緩沖液，其中抗體以1mg/ml或以上的濃度存在，并且其中所述配制品的ph從約2.0至約10.0。在另一個(gè)實(shí)施例中，該配制品的ph在選自下列的范圍，該列由以下各項(xiàng)組成：從約2.0至約10.0、約3.0至約9.0、約4.0至約8.5、約5.0至約8.0和約5.5至約7.5。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，緩沖液選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：乙酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸鹽、甘氨酰甘氨酸、組氨酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉和三(羥甲基)-氨基甲烷、n-二甘氨酸、兩性離子緩沖劑、蘋果酸、琥珀酸鹽、馬來酸、富馬酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。這些特定緩沖液中的每一個(gè)構(gòu)成替可替代的實(shí)施例。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，該配制品進(jìn)一步包含要學(xué)上可接受的防腐劑。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，該配制品進(jìn)一步包含等滲劑。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，該配制品也包含螯合劑。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，該配制品進(jìn)一步包含穩(wěn)定劑。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，該配制品進(jìn)一步包含表面活性劑。為了方便起見，參考雷明頓(remington)：藥學(xué)科學(xué)與實(shí)踐(thescienceandpracticeofpharmacy)，第19版，1995。在肽藥物配制品中存在其他成分是可能的。這些另外的成分包括潤濕劑、乳化劑、抗氧化劑、膨脹劑、張度調(diào)節(jié)級、螯合劑、金屬離子、油性運(yùn)載體、蛋白質(zhì)(例如人血清蛋白、明膠或蛋白質(zhì))和兩性離子(例如氨基酸如甜菜堿、?；撬?、精氨酸、甘氨酸、賴氨酸和組氨酸)。當(dāng)然，這些另外的成分不應(yīng)不利地影響藥物配制品的總體穩(wěn)定性。可以在以下若干個(gè)位點(diǎn)向需要此類治療的患者給予包含抗體的藥物組合物：例如在局部位點(diǎn)(例如皮膚)和粘膜位點(diǎn)、在避開吸收作用的位點(diǎn)(例如在動脈、血管、心臟給藥)以及在涉及吸收的位點(diǎn)(例如在皮膚、皮下、肌肉或腹部給藥)?？梢酝ㄟ^以下若干個(gè)給藥途徑向需要此類治療的患者給予藥物組合物：例如皮下的、肌肉注射的、腹膜內(nèi)的、靜脈的、舌的、舌下的、頰的、口腔內(nèi)的、口的、在胃和腸中、鼻的、肺的，例如通過細(xì)支氣管和肺泡或其組合、表皮的、真皮的、經(jīng)皮膚的、陰道的、直腸的、眼睛的，例如通過結(jié)膜、輸尿管和胃腸外。合適的抗體配制品也可以通過檢查其他已經(jīng)開發(fā)的治療性單克隆抗體的經(jīng)驗(yàn)來確定。在臨床方面，數(shù)種單克隆抗體已經(jīng)顯示是有效的，例如美羅華(利妥昔單抗)、赫賽汀(曲妥珠單抗)、艾克斯萊爾(xolair)(奧巴佐單抗)、托西莫(托西莫單抗)、坎帕斯(阿倫單抗)、澤娃靈(zevalin)、oncolym，并且類似的配制品可以與該披露的化合物一起使用。例如，可以在100mg(10ml)或500mg(50ml)一次性使用的小瓶中以10mg/ml的濃度提供單克隆抗體，配制用于在9.0mg/ml氯化鈉、7.35mg/ml檸檬酸鈉二水合物、0.7mg/ml聚山梨酯80和無菌注射用水中的iv給藥。將ph調(diào)節(jié)到6.5。在另一個(gè)實(shí)施例中，在約6.0的ph下，將抗體以包含約20mm檸檬酸鈉、約150mmnacl的配制品提供。惡性腫瘤的診斷和治療描述了在個(gè)體中在診斷、預(yù)后、監(jiān)測、治療和預(yù)防頭頸癌中有用的方法。hnscc是在頭部或頸部區(qū)域出現(xiàn)的鱗狀上皮細(xì)胞或基底細(xì)胞樣腫瘤，并且包括鼻腔、鼻竇、嘴唇、口和口腔、唾液腺、咽或喉的腫瘤?？筺kg2a試劑可特別地有用于例如口咽腫瘤、喉腫瘤、口腔腫瘤和下咽腫瘤的治療。這些腫瘤由腫瘤學(xué)領(lǐng)域的從業(yè)者(例如醫(yī)生、醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)家、組織病理學(xué)家和腫瘤臨床醫(yī)生)常規(guī)鑒定。hnscc的治療也包括其惡化前的損害的治療。hnscc惡化前的損害可以包括例如發(fā)育異常、增生、粘膜白斑病、無核紅細(xì)胞或毛舌?？梢詫⒅泻腿祟恘kg2a多肽抑制活性的化合物(例如抗體)給予患有頭頸癌的個(gè)體，這些個(gè)體沒有接受外科手術(shù)以去除癌癥細(xì)胞或這些患者沒有在當(dāng)前期間接受這種手術(shù)。然而，應(yīng)當(dāng)理解的是，也可以將該化合物給予接受了或正在接受外科手術(shù)以去除癌癥細(xì)胞的患者。當(dāng)將抗nkg2a化合物給予未接受外科手術(shù)以去除癌癥細(xì)胞(例如以去除hnscc細(xì)胞)的個(gè)體時(shí)，可例如在手術(shù)前約0至30天給予結(jié)合nkg2a的化合物。在一個(gè)實(shí)施例中，在手術(shù)前給予用抗nkg2a化合物治療的至少一個(gè)(例如一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或更多個(gè))給藥周期。在一個(gè)實(shí)施例中，該給藥周期在2周和8周之間。在有或沒有預(yù)先檢測步驟評估hla-e在腫瘤細(xì)胞表面上的表達(dá)的情況下，患有頭頸癌的患者可以用抗nkg2a藥劑治療。有利地，治療方法可以包括檢測來自個(gè)體的腫瘤的生物樣品(例如腫瘤細(xì)胞)中的hla-e核酸或多肽的步驟。生物樣品表達(dá)hla-e(例如突出表達(dá)；與參考相比以高水平表達(dá)hla-e，用抗hla-e抗體進(jìn)行高強(qiáng)度染色)的測定表明患者患有從用抑制nkg2a的試劑治療獲得強(qiáng)的益處的頭頸癌。在一個(gè)實(shí)施例中，該方法包括在一種生物樣品中確定hla-e核酸或多肽的表達(dá)水平并且將該水平與對應(yīng)于健康個(gè)體或不從用抑制nkg2a的試劑治療獲益的個(gè)體的參考水平(例如一個(gè)值，弱的細(xì)胞表面染色，等)進(jìn)行比較。生物樣品以與參考水平相比增加的水平表達(dá)hla-e核酸或多肽的測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。任選地，在一種生物樣品中檢測hla-e多肽包括檢測在惡性hnscc細(xì)胞的表面上表達(dá)的hla-e多肽。在一個(gè)實(shí)施例中，生物樣品顯著地表達(dá)hla-e核酸或多肽的測定表明患者患有可以用抑制nkg2a的試劑治療的頭頸癌。當(dāng)提及一種hla-e多肽時(shí)，“顯著地表達(dá)”意指該hla-e多肽被表達(dá)于一種相當(dāng)多的取自給定病人的腫瘤細(xì)胞中。然而術(shù)語“顯著地表達(dá)”的定義不限于精確的百分率值，在一些實(shí)例中，稱為“顯著地表達(dá)”的受體將存在于至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多的取自患者的hnscc細(xì)胞上。確定個(gè)體是否具有表達(dá)hla-e多肽的頭頸癌細(xì)胞可以例如包括從包含頭頸癌細(xì)胞的個(gè)體獲得生物樣品(例如通過進(jìn)行活檢)，使所述細(xì)胞與結(jié)合hla-e多肽的抗體接觸，并檢測該細(xì)胞是否在其表面上表達(dá)hla-e。任選地，確定個(gè)體是否具有表達(dá)hla-e的頭頸癌細(xì)胞，包括進(jìn)行免疫組織化學(xué)測定。任選地，確定個(gè)體是否具有表達(dá)hla-e的頭頸癌細(xì)胞，包括進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)測定。可以在有或沒有預(yù)先檢測步驟評估患者(或患者的腫瘤)是否是hpv陽性，患有頭頸癌的患者用抗nkg2a藥劑來治療。在一個(gè)方面，提供了一種方法，該方法預(yù)測患有腫瘤的患者是否將從抗nkg2a試劑的治療獲益。在一個(gè)實(shí)施例中，該方法包括確定患者是否是hpv陽性。在一個(gè)實(shí)施例中，確定患有hnscc的個(gè)體是否是hpv陽性的步驟包括檢測或鑒定受試者中(例如來自受試者的樣品中)的hpv分子。在一個(gè)實(shí)施例中，該hpv分子是受試者(例如樣品中)的hpv核酸或hpv蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施例中，通過樣品中的核酸的原位雜交(ish)、pcr、rna印跡分析或測序來鑒定hpv核酸?？梢酝ㄟ^蛋白質(zhì)印跡分析來鑒定hpv蛋白質(zhì)，例如免疫組織化學(xué)(ihc)。在一個(gè)實(shí)施例中，通過ihc檢測hpv以檢測pi6蛋白(由cdkn2a編碼)。來自受試者的樣品可以是例如血液或血清樣品、或尿液樣品、或組織樣品(例如腫瘤組織樣品(例如來自活檢))或口頰棉簽。該樣品可以是新鮮或冷凍的。在一個(gè)實(shí)施例中，是hpv陽性的個(gè)體對于類型16hpv，或任選地類型18、31和33hpv是陽性的。任選地，確定患有hnscc的個(gè)體是否是hpv陽性的步驟包括檢測類型16hpv，和/或類型18、31和/或33hpv通?？梢允褂萌魏魏线m的hpv測定方法。fda批準(zhǔn)的hpv測定的實(shí)例包括雙基因雜交捕獲2高風(fēng)險(xiǎn)(digenehybridcapture2high-risk)hpvdna測試(qiagen集團(tuán))，基于信號擴(kuò)增的核酸雜交的體外微孔板測定，其使用化學(xué)發(fā)光定性檢測在宮頸的18種類型的人乳頭瘤病毒(hpv)dna標(biāo)本。另一個(gè)實(shí)例是來自第三波技術(shù)(thirdwavetechnologies)的cervistatmhpv測試。另一個(gè)實(shí)例是來自羅氏分子系統(tǒng)公司(rochemolecularsystems,inc.)，加利福尼亞州(ca.)的cobashpv測試。另外的實(shí)例是來自基因探針公司(gen-probe,inc.)的hpv測定。hpv陽性的患者然后可以例如被指定為適合用抗nkg2a試劑治療的個(gè)體，或指定為用抗nkg2a試劑治療的反應(yīng)者，并任選地可以進(jìn)一步用抗nkg2a試劑治療。任選地，評估個(gè)體是否存在一種或多種hnscc相關(guān)的遺傳標(biāo)志物。hnscc相關(guān)基因可能在那個(gè)基因或相關(guān)基因中具有異常的功能喪失或功能獲得?？筺kg2a試劑可獨(dú)立于hnscc相關(guān)基因中的突變而有用，和/或可用于增強(qiáng)具有不良癌癥預(yù)后的個(gè)體中的抗腫瘤反應(yīng)，例如基于一個(gè)或多個(gè)遺傳標(biāo)記。因此，抗nkg2a試劑可用于治療患有(或缺乏)hnscc的患者，該hnscc患有hnscc相關(guān)基因中的突變，例如選自下組的基因，該組由一下各項(xiàng)組成：pi3激酶(pi3k)、pik3ca、pik3cg、tp63、ccnd1、ccne1、myc、yap1、hras、notch1、notch2、notch3、irf6、cdkn2a、tp53、casp8、pten、fat1、ripk4、ezh1、ezh2、med1、mll2、cdh1、fbxw7、pclo、rims2、rbi、nsd1、ep300和nfe2l2。示例性異常功能獲得hnscc基因可以包括tp63、ccnd1、ccne1、myc、yap1、hras、pik3ca、pik3cg或nfe2l2。示例性異常功能喪失hnscc基因可以包括notch1、notch2、notch3、irf6、cdkn2a、tp53、casp8、pten、fat1、ripk4、ezh1、ezh2、med1、mll2、cdh1、fbxw7、pclo、rims2、rbi、nsd1或ep300。hnscc相關(guān)的基因描述在斯特蘭斯基(stransky)等人，“頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的突變景觀”(“themutationallandscapeofheadandnecksquamouscellcarcinoma”)，科學(xué)(science)，第333卷，2011年8月26日，該專利的內(nèi)容通過引用以其整體結(jié)合在此。在一個(gè)示例性方面中，提供了在具有可檢測水平的癌細(xì)胞的哺乳動物宿主(例如，人類患者)中降低hnscc進(jìn)展的方法，該方法包括給予抗nkg2a試劑(例如抗nkg2a抗體)、抗nkg2a抗體組合物、或一種相關(guān)的組合物(例如，一種編碼抗nkg2a抗體的核酸)，所給予的量足以可檢測地降低宿主中hnscc的進(jìn)展。用于治療患有癌癥的人類的合適的治療方案包括例如向患者給予有效量的中和人類nkg2a的抑制活性的抗體，其中該方法包括至少一個(gè)給藥周期，其中至少一個(gè)劑量的抗nkg2a抗體以1-10mg/kg體重的劑量給予。在一個(gè)實(shí)施例中，該給藥周期在2周和8周之間。在一個(gè)實(shí)施例中，該方法包括至少一個(gè)給藥周期，其中該周期是八周或更短的時(shí)間，其中對于該至少一個(gè)周期中的每一個(gè)，以1-10mg/kg體重的劑量給予兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)劑量的抗nkg2a抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a以有效使淋巴細(xì)胞上的nkg2a受體飽和的量給予至少一周、兩周、三周或四周。在某些實(shí)施例中，抗nkg2a抗體以約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg/kg的劑量(例如每個(gè)劑量)給予。在此的任何實(shí)施例的一個(gè)方面中，約每2或4周給予一次抗nkg2a抗體。將抗nkg2a抗體遞送至受試者(通過直接給予，或從其中的核酸表達(dá)，例如從包括一個(gè)或多個(gè)抗nkg2a抗體-編碼核酸序列的痘病毒基因轉(zhuǎn)移載體)并且實(shí)踐此處的其他方法可以用于降低、治療、預(yù)防、或以其他方式改善癌癥進(jìn)展(特別hnscc進(jìn)展)的任何適合的方面。該方法可以特別用于降低和/或改善腫瘤生長(例如(腫瘤細(xì)胞相比于健康的t細(xì)胞)百分比、循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞數(shù)目)、以及任何與其相關(guān)聯(lián)的參數(shù)或癥狀(例如生物標(biāo)記物)。獨(dú)立地并且全面地降低、預(yù)防、或以其他方式改善癌癥進(jìn)展的這些方面的方法是有利的特征。在另一個(gè)方面中，提供了這樣一種方法，該方法降低癌癥進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)，在已經(jīng)經(jīng)歷起發(fā)的細(xì)胞群體中降低進(jìn)一步癌癥進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)，和/或在人類患者中提供用于降低癌癥進(jìn)展的治療方案，該方法包括以一個(gè)足以實(shí)現(xiàn)反應(yīng)(部分或完全反應(yīng))的量和方案向患者給予一種或多種第一治療(例如，誘導(dǎo)療法，如化學(xué)治療劑)，并且然后向該患者給予一個(gè)量的抗nkg2a抗體或相關(guān)組合物(或施用組合給予方法)。在一個(gè)另外的方面中，提供了一種在哺乳動物宿主(例如人類患者)中促進(jìn)hnscc的緩解的方法，該方法包括向該宿主給予一種包括抗nkg2a抗體的組合物，從而促進(jìn)在宿主中的hnscc緩解。在一個(gè)又另外的方面，提供了這樣一種方法，該方法用于降低發(fā)展hnscc的風(fēng)險(xiǎn)，減少癌性病狀發(fā)作的時(shí)間，和/或降低在早期階段診斷的hnscc的嚴(yán)重性，該方法包括向宿主給予一個(gè)預(yù)防有效量的抗nkg2a抗體或相關(guān)組合物以實(shí)現(xiàn)所希望的一種或多種生理效果。在一個(gè)另外的方面中，提供了一種在診斷患有hnscc的人類患者中增加存活超過一個(gè)相關(guān)時(shí)期的可能性的方法。在另一個(gè)方面中，提供了一種用于改進(jìn)hnscc患者的生活質(zhì)量的方法，該方法包括向該患者給予一個(gè)有效于改進(jìn)其生活質(zhì)量的量的組合物。在一個(gè)另外的方面中，可以施用在此描述的方法以顯著減少一種脊椎動物宿主中hnscc細(xì)胞的數(shù)目，使得例如hnscc細(xì)胞的總數(shù)降低。在一種相關(guān)的意義上，提供了一種用于殺滅(例如，直接或間接引起死亡)脊椎動物(如人類癌癥患者)中的hnscc細(xì)胞的方法。抗nkg2a試劑(例如抗nkg2a抗體)可以作為單一療法或與第二治療劑的輔助或聯(lián)合給藥(共給藥)給予。輔助或聯(lián)合給藥包括呈相同或不同劑量形式的化合物的同時(shí)給藥，或化合物的分開給藥(例如，順序給藥)。因此，抗nkg2a和第二治療劑可以在單個(gè)配制品中同時(shí)給予?？商娲?，抗nkg2a和第二治療劑可以配制用于單獨(dú)給藥以及同時(shí)或順序給予。第二治療劑將通常按照在用于正治療的具體疾病或病狀的單次療法中針對該藥劑典型使用的量和治療方案來給予。在一個(gè)實(shí)施例中，第二治療劑是能夠介導(dǎo)adcc(例如經(jīng)由其fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合一種或多種人類fcγ受體(例如cd16))的抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，該抗體包含一種或多種抗原結(jié)合域(例如vh-vl對)，該抗原結(jié)合域結(jié)合由腫瘤細(xì)胞表達(dá)的多肽，和fc結(jié)構(gòu)域，該fc結(jié)構(gòu)域經(jīng)由其fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合一個(gè)或多個(gè)人類fcγ受體(例如cd16)。在一個(gè)實(shí)施例中，介導(dǎo)adcc的抗體以有效量給予，該有效量引起針對人類患者(體內(nèi))中的人腫瘤細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞毒性，該人類腫瘤細(xì)胞表達(dá)第二抗癌劑所針對的多肽。在一個(gè)實(shí)例中，第二治療劑是結(jié)合和/或抑制表皮生長因子受體(egfr)的試劑。在一個(gè)實(shí)施例中，使用的抗egfr抗體是如以下各項(xiàng)中描述的抗體：wo2006/082515和wo2008/017963、wo2002/100348、wo2004/056847、wo2005/056606、wo2005/012479、wo2005/10151、美國專利號6,794,494、ep1454917、wo2003/14159、wo2002/092771、wo2003/12072、wo2002/066058、wo2001/88138、wo98/50433、wo98/36074、wo96/40210、wo96/27010、us2002065398、wo95/20045、ep586002、美國專利號5,459,061或美國專利號4,943,533。因此，結(jié)合和/或抑制的試劑可以是抗egfr抗體(例如嵌合抗體、人類抗體或人源化抗體)。本披露的方法中使用的抗egfr抗體可以具有對egfr中包含的一個(gè)或多個(gè)表位的任何合適的親和力和/或親合力。優(yōu)選地，所使用的抗體以至多10-8m(優(yōu)選至多10-10m)的平衡解離常數(shù)(kd)結(jié)合至人類egfr。在一個(gè)實(shí)施例中，抗egfr抗體包含保留fcγ結(jié)合的fc結(jié)構(gòu)域(例如cd16)。在一個(gè)實(shí)施例中，抗egfr抗體包含人igg1或igg3同種型的fc結(jié)構(gòu)域。c225抗體(西妥昔單抗，)是抗egfr抗體的一個(gè)實(shí)例；西妥昔單抗以在體外抑制egf介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長并在體內(nèi)抑制人類結(jié)腸直腸腫瘤在2003年得到了顯著地認(rèn)可。它是靶向表皮生長因子受體(egfr)的嵌合的人類/小鼠單克隆抗體。已知其他抗egfr抗體共享西妥昔單抗的所有生物活性的一些或全部，例如阻止egfr的配體結(jié)合，阻止egfr受體的激活并阻斷egfr途徑的下游信號傳導(dǎo)，從而導(dǎo)致細(xì)胞生長破壞。用于本披露的抗體的其他實(shí)例包括：扎蘆木單抗(2f8，描述在wo02/100348和wo04/056847中)、尼妥珠單抗(h-r3)，帕木單抗(abx-egf)和馬妥珠單抗(emd72000)、具有大鼠icr62抗體的cdr的抗體((wo2010/112413)、奈斯單抗(necitumumab)(imc-11f8，elililly)或這些中的任一種的變體抗體，或能夠與這些中的任一種競爭的抗體(例如識別與這些中的任一個(gè)相同的表位的抗體)?？梢酝ㄟ^任何適合的技術(shù)確定競爭。在一個(gè)實(shí)施例中，可以通過elisa測定確定競爭。通常，競爭的特征在于通過elisa分析確定的顯著大于5％、10％或25％的相對抑制?？筫gfr抗體或介導(dǎo)adcc的其他抗體這些抗體還可以采用修飾有利地制成，所述例如修飾增加了它們結(jié)合fc受體的能力，這可以影響效應(yīng)子功能例如抗體依賴性細(xì)胞毒性、肥大細(xì)胞脫顆粒、以及吞噬，連同免疫調(diào)節(jié)信號(如調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞增殖和抗體分泌)。典型的修飾包括修飾的人類恒定區(qū)，所述修飾的人類恒定區(qū)包含至少一個(gè)氨基酸修飾(例如取代、缺失、插入)、和/或改變類型的糖基化，例如低巖藻糖基化。此類修飾可以影響與以下fc受體的相互作用：fcγri(cd64)、fcγrii(cd32)、和fcγriii(cd16)。fcγri(cd64)、fcγriia(cd32a)以及fcγriii(cd16)是激活型(即，免疫系統(tǒng)增強(qiáng)型)受體，而fcγriib(cd32b)是一種抑制型(即，免疫系統(tǒng)阻滯型)受體。修飾可以例如增加fc結(jié)構(gòu)域與活化性fcγ(例如fcγriiia)在效應(yīng)子(例如nk)細(xì)胞上的結(jié)合，或者可以減少fc結(jié)構(gòu)域與抑制性fcγ(例如fcγriib)的結(jié)合。可以制得fc修飾的任何組合，例如在以下文獻(xiàn)中披露的不同修飾的任何組合：美國專利號us,7,632,497；7,521,542；7,425,619；7,416,727；7,371,826；7,355,008；7,335,742；7,332,581；7,183,387；7,122,637；6,821,505和6,737,056；在pct公開號wo2011/109400；wo2008/105886；wo2008/002933；wo2007/021841；wo2007/106707；wo06/088494；wo05/115452；wo05/110474；wo04/1032269；wo00/42072；wo06/088494；wo07/024249；wo05/047327；wo04/099249和wo04/063351；以及在普雷斯塔(presta,l.g.)等人(2002)生物化學(xué)學(xué)會匯報(bào)(biochem.soc.trans.)30(4):487-490；謝爾頓(shields,r.l.)等人(2002)生物化學(xué)雜志(j.biol.chem.)26；277(30):26733-26740和謝爾頓(shields,r.l.)等人(2001)生物化學(xué)雜志(j.biol.chem.)276(9):6591-6604)?？筫gfr抗體或介導(dǎo)adcc的其他抗體可以包含變體fc區(qū)，其中相對于野生型fc區(qū)，該變體fc區(qū)包括至少一個(gè)氨基酸修飾(例如，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、或更多個(gè)氨基酸修飾)，使得該分子相對于包含野生型fc區(qū)的分子而言具有增強(qiáng)的效應(yīng)子功能，可任選地其中該變體fc區(qū)包括在以下位置的任何一個(gè)或多個(gè)處的取代：221、243、247、255、256、258、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、300、301、303、305、307、308、309、310、311、312、316、320、322、326、329、330、332、331、333、334、335、337、338、339、340、359、360、370、373、376、378、392、396、399、402、404、416、419、421、430、434、435、437、438和/或439。在一個(gè)實(shí)施例中，變體fc區(qū)在以下任何一個(gè)或多個(gè)位置包含取代：329、298、330、332、333和/或334(例如s239d、s298a、a330l、i332e、e333a和/或k334a取代)?？筫gfr抗體可以包含變體fc區(qū)，其中相對于野生型fc區(qū)，該變體fc區(qū)包含至少一個(gè)氨基酸修飾(例如，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、或更多個(gè)氨基酸修飾)，使得該分子相對于包含野生型fc區(qū)的分子而言具有增強(qiáng)的效應(yīng)子功能，可任選地其中該變體fc區(qū)包括在以下位置的任何一個(gè)或多個(gè)處的取代：329、298、330、332、333和/或334(例如s239d、s298a、a330l、i332e、e333a和/或k334a取代)。在一個(gè)實(shí)施例中，具有變體或野生型fc區(qū)的抗體可以具有改變的糖基化模式，所述模式增加抗體的fc受體結(jié)合能力?？梢酝ㄟ^例如在具有改變的糖基化機(jī)構(gòu)的宿主細(xì)胞中表達(dá)抗體完成此類糖類修飾。在本領(lǐng)域中已經(jīng)說明了具有改變的糖基化機(jī)構(gòu)的細(xì)胞，并且這些細(xì)胞可以用作宿主細(xì)胞，在這些宿主細(xì)胞中表達(dá)本公開的重組抗體從而由此產(chǎn)生具有改變的糖基化的抗體。參見例如謝爾頓(shields,r.l.)等人(2002)生物化學(xué)雜志(j.biol.chem.)277:26733-26740；烏馬納(umana)等人(1999)自然生物技術(shù)(nat.biotech.)17:176-1，以及歐洲專利號：ep1,176,195；pct公開wo06/133148；wo03/035835；wo99/54342，這些文獻(xiàn)中各自的內(nèi)容通過引用以其整體結(jié)合在此。通常，具有改變的糖基化的此類抗體是“糖基化優(yōu)化的”，使得抗體具有特定的n-多糖結(jié)構(gòu)，其產(chǎn)生某些期望的性質(zhì)，包括但不限于與以下抗體相比增強(qiáng)的adcc和效應(yīng)細(xì)胞受體結(jié)合活性，這些抗體是未修飾的抗體或具有天然存在的恒定區(qū)并由鼠骨髓瘤nso和中國倉鼠卵巢(cho)細(xì)胞(朱(chu)和羅賓遜(robinson)，當(dāng)前生物技術(shù)(currentopinionbiotechnol.)2001,12:180-7)產(chǎn)生的抗體、hek293t表達(dá)的抗體或通常用于產(chǎn)生重組治療性抗體的其他哺乳動物宿主細(xì)胞系。在哺乳動物宿主細(xì)胞中產(chǎn)生的單克隆抗體包括在每個(gè)重鏈的asn297處的n-連接的糖基化位點(diǎn)。抗體上的聚糖典型地是復(fù)雜的雙觸角(biatennary)結(jié)構(gòu)，具有非常低的或沒有平分型n-乙酰葡糖胺(平分型glcnac)和高水平的核心巖藻糖基化作用。聚糖末端含有非常低的或不含末端唾液酸和可變量的半乳糖。關(guān)于糖基化對抗體功能的作用的綜述，參見，例如賴特(wright)和莫里森(morrison),生物技術(shù)趨勢(trendbiotechnol.)15:26-31(1997)。大量的工作顯示，抗體聚糖結(jié)構(gòu)的糖組成的改變可以改變fc效應(yīng)子功能。對抗體活性有貢獻(xiàn)的重要的碳水化合物結(jié)構(gòu)被認(rèn)為是經(jīng)由α-i,6連鍵附接至fc區(qū)n-連接的寡糖的最里面的n-乙酰葡糖胺(glacnac)殘基上的巖藻糖殘基(希爾茲(shields)等人，2002)。歷史上，在cho細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體在群體中含有大約2％至6％是非巖藻糖基化的。已經(jīng)報(bào)道yb2/0(大鼠骨髓瘤)和lecl3細(xì)胞系(cho系的凝集素突變體，該突變體具有有缺陷的gdp-甘露糖4,6-脫水酶，導(dǎo)致缺乏作為α6-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶底物的gdp-巖藻糖或gdp糖中間體)可產(chǎn)生具有78％至98％非巖藻糖基化種類的抗體。在其他實(shí)例中，rna干擾(rnai)或敲除技術(shù)可以用來改造細(xì)胞，以便降低fut8mrna轉(zhuǎn)錄物水平或完全敲除基因表達(dá)完全，并且此類抗體已被報(bào)道為含有高達(dá)70％非巖藻糖基化的聚糖?？筫gfr抗體或介導(dǎo)adcc的其他抗體可以例如在asn297處用糖鏈糖基化，所述抗體顯示出經(jīng)由其fc部分對fcγriii的增加的結(jié)合親和力。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，抗體將包含恒定區(qū)，該恒定區(qū)在fc區(qū)中包含改善抗體與fcγriiia和/或adcc的結(jié)合的至少一個(gè)氨基酸改變。如在此所使用，輔助或聯(lián)合給藥(共同給藥)包括呈相同或不同劑量形式的化合物的同時(shí)給藥，或化合物的分開給藥(例如，順序給藥)。因此，抗nkg2a和該第二治療劑可以在單個(gè)配制品中同時(shí)給予?？商娲兀筺kg2a和該第二治療劑可以配制用于單獨(dú)給藥以及同時(shí)或順序給予。在治療方法中，抗nkg2a抗體和該第二治療劑可以分開、一起或順序地給予，或在混合劑中給予。在一些實(shí)施例中，該抗原結(jié)合化合物是在給予該第二治療劑之前給予。例如，該抗nkg2a抗體可以是在給予該第二治療劑之前大約0至30天給予。在一些實(shí)施例中，抗nkg2a抗體是在給予該第二治療劑之前從大約30分鐘至大約2周、從大約30分鐘至大約1周、從大約1小時(shí)至大約2小時(shí)、從大約2小時(shí)至大約4小時(shí)、從大約4小時(shí)至大約6小時(shí)、從大約6小時(shí)至大約8小時(shí)、從大約8小時(shí)至1天、或從大約1至5天來給予。在一些實(shí)施例中,抗nkg2a抗體是在給予該第二治療劑同時(shí)給予的。在一些實(shí)施例中，抗nkg2a抗體是在給予該第二治療劑之后給予的。例如，抗nkg2a抗體可以在給予該第二治療劑之后大約0至30天來給予。在一些實(shí)施例中，抗nkg2a抗體是在給予該第二治療劑之后從大約30分鐘至大約2周、從大約30分鐘至大約1周、從大約1小時(shí)至大約2小時(shí)、從大約2小時(shí)至大約4小時(shí)、從大約4小時(shí)至大約6小時(shí)、從大約6小時(shí)至大約8小時(shí)、從大約8小時(shí)至1天、或從大約1至5天來給予。用于治療患有癌癥的人類的合適的治療方案包括例如向患者給予有效量的每種抑制nkg2a的抗體和結(jié)合和/或抑制人類egfr的抗體，其中該方法包括其中至少一個(gè)劑量的抗nkg2a抗體以1-10mg/kg體重的劑量給予以及至少一個(gè)劑量的抗egfr抗體以1-20mg/kg體重的劑量給予的至少一個(gè)給藥周期。在一個(gè)實(shí)施例中，該給藥周期在2周和8周之間。在一個(gè)實(shí)施例中，當(dāng)與抗egfr抗體組合施用時(shí)，抗nkg2a以有效中和淋巴細(xì)胞上的nkg2a受體的量給予至少一周，兩周，三周或四周。對在皮摩爾范圍的單鏈nkg2a-cd94-mfc多肽具有親和力(kd值)的抗nkg2a抗體，特別是具有seqidno:2和7的重鏈和輕鏈的抗體，分別對單鏈nkg2a-cd94-mfc多肽具有67pm的親和力(kd值)，以1-10mg/kg的劑量，當(dāng)每兩周給予時(shí)導(dǎo)致外周血淋巴細(xì)胞上的nkg2a的中和。在一個(gè)實(shí)施例中，該方法包括至少一個(gè)給藥周期，其中該周期是八周(或至少)的時(shí)間，其中對于該至少一個(gè)周期中的每一個(gè)，以1-10mg/kg體重的劑量給予兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)劑量的抗nkg2a抗體以及以0.1-20mg/kg體重的劑量給予兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)劑量的抗egfr抗體。在某些實(shí)施例中，抗nkg2a抗體的劑量(例如每個(gè)劑量)以10mg/kg給予。在某些實(shí)施例中，抗egfr抗體的劑量(例如每個(gè)劑量)以1-20mg/kg、任選地以1-10mg/kg、任選地以1-5mg/kg(例如約1、2、3、4或5mg/kg)給予。在一個(gè)實(shí)施例中，以400mg/m2初始劑量，隨后每周250mg/m2，任選每2周一次給予西妥昔單抗。在一個(gè)實(shí)施例中，以每2周6mg/kg的劑量給予帕木單抗(維克替比(vectibix)，amgen)。在某些實(shí)施例中，聯(lián)合治療允許以最大或批準(zhǔn)劑量的較低劑量(例如作為單一藥劑，或不存在抗nkg2a)給予抗egfr抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，抗nkg2a抗體和抗egfr抗體按以下劑量給予：(a)10mg/kg抗nkg2a抗體和1-10mg/kg(例如250mg/m2)的抗egfr抗體；(b)少于10mg/kg抗nkg2a抗體(例如至少1mg/kg)和1-10mg/kg(例如250mg/m2)的抗egfr抗體；或在此的任何實(shí)施例的一個(gè)方面中，約每2或4周給予一次抗nkg2a抗體。在此的任何實(shí)施例的一個(gè)方面中，約每一周給予一次抗egfr抗體。在此的任何實(shí)施例的一個(gè)方面中，約每兩周給予一次抗egfr抗體。在此的任何實(shí)施例的一個(gè)方面中，約每四周給予一次抗egfr抗體。在一個(gè)實(shí)例中，一種方法包括至少一個(gè)給藥周期，其中一劑量的抗nkg2a抗體以1-10mg/kg體重的劑量給予，并且至少一劑量的抗egfr抗體以1-10mg/kg體重的劑量給予，其中抗nkg2a抗體每約兩周給予一次(任選每四周給予一次)，并且抗egfr抗體每約一周給予一次或每兩周給予一次。在一個(gè)實(shí)施例中，該給藥周期在2周和8周之間。在一個(gè)實(shí)施例中，該給藥周期是2周。在一個(gè)實(shí)例中，抗egfr抗體是西妥昔單體并且沒兩周給予一次。例如，一種治療包括至少一個(gè)給藥周期，其中一劑量的抗nkg2a抗體以1-10mg/kg體重的劑量給予，并且至少一劑量的抗egfr抗體以1-10mg/kg體重的劑量給予(任選地對于第一次給藥的抗egfr的更高劑量的抗egfr)，其中抗nkg2a抗體每約兩周給予一次，并且抗egfr抗體每約兩周給予一次。在一個(gè)實(shí)施例中，提供了測試個(gè)體是否適合用抑制nkg2a的試劑和結(jié)合(并且例如誘導(dǎo)adcc朝向)和/或抑制人類egfr的活性的試劑治療的方法，該方法包括檢測在來自個(gè)體的生物樣品中表達(dá)hla-e核酸或多肽和egfr核酸或多肽的腫瘤細(xì)胞(例如hnscc腫瘤細(xì)胞)。個(gè)體具有表達(dá)hla-e核酸或多肽和egfr核酸或多肽的腫瘤細(xì)胞(或腫瘤細(xì)胞群體)的測定表明患者患有癌癥，其可以用抑制nkg2a的試劑與結(jié)合和/或抑制人類egfr或活性的試劑組合治療。實(shí)例實(shí)例1-抗nkg2a的劑量反應(yīng)對nk細(xì)胞活化的影響hnscc的免疫治療方法由于通過hnscc誘導(dǎo)的深刻的免疫抑制特別復(fù)雜，其潛在地降低免疫刺激作用的有效性(參見例如杜瑞(duray)等人(2010)免疫臨床發(fā)展(clin.dev.immunol)2010:1-15)。該實(shí)驗(yàn)的目的是探究靶向nkg2a的抗nkg2a抗體是否能夠消除hnscc細(xì)胞。通過分析cd107和cd137表達(dá)來測定抗nkg2a對nk細(xì)胞活化的劑量反應(yīng)的影響。4小時(shí)內(nèi)的cd107轉(zhuǎn)移是nk細(xì)胞釋放裂解顆粒的標(biāo)志(阿爾特(alter)等人，(2004)免疫方法雜志(jimmunolmethods)294(1-2):15-22)。在24小時(shí)內(nèi)cd137表達(dá)的增加與幾種淋巴細(xì)胞(包括nk細(xì)胞)的活化相關(guān)(科赫瑞特(kohrt)等人(2011)血液(blood)117(8):2423-2432)。對表達(dá)或不表達(dá)nkg2a(分別為nkg2a+nk細(xì)胞或nkg2a-nk細(xì)胞)的nk細(xì)胞進(jìn)行cd107和cd137表達(dá)的分析。由于抗體靶向nkg2a，預(yù)期其作用僅在nkg2a+nk細(xì)胞上可見，并且因此在實(shí)驗(yàn)中nkg2a-nk細(xì)胞可以被認(rèn)為是內(nèi)部對照。使用的效應(yīng)細(xì)胞是來自健康志愿者的新鮮分離的pbmc，并且靶細(xì)胞是hnscc細(xì)胞系或用hla-e轉(zhuǎn)染的k562細(xì)胞系的克隆。計(jì)數(shù)細(xì)胞并在完全培養(yǎng)基中每兩天傳代。將它們保持在培養(yǎng)物中達(dá)12代。在實(shí)驗(yàn)的前一天，計(jì)數(shù)細(xì)胞并調(diào)節(jié)至100,000個(gè)細(xì)胞/孔。測量活力并且必須超過90％。k562細(xì)胞系是k562克隆e6(hla-e陽性，cd32低)和k562克隆f7(hla-e陰性/低，cd32低)。通過流式細(xì)胞術(shù)篩選hla-e表達(dá)的人類頭頸癌細(xì)胞系(參見下表c)。選擇三種細(xì)胞系進(jìn)行功能測試：fadu(atcc#htb-43)、h-n(dsmz#acc417)和cal-27(dsmz#acc446)。表c使用的效應(yīng)細(xì)胞是來自健康志愿者的新鮮分離的pbmc。靶細(xì)胞是hnscc細(xì)胞系(fadu、h-n和cal-27)，以及用hla-e(克隆e6＝hla-e+，克隆f7＝hla-e-)轉(zhuǎn)染的k562細(xì)胞系的克隆，以e:t比為2.5/1。讀出在4小時(shí)是cd107，在24小時(shí)是cd137。測試7個(gè)供體(fadu和h-n)和2個(gè)供體(cal-27)。使用其重鏈氨基酸序列顯示于seqidno:2中且其輕鏈氨基酸序列顯示于seqidno:7中的抗nkg2a抗體，以10μg/ml的終濃度使用。圖1a和1b顯示了在對照或指示的靶細(xì)胞系存在下和在以10μg/ml的飽和劑量存在或不存在抗nkg2a下，nkg2a-nk(左)或nkg2a+nk細(xì)胞(右)上的cd107(頂部)和cd137(底部)facs讀數(shù)。細(xì)胞系根據(jù)hla-e表面表達(dá)水平從左到右排序。每個(gè)點(diǎn)代表來自健康志愿者的pbmc。圖1b顯示hnscc細(xì)胞系并且證明抗nkg2a可以恢復(fù)具有內(nèi)源性hla-e表達(dá)的hnscc或者用hla-e轉(zhuǎn)染的k562的裂解。該作用僅在nkg2a陽性nk細(xì)胞上觀察到，并且依賴于hla-e的表達(dá)水平。實(shí)際上，在具有中等至高h(yuǎn)la-e表達(dá)水平的細(xì)胞系上觀察到抗nkg2a效應(yīng)?？筺kg2a可以通過阻斷抑制性受體nkg2a與hla-e的相互作用來誘導(dǎo)nk介導(dǎo)的hla-e表達(dá)細(xì)胞系的裂解。這種效應(yīng)在用hla-e轉(zhuǎn)染的k562細(xì)胞系上觀察到，但更重要的是在具有內(nèi)源hla-e表達(dá)的hnscc細(xì)胞系如fadu和cal-27細(xì)胞系上觀察到?？筺kg2a效應(yīng)的程度取決于靶細(xì)胞的細(xì)胞表面的hla-e表達(dá)水平。實(shí)例2-抗egfr活性的hla-e抑制可以通過抗nkg2a克服表皮生長因子受體(egfr)(還有erbb-1；人類中的her1)是受體酪氨酸激酶的erbb/her家族中普遍表達(dá)的跨膜糖蛋白。egfr的高表達(dá)發(fā)生在大多數(shù)上皮惡性腫瘤(包括hnscc)中并且與不良預(yù)后相關(guān)。其通過天然配體的激活導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信號通路的啟動，這調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、侵入、血管生成和轉(zhuǎn)移的激活，從而驅(qū)動腫瘤生長?？筫gfr單克隆抗體西妥昔單抗被認(rèn)為通過阻斷egf受體途徑的致癌信號傳導(dǎo)和通過誘導(dǎo)fcγ受體介導(dǎo)的抗體依賴性細(xì)胞毒性(adcc)而起作用。然而，在hnscc中，adcc可以受誘導(dǎo)的深度免疫抑制的影響。同時(shí)，阻斷egf受體途徑的致癌信號傳導(dǎo)導(dǎo)致mica/b和ulbp蛋白家族的主要組織相容性復(fù)合體(mhc)i類相關(guān)抗原在腫瘤細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)，其被在nk細(xì)胞和t細(xì)胞亞群上的激活受體nkg2d識別。特別地，通過臨床egfr抑制劑降低了作為nkg2d的天然配體的這些應(yīng)激相關(guān)抗原的腫瘤細(xì)胞的表達(dá)，因此潛在地降低了腫瘤細(xì)胞對nk和t細(xì)胞的可見性(萬托瑞奧特(vantourout)等人，科學(xué)轉(zhuǎn)譯醫(yī)學(xué)(scitransmed)6:231ra49(2014)。設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)以探索egfr抑制抗體對抗nkg2a抗體激活hnscc中的nk細(xì)胞的能力的影響。使用從健康志愿者新鮮分離的pbmc作為效應(yīng)細(xì)胞，以及作為靶細(xì)胞的hnscc細(xì)胞系，通過分析cd107和cd137表達(dá)(參見實(shí)施例1的方法概述)來確定西妥昔單抗對nk細(xì)胞活化的劑量反應(yīng)的作用(fadu和h-n)，以e:t比為2.5/1。使用3個(gè)供體(在4小時(shí)內(nèi)讀出cd107)和4個(gè)供體(在24小時(shí)內(nèi)讀出cd137)讀出在4小時(shí)為cd107，在24小時(shí)為cd137。西妥昔單抗以劑量反應(yīng)，以10μg/ml開始的1/10系列稀釋進(jìn)行測試。對于一個(gè)健康志愿者，nk細(xì)胞被細(xì)分為nkg2a+和nkg2a-亞群。選擇次優(yōu)劑量的西妥昔單抗用于進(jìn)一步測試以探索egfr抑制抗體對抗nkg2a抗體激活hnscc中的nk細(xì)胞的能力的影響。0.001μg/ml(1ng/ml)劑量是用cd107和cd137讀數(shù)兩者觀察到的西妥昔單抗效應(yīng)的起點(diǎn)。0.01μg/ml(10ng/ml)劑量大約在西妥昔單抗效應(yīng)的ec50。使用新鮮分離的來自健康志愿者的pbmc作為效應(yīng)細(xì)胞和作為靶細(xì)胞的hnscc細(xì)胞系(fadu、h-n和cal-27)，用hla-e(克隆e6＝hla-e+，克隆f7＝hla-e-)轉(zhuǎn)染的k562細(xì)胞系的克隆，通過分析cd107和cd137表達(dá)(參見實(shí)例1的方法概述)評估抗nkg2a和亞最佳劑量的egfr抑制劑的組合效應(yīng)，以e:t比為2.5/1。使用7個(gè)供體(fadu和h-n)和2個(gè)供體(cal-27)讀出在4小時(shí)為cd107，在24小時(shí)為cd137。使用其重鏈氨基酸序列顯示于seqidno:2中且其輕鏈氨基酸序列顯示于seqidno:7中的抗nkg2a抗體，以對應(yīng)于飽和劑量的10μg/ml的終濃度使用，并且egfr抑制劑西妥昔單抗以0.001μg/ml或0.01μg/ml的兩個(gè)次優(yōu)劑量使用。飽和劑量的抗nkg2a增強(qiáng)了由次優(yōu)劑量的西妥昔單抗誘導(dǎo)的hnscc細(xì)胞系的adcc。在k562轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系上未觀察到西妥昔單抗依賴性adcc，因?yàn)樗鼈儾槐磉_(dá)egf-r?？筺kg2a作用僅在nkg2a陽性nk細(xì)胞上觀察到，并且依賴于hla-e的表達(dá)水平。實(shí)際上，在具有中等至高h(yuǎn)la-e表達(dá)水平的細(xì)胞系(fadu、cal-27和k562-hla-e克隆e6)上觀察到抗nkg2a效應(yīng)。圖2是對于fadu細(xì)胞顯示的代表性實(shí)例?？梢栽趫D2中看出飽和劑量的抗nkg2a增強(qiáng)了由次優(yōu)劑量的西妥昔單抗(ctx)誘導(dǎo)的hnscc細(xì)胞系的adcc。實(shí)例3-增加劑量的抗nkg2a與增加劑量的西妥昔單抗的聯(lián)合作用評估增加劑量的抗nkg2a與增加劑量的西妥昔單抗的聯(lián)合作用的效果，以觀察激活nk細(xì)胞對hnscc靶細(xì)胞的能力。實(shí)驗(yàn)試圖評估當(dāng)以飽和劑量使用西妥昔單抗時(shí)抗nkg2a治療是否仍能增強(qiáng)adcc，以及抗nkg2a效應(yīng)是否是劑量依賴性的。簡而言之，使用的效應(yīng)細(xì)胞是來自健康志愿者的新鮮分離的pbmc，靶細(xì)胞是hnscc細(xì)胞系(fadu、h-n和cal-27)，以及用hla-e(克隆e6＝hla-e+，克隆f7＝hla-e-)轉(zhuǎn)染的k562細(xì)胞系的克隆，以e:t比為2.5/1。使用2個(gè)供體，讀出在4小時(shí)是cd107，在24小時(shí)是cd137。使用其重鏈氨基酸序列顯示于seqidno:2中且其輕鏈氨基酸序列顯示于seqidno:7中的抗nkg2a抗體，以0.1和1μg/ml的兩個(gè)次最佳劑量，以及以10μg/ml的飽和劑量使用。西妥昔單抗以0.001μg/ml和0.01μg/ml(約ec50)的兩個(gè)次優(yōu)劑量和0.1μg/ml的飽和劑量在這些實(shí)驗(yàn)設(shè)置中使用。結(jié)果在圖3a和3b中示出。圖3a顯示cd107在沒有靶標(biāo)和k562-hla-e轉(zhuǎn)染子的對照上讀出。每個(gè)健康志愿者由不同的符號表示：正方形或圓形。交叉打開的符號對應(yīng)于其中抗nkg2a被10μg/mlhigg4同種型對照取代的情況，其與0.1μg/ml西妥昔單抗共溫育?？梢钥闯?，抗nkg2a抗體的效果是劑量依賴性的，取決于hla-e表達(dá)水平，并且在以高水平表達(dá)hla-e的克隆e6中0.1μg/ml的飽和劑量的西妥昔單抗仍觀察到。在克隆f7(低hla-e表達(dá)水平)中，抗nkg2a的作用有限，并且高劑量(例如飽和劑量)的抗nkg2a沒有進(jìn)一步增強(qiáng)該作用。圖3b顯示了在hnscc細(xì)胞系上的cd107讀出。每個(gè)健康志愿者由不同的符號表示：正方形或圓形。交叉打開的符號對應(yīng)于其中抗nkg2a被10μg/mlhigg4同種型對照取代的情況，其與0.1μg/ml西妥昔單抗共溫育。可以看出，抗nkg2a抗體的效果是劑量依賴性的，取決于hla-e表達(dá)水平，并且在以高水平表達(dá)的hla-e的fadu或cal-27中的0.1μg/ml的西妥昔單抗的飽和劑量下觀察到?？筺kg2a抗體的效果是劑量依賴性的，取決于hla-e表達(dá)水平，并且在0.1μg/ml的西妥昔單抗的飽和劑量下仍然觀察到。實(shí)例4-hla-e在hnscc中(包括在hpv16基因型中)一致地表達(dá)研究了hla-e在hnscc患者腫瘤上的表達(dá)。從患有臨床階段iii、iv或iva癌癥鱗狀細(xì)胞癌，nos(16個(gè)原發(fā)性腫瘤和4個(gè)腫瘤等級為i至iv的轉(zhuǎn)移性腫瘤(ln))疾病的20位患者中獲得樣品。分解為：口腔和/或底部(n＝3)、喉(n＝6)、咽(n＝1)、舌(n＝7)、扁桃體(n＝3)。hpv16基因型(14/20陽性)和hpvp16inka檢測(7/14陽性)。使用5μg/ml的鼠igg1抗人類hla-e(3d12)在冷凍組織切片上進(jìn)行染色以染色5μg/ml的hla-e和鼠igg1抗nkg2a(z270)以染色nkg2a，對照同種型：在5μg/ml的鼠的igg1(dakoa/s，denmark)，使用envisiontm檢測試劑盒(dakoa/s，denmark)進(jìn)行檢測。包括健康的人類陽性對照組織(胎盤、扁桃體和淋巴結(jié))以及轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。單獨(dú)地，在腫瘤樣品中評估腫瘤和基質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤。使用的hla-e和nkg2a染色方案如下：達(dá)到室溫、用pbs再水化、在pbs中封閉內(nèi)源性過氧化物酶0.3％h2o2、洗滌pbs3x、用pbs飽和5％山羊血清、用稀釋在pbs中的ab100μl孵育、洗滌pbs3x、用envision試劑盒孵育(2滴)、洗滌pbs3x、與dab孵育100μl、漂洗h2od、用蘇木精(2滴)孵育、漂洗h2od、ottix成型浴、ottix加浴、并用diamount滑動切割器和安裝器安裝。除了染色水平0-3的評分之外，當(dāng)存在時(shí)記錄信號的細(xì)胞類型和細(xì)胞定位。它被歸類為膜、細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞外的細(xì)胞定位。ihc評分是如下進(jìn)行的：0：負(fù)信號1：在<25％-50％的細(xì)胞類型中微弱至弱信號2：中間信號強(qiáng)度但表示為>50％的細(xì)胞類型，或強(qiáng)信號但表示為<25％-50％的細(xì)胞類型3：強(qiáng)信號在細(xì)胞亞型內(nèi)的所有細(xì)胞上擴(kuò)散表達(dá)結(jié)果顯示從1+到3+的hla-e的彌漫性細(xì)胞質(zhì)染色。hla-e染色跨越不同的腫瘤位置/類型，并且包括hpv陽性患者，包括hpv16基因型和以hpvp16inka表達(dá)為特征的樣品。圖4顯示在不同腫瘤位置/類型中從1+到3+的hla-e染色。有趣的是，在來自通常認(rèn)為具有最差預(yù)后(扁桃體)的腫瘤類型的所有樣品中染色為3+。結(jié)果還顯示hla-e在hpv陽性患者中一致表達(dá)，包括hpv16基因型。圖5顯示了不同腫瘤患者的hpv16和p16狀態(tài)的細(xì)節(jié)；通常認(rèn)為具有最差預(yù)后的腫瘤類型(扁桃體)的所有樣品都是hpv16陽性和p16inka陽性。喉癌和舌腫瘤也主要是hpv16陽性，并且具有顯著的p16inka陽性樣品的份額。圖6顯示作為hpv16和p16inka的函數(shù)的腫瘤類型(轉(zhuǎn)移性或原發(fā)性腫瘤)；所有轉(zhuǎn)移性腫瘤均為hpv16陽性，且均為p16inka陽性。結(jié)果進(jìn)一步顯示hla-e表達(dá)以及hpv陽性腫瘤以強(qiáng)淋巴細(xì)胞浸潤為特征，如圖7所示。此外，腫瘤樣品中的淋巴細(xì)胞表達(dá)nkg2a，在hpv16陽性和p16inka陽性的患者中nkg2a的最強(qiáng)染色。實(shí)例5-用于治療癌癥的人臨床試驗(yàn)，其中重復(fù)注射人源化z270作為單一試劑該試驗(yàn)的主要目的是評估術(shù)前iph2201(包含s241p突變的人源化抗nkg2a抗體z270)在患有可操作的口腔鱗狀細(xì)胞癌的患者中的抗腫瘤活性。次要目的是評估iph2201的安全性、藥代動力學(xué)、免疫原性和包括腫瘤內(nèi)生物標(biāo)志物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：該試驗(yàn)是一個(gè)開放標(biāo)簽單臂階段ib-ii研究，該研究包括一個(gè)進(jìn)入部分。用具有可測量的、臨床中期或高風(fēng)險(xiǎn)、iii期或iva口腔鱗狀細(xì)胞癌的先前未治療的患者將用單劑iph2201i.v.每2周(q2w)給藥4次，通過靜脈內(nèi)(i.v.)途徑經(jīng)1小時(shí)。前6名患者將以4mg/kgq2wx4的劑量接受iph2201。在以4mg/kg治療的3名第一患者中，觀察到iph2201的第一次給予之間的最小間隔為一周。隨后的患者將以10mg/kgq2wx4的劑量治療，在以4mg/kg治療的最后一個(gè)患者中第一次給予后4周的最小隨訪后，安全委員會允許劑量增加。在最后一次給予iph2201后，根據(jù)組織病理學(xué)危險(xiǎn)因素進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)局部區(qū)域性手術(shù)治療，隨后輔助治療(放射治療(rt)或放射化學(xué)治療(rct))。在腫瘤進(jìn)展的情況下，將立即開始局部-區(qū)域治療。在第三次給予iph2201之前和在最后一次給予iph2201之后2周，在手術(shù)前臨床和放射學(xué)評價(jià)抗腫瘤活性。根據(jù)recist1.1標(biāo)準(zhǔn)在靶損傷上獲得腫瘤測量。相同的成像技術(shù)用于在基線和術(shù)前期間，用于評價(jià)主要終點(diǎn)和/或手術(shù)后的功效評估，用于監(jiān)測潛在的復(fù)發(fā)。在所有患者中進(jìn)行通過適當(dāng)?shù)某上窦夹g(shù)，在研究者的判斷(計(jì)算機(jī)斷層攝影(ct)掃描和/或磁共振成像(mri))的評估，以及可及的腫瘤損傷的照片。通過在基線時(shí)的活組織檢查獲得新鮮腫瘤樣品，并在手術(shù)時(shí)收集切除的標(biāo)本?；颊邔⒃诘谝淮谓o藥周期后跟蹤一年。在研究訪視結(jié)束后，復(fù)發(fā)和存活將根據(jù)當(dāng)?shù)刈龇ㄔ谘芯亢笥涗浟硗?年。在此所引用的所有文獻(xiàn)(包括出版物、專利申請、以及專利)均通過引用以其全部內(nèi)容特此結(jié)合，并且引用的程度如同每個(gè)文獻(xiàn)被個(gè)別地并且明確地指示通過引用結(jié)合并且以其全部內(nèi)容在此闡述(至法律允許的最大程度)，而不考慮在此其他地方做出的特定文件的任何單獨(dú)提供的結(jié)合。除非在此另外指示或與上下文明顯矛盾，否則在描述本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“一個(gè)/種”和“該”以及類似指稱對象的使用應(yīng)解釋為包括單數(shù)和復(fù)數(shù)二者。除非另有說明，所有在此提供的精確值均代表相應(yīng)的近似值(例如，所有精確的示例值是相對于具體因子提供的，或者測量可以視為還包括提供相應(yīng)的近似測量，在適當(dāng)時(shí)由“大約”修飾)。其中“約”與數(shù)字結(jié)合使用，這可以被指定為包括對應(yīng)于指定數(shù)字的+/-10％的值。除非另外陳述或與上下文明顯矛盾，否則在此對于使用了涉及一種或多種要素的術(shù)語如“包含”、“具有”、“包括”或“含有”的本發(fā)明的任何方面或?qū)嵤├拿枋?，旨在提供對“由那一種或多種特定要素組成”、“基本上由那一種或多種特定要素組成”或“基本上包含那一種或多種特定要素”的本發(fā)明的類似方面或?qū)嵤├闹С?例如，除非另外陳述或與上下文明顯矛盾，否則在此所述的包含特定要素的組合物應(yīng)理解為也描述由那個(gè)要素組成的組合物)。本文提供的任何和所有實(shí)例或示例性語言(例如“例如”)的應(yīng)用僅旨在更好地說明本發(fā)明，而不對另外要求保護(hù)的本發(fā)明范圍做出限制。說明書中的語言不應(yīng)當(dāng)被解釋為指示任何未要求保護(hù)的要素為實(shí)踐本發(fā)明所必需的。序列表<110>依奈特制藥公司<120>使用抗nkg2a試劑治療癌癥<130>nkg2ahn<150>62/067,642<151>2014-10-23<160>17<170>patentin版本3.5<210>1<211>233<212>prt<213>智人<400>1metaspasnglnglyvaliletyrseraspleuasnleuproproasn151015prolysargglnglnarglysprolysglyasnlysserserileleu202530alathrgluglngluilethrtyralagluleuasnleuglnlysala354045serglnasppheglnglyasnasplysthrtyrhiscyslysaspleu505560proseralaproglulysleuilevalglyileleuglyileilecys65707580leuileleumetalaservalvalthrilevalvalileproserthr859095leuileglnarghisasnasnserserleuasnthrargthrglnlys100105110alaarghiscysglyhiscysprogluglutrpilethrtyrserasn115120125sercystyrtyrileglylysgluargargthrtrpglugluserleu130135140leualacysthrserlysasnserserleuleuserileaspasnglu145150155160gluglumetlyspheleuserileileserprosersertrpilegly165170175valpheargasnserserhishisprotrpvalthrmetasnglyleu180185190alaphelyshisgluilelysaspseraspasnalagluleuasncys195200205alavalleuglnvalasnargleulysseralaglncysglyserser210215220ileiletyrhiscyslyshislysleu225230<210>2<211>452<212>prt<213>人工的<220><223>小鼠/人嵌合的<400>2glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala151015servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530trpmetasntrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glyargileaspprotyraspsergluthrhistyralaglnlysleu505560glnglyargvalthrmetthrthraspthrserthrserthralatyr65707580metgluleuargserleuargseraspaspthralavaltyrtyrcys859095alaargglyglytyrasppheaspvalglythrleutyrtrpphephe100105110aspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserseralaserthr115120125lysglyproservalpheproleualaprocysserargserthrser130135140gluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyrpheproglu145150155160provalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyvalhis165170175thrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuserser180185190valvalthrvalproserserserleuglythrlysthrtyrthrcys195200205asnvalasphislysproserasnthrlysvalasplysargvalglu210215220serlystyrglyproprocysproprocysproalaproglupheleu225230235240glyglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu245250255metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser260265270glngluaspprogluvalglnpheasntrptyrvalaspglyvalglu275280285valhisasnalalysthrlysproargglugluglnpheasnserthr290295300tyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasn305310315320glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysglyleuproserser325330335ileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluprogln340345350valtyrthrleuproproserglngluglumetthrlysasnglnval355360365serleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealaval370375380glutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpro385390395400provalleuaspseraspglyserphepheleutyrserargleuthr405410415valasplysserargtrpglngluglyasnvalphesercysserval420425430methisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleu435440445serleuglylys450<210>3<211>452<212>prt<213>人工的<220><223>小鼠/人嵌合的<400>3gluvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyglu151015serleulysilesercyslysglyserglytyrserphethrsertyr202530trpmetasntrpvalargglnmetproglylysglyleuglutrpmet354045glyargileaspprotyraspsergluthrhistyrserproserphe505560glnglyglnvalthrileseralaasplysserileserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargglyglytyrasppheaspvalglythrleutyrtrpphephe100105110aspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserseralaserthr115120125lysglyproservalpheproleualaprocysserargserthrser130135140gluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyrpheproglu145150155160provalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyvalhis165170175thrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuserser180185190valvalthrvalproserserserleuglythrlysthrtyrthrcys195200205asnvalasphislysproserasnthrlysvalasplysargvalglu210215220serlystyrglyproprocysproprocysproalaproglupheleu225230235240glyglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu245250255metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser260265270glngluaspprogluvalglnpheasntrptyrvalaspglyvalglu275280285valhisasnalalysthrlysproargglugluglnpheasnserthr290295300tyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasn305310315320glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysglyleuproserser325330335ileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluprogln340345350valtyrthrleuproproserglngluglumetthrlysasnglnval355360365serleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealaval370375380glutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpro385390395400provalleuaspseraspglyserphepheleutyrserargleuthr405410415valasplysserargtrpglngluglyasnvalphesercysserval420425430methisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleu435440445serleuglylys450<210>4<211>452<212>prt<213>人工的<220><223>小鼠/人嵌合的<400>4gluvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyglu151015serleuargilesercyslysglyserglytyrserphethrsertyr202530trpmetasntrpvalargglnmetproglylysglyleuglutrpmet354045glyargileaspprotyraspsergluthrhistyrserproserphe505560glnglyhisvalthrileseralaasplysserileserthralatyr65707580leuglntrpserserleulysalaseraspthralamettyrtyrcys859095alaargglyglytyrasppheaspvalglythrleutyrtrpphephe100105110aspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserseralaserthr115120125lysglyproservalpheproleualaprocysserargserthrser130135140gluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyrpheproglu145150155160provalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyvalhis165170175thrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuserser180185190valvalthrvalproserserserleuglythrlysthrtyrthrcys195200205asnvalasphislysproserasnthrlysvalasplysargvalglu210215220serlystyrglyproprocysproprocysproalaproglupheleu225230235240glyglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu245250255metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser260265270glngluaspprogluvalglnpheasntrptyrvalaspglyvalglu275280285valhisasnalalysthrlysproargglugluglnpheasnserthr290295300tyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasn305310315320glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysglyleuproserser325330335ileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluprogln340345350valtyrthrleuproproserglngluglumetthrlysasnglnval355360365serleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealaval370375380glutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpro385390395400provalleuaspseraspglyserphepheleutyrserargleuthr405410415valasplysserargtrpglngluglyasnvalphesercysserval420425430methisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleu435440445serleuglylys450<210>5<211>452<212>prt<213>人工的<220><223>小鼠/人嵌合的<400>5gluvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala151015thrvallysilesercyslysvalserglytyrthrphethrsertyr202530trpmetasntrpvalglnglnalaproglylysglyleuglutrpmet354045glyargileaspprotyraspsergluthrhistyralaglulysphe505560glnglyargvalthrilethralaaspthrserthraspthralatyr65707580metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys859095alathrglyglytyrasppheaspvalglythrleutyrtrpphephe100105110aspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserseralaserthr115120125lysglyproservalpheproleualaprocysserargserthrser130135140gluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyrpheproglu145150155160provalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyvalhis165170175thrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuserser180185190valvalthrvalproserserserleuglythrlysthrtyrthrcys195200205asnvalasphislysproserasnthrlysvalasplysargvalglu210215220serlystyrglyproprocysproprocysproalaproglupheleu225230235240glyglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu245250255metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser260265270glngluaspprogluvalglnpheasntrptyrvalaspglyvalglu275280285valhisasnalalysthrlysproargglugluglnpheasnserthr290295300tyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasn305310315320glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysglyleuproserser325330335ileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluprogln340345350valtyrthrleuproproserglngluglumetthrlysasnglnval355360365serleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealaval370375380glutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpro385390395400provalleuaspseraspglyserphepheleutyrserargleuthr405410415valasplysserargtrpglngluglyasnvalphesercysserval420425430methisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleu435440445serleuglylys450<210>6<211>452<212>prt<213>人工的<220><223>小鼠/人嵌合的<400>6glnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslysproglyala151015servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrsertyr202530trpmetasntrpvalargglnalaproglyglnglyleuglutrpmet354045glyargileaspprotyraspsergluthrhistyralaglnlysphe505560glnglyargvalthrmetthrargaspthrserthrserthrvaltyr65707580metgluleuserserleuargsergluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargglyglytyrasppheaspvalglythrleutyrtrpphephe100105110aspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserseralaserthr115120125lysglyproservalpheproleualaprocysserargserthrser130135140gluserthralaalaleuglycysleuvallysasptyrpheproglu145150155160provalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyvalhis165170175thrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuserser180185190valvalthrvalproserserserleuglythrlysthrtyrthrcys195200205asnvalasphislysproserasnthrlysvalasplysargvalglu210215220serlystyrglyproprocysproprocysproalaproglupheleu225230235240glyglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu245250255metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser260265270glngluaspprogluvalglnpheasntrptyrvalaspglyvalglu275280285valhisasnalalysthrlysproargglugluglnpheasnserthr290295300tyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasn305310315320glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysglyleuproserser325330335ileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluprogln340345350valtyrthrleuproproserglngluglumetthrlysasnglnval355360365serleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealaval370375380glutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpro385390395400provalleuaspseraspglyserphepheleutyrserargleuthr405410415valasplysserargtrpglngluglyasnvalphesercysserval420425430methisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleu435440445serleuglylys450<210>7<211>214<212>prt<213>人工的<220><223>小鼠/人嵌合的<400>7aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalasergluasniletyrsertyr202530leualatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrasnalalysthrleualagluglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnhishistyrglythrproarg859095thrpheglyglyglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>8<211>5<212>prt<213>小家鼠<400>8sertyrtrpmetasn15<210>9<211>11<212>prt<213>小家鼠<400>9argileaspprotyraspsergluthrhistyr1510<210>10<211>17<212>prt<213>人工的<220><223>小鼠/人嵌合的<400>10argileaspprotyraspsergluthrhistyrserproserphegln151015gly<210>11<211>17<212>prt<213>人工的<220><223>小鼠/人嵌合的<400>11argileaspprotyraspsergluthrhistyralaglnlysleugln151015gly<210>12<211>16<212>prt<213>小家鼠<400>12glyglytyrasppheaspvalglythrleutyrtrpphepheaspval151015<210>13<211>11<212>prt<213>小家鼠<400>13argalasergluasniletyrsertyrleuala1510<210>14<211>7<212>prt<213>小家鼠<400>14asnalalysthrleualaglu15<210>15<211>9<212>prt<213>小家鼠<400>15glnhishistyrglythrproargthr15<210>16<211>119<212>prt<213>小家鼠<400>16gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvallysproglygly151015serleulysleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr202530alametsertrpvalargglnserproglulysargleuglutrpval354045alagluileserserglyglysertyrthrtyrtyrproaspthrval505560thrglyargphethrileserargaspasnalalysasnthrleutyr65707580leugluileserserleuargsergluaspthralamettyrtyrcys859095thrarghisglyasptyrproargphepheaspvaltrpglyalagly100105110thrthrvalthrvalserser115<210>17<211>107<212>prt<213>小家鼠<400>17glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserprogly151015glulysvalthrmetthrcysseralaserserservalsertyrile202530tyrtrptyrglnglnlysproargserserprolysprotrpiletyr354045leuthrserasnleualaserglyvalproalaargpheserglyser505560glyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpserglyasnprotyrthr859095pheglyglyglythrlysleugluilelysarg100105當(dāng)前第1頁12