說明書序列表[000]本申請含有已以ascii格式以電子方式提交且特此以引用的方式整體并入的序列表。2015年6月16日創(chuàng)建的所述ascii副本命名為b7h1-275wo1_sl.txt并且大小為103,313字節(jié)。領(lǐng)域用于癌癥的治療方法。背景放射療法(rt)仍然是實體惡性腫瘤的管理中最重要的非手術(shù)治療，其中所有癌癥患者中的約50％-60％接受這種治療。rt包括于治療方案中減少疾病復(fù)發(fā)并且提高大多數(shù)常見癌癥(1-3)中的總體存活率。雖然有效，但許多患者患有局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移性疾病。除了rt的直接細(xì)胞減少作用之外，出現(xiàn)的證據(jù)表明，抗腫瘤免疫應(yīng)答的產(chǎn)生可以在該治療的有效性中發(fā)揮重要作用(4，5)。rt可以導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞上外鈣網(wǎng)蛋白的表達(dá)以及若干損傷相關(guān)分子模式(damp)(包括高遷移率族匣1(hmgb1)和atp)的釋放，其可導(dǎo)致抗原呈遞細(xì)胞(apc)的募集和活化以及腫瘤抗原特異性t細(xì)胞應(yīng)答的引發(fā)(6-10)。盡管這種免疫逃逸頻繁發(fā)生，但腫瘤復(fù)發(fā)仍然是接受rt的患者中的死亡率的主要原因(11)。免疫抑制的關(guān)鍵驅(qū)動物的鑒別和抑制可以增強抗腫瘤免疫應(yīng)答，具有改善患者結(jié)果的潛力。因此迫切需要對治療失敗和更有效的rt組合方法的新見解。程序性死亡-1(pd-1)/程序性死亡配體1(pd-l1)軸通過抑制t細(xì)胞功能并通過活化的t細(xì)胞的凋亡參與維持外周耐受性和調(diào)節(jié)急性炎癥性應(yīng)答(12，13)。除了結(jié)合pd-1，pd-l1還可以通過與cd80相互作用來抑制t細(xì)胞功能(14)。pd-l1的表達(dá)是可誘導(dǎo)的，并且被認(rèn)為對局部炎性環(huán)境、特別是i型和ii型干擾素(ifn)有反應(yīng)(12、15、16)。雖然在大多數(shù)正常組織中幾乎檢測不到，但已在多種惡性腫瘤中描述了pd-l1的表達(dá)(在(17)中綜述)。重要地是，使用pd-1抑或pd-l1靶向單克隆抗體(mab)進行的最近臨床研究已證明了在晚期疾病患者中的令人鼓舞的應(yīng)答(18-21)。希望用于組合放射療法與pd-1和/或pd-l1拮抗劑的給藥策略對患有癌癥的患者產(chǎn)生最大益處。概述根據(jù)描述，一種治療患者中的癌癥的方法包括a.給予至少一個劑量的放射療法；并且b.給予至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑，其中至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑在與放射療法劑量同一天或達(dá)且包括4天之后給予。在另一種模式中，該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑是至少一種pd-1和/或pd-l1抗體或其功能部分。在一方面，該放射療法是分割放射療法。在一種模式中，該分割放射療法包括從2至7個部分。在另一種模式中，該分割放射療法包括5個部分。在一個實施例中，這些放射療法部分在連續(xù)天數(shù)給予。在另一個實施例中，這些放射療法部分在第1天、第2天、第3天、第4天、以及第5天給予。在一個實施例中，該放射療法包括在5個部分中約10gy。在一方面，該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑在至少第1天和/或在第5天給予。在一種模式中，多次給予該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑。例如，該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑可一周3次給予。在一個實施例中，該抗pd-1和/或pd-l1抗體或其功能部分是medi4736。在另一個實施例中，該抗pd-1和/或抗pd-l1抗體或其功能部分是潘布陸利珠單抗(pembrolizumab)、尼沃魯單抗(nivolumab)、bms-936558、amp-224或mpdl3280a。在一方面，該癌癥是黑色素瘤、結(jié)腸直腸癌或乳腺癌。在另一方面，進行多于一個治療周期。在另一方面，進行從2-8個治療周期。在一種模式中，治療周期是每周一次或每隔一周一次。另外的目的和優(yōu)點將在隨后的描述中部分闡述，并且部分目的和優(yōu)點在描述中將是顯而易見的，或可通過實踐來領(lǐng)會。這些目的和優(yōu)點將通過附加權(quán)利要求中特別指出的要素和組合來實現(xiàn)和獲得。應(yīng)了解，上文的一般描述與下文的詳細(xì)描述均只是例示性和解釋性的，而并非為權(quán)利要求的限制。并入并構(gòu)成本說明書的一部分的附圖示出了一個(若干個)實施例，并與說明書一起用于解釋在此描述的原理。附圖簡要說明圖1a-圖1f示出阻斷pd-1/pd-l1軸加強分割放射療法的活性。a和b，在用約10gy(2gy的5個每日部分)治療之后第1天、第3天或第7天從腫瘤分離的ct26細(xì)胞上pd-l1表達(dá)的中值熒光強度(a)和代表性直方圖(b)。c和d，攜帶ct26腫瘤的小鼠接受單獨的抑或與以10mg/kg每周三次給藥持續(xù)達(dá)3周的αpd-1(c)抑或αpd-l1(d)mab組合的以2gy的5個每日部分遞送的約10gyrt。e，接受單獨的抑或與αpd-l1mab組合的以4gy的5個每日部分遞送的20gyrt的攜帶4t1腫瘤的小鼠中在療法開始后10天的腫瘤體積。f，攜帶4434腫瘤的小鼠接受單獨的抑或與αpd-l1mab組合的以2gy的5個每日部分遞送的約10gyrt。實驗組包括至少7只小鼠并且代表至少2個獨立實驗。a、e和f示出平均值±sem。*，p＜0.05，**，p＜0.01，曼-惠特尼檢驗(mann-whitneytest)。c和d，*表示與對照小鼠相比較時的顯著性。+表示與單一療法相比較時的顯著性。***/+++，p＜0.001，對數(shù)秩(曼特爾-考克斯(mantel-cox))檢驗。圖2a-圖2c展示分割rt和αpd-l1mab組合的治療活性依賴于cd8+t-淋巴細(xì)胞的活性。a，在使用2gy的5個部分和αpd-l1mab的組合療法治療當(dāng)天、之后7天和11天的腫瘤體積。將免疫細(xì)胞亞群(cd8、cd4抑或nk細(xì)胞)在治療之前消減1天，其中消減維持持續(xù)2周。***，p＞0.001，*，p＞0.01，*，p＞0.05，曼-惠特尼檢驗。b，存活曲線。***/+++，p＜0.001，對數(shù)秩(曼特爾-考克斯(mantel-cox))檢驗。數(shù)據(jù)代表10只小鼠/組。c，表示證實免疫細(xì)胞亞群的消減的外周血的密度圖。圖3a-圖3c示出分割rt和αpd-l1mab組合產(chǎn)生保護性免疫記憶。a，在用5×105個ct26細(xì)胞雙側(cè)再激發(fā)之后lts小鼠的存活曲線。*相較于對照小鼠p＜0.05(對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)。b，表示從用rt和αpd-l1mab初始治療的腫瘤初試或lts小鼠分離的cd8+t細(xì)胞的ifnγ產(chǎn)生的點印跡。c，在與h2-ld限制肽(ah1(spsyvyhqf)(seqidno：91)；定義的ct26腫瘤相關(guān)抗原或β-半乳糖苷酶(tphparigl)(seqidno：92)；原核來源的對照肽)或50gy照射的ct26細(xì)胞一起共培養(yǎng)5天、接著用50gy照射的ct26細(xì)胞引發(fā)之后，從用rt和αpd-l1mab初始治療的腫瘤初試或lts小鼠分離的ifnγ+cd8+t細(xì)胞的頻率。*p＜0.05(曼-惠特尼檢驗)。數(shù)據(jù)代表2個獨立實驗。圖4a-圖4c示出分割rt增加體內(nèi)腫瘤細(xì)胞pd-l1表達(dá)并且依賴于cd8+t細(xì)胞。a，在體外用rt(2.5-10gy)治療之后ct26細(xì)胞上pd-l1的表達(dá)。b和c，在接受2gy的5個每日部分中約10gy與cd8、cd4或nk細(xì)胞消減抗體的組合之后3天從腫瘤分離的ct26細(xì)胞(作為cd45-細(xì)胞門控的)上pd-l1表達(dá)的代表性等值線圖(b)和中值熒光強度(c)。*p＜0.05(曼-惠特尼檢驗)。實驗組包括至少5只小鼠并且代表至少2個獨立實驗。圖5a-圖5e示出ifnγ的cd8+t細(xì)胞產(chǎn)生在分割rt之后負(fù)責(zé)上調(diào)腫瘤細(xì)胞上的pd-l1表達(dá)。a，在與20ng/mlifnγ、tnfα或兩種細(xì)胞因子的組合一起共培養(yǎng)24小時之后，野生型ct26腫瘤細(xì)胞(wt)或用非靶向?qū)φ?ntc)或ifnγr1shrna轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞上pd-l1的表達(dá)。b，示出在用pbs或佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(pma)和離子霉素治療之后，cd8+t細(xì)胞的ifnγ和tnfα表達(dá)的密度圖；c，在與pbs或pma/離子霉素活化的脾細(xì)胞一起共培養(yǎng)24小時之后pd-l1陽性ct26腫瘤細(xì)胞(wt、ntcshrna或ifnγr1shrna)的頻率。n/s＝p＞0.05，***p＜0.001**p＜0.01(雙尾學(xué)生t檢驗)。d和e，表示在體內(nèi)在αifnγ阻斷mab(或同種型對照)存在下在用rt(5個部分中約10gy)治療之后ct26腫瘤細(xì)胞上pd-l1表達(dá)的等值線圖(d)和中值熒光強度(e)。**p＜0.01，(曼-惠特尼檢驗)。實驗組包括至少5只小鼠。圖6a-圖6d展示給藥方案影響結(jié)果，其中僅在同時而非序貫αpd-l1mab療法情況下觀察到rt增強。a，劑量時程研究的圖解。小鼠接受分割劑量rt(如2gy的5個每日部分中約10gy)，單獨地或與在rt周期的第1天(方案a)、rt周期的第5天(方案b)或rt的最后一個劑量之后7天(方案c)開始的αpd-l1mab組合。b，治療的存活曲線。++，相較于單一療法p＜0.01(對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)。c和d，在rt的最后一個劑量之后24小時和7天cd4+(c)和cd8+(d)t細(xì)胞上pd-1的表達(dá)。*p＜0.05(曼-惠特尼檢驗)。實驗組包括至少5只小鼠并且代表至少2個獨立實驗。圖7示出阻斷pd-1和pd-l1兩者未進一步增強在攜帶ct26腫瘤的小鼠中與分割rt組合的功效。a)在分割劑量rt(如2gy的5個每日部分中約10gy)之后的存活曲線，單獨地或與αpd-1、αpd-l1或兩種mab的組合聯(lián)合給藥每周3次持續(xù)3周。n/s，p＞0.05，對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗。實驗組包括至少5只小鼠并且代表至少2個獨立實驗。圖8a-圖8b示出使用分割rt和αpd-1抑或αpd-l1mab的組合療法在小鼠中是良好耐受的。，攜帶ct26腫瘤的小鼠接受單獨的抑或與以10mg/kg每周三次給藥持續(xù)3周或1周的αpd-l1mab組合的以2gy的5個每日部分遞送的10gyrt。實驗組包括至少7只小鼠并且代表至少2個獨立實驗。n/s，p＞0.05，曼-惠特尼檢驗。圖9a-圖9c示出用αpd-1或αpd-l1mab治療腫瘤細(xì)胞對體外放射誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡不敏感。在2μg/mlαpd1或αpd-l1存在或不存在下用rt(2.5-10gy)處理的ct26細(xì)胞(a)、4t1細(xì)胞(b)和4434細(xì)胞(c)的克隆發(fā)生存活曲線。圖10a-圖10c示出給藥方案影響結(jié)果。a)在分割劑量rt(如2gy的5個每日部分中10gy)之后的腫瘤體積，單獨地或與在rt周期的第1天(方案a)、rt周期的第5天(方案b)或rt的最后一個劑量之后7天(方案c)開始的αpd-l1mab組合。b和c)rt治療的小鼠的腫瘤體積展示跨不同給藥方案相等的腫瘤體積。n/s，p＞0.05(曼-惠特尼檢驗)。實驗組包括至少5只小鼠并且代表至少2個獨立實驗。圖11示出急性對比慢性給予αpd-l1mab不影響組合療法的功效。a，攜帶ct26腫瘤的小鼠接受單獨的抑或與以10mg/kg每周三次給藥持續(xù)3周或1周的αpd-l1mab組合的以2gy的5個每日部分遞送的10gyrt。實驗組包括至少7只小鼠并且代表至少2個獨立實驗。n/s，p＞0.05，對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗。序列說明表1提供當(dāng)前實施例中提及的某些序列的列表。cdr以粗體且加下劃線指示。實施方式說明i.治療方法本發(fā)明方法涵蓋采用至少一個劑量的輻射療法和至少一個劑量的至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑治療癌癥。例如，一種治療患者中的癌癥的方法可以包括給予至少一個劑量的輻射療法且給予至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑，其中該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑在與放射療法劑量同一天或達(dá)且包括4天之后給予。該治療癌癥的方法可以一次給予(作為單個治療周期)或它可以多于一次給予(即，使用多個治療周期)，如每周、每隔一周、每三周或每月周期。如果該方法多于一次給予，則它可以2、3、4、5、6、7、或8次或更多次給予。雖然不受理論限制，但在所建立的同系腫瘤模型的范圍中，據(jù)發(fā)現(xiàn)低劑量的分割rt導(dǎo)致體內(nèi)pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)上調(diào)。表明以與αpd-1或αpd-l1mab的組合遞送的分割rt產(chǎn)生了有效抗腫瘤cd8+應(yīng)答，這改善了局部腫瘤控制和長期存活，并且通過誘導(dǎo)腫瘤抗原特異性記憶免疫應(yīng)答來保護免受腫瘤再激發(fā)。ifnγ的cd8+t細(xì)胞產(chǎn)生據(jù)發(fā)現(xiàn)在分割rt之后負(fù)責(zé)上調(diào)腫瘤細(xì)胞上的pd-l1。此外，相對于分割rt的遞送安排抗pd-l1mab似乎影響治療結(jié)果；其中在與rt同一天或在第一劑量的分割rt之后達(dá)且包括4天給予該拮抗劑顯示優(yōu)于在結(jié)束放射療法之后超過7天給予該拮抗劑的益處。此外，雖然不受理論限制，但如在臨床上常規(guī)使用的，響應(yīng)于低劑量的分割rt上調(diào)腫瘤細(xì)胞pd-l1表達(dá)似乎是腫瘤細(xì)胞適應(yīng)性免疫抗性的機制；其中pd-l1/pd-1信號傳導(dǎo)軸因此潛在促成rt治療失敗。使用rt和阻斷pd-1/pd-l1信號傳導(dǎo)軸的組合療法具有克服這種抗性的潛力，但基于臨床前研究，劑量時程影響治療結(jié)果，從而提供轉(zhuǎn)換到臨床上的重要新見解。a.用于在治療方法中使用的pd-1和/或pd-l1拮抗劑在一個實施例中，用于使用本發(fā)明方法的至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑是抗pd-1和/或抗pd-l1抗體或其功能部分。在一方面，該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑在與放射療法劑量同一天或達(dá)且包括4天之后給予。例如，在一方面，如果在治療周期的第1天提供放射療法，則該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑也可以在該治療周期的第1天(即，與放射療法劑量同一天)給予。在另一方面，如果在治療周期的第1天提供放射療法，則在第5天(即，4天之后)給予該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑。在另一方面，該pd-1和/或pd-l1拮抗劑可以在治療周期的第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、和/或第7天給予(包括單次和多次治療方案)。在一個實施例中，該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑在治療周期中多次給予。在另一個實施例中，該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑在治療周期中2、3、4、5或更多次給予。例如，該拮抗劑可以一周三次給予持續(xù)一周治療周期，或一周三次給予持續(xù)具有兩周或更多個周的治療周期，如上所述。在一方面，該抗體或其功能部分選自在美國公開2010/0028330中披露的那些，該公開通過引用并入以用于傳授這些抗體及其功能部分。在一個實施例中，該抗體是medi4736。在另一個實施例中，該抗pd-1和/或抗pd-l1抗體是潘布陸利珠單抗、尼沃魯單抗、bms-936558、amp-224或mpdl3280a。以治療有效量給予這些抗體或其功能部分。一般來說，治療有效量可以根據(jù)受試者的年齡、狀況和性別以及受試者的醫(yī)學(xué)病狀的嚴(yán)重程度變化?？贵w或其功能部分的治療有效量在從約0.001至約30mg/kg體重、從約0.01至約25mg/kg體重、從約0.1至約20mg/kg體重或從約1至約10mg/kg的范圍內(nèi)。該劑量可以根據(jù)需要進行調(diào)整以變適合所觀察到的治療作用。適當(dāng)劑量是由治療醫(yī)師基于臨床適應(yīng)癥進行選擇的。這些抗體可以作為濃注劑量給予以便使抗體的循環(huán)水平在該劑量之后最大化持續(xù)最長時間長度。在濃注劑量之后還可以使用連續(xù)輸注。如在此所使用，術(shù)語抗體或其功能部分是以最廣泛的意義使用的。其可以為人造的，如通過常規(guī)雜交瘤技術(shù)、重組技術(shù)產(chǎn)生的單克隆抗體(mab)和/或其功能片段。它可以包括完整的免疫球蛋白分子，例如多克隆抗體、單克隆抗體(mab)、單特異性抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、人抗體、人源化抗體、動物抗體(例如，駱駝科動物抗體)、嵌合抗體，以及其部分、片段、區(qū)、肽和衍生物(通過任何已知的技術(shù)諸如但不限于酶促裂解、肽合成或重組技術(shù)所提供的)，例如像缺乏輕鏈的免疫球蛋白、fab、fab′、f(ab′)2、fv、scfv、抗體片段、雙抗體、fd、cdr區(qū)、或抗體的能夠結(jié)合抗原或表位的任何部分或肽序列。在一個實施例中，該功能部分是單鏈抗體、單鏈可變區(qū)片段(scfv)、fab片段或f(ab′)2片段。如果一種抗體或功能部分能夠特異性地與一種分子反應(yīng)從而使該分子結(jié)合至該抗體，則稱該抗體或功能部分“能夠結(jié)合”該分子?？贵w片段或部分可以缺乏完整抗體的fc片段，從循環(huán)中更快速清除，并且可以具有比完整抗體更少的非特異性組織結(jié)合。抗體的實例可以使用本領(lǐng)域中熟知的方法由完整抗體產(chǎn)生，例如通過用酶諸如木瓜蛋白酶(以產(chǎn)生fab片段)或胃蛋白酶(以產(chǎn)生f(ab′)2片段)進行蛋白水解裂解?？贵w的部分可以通過上述方法中的任一種而產(chǎn)生，或者可以通過表達(dá)重組分子的一部分而產(chǎn)生。例如，可以將重組抗體的一個或多個cdr區(qū)域進行分離并亞克隆到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中。在一個實施例中，抗體或功能部分是人抗體。人抗體用于人療法可以減小由于人個體中針對非人序列的免疫反應(yīng)而引起的副反應(yīng)的可能性。在另一個實施例中，抗體或功能部分是人源化的。在另一個實施例中，抗體或功能部分是嵌合抗體。這樣，所感興趣的序列，諸如像所感興趣的結(jié)合位點能夠被包括到抗體或功能部分中。在一個實施例中，抗體可以具有igg、iga、igm或ige同種型。在一個實施例中，該抗體是igg。b.用于在治療方法中使用的放射療法還被稱為高劑量電離照射的放射療法是本發(fā)明治療方法的組成部分。在一種模式中，該放射療法是分割放射療法。在一個實施例中，該分割放射療法包括從2至7個部分。在另一個實施例中，該分割放射療法包括從3至6個部分。在另一個實施例中，該分割放射療法包括從4至5個部分。在一種模式中，該分割放射療法包括2、3、4、5、6、或7個部分。在一個實施例中，該分割放射療法包括5個部分。在一種模式中，這些放射療法部分在連續(xù)天數(shù)給予。在一種模式中，放射療法可以包括在一天的多于一個劑量和/或在連續(xù)天數(shù)的多個劑量。在一種模式中，這些放射療法部分在第1天、第2天、第3天、第4天、以及第5天給予。在另一種模式中，該放射療法包括5個部分中的約10gy(即，在5天中的每一天2gy)?？梢圆捎闷渌指罘桨福铀俜指?以較大每日或每周劑量給予的治療以便減少治療周數(shù))、超分割(一天多于一次給予的較小劑量的放射)或低分割(一天一次或更低頻率給予的較大劑量以便減少治療次數(shù))。放射療法可以是x射線、γ射線或帶電粒子。該放射療法可以是外部波束放射療法或內(nèi)部放射療法(還稱為短距離放射療法)。還可以采用使用放射性物質(zhì)(如放射性碘)的全身放射療法。外部波束放射療法包括3d構(gòu)象放射療法、調(diào)強放射療法、圖像引導(dǎo)的放射療法、斷層放射療法、立體定位放射手術(shù)、質(zhì)子療法或其他帶電粒子束。c.用于治療的癌癥本發(fā)明方法可以用于治療多種類型的癌癥。在一方面，該方法可以用于治療黑色素瘤、結(jié)腸直腸癌或乳腺癌。在一個實施例中，乳腺癌是三陰性乳腺癌。在一個實施例中，該癌癥是腎上腺皮質(zhì)腫瘤、腎上腺癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦癌、乳腺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、子宮頸癌、胸癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、表皮樣癌、食道癌、眼癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膽囊癌、胃腸道類癌瘤、胃腸道間質(zhì)瘤、妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病、頭頸部癌、霍奇金病、卡波西肉瘤、腎癌、喉癌和下咽癌、白血病、肝癌(如肝細(xì)胞癌)、肺癌(包括非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌和肺類癌瘤)、淋巴結(jié)癌、淋巴瘤、皮膚淋巴瘤、黑色素瘤、間皮瘤、口腔癌、多發(fā)性骨髓瘤、鼻腔和鼻竇癌、鼻咽癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、陰莖癌、垂體癌、前列腺癌、小兒科惡性腫瘤、直腸癌、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮膚癌、小腸癌、胃癌、睪丸癌、胸腺癌、咽喉癌、甲狀腺癌、子宮癌、陰道癌或外陰癌?，F(xiàn)在將詳細(xì)參考當(dāng)前的示例性實施例，其實例在附圖中展示。在一切可能之處，將貫穿整個附圖使用相同的參考數(shù)字來指代相同或類似部分。通過考慮在此披露的說明和實踐，其他實施例對于本領(lǐng)域技術(shù)人員也是顯而易見的。在以下實例中進一步解釋這些實施例。這些實例并非限制權(quán)利要求的范圍，僅用來說明某些實施例。目的在于，說明書和實例僅被認(rèn)為是示例性的，其中本發(fā)明的真正范圍和精神將由以下權(quán)利要求指出。實例實例1.方法a)小鼠和細(xì)胞系balb/c和c57b1/6小鼠獲自哈蘭(harlan)，英國。所有動物實驗由當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會批準(zhǔn)并且在英國內(nèi)政部(unitedkingdomhomeoffice)許可下進行。將從brafv600ep16-/-小鼠(理查德馬里亞斯(richardmarias)，英國癌癥研究中心(cancerresearchuk)，曼徹斯特學(xué)院(manchesterinstitute))分離的ct26鼠結(jié)腸癌細(xì)胞(atcc)和4434細(xì)胞維持在dmem中，并且將4t1三陰性乳腺癌(atcc)細(xì)胞維持在補充有10％fcs、1％l-谷氨酰胺的rpmi-1640中(英杰公司(invitrogen)，英國)。對所有細(xì)胞系進行常規(guī)篩選以確認(rèn)不存在支原體污染。b)腫瘤療法將小鼠皮下(s.c.)接種5×105個ct26細(xì)胞、1×105個4t1細(xì)胞、抑或5×106個4434細(xì)胞。使用pantakhf-320320kvx-射線單元(高美醫(yī)療公司(gulmaymedical)，英國)在接種之后7-10天(當(dāng)腫瘤是至少100mm3時)進行照射。該機器在300kv、9.2ma下操作，其中濾光器裝配在x-射線束中以得到2.3mmcu半值層的放射質(zhì)量。將小鼠定位在距x-射線焦點350mm的距離處，其中劑量速率是0.80gy/分鐘。給予αpd-1(克隆rmpi-14)、αpd-l1(克隆10f.9g2)(兩者均是biolegend公司)或同種型對照mab(分別igg2a和igg2b)在分割rt周期的第1天開始(除非另外說明)并且以10mg/kg的劑量以于pbs中100μ1/10g的劑量體積腹膜內(nèi)(i.p.)給予，每周3次持續(xù)達(dá)3周。對于細(xì)胞和細(xì)胞因子消減實驗，小鼠接受αcd8mab；克隆yts169(來自m.格倫尼(m.glennie)的贈品，南安普頓大學(xué)(southamptonuniversity)，αcd4mab；克隆gk1.5(biolegend公司)，αasialo-gm1(和光化學(xué)公司(wakochemicals))或αifnγ；克隆xmg1.2(bioxcell)。在治療期間對外周血進行采用以曲兒細(xì)胞消減。對于腫瘤再激發(fā)實驗，將長期存活(lts)小鼠在先前腫瘤植入之后最少100天雙側(cè)植入腫瘤細(xì)胞。另外對照小鼠也植入以便確認(rèn)腫瘤生長。實驗組包括至少5只小鼠/組并且代表至少2個獨立實驗。c)測量從長期存活小鼠分離的cd8+t細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生對于體外刺激，將來自lts抑或?qū)φ招∈蟮?.5×106個脾細(xì)胞在補充有10％fcs、100u/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素、1％l-谷氨酰胺、50μm2-me以及10iu/ml人重組il-2的rpmi-1640中在用50gy照射的1×106個腫瘤細(xì)胞抑或1μmol/ml的h2-ld限制肽spsyvyhqf(seqidno：91)(ah1)/tphparigl(seqidno：92)(β-半乳糖苷酶)(anaspec公司，英國)存在下培養(yǎng)5天。實驗組包括3-5只小鼠并且代表2個獨立實驗。在培養(yǎng)5天之后，將細(xì)胞在3ug/ml布雷菲德菌素a(bdpharmingen，英國)和100iu/ml人重組il-2(凱龍公司(chiron)，nl)存在下以1∶1比例用50gy照射的腫瘤細(xì)胞再刺激16小時。對于facs分析，將細(xì)胞洗滌且與大鼠抗cd16/32(ebioscience公司，英國)一起孵育以便阻斷非特異性結(jié)合且隨后用fitc共軛的抗cd8αmab(ebioscience公司，英國)染色。然后將細(xì)胞固定/透化且使用apc共軛的mab(ebioscience公司，英國)針對ifnγ的表達(dá)進行染色。d)通過流式細(xì)胞術(shù)進行的腫瘤和免疫細(xì)胞表型分析為獲得單細(xì)胞懸浮液，將腫瘤使用溫和macs解離器和鼠腫瘤解離試劑盒(美天旎生物技術(shù)公司(miltenyibiotec)，英國)進行加工。對于分析，如上所述阻斷非特異性結(jié)合，并且通過多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢查cd4、cd8(bd生物科技公司，英國)、cd45、nkp46、pd-1以及pd-l1的表達(dá)(除非另外說明，否則全部ebioscience公司)。e)體外共培養(yǎng)物將腫瘤細(xì)胞在20ng/mlifnγ和/或tnfα存在下培養(yǎng)24小時，之后如上所述通過流式細(xì)胞術(shù)評價pd-l1表達(dá)。對于共培養(yǎng)測定，將靜息抑或活化的脾細(xì)胞(分別用pbs或佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯和離子霉素細(xì)胞刺激混合物處理，(ebioscience公司，英國))以1∶1比例與腫瘤細(xì)胞一起共培養(yǎng)且如上所述測定pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)。ifnγr1表達(dá)的沉默通過用shrna慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞來實現(xiàn)(還將細(xì)胞用非靶向shrna轉(zhuǎn)導(dǎo)作為對照)(賽默科技公司(thermoscientific)，英國)。如上所述通過細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞術(shù)來測量脾細(xì)胞細(xì)胞因子產(chǎn)生(ifnγ和tnfα)的測量。實例2.阻斷pd-1或pd-l1增強rt的治療功效放射療法已顯示調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，但很少能夠單獨產(chǎn)生帶來全身抗腫瘤免疫力的持久治療應(yīng)答。顯示當(dāng)相較于時間匹配的未治療的(nt)小鼠時，作為5個部分中的約10gy遞送的低劑量的局部分割劑量rt產(chǎn)生增加的pd-l1腫瘤細(xì)胞表達(dá)，其中升高的表達(dá)在rt的最后一個劑量之后第1天、第3天和第5天明顯(圖1a和圖1b)。這種rt介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞pd-l1表達(dá)的增加在rt的最后一個劑量之后72小時達(dá)到峰值，并且雖然它在rt后7天顯著下降(當(dāng)相較于第1天和第3天的表達(dá)時；分別p＜0.05和p＜0.01，曼-惠特尼檢驗)，但當(dāng)相較于nt小鼠時仍然升高(p＜0.05，曼-惠特尼檢驗)。鑒于這些觀察結(jié)果，假設(shè)在rt之后產(chǎn)生的免疫應(yīng)答可以通過pd-1/pd-l1軸進行限制。當(dāng)相較于nt對照時，作為5個每日部分中的約10gy遞送的局部rt據(jù)發(fā)現(xiàn)顯著改善攜帶已形成的ct26腫瘤的小鼠中的存活(圖1c和圖1d；p＜0.05對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)。數(shù)據(jù)證明這種rt介導(dǎo)的局部腫瘤控制可以通過與αpd-l1mab抑或αpd-1mab的組合實質(zhì)性地改善(圖1c和圖1d；p＜0.001對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)。組合療法產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤應(yīng)答，其分別在66％和80％的接受rt與αpd-l1mab或αpd-1mab的組合的小鼠中有療效。相較于與rt組合，使用αpd-l1mab抑或αpd-1mab的單一療法未顯著改善存活(圖1c和圖1d；p＞0.05對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)。此外，當(dāng)小鼠接受rt與αpd-1和αpd-l1mab兩者的組合對比與單獨任一mab的組合時，未觀察到顯著益處(圖7)。阻斷pd-l1還改善攜帶已形成的4t1腫瘤的小鼠中對rt的應(yīng)答，其中當(dāng)相較于單獨rt時，組合療法使腫瘤負(fù)荷顯著降低38％(圖1e；治療開始后10天；分布184.3±13.5mm2對比292.8±14.3mm2，p＜0.01曼-惠特尼檢驗)；并且顯著改善存活(p＜0.001對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗；數(shù)據(jù)未示出)。在攜帶已形成的4434黑色素瘤的小鼠中也觀察到類似結(jié)果(圖1f)。使用局部rt和靶向pd-1抑或pd-l1的mab的組合療法在balb/c和c57b1/6小鼠兩者中均是良好耐受的(圖8a和圖8b)。這些臨床前數(shù)據(jù)清楚地證明了通過阻斷pd-1/pd-l1軸，改善在已形成的實體腫瘤的低劑量分割rt之后的結(jié)果的潛力。實例3.nk細(xì)胞有助于組合療法之后的局部腫瘤控制，但長期存活依賴于cd8+t細(xì)胞接下來研究在組合rt和αpd-l1mab療法之后觀察到的長期腫瘤控制的潛在機制。初始地，集落形成測定用于證實αpd-1和αpd-l1mab不通過與腫瘤細(xì)胞直接相互作用來充當(dāng)放射致敏劑(圖9a-9c)。使用消減抗體，接下來探究在rt/αpd-l1mab組合療法之后效應(yīng)t細(xì)胞和nk細(xì)胞在介導(dǎo)抗腫瘤活性中的作用。數(shù)據(jù)證明，當(dāng)相較于nt小鼠時，早在5天分割rt周期開始之后7天(其中αpd-l1mab療法在該rt周期的第1天開始)，降低的腫瘤負(fù)荷就在組合療法之后的小鼠中明顯(分別207.5±29.2mm2對比409.4±86.88mm2；p＝0.067，曼-惠特尼檢驗)(圖2a)。然而，體積減小的這種統(tǒng)計趨勢在cd8+t細(xì)胞抑或nk細(xì)胞消減之后喪失，其中腫瘤體積與nt組中的那些沒有顯著不同(分別p＝0.52和p＝0.70，曼-惠特尼u檢驗)，但顯著大于接受組合療法的無免疫細(xì)胞消減的小鼠(p＜0.01；組合療法對比cd8消減，以及p＜0.05；組合療法對比nk細(xì)胞消減，曼-惠特尼u檢驗)。到治療后第11天，當(dāng)相較于nt對照時，組合療法顯著降低腫瘤負(fù)荷(p＜0.001，曼-惠特尼u檢驗)。而在此時間點消減cd8+t細(xì)胞抑或nk細(xì)胞降低組合療法的功效(分別p＜0.001和p＜0.05，曼-惠特尼u檢驗)，cd8+t細(xì)胞和nk細(xì)胞的相對貢獻(xiàn)變得更加明顯，其中在cd8對比nk細(xì)胞消減的小鼠中腫瘤控制顯著降低(p＜0.05，曼-惠特尼u檢驗)。數(shù)據(jù)還揭示cd4+t細(xì)胞的消減改善組合療法之后的局部腫瘤控制(分別153.2±27.0mm2對比72.7±17.3mm2；p＜0.05，曼-惠特尼u檢驗)。相較于早期腫瘤控制，在組合rt/αpd-l1mab療法之后，長期存活(lts)不受nk細(xì)胞的消減影響(在用rt/αpd-l1治療之后70％lts小鼠對比在nk細(xì)胞消減情況下在組合療法之后77.8％)(圖2b)。cd4+t淋巴細(xì)胞的消減使lts小鼠的頻率從70％增加至87.5％(組合對比組合+cd4消減)，但這未達(dá)到顯著性(p＞0.05對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)。然而，消減cd8+t細(xì)胞完全消除組合rt/αpd-l1mab療法的治療功效(p＜0.001對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)。在外周血樣品上通過流式細(xì)胞術(shù)確認(rèn)免疫細(xì)胞群體的消減(圖2c)。這些數(shù)據(jù)表明雖然nk細(xì)胞可以施加一些局部腫瘤控制，但這不影響總體存活，并且雖然cd4+t細(xì)胞是非必要的或甚至能夠抑制應(yīng)答，但cd8+t細(xì)胞似乎介導(dǎo)在用rt和αpd-l1mab治療之后的有效長期腫瘤控制。實例4.用αpd-l1mab和rt治療產(chǎn)生保護性腫瘤抗原特異性記憶t細(xì)胞應(yīng)答接下來研究在用rt和αpd-l1mab治療之后是否產(chǎn)生免疫記憶。顯示最初用rt和αpd-l1mab治療的lts小鼠在雙側(cè)再激發(fā)之后能夠完全排斥腫瘤(圖3a)。為了定量這種記憶應(yīng)答，對從lts小鼠收獲的脾細(xì)胞進行評定，這些小鼠在與源自ct26腫瘤相關(guān)抗原的肽(ah1：spsyvyhqf(seqidno：91))、對照肽(β-半乳糖苷酶：tpharigl(seqidno：93))或與照射的ct26細(xì)胞一起共培養(yǎng)之后具有大于100天無疾病存活和cd8+t細(xì)胞產(chǎn)生ifnγ的能力(圖3b和圖3c)。數(shù)據(jù)揭示lts小鼠在與ah1肽一起共培養(yǎng)之后被賦予比初次接受試驗的小鼠顯著更大的產(chǎn)生ifnγ的cd8+t淋巴細(xì)胞的頻率(分別6.6％±0.8對比2.3％±0.2；p＜0.05，曼-惠特尼檢驗)。在脾細(xì)胞與ct26細(xì)胞的共培養(yǎng)之后觀察到類似的應(yīng)答。肽和腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)的比較揭示記憶cd8+t細(xì)胞的頻率在lts小鼠中在與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)之后比與ah1共培養(yǎng)之后低約3倍并且可以反映t細(xì)胞活化的腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的抑制?？傊?，這些數(shù)據(jù)證明在小鼠模型中當(dāng)與pd-1/pd-l1軸的阻斷組合時，rt能夠在長期幸存者中產(chǎn)生保護性免疫記憶。實例5.分割rt導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞pd-l1表達(dá)的cd8+t細(xì)胞依賴性適應(yīng)性上調(diào)初始地，證實了在體外用一系列rt劑量處理腫瘤細(xì)胞對pd-l1的表達(dá)不具有任何直接影響(圖4a)。為了鑒別腫瘤微環(huán)境內(nèi)的哪些細(xì)胞群體負(fù)責(zé)調(diào)解pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)，使小鼠接受分割rt周期與cd8、cd4或nk細(xì)胞消減抗體的組合。數(shù)據(jù)揭示cd8+t細(xì)胞而非nk細(xì)胞的消減完全消除rt介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞上pd-l1的上調(diào)(圖4b和圖4c)。令人感興趣地，cd4+t細(xì)胞的消減據(jù)發(fā)現(xiàn)進一步加強rt介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞上pd-l1的上調(diào)(相較于用單獨rt治療約2倍)。實例6.在分割rt之后腫瘤細(xì)胞的pd-l1的適應(yīng)性上調(diào)是ifnγ依賴性的鑒于腫瘤微環(huán)境中的ifnγ與pd-l1表達(dá)之間的臨床相關(guān)性(16)以及tnfα對這種應(yīng)答的影響(22)，在細(xì)胞系中評價了這些細(xì)胞因子對pd-l1的影響。將腫瘤細(xì)胞與重組ifnγ共培養(yǎng)導(dǎo)致體外pd-l1的細(xì)胞表面表達(dá)的顯著20倍增加(圖5a)。此外，雖然單獨添加重組tnfα對pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)沒有影響，但當(dāng)相較于單獨ifnγ情況下的表達(dá)時，ifnγ和tnfα兩者的混合物可以進一步加強腫瘤細(xì)胞pd-l1表達(dá)(約2倍)(圖5a)。顯示使用shrna進行的ct26腫瘤細(xì)胞上ifn-γ-受體1(ifnγr1)的沉默完全消除在與重組ifnγ抑或ifnγ和tnfα兩者共培養(yǎng)之后pd-l1的上調(diào)(圖5a)。為了確立活化的免疫細(xì)胞是否能夠通過ifnγ和tnfα的產(chǎn)生而導(dǎo)致pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)的適應(yīng)性變化，將wtct26細(xì)胞以及用非靶向shrna(ntcshrna)和ifnγr1shrna轉(zhuǎn)導(dǎo)的那些細(xì)胞與分離的靜息(pbs處理的)和活化的(佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(pma)和離子霉素處理的)脾細(xì)胞一起共培養(yǎng)(圖5b和圖5c)。重要的是，這些實驗證明活化的免疫細(xì)胞能夠在生理學(xué)相關(guān)濃度的ifnγ和tnfα下以ifnγr1依賴性方式升高腫瘤細(xì)胞pd-l1表達(dá)。為了證實在體內(nèi)響應(yīng)于rt，ifnγ對pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)的作用，小鼠接受rt與αifnγ阻斷抗體(或同種型對照)的組合。ifnγ阻斷使nt小鼠中pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)降低2.6倍至在體外培養(yǎng)的ct26細(xì)胞上觀察到的水平；從而表明pd-l1的適應(yīng)性上調(diào)在植入腫瘤之后發(fā)生(圖5d和圖5e)。然而，在rt之后觀察到的pd-l1的顯著上調(diào)(相較于nt對照2.4倍)通過ifnγ阻斷完全消除，從而證實這是rt治療之后pd-l1的適應(yīng)性腫瘤細(xì)胞表達(dá)的驅(qū)動物。實例7.伴隨安排αpd-l1mab和rt產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答對3種不同的組合方案進行了評價，其中攜帶已形成的ct26腫瘤的小鼠接受5個部分中的約10gy的分割rt周期，其中給予αpd-l1mab在該分割rt周期的第1天(方案a)、在該周期的第5天(方案b)抑或在完成rt之后7天(方案c)開始(圖6a)。在方案a與方案b之間未發(fā)現(xiàn)總體存活的顯著差異，其中l(wèi)ts分別為60％和57％(p＞0.05對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)(圖6b和圖10a)。相比之下，盡管跨多個組類似的腫瘤負(fù)荷，但當(dāng)相較于單獨rt時，使用rt接著7天之后αpd-l1mab的序貫治療(方案c)在增強總體存活方面是完全無效的(分別30天對比35天的中值存活期；p＞0.05對數(shù)秩；曼特爾-考克斯檢驗)(圖10b和圖10c)。在rt的最后一個劑量之后24小時對腫瘤浸潤cd4+和cd8+t細(xì)胞的分析揭示當(dāng)相較于時間匹配的nt對照時增加的pd-1表達(dá)(p＜0.05，曼-惠特尼檢驗)(圖6c)。相比之下，到rt后7天時，在cd4+t細(xì)胞上沒有pd-1表達(dá)的明顯變化并且據(jù)發(fā)現(xiàn)當(dāng)相較于時間匹配的nt對照時，pd-1表達(dá)在cd8+t細(xì)胞上顯著降低(p＜0.05，曼-惠特尼檢驗)(圖6d)。pd-1的表達(dá)被一致地發(fā)現(xiàn)在腫瘤浸潤cd8+t細(xì)胞上比cd4+t細(xì)胞上更高(圖6c和圖6d)。接下來對急性對比延長的αpd-l1mab給藥方案之后的活性進行了比較，其中小鼠與rt同時接受3個劑量的mab抑或相同但給藥延長(每周3次)持續(xù)另外2周。在延長的αpd-l1mab給予情況下未觀察到另外的益處(圖11)?？傊@些數(shù)據(jù)證明用低劑量的分割rt治療導(dǎo)致t細(xì)胞上pd-1表達(dá)的急性增加，并且序貫療法(其中pd-1/pd-l1信號傳導(dǎo)軸的阻斷被延遲直到完成rt周期)可能潛在由于腫瘤反應(yīng)性cd8+t細(xì)胞的消減或無反應(yīng)性而是無效的。實例8.以上實例的討論低劑量的分割rt導(dǎo)致繼發(fā)于ifnγ的cd8+t細(xì)胞產(chǎn)生，腫瘤細(xì)胞上pd-l1表達(dá)的上調(diào)。在黑色素瘤、結(jié)腸直腸癌和乳腺癌的小鼠模型中，證明了rt的活性可以通過與αpd-l1mab組合而增強，從而導(dǎo)致長期存活小鼠中免疫記憶的產(chǎn)生，該免疫記憶能夠保護免疫腫瘤復(fù)發(fā)。此外，數(shù)據(jù)揭示劑量時程可以影響結(jié)果，其中同時而非序貫療法在改善局部腫瘤控制和存活方面有效。這是用于證明分割rt通過ifnγ的cd8+t細(xì)胞產(chǎn)生導(dǎo)致pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)增加的第一臨床前研究。在此，pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)可以充當(dāng)局部抗腫瘤應(yīng)答的生物標(biāo)志物，從而表明局部rt可能足以引發(fā)cd8+t細(xì)胞應(yīng)答。然而，雖然用單獨rt治療不能產(chǎn)生持久抗癌免疫力，但活性據(jù)發(fā)現(xiàn)通過mab介導(dǎo)的pd-1抑或pd-l1的阻斷增強，從而表明通過此軸信號傳導(dǎo)可以限制對rt的免疫應(yīng)答。觀察到在以與αpd-1或αpd-l1的組合或與兩種mab的組合聯(lián)合遞送的rt之間無總體存活的顯著差異。鑒于此觀察結(jié)果，看起來似乎在與rt組合遞送時這些mab的活性是通過阻斷pd-1/pd-l1信號傳導(dǎo)介導(dǎo)的，而不是通過pd-l1/cd80或pd-1/pd-l2軸介導(dǎo)的，但是需要進一步實驗來證實這一點。臨床前數(shù)據(jù)揭示nk細(xì)胞的消減在早期時間點(到rt完成后11天)降低局部腫瘤控制，但并不影響總體存活。此外，消減nk細(xì)胞并不影響在rt之后pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)，從而表明它們對局部ifnγ產(chǎn)生的有限貢獻(xiàn)。相比之下，雖然消減cd4+t細(xì)胞并不影響組合療法之后的存活，但觀察到rt后pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)的實質(zhì)性增加。cd4+t細(xì)胞的消減影響輔助t細(xì)胞和treg群體兩者。雖然需要進一步研究來描述cd4+t細(xì)胞的這些亞群的相對貢獻(xiàn)，但可以推測cd4+輔助t細(xì)胞對于模型中rt/pd-l1mab療法之后的有效cd8+t細(xì)胞應(yīng)答的產(chǎn)生來說可能是非必要的，并且輔助t細(xì)胞抑或更可能treg可以在局部腫瘤環(huán)境中主動抑制ifnγ產(chǎn)生。因此，通過treg消減增強抗腫瘤應(yīng)答的治療潛力可以至少部分地通過增強的pd-l1腫瘤細(xì)胞表達(dá)減弱。pd-l1表達(dá)可以通過多種細(xì)胞因子(包括1型和2型ifn、tnfα和tgfβ)進行調(diào)節(jié)(16、22、30-32)。顯示pd-l1的腫瘤細(xì)胞應(yīng)答可以在與ifnγ共培養(yǎng)之后增強并且添加tnfα可以進一步加強這種應(yīng)答。然而，阻斷ifnγr1或體內(nèi)消減ifnγ展示了ifnγ介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)對pd-l1的上調(diào)的依賴性，其中單獨tnfα不能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞pd-l1表達(dá)。令人感興趣地，體內(nèi)消減ifnγ降低同系腫瘤細(xì)胞上的pd-l1表達(dá)，從而匹配體外腫瘤細(xì)胞的表達(dá)譜。這表明在治療干預(yù)不存在下局部腫瘤微環(huán)境可以促進免疫驅(qū)動的腫瘤適應(yīng)，這可以支持腫瘤發(fā)展。類似地，在人黑色素細(xì)胞病變中，pd-l1的表達(dá)已顯示與cd8+t細(xì)胞浸潤的區(qū)域共定位，并且被認(rèn)為表示免疫逃逸的適應(yīng)性機制(16)。然而，在臨床前小鼠模型中，使用靶向pd-1/pd-l1的mab的單一療法僅展示適度活性，從而表明單獨靶向此軸可能不能在所有環(huán)境中帶來持久抗腫瘤免疫應(yīng)答，并且強調(diào)了對組合方法的需求。相較于使用單一12gy劑量(30)，結(jié)果證明pd-l1的上調(diào)在涉及使用5個每日部分中的約10gy遞送分割rt的更低生物學(xué)有效劑量下發(fā)生。鑒于每個部分的這種劑量更常用于常規(guī)臨床實踐中，這是重要的發(fā)現(xiàn)。若干研究已經(jīng)評定了rt劑量分割對抗腫瘤免疫應(yīng)答和腫瘤微環(huán)境的影響；比較了單次消融劑量、大分割和分割rt(4、5、25、26、33、34)。然而，這些研究的結(jié)果是不確定的，并且最優(yōu)rt遞送和rt劑量分割對pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)的影響需要進一步研究。先前，沒有研究解決了定序?qū)t和αpd-l1mab療法的活性的影響。鑒于傾向于在臨床中采用定序的組合方案作為最大化耐受性的策略，這是尤其相關(guān)的。顯示在rt遞送時僅阻斷pd-l1可以增強小鼠模型中的治療應(yīng)答，其中在完成rt之后7天治療并不比用單獨rt治療好。此外，數(shù)據(jù)揭示pd-l1表達(dá)在完成分割rt循環(huán)之后24小時升高并且保持升高持續(xù)完成之后至少7天。此外，發(fā)現(xiàn)當(dāng)相較于對照組時，在rt之后24小時腫瘤浸潤cd4+t細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞上升高的pd-1表達(dá)。pd-1的表達(dá)據(jù)發(fā)現(xiàn)在cd8+t細(xì)胞對比cd4+t細(xì)胞上一致更高?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明局部分割rt能夠引發(fā)抗腫瘤cd8+t細(xì)胞應(yīng)答，但是這些可能通過經(jīng)由pd-1/pd-l1軸信號傳導(dǎo)減弱，并且此軸的早期抑制可以產(chǎn)生持久有效的抗腫瘤應(yīng)答。此外，在與rt組合時，對pd-1/pd-l1軸的慢性對比急性阻斷的要求是不清楚的。當(dāng)與rt遞送同時在1周內(nèi)一周3次給予αpd-l1mab對比達(dá)3周的延長方案時未觀察到存活的差異。這些數(shù)據(jù)表明與rt的組合方法可以允許實現(xiàn)治療性抗腫瘤免疫應(yīng)答所需的αpd-1/pd-l1mab療法的持續(xù)時間的減少。這些數(shù)據(jù)一起對臨床試驗設(shè)計具有重要意義。總之，該研究證明用分割rt治療導(dǎo)致pd-l1的腫瘤細(xì)胞表達(dá)上調(diào)并且阻斷pd-1/pd-l1軸能夠增強在多個同系小鼠癌癥模型中對分割rt的免疫應(yīng)答。數(shù)據(jù)表明αpd-l1mab與rt的劑量時程可以產(chǎn)生治療性免疫應(yīng)答，具有降低腫瘤負(fù)荷且改善存活的能力。這種治療組合可以是用于治療許多實體惡性腫瘤的有希望的方法，其中通常使用rt并且明確批準(zhǔn)轉(zhuǎn)換到早期臨床試驗。實例9.治療方案患者a具有結(jié)腸直腸癌。在第1周，患者a接受有效量的在五個部分中的放射療法。在第1周，患者a還在第1天、第3天和第5天接受治療劑量的medi4736?；颊遖重復(fù)此方案持續(xù)第2、3、4、和5周。患者b具有乳腺癌。在第1周，患者b接受有效量的放射療法。在第1周，患者b還在第5天接受治療劑量的medi4736?；颊遙重復(fù)此方案持續(xù)第3、5、和7周。實例10.某些實施例以下項目提供在此披露的某些實施例。項目1.一種治療患者的癌癥的方法，該方法包括a.給予至少一個劑量的放射療法；并且b.給予至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑，其中至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑在與放射療法劑量同一天或達(dá)且包括4天之后給予。項目2.如項目1所述的方法，其中該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑是至少一種pd-1和/或pd-l1抗體或其功能部分。項目3.如項目1-2中任一項所述的方法，其中該放射療法劑量是約11gy或更低。項目4.如項目3所述的方法，其中該放射療法劑量是約10gy或更低。項目5.如項目1-4中任一項所述的方法，其中該放射療法是分割放射療法。項目6.如項目5所述的方法，其中該分割放射療法包括從2至7個部分。項目7.如項目6所述的方法，其中該分割放射療法包括5個部分。項目8.如項目5-7中任一項所述的方法，其中這些放射療法部分是在連續(xù)天數(shù)給予的。項目9.如項目5-8中任一項所述的方法，其中這些放射療法部分是在第1天、第2天、第3天、第4天、以及第5天給予的。項目10.如項目7-9中任一項所述的方法，其中該放射療法包括在5個部分中約10gy。項目11.如項目1-10中任一項所述的方法，其中該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑是在第1天給予的。項目12.如項目1-11中任一項所述的方法，其中該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑是在第5天給予的。項目13.如項目1-12中任一項所述的方法，其中多次給予該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑。項目14.如項目1-13中任一項所述的方法，其中該至少一種pd-1和/或pd-l1拮抗劑一周3次給予。項目15.如項目1-14中任一項所述的方法，其中該抗pd-1和/或pd-l1抗體或其功能部分是medi4736。項目16.如項目1-15中任一項所述的方法，其中該抗pd-1和/或抗pd-l1抗體或其功能部分是潘布陸利珠單抗、尼沃魯單抗、bms-936558、amp-224或mpdl3280a。項目17.如項目1-16中任一項所述的方法，其中該癌癥是黑色素瘤、結(jié)腸直腸癌或乳腺癌。項目18.如項目1-17中任一項所述的方法，其中進行多于一個治療周期。項目19.如項目18所述的方法，其中進行從2-8個治療周期。項目20.如項目18-19中任一項所述的方法，其中這些治療周期是每周。項目21.如項目18-19中任一項所述的方法，其中這些治療周期是每隔一周。參考文獻(xiàn)1.d.費瑞倫(d.verellen)等人，圖像引導(dǎo)的放射療法中的創(chuàng)新(innovationsinimage-guidedradiotherapy).癌癥自然評論(natrevcancer)7，949-960(2007)。2.l.j.李(l.j.lee)等人，用于乳腺癌的放射療法(rt)中的創(chuàng)新(innovationsinradiationtherapy(rt)forbreastcancer).乳腺(breast)18增刊3，s103-111(2009)。3.e.卡皮騰(e.kapiteijn)等人，與用于可切除的直腸癌的全直腸系膜切除術(shù)組合的術(shù)前放射療法(preoperativeradiotherapycombinedwithtotalmesorectalexcisionforresectablerectalcancer).新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(nengljmed)345，638-646(2001)。4.y.李(y.lee)等人，消融放射對局部腫瘤的治療作用需要cd8+t細(xì)胞：改變用于癌癥治療的策略(therapeuticeffectsofablativeradiationonlocaltumorrequirecd8+tcells：changingstrategiesforcancertreatment).血液(blood)114，589-595(2009)。5.a.a.盧加德(a.a.lugade)等人，b16黑色素瘤腫瘤的局部放射療法增加運輸至腫瘤的腫瘤抗原特異性效應(yīng)細(xì)胞的產(chǎn)生(localradiationtherapyofb16melanomatumorsincreasesthegenerationoftumorantigen-specificeffectorcellsthattraffictothetumor).免疫學(xué)雜志(jimmunol)174，7516-7523(2005)。6.l.阿佩多(l.apetoh)等人，免疫系統(tǒng)對抗癌化學(xué)療法和放射療法的toll樣受體4依賴性貢獻(xiàn)(toll-likereceptor4-dependentcontributionoftheimmunesystemtoanticancerchemotherapyandradiotherapy).自然醫(yī)學(xué)(natmed)13，1050-1059(2007)。7.s.j.加爾達(dá)(s.j.gardai)等人，細(xì)胞表面鈣網(wǎng)蛋白通過吞噬細(xì)胞上lrp的反式活化引發(fā)存活或凋亡細(xì)胞的清除(cell-surfacecalreticulininitiatesclearanceofviableorapoptoticcellsthroughtrans-activationoflrponthephagocyte).細(xì)胞(cell)123，321-334(2005)。8.f.基林格利(f.ghiringhelli)等人，樹突細(xì)胞中nlrp3炎性體的活化誘導(dǎo)針對腫瘤的il-1β依賴性適應(yīng)性免疫(activationofthenlrp3inflammasomeindendriticcellsinducesil-1beta-dependentadaptiveimmunityagainsttumors).自然醫(yī)學(xué)(natmed)15，1170-1178(2009)。9.y.馬(y.ma)等人，抗癌化學(xué)療法誘導(dǎo)的抗原呈遞細(xì)胞的瘤內(nèi)募集和分化(anticancerchemotherapy-inducedintratumoralrecruitmentanddifferentiationofantigen-presentingcells).免疫(immunity)38，729-741(2013)。10.j.霍尼丘奇(j.honeychurch)等人，照射的淋巴瘤細(xì)胞的免疫原性潛力通過佐劑免疫療法和局部巨噬細(xì)胞群體的調(diào)節(jié)得以增強(immunogenicpotentialofirradiatedlymphomacellsisenhancedbyadjuvantimmunotherapyandmodulationoflocalmacrophagepopulations).白血病和淋巴瘤(leuklymphoma)54，2008-2015(2013)。11.b.卡明斯(b.cummings)等人，比較局部晚期頭頸癌中四周的超分割與常規(guī)放射療法的隨機試驗的五年結(jié)果(fiveyearresultsofarandomizedtrialcomparinghyperfractionatedtoconventionalradiotherapyoverfourweeksinlocallyadvancedheadandneckcancer).放射療法與腫瘤學(xué)(radiotheroncol)85，7-16(2007)。12.h.董(h.dong)等人，腫瘤相關(guān)的b7-h1促進t細(xì)胞凋亡：免疫逃避的潛在機制(tumor-associatedb7-h1promotest-cellapoptosis：apotentialmechanismofimmuneevasion).自然醫(yī)學(xué)(natmed)8，793-800(2002)。13.g.j.弗里曼(g.j.freeman)等人，通過新穎的b7家族成員結(jié)合pd-1免疫抑制性受體導(dǎo)致淋巴細(xì)胞活化的負(fù)調(diào)控(engagementofthepd-1immunoinhibitoryreceptorbyanovelb7familymemberleadstonegativeregulationoflymphocyteactivation).實驗醫(yī)學(xué)雜志(jexpmed)192，1027-1034(2000)。14.m.j.布特(m.j.butte)等人，程序性死亡-1配體1與b7-1共刺激分子特異性地相互作用以便抑制t細(xì)胞應(yīng)答(programmeddeath-1ligand1interactsspecificallywiththeb7-1costimulatorymoleculetoinhibittcellresponses).免疫(immunity)27，111-122(2007)。15.s.施普蘭格爾(s.spranger)等人，黑色素瘤腫瘤微環(huán)境中pd-l1、ido和t(regs)的上調(diào)由cd8(+)t細(xì)胞驅(qū)動(up-regulationofpd-l1，ido，a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