根據(jù)35U.S.C.119(e)，本申請(qǐng)要求2014年8月1日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?2/031,924的權(quán)益，以引用的方式將其內(nèi)容整體并入本文。政府支持本發(fā)明是在由國(guó)立衛(wèi)生研究院(NationalInstitutesofHealth)授予的5K08HL07994305號(hào)的政府支持下作出的。美國(guó)政府對(duì)本發(fā)明享有一定的權(quán)利。
技術(shù)領(lǐng)域：
：本文所述的技術(shù)涉及纖維化和/或高血壓(例如，肺動(dòng)脈高壓)的治療。
背景技術(shù)：
：：已經(jīng)嘗試了TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)抑制以用于治療肺動(dòng)脈高壓，但現(xiàn)有策略(例如，抑制活化素/TGF-βI型激酶受體ALK4/ALK5/ALK7或者所有的TGFβ配體的非選擇性中和)引起例如出血性瓣膜壞死或骨礦化和成熟的異常的嚴(yán)重副作用，或者例如皮疹和皮膚病變、鼻出血或牙齦出血的顯著副作用。調(diào)控這種信號(hào)級(jí)聯(lián)的更具體方法可以允許高血壓的有效和安全的治療。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：如本文所述，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過(guò)聚焦于配體TGF-β1、TGF-β3和/或GDF15的抑制來(lái)抑制TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)可以對(duì)肺動(dòng)脈高壓進(jìn)行治療，而不會(huì)誘發(fā)由廣泛抑制活化素/TGFβ配體信號(hào)傳導(dǎo)受體-配體相互作用而引起的副作用。在一個(gè)方面，本文描述的是在需要治療的受試者中對(duì)高血壓或纖維化進(jìn)行治療的方法，所述方法包括向所述受試者給予GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3的抑制劑。在一些實(shí)施方式中，高血壓是肺動(dòng)脈高壓(PAH)。在一些實(shí)施方式中，受試者是患有或被診斷為患有肺動(dòng)脈高壓(PAH)的受試者。在一些實(shí)施方式中，纖維化是與選自于由以下所組成的組中的疾病或病癥相關(guān)的纖維化：肺氣腫；COPD；間質(zhì)性肺病和肺纖維化；特發(fā)性肺纖維化；硬皮病肺?。婚g質(zhì)性或肺血管疾?。徊﹣?lái)霉素誘導(dǎo)的肺損傷；歸因于暴露至化療藥物(甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺)或其它毒素的肺纖維化；與早產(chǎn)、a.k.a.、支氣管肺發(fā)育不良相關(guān)的慢性肺?。慌c暴露至抗心律失常藥物(例如胺碘酮)相關(guān)的間質(zhì)性肺病或肺纖維化；以及與暴露至石棉、二氧化硅或谷物(grain)相關(guān)的間質(zhì)性肺病。在一些實(shí)施方式中，受試者是患有或被診斷為患有選自于由以下所組成的組中的疾病或病癥的受試者：肺氣腫；COPD；間質(zhì)性肺病和肺纖維化；特發(fā)性肺纖維化；硬皮病肺??；間質(zhì)性或肺血管疾??；博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺損傷；歸因于暴露至化療藥物(甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺)或其它毒素的肺纖維化；與早產(chǎn)、a.k.a.、支氣管肺發(fā)育不良相關(guān)的慢性肺?。慌c暴露至抗心律失常藥物(例如胺碘酮)相關(guān)的間質(zhì)性肺病或肺纖維化；以及與暴露至石棉、二氧化硅或谷物相關(guān)的間質(zhì)性肺病。在一些實(shí)施方式中，抑制劑對(duì)TGFβ1進(jìn)行抑制。在一些實(shí)施方式中，抑制劑對(duì)TGFβ3進(jìn)行抑制。在一些實(shí)施方式中，抑制劑對(duì)TGFβ1和TGFβ3進(jìn)行抑制。在一些實(shí)施方式中，抑制劑對(duì)GDF15進(jìn)行抑制。在一些實(shí)施方式中，抑制劑進(jìn)一步對(duì)TGFβ1和/或TGFβ3進(jìn)行抑制。在一些實(shí)施方式中，抑制劑對(duì)于GDF15而言是特異性的。在一些實(shí)施方式中，抑制劑對(duì)于TGFβ1而言是特異性的。在一些實(shí)施方式中，抑制劑對(duì)于TGFβ3而言是特異性的。在一些實(shí)施方式中，抑制劑是抗體試劑或配體捕獲劑。在一些實(shí)施方式中，配體捕獲劑是TGFβ-1/3GDF-15配體捕獲劑。在一些實(shí)施方式中，配體捕獲劑是TGFBRII-Fc。在一些實(shí)施方式中，受試者患有與PAH相關(guān)的結(jié)締組織病(APAH-CTD)或硬皮病。在一些實(shí)施方式中，相對(duì)于對(duì)照，受試者被確定為具有增高水平的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3。在一些實(shí)施方式中，相對(duì)于患有PAH但未顯示出APAH-CTD或硬皮病的癥狀的受試者中的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3的平均水平，受試者被確定為具有增高水平的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3。附圖說(shuō)明圖1A至圖1H表明大鼠中的野百合堿(MCT)誘導(dǎo)的肺高壓與增加的PAI-1轉(zhuǎn)錄活性和升高的GDF15mRNA水平相關(guān)。在用MCT(40mg/kgSC)處理SpragueDawley大鼠后，在不同的時(shí)間間隔對(duì)右心室收縮壓(RVSP，圖1A)和右心室肥厚(RVH，圖1B)方面的變化進(jìn)行測(cè)量。通過(guò)右心室導(dǎo)管插入術(shù)對(duì)RVSP進(jìn)行測(cè)量，并通過(guò)右心室(RV)游離壁的重量對(duì)左心室和間隔壁(LV+S)的總和的比例確定RVH(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝3)。經(jīng)MCT處理的大鼠的肺的定量RT-PCR顯示通過(guò)升高的PAI-1轉(zhuǎn)錄活性(圖1C)和TGFb1轉(zhuǎn)錄活性(圖1D)反映的增高的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)。通過(guò)降低的ld1(圖1E)和BMPR2(圖1F)的mRNA水平示出了受損的BMP信號(hào)傳導(dǎo)活性。在經(jīng)MCT處理的大鼠的肺中的TGFb3的表達(dá)仍然不受影響(圖1G)。在經(jīng)MCT處理的大鼠的肺中還發(fā)現(xiàn)升高的GDF15水平。相較于對(duì)照大鼠，*p<0.05，并且**p<0.01(圖1H)。圖2A至圖2D表明了在經(jīng)MCT處理的大鼠中的TGF-β和BMP信號(hào)傳導(dǎo)活性方面的變化與疾病嚴(yán)重性之間的相關(guān)性。增加的PAI-1水平(圖2A)與基于RVSP的PH程度直接相關(guān)。相比之下，觀察到轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)ld1(圖2B)和Bmpr2(圖2C)的表達(dá)降低，兩者都具有與RVSP負(fù)相關(guān)的水平。實(shí)驗(yàn)性PAH中的表型和TGFb1的表達(dá)之間無(wú)相關(guān)性(圖2D)。圖3A至圖3E表明TGFBRII-Fc是體外針對(duì)TGFβ1和TGFβ3、而非TGFβ2的選擇性配體捕獲劑。TGFb1、TGFb2和TGFb3在人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMC，圖3A)中引發(fā)信號(hào)傳導(dǎo)，而在人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(PMVEC，圖3B)中引起實(shí)質(zhì)上較低程度的信號(hào)傳導(dǎo)。將經(jīng)培養(yǎng)的血管細(xì)胞去除血清，并與多種濃度的BMP4、BMP9、TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3孵育30分鐘。實(shí)施Western印跡(圖3C)和qPCR(圖3D至圖3E)，以確定TGFBRII-Fc對(duì)體外信號(hào)傳導(dǎo)活性的影響。圖4A至圖4M表明TGFBRII-Fc減弱右心室收縮壓(RVSP)、右心室肥厚和血管重塑。在用或不用不同劑量的TGFBRII-Fc(15mg/kg，每周兩次)的條件下，用MCT處理3周后，通過(guò)在用戊巴比妥進(jìn)行的麻醉下的導(dǎo)管插入術(shù)和氣管內(nèi)插管以盲法對(duì)大鼠進(jìn)行分析，從而確定RVSP(圖4A)，并將大鼠進(jìn)行安樂(lè)死?；贔ulton’s比例(RV/(LV+S)，圖4B)的測(cè)量，以盲法對(duì)RVH的程度進(jìn)行評(píng)估。將值表示為平均值±SEM，n＝6-8，**p<0.01和***p<0.001(相較于對(duì)照大鼠)。對(duì)tgfb1(圖4C)、pai1(圖4D)、il6(圖4E)、il1b(圖4L)和icam(圖4L)的mRNA水平進(jìn)行測(cè)定。將值表示為平均值±SEM，n＝3-5，*p<0.05和**p<0.01(相較于對(duì)照)。對(duì)遠(yuǎn)端腺泡內(nèi)血管(直徑10μm-50μm)的肌肉化進(jìn)行定量，并對(duì)未肌肉化血管、部分肌肉化血管和完全(周向)肌肉化血管的百分比進(jìn)行計(jì)算(圖4F)。TGFBRII-Fc處理(15mg/kg，每周兩次)顯著降低完全肌肉化血管的百分比，并引起降低內(nèi)側(cè)壁厚度指數(shù)的趨勢(shì)。將值表示為平均值±SEM，n＝89-127個(gè)血管/處理組(各自來(lái)自6-8只大鼠)，p值如所示出的。在PH確立后用TGFBRII-Fc進(jìn)行的處理同死亡率和PH的部分復(fù)蘇有關(guān)。在用MCT(40mg/kgSC)處理之后，以延遲的方式在PH確立后的第17天開始用TGFBRII-FC(15mg/kg每周三次)對(duì)大鼠進(jìn)行處理。相較于用輔料處理的大鼠(每組n＝18)，Kaplan-Meier分析(圖4G)顯示出在經(jīng)TGFBRII-Fc處理的組中的改善的存活率。在第35天的存活動(dòng)物中，在用TGFBRII-Fc處理的動(dòng)物中存在顯著降低的RVSP(圖4H)，但在RVH方面不存在顯著差異(圖4I)。值顯示為平均值±SEM，每組n＝8-11，**p<0.01相較于對(duì)照。TGFBRII-Fc處理在具有確立的表型的大鼠中減弱了肺血管重塑(圖4J)。TGBRII-Fc降低了完全肌肉化血管(直徑10μm-50μm)的百分比，并降低了內(nèi)側(cè)壁厚度指數(shù)的百分比，將內(nèi)側(cè)壁厚度指數(shù)計(jì)算為：(外徑-內(nèi)徑)/外徑×100。n＝89-127個(gè)血管/處理組(各自來(lái)自6-8只大鼠)(圖4J至圖4K)。圖5A至圖5B表明TGFBRII-Fc在PAH的鼠模型中的效力。將小鼠用VEGFR阻斷劑(SUGEN)進(jìn)行處理，并暴露至低氧3周。TGFBRII-Fc處理(15mg/kg，每周3次)降低了RVSP(圖5A)并防止了右心室肥厚(圖5B)。圖6A至圖6B表明轉(zhuǎn)基因小鼠可用于確定GDF15的致病作用。對(duì)GDF15敲除小鼠進(jìn)行保護(hù)以免受SUGEN/缺氧引起的PAH。**p<0.01和***p<0.001，如所示出的。圖7A至圖7B表明GDF15在體外的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HASMC)中誘導(dǎo)有效的TGFb信號(hào)傳導(dǎo)，與肺血管平滑肌細(xì)胞中的數(shù)據(jù)一致。將BMP4、TGFb1和TGFb2用作陽(yáng)性對(duì)照。圖8A至圖8B表明在HASMC中證實(shí)了TGFBRII-Fc阻斷TGFb1和TGFb3信號(hào)傳導(dǎo)的選擇性。*p<0.05并且**p<0.01，如所示出的。圖9表明外源GDF15不能誘導(dǎo)人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(HPAEC)中的TGFb信號(hào)傳導(dǎo)，與微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HPMVEC)中的數(shù)據(jù)一致。圖10A至圖10E表明在經(jīng)MCT處理的大鼠中，低劑量的TGFBRII-Fc(5mg/kg，每周兩次)降低了RVSP(圖10A)和右心室肥厚(圖10B)。值得注意的是，低劑量的TGFBRII-Fc處理顯著阻止了MCT大鼠中的肺血管重塑(圖10C至圖10E)。圖11描繪了在用MCT和TGFβRII-Fc處理后的未肌肉化、部分肌肉化或完全肌肉化的血管的百分比的圖。圖12描繪了在用MCT和TGFβRII-Fc處理后，bmpr2、id1、tgfb2、tgfb3、il6和gdf15的mRNA表達(dá)的圖。圖13A至圖13D表明TGFRII-Fc選擇性地抑制了TGFβ1和TGFβ3誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)。將表達(dá)CAGA-Luc的HEK293細(xì)胞(圖13A)和表達(dá)BRE-Luc報(bào)告子轉(zhuǎn)基因的C2C12細(xì)胞(圖13B)用TGFBRII-Fc(2000ng/ml)孵育30分鐘，然后暴露至BMP或TGFβ過(guò)夜。將人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC，c-d)除去血清過(guò)夜，用TGFBRII-Fc(2000ng/ml)進(jìn)行預(yù)處理，然后用BMP4(10ng/ml)、TGFβ1(1ng/ml)、TGFβ2(1ng/ml)或TGFβ3(1ng/ml)處理30分鐘，并通過(guò)免疫印跡對(duì)TGFβ轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)(PAI-1，圖13D)以及Smads1、2和3(圖13C)的磷酸化進(jìn)行分析。TGFBRII-Fc經(jīng)由TGF-β1和TGF-β3而不是TGFβ2抑制信號(hào)傳導(dǎo)。(*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，如所示出的)。圖14表明TGFBRII-Fc防止了TGFβ誘導(dǎo)的SMC可塑性轉(zhuǎn)換(plasticityswitch)。將HPASMC除去血清過(guò)夜，然后暴露至具有或不具有TGFBRII-Fc(2000ng/ml)的TGFβ1(1ng/ml)24小時(shí)。對(duì)SMC收縮標(biāo)志物(contractilemarkers)的mRNA水平進(jìn)行檢查。數(shù)據(jù)為平均值±SEM，*p<0.05、**p<0.01、***P<0.001，如所示出的。圖15A至圖15E表明，在PAH確立后用TGFBRII-Fc進(jìn)行的處理與死亡率和PAH的部分復(fù)蘇相關(guān)。在MCT處理之后，以延遲的方式在PH確立后的第17天開始用TGFBRII-FC(15mg/kg每周三次)對(duì)大鼠進(jìn)行處理。用TGFBRII-Fc進(jìn)行的延遲處理降低了經(jīng)MCT處理的大鼠(n＝3-5)的肺組織中的TGFβ1、PAI-1、IL-6、IL1b和ICAM-1的表達(dá)(圖15A至圖15E)。圖16A至圖16B表明TGFBRII-Fc在PAH鼠模型中的效力。將成年雄性小鼠用SUGEN進(jìn)行處理，并暴露至低氧3周。TGFBRII-Fc處理阻止了經(jīng)SUGEN低氧處理的小鼠(n＝6-8)的肺中的PAI-1的上升(圖16A)并傾向于降低TGFβ1(圖16B)的mRNA水平。比例尺＝50μm。圖17A至圖17B表明用TGFBRII-Fc進(jìn)行的長(zhǎng)期處理與二尖瓣結(jié)構(gòu)方面的形態(tài)學(xué)變化無(wú)關(guān)，無(wú)硬化或退行性重塑的證據(jù)。經(jīng)輔料和TGFBRII-Fc處理的大鼠中的二尖瓣的組織學(xué)，比例尺＝500μm(圖17A)。來(lái)自超聲心動(dòng)圖的代表性追蹤顯示出經(jīng)輔料和TGFBRII-Fc處理的大鼠中的正常的二尖瓣反流(圖17B)。圖18表明接受輔料或TGFBRII-Fc處理的對(duì)照和MCT大鼠的體重。向用MCT(40mg/kgSC×1)處理的成年雄性SD大鼠給予TGFBRII-Fc(15mg/kgIP，每周兩次)或輔料3周。TGFBRII-Fc處理不會(huì)影響大鼠體重。圖19表明用TGFBRII-Fc延遲處理的MCT大鼠的體重。將成年雄性SD大鼠用MCT(40mg/kgSC×1)進(jìn)行處理，并在接受TGFBRII-Fc處理(15mg/kgIP，每周三次)之前觀察18天。在第35天對(duì)血液動(dòng)力學(xué)和重塑進(jìn)行檢查。TGFBRII-Fc處理不會(huì)影響大鼠體重。圖20A至圖20B描繪了以下實(shí)驗(yàn)，其中將成年雄性C57BL6/J小鼠隨機(jī)化并使之接受常氧、低氧或SUGEN+低氧3周。對(duì)RVSP(a)和右心室肥厚(b)進(jìn)行測(cè)量，并與常氧小鼠進(jìn)行比較(n＝5-8，*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，相較于對(duì)照)。具體實(shí)施方式如本文所述，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)由重組配體捕獲劑TGFBRII-Fc對(duì)TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的抑制降低了TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)并改善了肺動(dòng)脈高壓(PAH)。靶向受體配體的這一途徑比起靶向所有活化素和TGF-β受體(即ALK4、ALK5和ALK7)和/或所有的受體的配體的途徑具有更少的副作用和毒性。在一個(gè)方面，本文描述的是在有治療需要的受試者中對(duì)高血壓或纖維化進(jìn)行治療的方法，所述方法包括向受試者給予TGFβ1、TGFβ3和/或GDF-15的抑制劑。本文所使用的“高血壓(hypertension)”也稱為“HTN”或“高的血壓”或“動(dòng)脈高血壓”，是指其中的動(dòng)脈中的血壓升高的醫(yī)學(xué)病癥。這需要心臟比正常更加努力工作，以使血液通過(guò)血管循環(huán)。通過(guò)兩次測(cè)量(收縮期和舒張期)對(duì)血壓進(jìn)行歸納，收縮期和舒張期取決于心肌在搏動(dòng)(舒張)之間是收縮的(心縮期)還是放松的(心舒期)，并分別等于最大壓力和最小壓力。靜息時(shí)的正常血壓在收縮期為100-140mmHg(頂部讀數(shù))，而在舒張期為60-90mmHg(底部讀數(shù))。如果持續(xù)在140/90mmHg或以上，則認(rèn)為存在高血壓。高血壓是中風(fēng)、心肌梗死(心臟病發(fā)作)、心力衰竭或慢性心力衰竭(CHF)、動(dòng)脈瘤(例如主動(dòng)脈瘤)、外周動(dòng)脈疾病的主要危險(xiǎn)因素，并且是慢性腎臟疾病的原因。甚至動(dòng)脈血壓的穩(wěn)健升高還與縮短的壽命預(yù)期相關(guān)。盡管在生活方式改變證實(shí)不足或不充分的人中的藥物治療往往是必要的，但膳食和生活方式的改變可以改善血壓控制并降低相關(guān)健康并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí)施方式中，高血壓是肺動(dòng)脈高壓(PAH)。在一些實(shí)施方式中，受試者是患有或診斷為患有肺動(dòng)脈高壓(PAH)的受試者。在一方面，本文描述的是在有治療需要的受試者中對(duì)肺動(dòng)脈高壓(PAH)進(jìn)行治療的方法，所述方法包括向受試者給予TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的抑制劑。本文所使用的“肺動(dòng)脈高壓”或“PAH”是指其中的肺動(dòng)脈收縮異常的一類肺動(dòng)脈高壓(例如，肺血管系統(tǒng)中的高血壓)。本文所使用的“纖維化”是指作為修復(fù)或反應(yīng)過(guò)程而不是作為器官或組織的正常組分的纖維組織的形成。纖維化的特征在于在任何特定組織中的成纖維細(xì)胞積聚和超過(guò)正常沉積的膠原沉積。纖維化可以作為炎癥、刺激或愈合的結(jié)果而發(fā)生。在一些實(shí)施方式中，纖維化是與選自于由以下所組成的組中的疾病或病癥相關(guān)的纖維化：肺氣腫；COPD；間質(zhì)性肺病和肺纖維化；特發(fā)性肺纖維化；硬皮病肺病；間質(zhì)性或肺血管疾??；博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺損傷；歸因于暴露至化療藥物(甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺)或其它毒素的肺纖維化；與早產(chǎn)、a.k.a.、支氣管肺發(fā)育不良相關(guān)的慢性肺病；與暴露至抗心律失常藥物(例如胺碘酮)相關(guān)的間質(zhì)性肺病或肺纖維化；以及與暴露至石棉、二氧化硅或谷物相關(guān)的間質(zhì)性肺病。在一些實(shí)施方式中，受試者是患有或被診斷為患有選自于由以下所組成的組中的疾病或病癥的受試者：肺氣腫；COPD；間質(zhì)性肺病和肺纖維化；特發(fā)性肺纖維化；硬皮病肺??；間質(zhì)性或肺血管疾病；博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺損傷；歸因于暴露至化療藥物(甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺)或其它毒素的肺纖維化；與早產(chǎn)、a.k.a.、支氣管肺發(fā)育不良相關(guān)的慢性肺??；與暴露至抗心律失常藥物(例如胺碘酮)相關(guān)的間質(zhì)性肺病或肺纖維化；以及與暴露至石棉、二氧化硅或谷物相關(guān)的間質(zhì)性肺病。本文所述的方法和組合物涉及TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的抑制劑。本文所使用的“GDF-15”是指生長(zhǎng)和分化因子15(NCBIGeneIDNO：9518)，生長(zhǎng)因子的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族的成員。已知GDF15結(jié)合TGFβ超家族I型受體(包括TGFBRII)。對(duì)于許多物種而言，GDF-15的序列在本領(lǐng)域中是已知的，例如人GDF-15(多肽序列：SEQIDNO：1，NCBIRefSeq：NP_004855)。本文所使用的“TGFβ1”是指轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(NCBIGeneIDNO：7040)，生長(zhǎng)因子的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族的成員。已知TGFβ1結(jié)合TGFβ超家族I型受體(包括TGFBRII)。對(duì)于許多物種而言，TGFβ1的序列在本領(lǐng)域中是已知的，例如人TGFβ1(多肽序列：SEQIDNO：2，NCBIRefSeq：NP_000651)。本文所使用的“TGFβ3”是指轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(NCBIGeneIDNO：7043)，生長(zhǎng)因子的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族的成員。已知TGFβ3結(jié)合TGFβ超家族I型受體(包括TGFBRII)。對(duì)于許多物種而言，TGFβ3的序列在本領(lǐng)域中是已知的，例如人TGFβ3(多肽序列：SEQIDNO：3，NCBIRefSeq：NP_003032)。本文所使用的“抑制劑”是指可以降低靶向的表達(dá)產(chǎn)物(例如編碼靶標(biāo)或靶多肽的mRNA)的表達(dá)和/或活性的試劑，例如降低至少10％以上(例如10％以上、50％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上或98％以上)?？梢岳缤ㄟ^(guò)對(duì)TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的表達(dá)產(chǎn)物的水平和/或TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的活性進(jìn)行測(cè)量，對(duì)例如TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的抑制劑的效力(例如降低TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的水平和/或活性的能力)進(jìn)行測(cè)定。用于對(duì)給定的mRNA和/或多肽的水平進(jìn)行測(cè)量的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如，可以使用定量RT-PCR以及引物來(lái)對(duì)RNA的水平進(jìn)行測(cè)定，并且可以使用Western印跡以及抗體(例如抗TGFβ1抗體和/或抗TGFβ3抗體，例如單克隆抗體1D11)對(duì)多肽水平進(jìn)行測(cè)定?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的和本文其它地方所描述的方法對(duì)TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的活性進(jìn)行測(cè)定，例如通過(guò)對(duì)結(jié)合至TGFBRII的TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15的水平進(jìn)行測(cè)量，或?qū)鏟AI1mRNA的水平(其中，那些mRNA的降低的水平表明了TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15活性的降低水平)進(jìn)行檢測(cè)。在一些實(shí)施方式中，抑制劑可以是抑制性核酸、適體、抗體試劑、抗體或小分子。在一些實(shí)施方式中，抑制劑可以是抗體試劑。在一些實(shí)施方式中，抑制劑可以是配體捕獲劑。如本文所述，“配體捕獲劑”是指包含結(jié)合靶分子(例如TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15)的蛋白質(zhì)的至少一部分的工程化的多肽。結(jié)合靶分子的蛋白質(zhì)的部分可以是例如受體的胞外結(jié)構(gòu)域、受體的可溶性形式、受體的結(jié)合結(jié)構(gòu)域等。在一些實(shí)施方式中，配體捕獲劑可以進(jìn)一步包含第二結(jié)構(gòu)域，該第二結(jié)構(gòu)域包含Ig恒定結(jié)構(gòu)域，例如IgG恒定結(jié)構(gòu)域(例如IgG1)和/或人Ig恒定結(jié)構(gòu)域。第二結(jié)構(gòu)域可以例如改善配體捕獲劑的半衰期。在一些實(shí)施方式中，配體捕獲劑可以是TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15配體捕獲劑。在一些實(shí)施方式中，配體捕獲劑可以是GDF-15和TGFβ1和/或TGFβ3配體捕獲劑。在一些實(shí)施方式中，配體捕獲劑可以是TGFβ-1/3GDF-15配體捕獲劑，例如，它可以結(jié)合至所有三種配體。在一些實(shí)施方式中，配體捕獲劑可以是TGFBRII-Fc。本文所使用的“TGFBRII-Fc”是指包含TGFBRII的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域和/或TGFBRII的可溶性誘餌受體的配體捕獲劑。在一些實(shí)施方式中，TGFBRII-Fc可以被商購(gòu)(例如CatNo.314-BR、1003-RT、1600-R2或532-R2，R&DSystems，Minneapolis，MN)。TGFBRII-Fc也可以從Acceleron(Cambridge，MA)獲得。在一些實(shí)施方式中，TGFBRII-Fc可包含SEQIDNO：4的氨基酸23-159、23-184、24-159、24-184、23-176、24-176、73-159、73-184、73-176。在一些實(shí)施方式中，抑制劑對(duì)GDF-15而言是特異性的。在一些實(shí)施方式中，抑制劑是半選擇性的，例如，它對(duì)另外的TGFBR1配體但不是所有TGFβ配體具有抑制作用。在一些實(shí)施方式中，除了GDF-15以外，抑制劑可對(duì)TGFβ1(例如NCBIGeneID：7040)和/或TGFβ3(例如NCBIGeneID：7043)進(jìn)行抑制。本文表明使用TGFBRII-Fc(TGF-β1/3、GDF-15配體捕獲劑)拮抗GDF-15在兩種動(dòng)物模型中改善了肺動(dòng)脈高壓(PAH)。對(duì)缺乏GDF-15的敲除小鼠進(jìn)行相對(duì)保護(hù)免于肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生。此前用于抑制TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)作為PAH的療法的途徑采用如下策略：通過(guò)抑制TGFβI型受體激酶ALK5而抑制所有TGF-β配體，或使用泛TGF-β抗體中和所有TGF-β配體。盡管在動(dòng)物模型中有效，但是這些策略受到各種毒性的限制，包括歸因于這些TGF-β配體的多種的組成性功能的成熟和骨礦化異常以及出血性瓣膜壞死。如本文所述，使用TGFBRII-Fc的TGF-β配體1和3的半選擇性抑制仍然有效，并且良好耐受。TGFβ1、TGFβ3和/或GDF15在本文中被認(rèn)定為這種療法的有效的重要靶標(biāo)。此外，它們已經(jīng)示出，GDF-15的基因切除顯著減弱了PAH，并且針對(duì)GDF-15的有效中和抗體減弱了PAH。對(duì)GDF-15而言特異性的人源化或源自人的單克隆抗體可周期性地給予患有各種類型肺動(dòng)脈高壓的患者。已知具有特別高水平的GDF-15的具有PAH的特定病因(即，與PAH相關(guān)的結(jié)締組織疾病(APAH-CTD)或硬皮病)的某些患者更受益于中和抗體的治療。在各種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了當(dāng)給予患者時(shí)對(duì)GDF-15進(jìn)行抑制的抗體、肽和核酸以及使用它們的方法。此類GDF-15抑制可以出于對(duì)患者中的病癥進(jìn)行治療的目的在患者中實(shí)施。該病癥可以是但不限于肺動(dòng)脈高壓。在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法涉及用GDF-15的抑制劑對(duì)患有或被診斷為患有高血壓(例如PAH)的受試者進(jìn)行治療?？梢杂舍t(yī)生使用診斷高血壓的現(xiàn)有方法對(duì)患有高血壓的受試者進(jìn)行認(rèn)定。表征這些病癥和幫助診斷的高血壓的癥狀和/或并發(fā)癥是本領(lǐng)域眾所周知的，包括但不限于頭痛、眩暈、耳鳴、頭暈或昏厥?？赡苡兄诶绺哐獕旱脑\斷的測(cè)試包括但不限于血壓測(cè)量。高血壓家族史還可以幫助確定受試者是否可能患有高血壓或有助于對(duì)高血壓進(jìn)行診斷。在一些實(shí)施方式中，根據(jù)本文所述方法進(jìn)行治療的受試者可以是患有和/或被診斷為患有與PAH相關(guān)的結(jié)締組織疾病(APAH-CTD)或硬皮病的受試者。在一些實(shí)施方式中，根據(jù)本文所述方法進(jìn)行治療的受試者可以是相較于對(duì)照具有和/或被確定為具有增高水平的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3的受試者。在一些實(shí)施方式中，GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3的增高的水平可以是循環(huán)的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3的增高的水平。在一些實(shí)施方式中，對(duì)照可以是健康受試者和/或健康受試者群體中的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3的水平。在一些實(shí)施方式中，對(duì)照可以是具有PAH但不顯示出硬皮病或APAH-CTD的癥狀的受試者和/或受試者群體中的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3的水平。本文所述的組合物和方法可以被給予至患有或被診斷為患有高血壓(例如PAH)的受試者。在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法包括向受試者給予有效量的本文所述的組合物(例如GDF-15的抑制劑)，以減輕高血壓(例如PAH)的癥狀。本文所使用的“減輕高血壓的癥狀”是改善與高血壓相關(guān)的任何病癥或癥狀。相較于等同的未處理對(duì)照，這種降低是如通過(guò)任何標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)量的減少至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、99％以上。用于將本文所述的組合物給予至受試者的各種方式是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。此類方法可以包括但不限于口服、腸胃外、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、透皮、氣道(氣霧劑)、肺、皮膚、局部或注射給予。給予可以是局部的或全身的。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“有效量”是指減輕疾病或紊亂的至少一種或多種癥狀所需的GDF-15的抑制劑的量，并且涉及用于提供期望效果的藥理學(xué)組合物的足夠量。因此，術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指當(dāng)給予至典型的受試者時(shí)足以提供具體的抗高血壓效果的GDF-15的抑制劑的量。在各種上下文中，本文所使用的有效量還將包括足以延遲疾病癥狀的發(fā)展、改變疾病癥狀的進(jìn)程(例如但不限于減緩疾病癥狀的進(jìn)展)或逆轉(zhuǎn)疾病癥狀的量。因此，指定確切的“有效量”通常是不可行的。然而，對(duì)于任何給定的情況，通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員僅使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)即可確定合適的“有效量”。可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)程序(例如，用于確定LD50(50％群體致死的劑量)和ED50(在50％群體中治療有效的劑量))對(duì)有效量、毒性和治療效力進(jìn)行確定。劑量可以根據(jù)所采用的劑型和所使用的給予途徑而變化。毒性和治療效果之間的劑量比是治療指數(shù)，并且可以表示為L(zhǎng)D50/ED50之比。優(yōu)選表現(xiàn)出大的治療指數(shù)的組合物和方法。最初可以從細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)對(duì)治療有效劑量進(jìn)行估算。此外，可以在動(dòng)物模型中配制劑量以達(dá)到循環(huán)血漿濃度范圍，該范圍包括在細(xì)胞培養(yǎng)物中或在合適的動(dòng)物模型中確定的IC50(即，達(dá)到癥狀半數(shù)最大抑制的GDF-15的抑制劑的濃度)。可以例如通過(guò)高效液相色譜法對(duì)血漿中的水平進(jìn)行測(cè)量?？梢酝ㄟ^(guò)合適的生物測(cè)定法(例如血壓的測(cè)定法等)對(duì)任何特定劑量的效果進(jìn)行監(jiān)控。劑量可以由醫(yī)生確定并根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整以適合所觀察到的治療的效果。在一些實(shí)施方式中，本文所述的技術(shù)涉及包含本文所述的GDF-15的抑制劑和任選的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在一些實(shí)施方式中，藥物組合物的活性成分包含本文所述的GDF-15的抑制劑。在一些實(shí)施方式中，藥物組合物的活性成分基本上由本文所述的GDF-15的抑制劑組成。在一些實(shí)施方式中，藥物組合物的活性成分由本文所述的GDF-15的抑制劑組成。藥學(xué)上可接受的載體和稀釋劑包括鹽水、水性緩沖溶液、溶劑和/或分散介質(zhì)。此類載體和稀釋劑的使用是本領(lǐng)域公知的。可用作藥學(xué)上可接受的載體的材料的一些非限制性實(shí)例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素和乙酸纖維素；(4)粉狀黃蓍膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉和滑石；(8)賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；(9)油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇(PEG)；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)藻酸；(16)無(wú)熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)pH緩沖溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；(22)填充劑，例如多肽和氨基酸；(23)血清成分，例如血清白蛋白、HDL和LDL；(24)C2-C12醇，例如乙醇；以及(25)在藥物制劑中使用的其它無(wú)毒相容性物質(zhì)。潤(rùn)濕劑、著色劑、脫模劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑、芳香劑、防腐劑和抗氧化劑也可以存在于制劑中。術(shù)語(yǔ)例如“賦形劑”、“載體”、“藥學(xué)上可接受的載體”等在本文中可互換使用。在一些實(shí)施方式中，載體抑制活性劑(例如，如本文所述的GDF-15的抑制劑)的降解。在一些實(shí)施方式中，包含本文所述的GDF-15的抑制劑的藥物組合物可以是腸胃外劑量形式。由于腸胃外劑型的給予通常繞過(guò)患者對(duì)污染物的天然防御，所以腸胃外劑型優(yōu)選是無(wú)菌的或能夠在給予患者之前進(jìn)行滅菌。腸胃外劑型的實(shí)例包括但不限于準(zhǔn)備用于注射的溶液、準(zhǔn)備用于被溶解或懸浮在藥學(xué)上可接受的注射用輔料中的干燥產(chǎn)品、準(zhǔn)備用于注射的懸浮液和乳液。此外，可以制備用于給予患者的控釋腸胃外劑型包括但不限于型劑型和劑量?jī)A卸(dose-dumping)?？捎糜谔峁┤绫疚乃_的GDF-15的抑制劑的腸胃外劑型的合適輔料是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。實(shí)例包括但不限于無(wú)菌水；USP注射用水；鹽水溶液；葡萄糖溶液；水性輔料，例如但不限于氯化鈉注射液、林格氏注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化鈉注射液、以及乳酸林格氏注射液；水混溶性輔料，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和丙二醇；以及非水性輔料，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸芐酯。改變或修飾本文公開的抑制劑的藥學(xué)上可接受的鹽的溶解度的化合物也可以被摻入至本公開的腸胃外劑型中，包括常規(guī)腸胃外劑型和控釋腸胃外劑型。包含GDF-15的抑制劑的藥物組合物也可以被配制為適于口服給予(例如作為離散劑型)，例如但不限于片劑(包括但不限于刻痕片劑或包衣片劑)、丸劑、囊片(caplets)、膠囊、可咀嚼片劑、粉末包、扁囊劑(cachets)、錠劑(troches)、薄片(wafers)、氣溶膠噴霧劑或液體劑(例如但不限于糖漿、酏劑(elixirs)、水性液體中的混懸劑或溶液劑)、非水性液體劑、水包油乳液或油包水乳液。這樣的組合物含有預(yù)定量的所公開的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，并且可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的藥學(xué)方法來(lái)制備。一般參見Remington：TheScienceandPracticeofPharmacy，第21版，Lippincott、Williams和Wilkins，PhiladelphiaPA(2005)。常規(guī)劑型通常提供從制劑快速或立即釋放藥物。根據(jù)藥物的藥理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)，常規(guī)劑型的使用可引起患者血液和其它組織中的藥物濃度的廣泛的波動(dòng)。這些波動(dòng)可以影響多個(gè)參數(shù)，例如給藥頻率、起效時(shí)間、效力持續(xù)時(shí)間、治療劑血液水平的維持、毒性、副作用等。有利地，控釋制劑可用于控制藥物的起效時(shí)間、作用持續(xù)時(shí)間、治療窗內(nèi)的血漿水平和血液峰值水平。特別地，控釋或延長(zhǎng)釋放劑型或制劑可以用于確保實(shí)現(xiàn)藥物的最大有效性，同時(shí)將可能由于藥物劑量不足(即，低于最低治療水平)以及超過(guò)藥物的毒性水平而產(chǎn)生的潛在的不利作用和安全問(wèn)題最小化。在一些實(shí)施方式中，可以將GDF-15的抑制劑以持續(xù)釋放制劑給予。控制釋放的藥物產(chǎn)品具有改善藥物治療以超過(guò)其非控釋對(duì)應(yīng)物所實(shí)現(xiàn)的藥物治療的共同目標(biāo)。理想地，醫(yī)學(xué)治療中的優(yōu)化設(shè)計(jì)的控釋制劑的使用的特征在于使用最少的藥物物質(zhì)在最短的時(shí)間內(nèi)治愈或控制病癥?？蒯屩苿┑膬?yōu)點(diǎn)包括：1)延長(zhǎng)藥物活性；2)降低劑量頻率；3)增加患者依從性；4)使用較少的總的藥物；5)降低局部或全身性副作用；6)藥物積累的最小化；7)減少血液水平波動(dòng)；8)改善治療效力；9)減少藥物活性的增強(qiáng)或喪失；以及10)改善疾病或病癥的控制速度。Kim，Cherng-ju，ControlledReleaseDosageFormDesign，2(TechnomicPublishing，Lancaster，Pa.：2000)。大多數(shù)控釋制劑被設(shè)計(jì)為最初釋放如下量的藥物(活性成分)，所述量的藥物迅速產(chǎn)生期望的治療效果，并且逐漸地和連續(xù)地釋放其它量的藥物以在延長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)保持治療或預(yù)防效果的這一水平。為了在體內(nèi)保持這種恒定的藥物水平，藥物必須以償還從體內(nèi)代謝和排泄的藥物的量的速率從劑型中釋放?？梢酝ㄟ^(guò)各種條件對(duì)活性成分的控釋進(jìn)行刺激，包括但不限于pH、離子強(qiáng)度、滲透壓、溫度、酶、水和其它生理?xiàng)l件或化合物。各種已知的控釋或延長(zhǎng)釋放劑型、制劑和裝置可以適于與本公開的鹽和組合物一起使用。實(shí)例包括但不限于在美國(guó)專利號(hào)：3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；4,008,719；5674,533；5,059,595；5,591,767；5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556；5,733,566和6,365,185B1中所描述的，通過(guò)引用將其各自并入本文。這些劑型可以使用例如羥丙基甲基纖維素、其它聚合物基質(zhì)、凝膠、可透過(guò)膜、滲透系統(tǒng)(例如(AlzaCorporation，MountainView，Calif.USA))或它們的組合對(duì)一種或多種活性成分提供緩釋或控釋，以提供不同比例的期望的釋放曲線。本文所述的方法可以進(jìn)一步包括向受試者給予第二藥劑和/或治療，例如作為組合治療的一部分。第二藥劑和/或治療的非限制性實(shí)例可以包括鈣通道阻滯劑(例如維拉帕米、地爾硫卓和二氫吡啶)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACE-1)(例如卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、群多普利和貝那普利)、ARB(坎地沙坦、依普羅沙坦、厄貝沙坦、氯沙坦、奧美沙坦、替米沙坦和纈沙坦)、噻嗪利尿劑、β-阻滯劑(例如阿替洛爾、美托洛爾、納多洛爾、奈必洛爾、氧烯洛爾、吲哚洛爾、普萘洛爾和噻嗎洛爾)以及α-阻滯劑(例如多沙唑嗪、酚妥拉明、吲哚拉明、苯氧芐胺、哌唑嗪、特拉唑嗪和妥拉唑啉)。在某些實(shí)施方式中，可以一次向患者給予有效劑量的包含本文所述的GDF-15的抑制劑的組合物。在某些實(shí)施方式中，可以重復(fù)向患者給予有效劑量的包含GDF-15的抑制劑的組合物。對(duì)于全身性給予，可以向受試者給予治療量的包含GDF-15的抑制劑的組合物，例如，如0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg以上。在一些實(shí)施方式中，在初始治療方案之后，可以在較不頻繁的基礎(chǔ)上給予治療。例如，在每?jī)芍苤委熑齻€(gè)月后，治療可以每月、六個(gè)月或一年以上重復(fù)一次。根據(jù)本文所述方法的治療可以降低病癥的癥狀或標(biāo)志物的水平，例如，血壓降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、或至少90％以上。如本文所述的組合物的劑量可以由醫(yī)生確定并且根據(jù)需要調(diào)整以適合所觀察到的治療效果。關(guān)于治療的持續(xù)時(shí)間和頻率，熟練的臨床醫(yī)生通常對(duì)受試者進(jìn)行監(jiān)測(cè)，以確定治療在何時(shí)提供治療益處，并確定是否增加或減少劑量、增加或減少給予頻率、中止治療、恢復(fù)治療、或?qū)χ委煼桨高M(jìn)行其它改變。根據(jù)眾多臨床因素，例如受試者對(duì)活性成分的敏感性，給藥方案可以從每周一次到每日變化。期望的劑量或活性量可以一次給予或分成亞劑量(subose)(例如2-4個(gè)亞劑量)并在一段時(shí)間內(nèi)給予，例如以一天中的適當(dāng)間隔或其它適當(dāng)?shù)臅r(shí)間表。在一些實(shí)施方式中，給予可以是長(zhǎng)期的，例如，在數(shù)周或數(shù)月的期間內(nèi)每日一次或多次給藥和/或治療。給藥和/或治療方案的實(shí)例是在1周、2周、3周、4周、1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月或者6個(gè)月或更長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)每天給予、每天兩次給予、每天三次給予或每天四次以上給予?？梢栽诶?分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘或25分鐘的時(shí)段內(nèi)給予包含GDF-15的抑制劑的組合物。根據(jù)本文所述的方法，給予GDF-15的抑制劑的劑量范圍取決于例如抑制劑的形式、其效力以及本文所述的病癥的癥狀、標(biāo)記物或指示物的期望降低的程度，例如血壓期望降低的百分比。劑量不應(yīng)該大到引起不良副作用。通常，劑量將隨著患者的年齡、身體狀況和性別而變化，并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。在任何并發(fā)癥的情況下，劑量也可以由個(gè)體醫(yī)師進(jìn)行調(diào)整。熟練的臨床醫(yī)生可以確定GDF-15的抑制劑在例如本文所述的病癥的治療中的效力、或引起本文所述的應(yīng)答(例如降低血壓)的效力。然而，如果根據(jù)本文所述的方法治療后，以有益的方式改變了本文所述病癥的一種或多種指征或癥狀，改善或甚至減緩其它臨床上接受的癥狀，或者引起至少10％的期望的應(yīng)答，則治療被認(rèn)為是本文所使用的術(shù)語(yǔ)“有效治療”?？梢岳缤ㄟ^(guò)對(duì)根據(jù)本文所述的方法治療的病癥的標(biāo)志物、指示物、癥狀和/或發(fā)生率或者任何其它適當(dāng)?shù)目蓽y(cè)量參數(shù)(例如血壓)進(jìn)行測(cè)量，對(duì)效力進(jìn)行評(píng)估。還可以通過(guò)經(jīng)由住院評(píng)估的個(gè)體治療失敗惡化或?qū)︶t(yī)學(xué)干預(yù)的需要(即，停止疾病進(jìn)展)對(duì)效力進(jìn)行測(cè)量。對(duì)這些指示物進(jìn)行測(cè)量的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的，和/或在本文進(jìn)行了描述。治療包括個(gè)體或動(dòng)物中的疾病的任何治療(一些非限制性實(shí)例包括人或動(dòng)物)，并且包括：(1)抑制疾病，例如，預(yù)防癥狀(例如，疼痛或炎癥)的惡化；或(2)緩解疾病的嚴(yán)重性，例如引起癥狀消退。用于治療疾病的有效量是指當(dāng)給予有需要的受試者時(shí)，對(duì)于該疾病而言足以產(chǎn)生如本文所定義的術(shù)語(yǔ)的有效治療的量。可以通過(guò)對(duì)期望的應(yīng)答或病癥的物理指標(biāo)(例如血壓)來(lái)確定藥劑的效力。通過(guò)對(duì)這些參數(shù)中的任一個(gè)或參數(shù)的任意組合進(jìn)行測(cè)量來(lái)監(jiān)測(cè)給予和/或治療的效力在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)?？梢栽诒疚乃龅牟“Y的動(dòng)物模型(例如治療PAH的小鼠模型)中對(duì)效力進(jìn)行評(píng)估。當(dāng)使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型時(shí)，在觀察到標(biāo)志物(例如血壓)的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著變化時(shí)，證明了治療的效力。本文提供了體外和動(dòng)物模型試驗(yàn)，使得能夠?qū)o定劑量的GDF-15的抑制劑進(jìn)行評(píng)估。作為非限制性實(shí)例，可通過(guò)使細(xì)胞與抑制劑接觸并測(cè)量例如PAI1和/或IL6的表達(dá)來(lái)對(duì)GDF-15的抑制劑的劑量進(jìn)行評(píng)估，其中，這些水平的降低表明GDF-15得到抑制。還可以在動(dòng)物模型(例如，小鼠高血壓模型)中對(duì)給定劑量組合的效力評(píng)估。例如，可以用野百合堿(MCT)對(duì)小鼠進(jìn)行處理以誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓，然后用GDF-15的抑制劑進(jìn)行治療。可以通過(guò)右心室導(dǎo)管插入術(shù)對(duì)右心室收縮壓(RVSP)進(jìn)行測(cè)量，并且可以通過(guò)右心室(RV)游離壁的重量對(duì)左心室和間隔壁(LV+S)的總和的比例確定右心室肥厚(RVH)?？梢杂忙疗交〖?dòng)蛋白和血管性血友病因子對(duì)肺組織切片進(jìn)行染色，以分別識(shí)別血管平滑肌血管和內(nèi)皮。為方便起見，下面提供了在說(shuō)明書、實(shí)施例和所附權(quán)利要求中使用的一些術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)的含義。除非另有說(shuō)明或者從上下文暗示，下列術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)包含以下提供的含義。提供這些定義以幫助對(duì)特定實(shí)施方式進(jìn)行描述，并不旨在限制所要求保護(hù)的發(fā)明，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍僅由權(quán)利要求限定。除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。如果本領(lǐng)域中術(shù)語(yǔ)的使用與本文中提供的定義之間存在明顯差異，則應(yīng)以說(shuō)明書中提供的定義為準(zhǔn)。為方便起見，此處收集了本發(fā)明的說(shuō)明書、實(shí)施例和所附權(quán)利要求中使用的某些術(shù)語(yǔ)。術(shù)語(yǔ)“減少/降低(decrease、reduced、reduction)”或“抑制”在本文中均用于表示以統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的量降低。在一些實(shí)施方式中，“減少、降低”或“抑制”通常是指相較于參考水平(例如，無(wú)給定的治療)減少至少10％，并且可以包括例如減少至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％、至少約99％以上。本文所使用的“減少/降低”或“抑制”不包括相較于參考水平的完全抑制或減少/降低?！巴耆种啤笔窍噍^于參考水平100％抑制。減少/降低可以優(yōu)選下降至無(wú)給定疾病的個(gè)體的正常范圍內(nèi)接受的水平。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“增加/增高(increased、increase)”、“增強(qiáng)”或“活化”是指以統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的量增加。在一些實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“增加/增高(increased、increase)”、“增強(qiáng)”或“活化”可以指相較于參考水平增加至少10％，例如增加至少約20％、或至少約30％、或至少約40％、或至少約50％、或至少約60％、或至少約70％、或至少約80％、或至少約90％、或高達(dá)并包括100％的增高或者相較于參考水平在10％-100％之間的任意增加，或至少約2倍、或至少約3倍、或至少約4倍、或至少約5倍、或至少約10倍增加、或相較于參考水平的2倍-10倍以上之間的任意增加。在標(biāo)記物或癥狀的上下文中，“增加”是以這種水平的統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的增加。本文所使用的“受試者”是指人或動(dòng)物。通常，動(dòng)物是脊椎動(dòng)物，例如靈長(zhǎng)類動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物、家畜或狩獵動(dòng)物。靈長(zhǎng)類動(dòng)物包括黑猩猩、食蟹猴、蜘蛛猴和獼猴，例如恒河猴。嚙齒動(dòng)物包括小鼠、大鼠、土撥鼠、雪貂、兔和倉(cāng)鼠。家畜和狩獵動(dòng)物包括牛、馬、豬、鹿、野牛、水牛、貓科動(dòng)物(例如家貓)、犬科動(dòng)物(例如狗、狐貍、狼)、禽類(例如雞、鴯鹋、鴕鳥)以及魚(例如鱒魚、鯰魚和鮭魚)。在一些實(shí)施方式中，受試者是哺乳動(dòng)物，例如靈長(zhǎng)類動(dòng)物，例如人。術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”、“患者”和“受試者”在本文中可互換使用。優(yōu)選地，受試者是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物可以是人、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物、小鼠、大鼠、狗、貓、馬或牛，但不限于這些實(shí)例。除人以外的哺乳動(dòng)物可以有利地用作代表高血壓動(dòng)物模型的受試者。受試者可以是男性或女性。受試者可以是先前已被診斷為患有或者被鑒定為患有或具有需要治療的病癥(例如高血壓)或與此類病癥相關(guān)的一種或多種并發(fā)癥的受試者，并且任選地已經(jīng)經(jīng)受高血壓或與高血壓相關(guān)的一種或多種并發(fā)癥的治療的受試者?；蛘?，受試者也可以是先前未被診斷為患有高血壓或患有與高血壓相關(guān)的一種或多種并發(fā)癥的受試者。例如，受試者可以是表現(xiàn)出高血壓的一種或多種危險(xiǎn)因素、或與高血壓相關(guān)的一種或多種并發(fā)癥的受試者，或未表現(xiàn)出危險(xiǎn)因素的受試者。對(duì)于特定病癥的“需要治療的受試者”可以是患有該病癥、被診斷為患有該病癥、或處于發(fā)展出該病癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者。術(shù)語(yǔ)“藥劑”一般指通常不存在或者不以給予至細(xì)胞、組織或受試者的水平存在的任何實(shí)體。藥劑可選自包括但不限于如下的組：多核苷酸、多肽、小分子以及抗體或其抗原結(jié)合片段。多核苷酸可以是RNA或DNA，并且可以是單鏈或雙鏈的，并且可以選自包括如下的組：例如，編碼多肽的核酸和核酸類似物。多肽可以是但不限于天然存在的多肽、突變的多肽、或保留感興趣的功能的片段。藥劑的進(jìn)一步的實(shí)例包括但不限于核酸適體、肽-核酸(PNA)、鎖核酸(LNA)、小的有機(jī)分子或無(wú)機(jī)分子；糖；寡糖；多糖；生物大分子；肽模擬物；核酸類似物和衍生物；由生物材料(如細(xì)菌、植物、真菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織)制成的提取物；以及天然存在的或合成的組合物?？梢詫⑺巹┦┯弥两橘|(zhì)，其中，藥劑與細(xì)胞接觸并誘導(dǎo)其作用。或者，藥劑可以作為將編碼所述藥劑的核酸序列引入細(xì)胞的結(jié)果而處于細(xì)胞中，并且其轉(zhuǎn)錄引起細(xì)胞內(nèi)的核酸和/或蛋白質(zhì)環(huán)境刺激物的生成。在一些實(shí)施方式中，藥劑是任何化學(xué)品、實(shí)體或部分，包括但不限于合成的和天然存在的非蛋白質(zhì)實(shí)體。在某些特定實(shí)施方式中，藥劑是具有選自例如未取代或取代的烷基、芳香族或雜環(huán)基部分的化學(xué)部分的小分子，包括大環(huán)內(nèi)酯類、leptomycins及其相關(guān)的天然產(chǎn)物或類似物。藥劑可已知具有期望的活性和/或性質(zhì)，或者可以選自不同的化合物的庫(kù)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“小分子”可以是至“天然產(chǎn)物樣”的化合物，然而，術(shù)語(yǔ)“小分子”不限于“天然產(chǎn)物樣”化合物。相反，小分子的典型特征在于其含有多個(gè)碳-碳鍵，并且具有大于約50道爾頓但小于約5000道爾頓(5kD)的分子量。優(yōu)選地，小分子具有小于3kD、更優(yōu)選小于2kD、最優(yōu)選小于1kD的分子量。在一些情況下，優(yōu)選小分子具有等于或小于700道爾頓的分子量。在一些實(shí)施方式中，給定多肽的抑制劑可以是對(duì)該多肽特異性的抗體試劑。本文所使用的“抗體”是指IgG、IgM、IgA、IgD或IgE分子或其抗原特異性抗體片段(包括但不限于Fab、F(ab')2、Fv、二硫鍵連接的Fv、scFv、單結(jié)構(gòu)域抗體、閉合構(gòu)象多特異性抗體、二硫鍵連接的scfv、雙特異抗體)，而無(wú)論其源自天然產(chǎn)生抗體的任何物種或是通過(guò)重組DNA技術(shù)產(chǎn)生的；無(wú)論是從血清、B細(xì)胞、雜交瘤、轉(zhuǎn)染瘤、酵母或是細(xì)菌中分離的。本文所述的“抗原”是通過(guò)抗體藥劑上的結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的分子。通常，抗原被抗體配體結(jié)合，并且能夠在體內(nèi)產(chǎn)生抗體應(yīng)答?？乖梢允嵌嚯?、蛋白質(zhì)、核酸或其它分子或其部分。術(shù)語(yǔ)“抗原決定簇”是指被抗原結(jié)合分子(更具體地，通過(guò)所述分子的抗原結(jié)合位點(diǎn))識(shí)別的抗原上的表位。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“抗體試劑”是指包括至少一個(gè)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列并且特異性地結(jié)合給定抗原的多肽?？贵w試劑可包括抗體或含有抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽。在一些實(shí)施方式中，抗體試劑可包含單克隆抗體或含有單克隆抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽。例如，抗體可包含重(H)鏈可變區(qū)(本文縮寫為VH)和輕(L)鏈可變區(qū)(本文縮寫為VL)。在另一個(gè)實(shí)施例中，抗體包含兩個(gè)重(H)鏈可變區(qū)和兩個(gè)輕(L)鏈可變區(qū)。術(shù)語(yǔ)“抗體試劑”涵蓋抗體的抗原結(jié)合片段(例如，單鏈抗體、Fab和sFab片段、F(ab')2、Fd片段、Fv片段、scFv和結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)片段(參見例如Wildt等，EurJ.Immunol.1996；26(3)：629-39；通過(guò)引用將其整體并入本文))以及完整抗體?？贵w可以具有IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(以及它們的亞型和組合)的結(jié)構(gòu)特征?？贵w可以來(lái)自任何來(lái)源，包括小鼠、兔、豬、大鼠和靈長(zhǎng)類動(dòng)物(人和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物)和靈長(zhǎng)類動(dòng)物化的抗體?？贵w還包括midibodies、人源化抗體和嵌合抗體等。VH區(qū)和VL區(qū)可以進(jìn)一步細(xì)分為稱為“互補(bǔ)決定區(qū)”(“CDR”)的高變區(qū)，其間插入有更保守的區(qū)域(稱為“框架區(qū)”(“FR”))。已經(jīng)精確定義了框架區(qū)和CDR的范圍(參見Kabat，E.A.等(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第五版，USDepartmentofHealthandHumanServices，NIHPublicationNo.91-3242，以及Chothia，C.等(1987)J.Mol.Biol.196：901-917；通過(guò)引用將其整體并入本文)。每個(gè)VH和VL通常由三個(gè)CDR和四個(gè)FR組成，從氨基末端到羧基末端按照以下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本文中可互換使用的術(shù)語(yǔ)“抗原結(jié)合片段”或“抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域”用于指保留了特異性地結(jié)合至感興趣的靶標(biāo)能力的全長(zhǎng)抗體的一個(gè)或多個(gè)片段。包含在術(shù)語(yǔ)全長(zhǎng)抗體的“抗原結(jié)合片段”的范圍內(nèi)的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；(ii)F(ab')2片段，包括在鉸鏈區(qū)通過(guò)二硫鍵連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；(iii)由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(v)由VH或VL結(jié)構(gòu)域組成的dAb片段(Ward等，(1989)Nature341：544-546；通過(guò)引用將其整體并入本文)；以及(vi)保留特異性抗原結(jié)合功能的分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”是指兩個(gè)分子、化合物、細(xì)胞和/或顆粒之間的化學(xué)相互作用，其中，第一實(shí)體以比其結(jié)合至第三實(shí)體(非靶標(biāo))更大的特異性和親和力結(jié)合至第二靶標(biāo)實(shí)體。在一些實(shí)施方式中，特異性結(jié)合可以指第一實(shí)體對(duì)于第二靶標(biāo)實(shí)體的親和力是其對(duì)第三非靶標(biāo)實(shí)體的親和力的至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍、至少1000倍以上。對(duì)給定靶標(biāo)特異性的試劑是在所使用的試驗(yàn)條件下對(duì)該靶標(biāo)顯示出特異性結(jié)合的試劑。此外，如本文所述，可以進(jìn)一步對(duì)重組人源化抗體進(jìn)行優(yōu)化，以降低潛在的免疫原性，同時(shí)保持功能活性，用于人類的治療。在這方面，功能活性是指能夠展示出與本文所述的重組抗體或其抗體試劑相關(guān)的一種或多種已知功能活性的多肽。這種功能活性包括例如結(jié)合GDF-15的能力。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)”和“多肽”在本文中可互換使用，表示通過(guò)相鄰殘基的α-氨基和羧基之間的肽鍵彼此連接的一系列氨基酸殘基。術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)”和“多肽”是指氨基酸的聚合物，所述氨基酸包括經(jīng)修飾的氨基酸(例如磷酸化、糖化、糖基化等)和氨基酸類似物，而不論其大小或功能?！暗鞍踪|(zhì)”和“多肽”通常用于指相對(duì)大的多肽，而術(shù)語(yǔ)“肽”通常用于指小的多肽，但是本領(lǐng)域中這些術(shù)語(yǔ)的使用是重疊的。當(dāng)提及基因產(chǎn)物及其片段時(shí)，術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)”和“多肽”在本文中可互換使用。因此，示例性多肽或蛋白質(zhì)包括基因產(chǎn)物、天然存在的蛋白質(zhì)、同源物、直系同源物、旁系同源物、片段，以及前述物質(zhì)的其它等同物、變體、片段和類似物。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“核酸”或“核酸序列”是指摻入核糖核酸、脫氧核糖核酸或其類似物的單位的任何分子，優(yōu)選聚合分子。核酸可以是單鏈的或雙鏈的。單鏈核酸可以是變性雙鏈DNA的一條核酸鏈?；蛘?，單鏈核酸可以是不衍生自任何雙鏈DNA的單鏈核酸。在一個(gè)方面，核酸可以是DNA。在另一方面，核酸可以是RNA。合適的核酸分子是DNA，包括基因組DNA或cDNA。其它合適的核酸分子是RNA，包括mRNA。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“處理/治療(treat、treatment、treating)”或“改善”是指治療性處理，其目的是逆轉(zhuǎn)、緩解、改善、抑制、減緩或停止與疾病或障礙(例如，高血壓)相關(guān)的病癥的進(jìn)展或嚴(yán)重性。術(shù)語(yǔ)“處理/治療”包括減輕或減緩與高血壓相關(guān)的病癥、疾病或障礙的至少一種副作用或癥狀。如果一種或多種癥狀或臨床指標(biāo)物降低，則治療通常是“有效的”?；蛘撸绻膊〉倪M(jìn)展減慢或停止，則治療是“有效的”。也就是說(shuō)，“治療”不僅包括癥狀或標(biāo)志物的改善，而且包括相較于無(wú)治療的情況下所預(yù)期的，停止或至少減慢癥狀的進(jìn)展或惡化。有益的或期望的臨床結(jié)果包括但不限于減輕一種或多種癥狀、減小疾病程度、穩(wěn)定(即，不惡化)疾病狀態(tài)、延遲或減緩疾病進(jìn)展、改善或減輕疾病狀態(tài)、緩解(無(wú)論部分或全部)和/或降低死亡率，無(wú)論其是可檢測(cè)的還是不可檢測(cè)的。術(shù)語(yǔ)疾病的“治療”還包括緩和疾病的癥狀或副作用(包括姑息治療)。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”是指與藥學(xué)上可接受的載體(例如在制藥工業(yè)中常用的載體)組合的活性藥劑。本文采用的短語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指下述化合物、材料、組合物和/或劑型：在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適于與人類和動(dòng)物的組織接觸而無(wú)過(guò)度的毒性、刺激、過(guò)敏反應(yīng)或其它問(wèn)題或并發(fā)癥，與合理的收益/風(fēng)險(xiǎn)比相匹配。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“給予”是指通過(guò)一定的方法或途徑向受試者中放置本文所公開的化合物，使得至少將藥劑部分遞送至期望部位。含有本文所公開的化合物的藥物組合物可以通過(guò)任何適當(dāng)?shù)耐緩浇o予，從而在受試者中產(chǎn)生有效的治療。術(shù)語(yǔ)“統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著”或“顯著地”是指統(tǒng)計(jì)顯著性，并且通常是指2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差(2SD)或更大的差異。除了在操作實(shí)施例中或另有指示以外，本文所使用的表示成分的量或反應(yīng)條件的所有數(shù)字均應(yīng)理解為在所有情況下均由術(shù)語(yǔ)“約”加以修飾。術(shù)語(yǔ)“約”在與百分比連接使用時(shí)可以表示±1％。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“包含”或“包括”是指對(duì)于方法或組合物而言必不可少的組成、方法及其各自的成分，對(duì)于包含未指定的要素(無(wú)論是必要的要素或是非必要的要素)而言也是開放性的。術(shù)語(yǔ)“由……組成”是指本文所述的組合物、方法及其各自的成分，排除了在實(shí)施方式的描述中未列舉的任何要素。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“基本上由……組成”是指對(duì)于給定的實(shí)施方式而言所需的要素。該術(shù)語(yǔ)允許存在實(shí)質(zhì)上不會(huì)影響實(shí)施方式的基本和新穎的或功能性的特性的要素。除非上下文另有明確指示，單數(shù)術(shù)語(yǔ)“一/該/所述(a/an/the)”包括復(fù)數(shù)的指示對(duì)象。類似地，除非上下文另有明確指示，詞語(yǔ)“或”意在包括“和”。盡管與本文描述的相似或相當(dāng)?shù)姆椒ê筒牧峡捎糜诒竟_的實(shí)踐或試驗(yàn)中，在下文中對(duì)合適的方法和材料進(jìn)行了描述?？s寫“例如(e.g.)”源自拉丁文的例如(exempligratia)，并且在本文中用于表示非限制性的實(shí)例。因此，縮寫“e.g.”與術(shù)語(yǔ)“例如(forexample)”同義。除非本文另有定義，與本申請(qǐng)結(jié)合使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有本公開所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的含義。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明不限于本文所述的特定方法、方案和試劑等，因此可以是變化的。這里使用的術(shù)語(yǔ)術(shù)僅僅是為了對(duì)特定實(shí)施方式進(jìn)行描述的目的，并不旨在限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅由權(quán)利要求限定。免疫學(xué)和分子生物學(xué)中常見術(shù)語(yǔ)的定義可以在以下文獻(xiàn)中找到：MerckSharp&DohmeCorp.出版的TheMerckManualofDiagnosisandTherapy，第19版，2011(ISBN978-0-911910-19-3)；RobertS.Porter等編，由BlackwellScienceLtd.出版的TheEncyclopediaofMolecularCellBiologyandMolecularMedicine，1999-2012(ISBN9783527600908)；以及RobertA.Meyers編，由VCHPublishers，Inc出版的MolecularBiologyandBiotechnology：aComprehensiveDeskReference，1995(ISBN1-56081-569-8)；由Elsevier出版的ImmunologybyWernerLuttmann，2006；Janeway'sImmunobiology，KennethMurphy，AllanMowat，CaseyWeaver編，Taylor&FrancisLimited，2014(ISBN0815345305,9780815345305)；Lewin'sGenesXI，由Jones&BartlettPublishers出版，2014(ISBN-1449659055)；MichaelRichardGreen和JosephSambrook，MolecularCloning：ALaboratoryManual，第四版，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，N.Y.，USA(2012)(ISBN1936113414)；Davis等，BasicMethodsinMolecularBiology，ElsevierSciencePublishing，Inc.，NewYork，USA(2012)(ISBN044460149X)；LaboratoryMethodsinEnzymology：DNA，JonLorsch編，Elsevier，2013(ISBN0124199542)；CurrentProtocolsinMolecularScience(CPMB)，F(xiàn)rederickM.Ausubel編，JohnWileyandSons，2014(ISBN047150338X，9780471503385)，CurrentProtocolsinProteinScience(CPPS)，JohnE.Coligan編，JohnWileyandSons，Inc.，2005；以及CurrentProtocolsinImmunology(CPI)(JohnE.Coligan，ADAMKruisbeek，DavidHMargulies，EthanMShevach，WarrenStrobe(編)JohnWileyandSons，Inc.，2003(ISBN0471142735,9780471142737)，通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容并于本文。本文在對(duì)本發(fā)明各個(gè)方面的描述中對(duì)其它術(shù)語(yǔ)進(jìn)行定義。出于描述和公開的目的，將本申請(qǐng)全文中引用的所有專利和其它出版物(包括文字出版物、發(fā)行的專利、公開的專利申請(qǐng)和同時(shí)待審的專利申請(qǐng))以引用的方式明確地并入本文，例如，在此類出版物中描述的可與本文描述的技術(shù)關(guān)聯(lián)使用的方法學(xué)。這些出版物僅由于它們的公開早于本申請(qǐng)的申請(qǐng)日而提供。在這一方面，不應(yīng)當(dāng)視作承認(rèn)了本發(fā)明人沒(méi)有權(quán)利借助于先前的發(fā)明或因?yàn)槿魏纹渌蚨鴮⒋祟惞_內(nèi)容提前。所有關(guān)于這些文件的日期的聲明或關(guān)于這些文件的內(nèi)容的表述是基于申請(qǐng)人可獲得的信息，并不構(gòu)成關(guān)于這些文件的日期或內(nèi)容的正確性的任何承認(rèn)。對(duì)本公開的實(shí)施方式的描述并非旨在進(jìn)行窮舉或?qū)⒈竟_限制為所公開的明確的形式。盡管本文中出于說(shuō)明性目的描述了本公開的具體實(shí)施方式和實(shí)施例，然而正如相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員將了解的，可在本公開的范圍內(nèi)進(jìn)行各種等同修改。例如，當(dāng)以給定的順序給出方法步驟或功能時(shí)，替代的實(shí)施方式能夠以不同的順序執(zhí)行功能、或可以實(shí)質(zhì)上同時(shí)執(zhí)行功能。本文所提供的本公開的教導(dǎo)可以施用至其它適當(dāng)?shù)某绦蚧蚍椒ā１疚乃龅母鞣N實(shí)施方式可以組合以提供進(jìn)一步的實(shí)施方式。如果需要的話，可對(duì)本公開的方面進(jìn)行修改，以采用上述參考文獻(xiàn)和應(yīng)用的組合、功能和構(gòu)思，從而提供本公開的進(jìn)一步的實(shí)施方式。此外，由于生物功能對(duì)等性的考慮，可以在種類或數(shù)量上對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行不影響生物或化學(xué)作用的一些改變。根據(jù)詳細(xì)的說(shuō)明書的啟示，可以對(duì)本公開作出這些改變和其它改變。所有這些修飾都旨在包含于所附的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。可將任何上述實(shí)施方式中的特定要素與其它實(shí)施方式中的要素組合或置換。此外，盡管在這些實(shí)施方式的上下文中已經(jīng)描述了與本公開的一些實(shí)施方式相關(guān)的優(yōu)點(diǎn)，然而其它實(shí)施方式也可以表現(xiàn)出此類優(yōu)點(diǎn)，并且，并非所有的實(shí)施方式都必須表現(xiàn)出這樣的優(yōu)點(diǎn)才能落入本公開的范圍之內(nèi)。本文所述的技術(shù)通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，而不應(yīng)被解釋為進(jìn)行了進(jìn)一步的限定。本文所述的技術(shù)的一些實(shí)施方式可以根據(jù)下列編號(hào)段落的任何一段進(jìn)行定義：1.一種對(duì)有治療需要的受試者中的高血壓或纖維化進(jìn)行治療的方法，所述方法包括向所述受試者給予TGFβ3、TGFβ1和/或GDF-15的抑制劑。2.如段落1所述的方法，其中，所述高血壓是肺動(dòng)脈高壓(PAH)。3.如段落1-2中任一段所述的方法，其中，所述受試者是患有或被診斷為患有肺動(dòng)脈高壓(PAH)的受試者。4.如段落1所述的方法，其中，所述纖維化是與選自于由以下所組成的組中的疾病或病癥相關(guān)的纖維化：肺氣腫；COPD；間質(zhì)性肺病和肺纖維化；特發(fā)性肺纖維化；硬皮病肺病；間質(zhì)性或肺血管疾病；博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺損傷；歸因于暴露至化療藥物(甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺)或其它毒素的肺纖維化；與早產(chǎn)、a.k.a.、支氣管肺發(fā)育不良相關(guān)的慢性肺病；與暴露至抗心律失常藥物(例如胺碘酮)相關(guān)的間質(zhì)性肺病或肺纖維化；以及與暴露至石棉、二氧化硅或谷物相關(guān)的間質(zhì)性肺病。5.如段落1或3所述的方法，其中，所述受試者是患有或被診斷為患有選自于由以下所組成的組中的疾病或病癥的受試者：肺氣腫；COPD；間質(zhì)性肺病和肺纖維化；特發(fā)性肺纖維化；硬皮病肺病；間質(zhì)性或肺血管疾??；博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺損傷；歸因于暴露至化療藥物(甲氨蝶呤、環(huán)磷酰胺)或其它毒素的肺纖維化；與早產(chǎn)、a.k.a.、支氣管肺發(fā)育不良相關(guān)的慢性肺??；與暴露至抗心律失常藥物(例如胺碘酮)相關(guān)的間質(zhì)性肺病或肺纖維化；以及與暴露至石棉、二氧化硅或谷物相關(guān)的間質(zhì)性肺病。6.如段落1-5中任一段所述的方法，其中，所述抑制劑抑制TGFβ1。7.如段落1-5中任一段所述的方法，其中，所述抑制劑抑制TGFβ3。8.如段落1-7中任一段所述的方法，其中，所述抑制劑抑制TGFβ1和TGFβ3。9.如段落1-8中任一段所述的方法，其中，所述抑制劑抑制GDF15。10.如段落9所述的方法，其中，所述抑制劑進(jìn)一步抑制TGFβ1和/或TGFβ3。11.如段落1-5中任一段所述的方法，其中，所述抑制劑對(duì)于GDF15而言是特異性的。12.如段落1-5中任一段所述的方法，其中，所述抑制劑對(duì)于TGFβ1而言是特異性的。13.如段落1-5中任一段所述的方法，其中，所述抑制劑對(duì)于TGFβ3是而言特異性的。14.如段落1-13中任一段所述的方法，其中，所述抑制劑是抗體試劑或配體捕獲劑。15.如段落14所述的方法，其中，所述配體捕獲劑是TGFβ-1/3GDF-15配體捕獲劑。16.如段落15所述的方法，其中，所述配體捕獲劑是TGFBRII-Fc。17.如段落1-16中任一段所述的方法，其中，所述受試者患有與PAH相關(guān)的結(jié)締組織病(APAH-CTD)或硬皮病。18.如段落1-17中任一段所述的方法，其中，相對(duì)于對(duì)照，所述受試者被確定為具有增高水平的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3。19.如段落18所述的方法，其中，相對(duì)于患有PAH但未顯示出APAH-CTD或硬皮病的癥狀的受試者中的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3的平均水平，所述受試者被確定為具有增高水平的GDF-15、TGFβ1和/或TGFβ3。實(shí)施例實(shí)施例1通過(guò)用野百合堿(MCT)對(duì)大鼠進(jìn)行處理來(lái)誘導(dǎo)肺高壓。在用MCT(40mg/kgSC)處理SpragueDawley大鼠后，在不同的時(shí)間間隔對(duì)右心室收縮壓(RVSP，圖1A)和右心室肥厚(RVH，圖1B)方面的變化進(jìn)行測(cè)量。通過(guò)右心室導(dǎo)管插入術(shù)對(duì)RVSP進(jìn)行測(cè)量，并通過(guò)右心室(RV)游離壁的重量對(duì)左心室和間隔壁(LV+S)的總和的比例確定RVH(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)n＝3)。經(jīng)MCT處理的大鼠的肺的定量RT-PCR顯示通過(guò)升高的PAI-1轉(zhuǎn)錄活性(圖1C)和TGFb1轉(zhuǎn)錄活性(圖1D)反映的增高的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)。通過(guò)降低的ld1(圖1E)和BMPR2(圖1F)的mRNA水平示出了受損的BMP信號(hào)傳導(dǎo)活性。在經(jīng)MCT處理的大鼠的肺中的TGFb3的表達(dá)仍然不受影響(圖1G)。在經(jīng)MCT處理的大鼠的肺中GDF15水平升高(圖1H)。相較于對(duì)照大鼠，*p<0.05，并且**p<0.01。使用RNA-Seq作為無(wú)偏差方法以對(duì)實(shí)驗(yàn)性PAH的新的致病靶標(biāo)進(jìn)行鑒別。GDF15是經(jīng)MCT處理的大鼠的肺中的TGFb超家族中的升高最多的配體(表1)。增加的PAI-1水平(圖2A)與基于RVSP的PH程度直接相關(guān)。相比之下，觀察到Bmpr2(圖2C)及轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)ld1(圖2B)的表達(dá)降低，兩者都具有與RVSP負(fù)相關(guān)的水平。在實(shí)驗(yàn)性PAH中的TGFb1的表達(dá)和表型之間無(wú)相關(guān)性。GDF15蛋白表達(dá)共定位(co-localized)至經(jīng)MCT處理的大鼠的肺中的CD68陽(yáng)性細(xì)胞和肺血管內(nèi)皮(數(shù)據(jù)未示出)。外源GDF15在人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMC，圖3A)中引發(fā)了有效的TGFb信號(hào)傳導(dǎo)活性，但未在人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(PMVEC，圖3B)中引發(fā)。使經(jīng)培養(yǎng)的血管細(xì)胞除去血清，并與在多種濃度下的BMP4、BMP9、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3和GDF15配體孵育30分鐘。實(shí)施Western印跡(圖3C)和qPCR(圖3D和圖3E)，以確定TGFBRII-Fc在體外對(duì)調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)活性的影響。發(fā)現(xiàn)TGFBRII-Fc是TGFβ1、TGFβ3和GDF15的體外選擇性配體捕獲劑。TGFBRII-Fc減弱右心室收縮壓(RVSP)、右心室肥厚和血管重塑。在用或不用不同劑量的TGFBRII-Fc(15mg/kg，每周兩次)的條件下，經(jīng)MCT處理3周后，通過(guò)在用戊巴比妥麻醉的條件下的導(dǎo)管插入術(shù)和氣管內(nèi)插管，以盲法對(duì)大鼠進(jìn)行分析，從而確定RVSP(圖4A)，并將大鼠進(jìn)行安樂(lè)死?；贔ulton’s比例(RV/(LV+S)，圖4B)的測(cè)量，以盲法對(duì)RVH的程度進(jìn)行評(píng)估。將值表示為平均值±SEM，n＝6-8，**p<0.01和***p<0.001(相較于對(duì)照大鼠)。對(duì)tgfb1(圖4C)、pai1(圖4D)和il6(圖4E)的mRNA水平進(jìn)行測(cè)定。將值表示為平均值±SEM，n＝3-5，*p<0.05和**p<0.01(相較于對(duì)照)。用α平滑肌肌動(dòng)蛋白和血管性血友病因子對(duì)肺組織部分進(jìn)行染色，以分別鑒別血管平滑肌血管和內(nèi)皮(數(shù)據(jù)未示出)。對(duì)遠(yuǎn)端腺泡內(nèi)血管(直徑10μm-50μm)的肌肉化進(jìn)行定量，并對(duì)未肌肉化血管、部分肌肉化血管和完全(周向)肌肉化血管的百分比進(jìn)行計(jì)算(圖4F)。TGFBRII-Fc處理(15mg/kg，每周兩次)顯著降低完全肌肉化血管的百分比，并引起降低內(nèi)側(cè)壁厚度指數(shù)的趨勢(shì)。將值表示為平均值±SEM，n＝89-127個(gè)血管/處理組(各自來(lái)自6-8只大鼠)，p值如所示出的。在PH確立后用TGFBRII-Fc進(jìn)行的處理同死亡率和PH的部分復(fù)蘇有關(guān)。在用MCT(40mg/kgSC)處理之后，以延遲的方式在PH確立后的第17天開始用TGFBRII-FC(15mg/kg每周三次)對(duì)大鼠進(jìn)行處理。相較于用輔料處理的大鼠(每組n＝18)，Kaplan-Meier分析(圖4G)顯示出在經(jīng)TGFBRII-Fc處理的組中的改善的存活率。在第35天的存活動(dòng)物中，在用TGFBRII-Fc處理的動(dòng)物中存在顯著降低的RVSP(圖4H)，但在RVH方面不存在顯著差異(圖4I)。值顯示為平均值±SEM，每組n＝8-11，**p<0.01相較于對(duì)照。TGFBRII-Fc處理在具有確立的表型的大鼠中減弱了肺血管重塑。TGFBRII-Fc在PAH鼠模型中的效力。將小鼠用VEGFR阻斷劑(SUGEN)進(jìn)行處理，并暴露至低氧3周。TGFBRII-Fc處理(15mg/kg，每周3次)減少了RVSP并預(yù)防右心室肥厚(圖5A至圖5B)。轉(zhuǎn)基因小鼠可用于確定GDF15的致病作用。對(duì)GDF15敲除小鼠進(jìn)行保護(hù)以免受SUGEN/缺氧引起的PAH(圖6A至圖6D)。**p<0.01和***p<0.001，如所示出的。GDF15在體外的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HASMC)中誘導(dǎo)有效的TGFb信號(hào)傳導(dǎo)與肺血管平滑肌細(xì)胞中的數(shù)據(jù)一致。將BMP4、TGFb1和TGFb2用作陽(yáng)性對(duì)照(圖7A至圖7B)。在HASMC中證實(shí)了TGFBRII-Fc在阻斷TGFb1、TGFb3和GDF15誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)方面的選擇性(圖8A至圖8B)。*p<0.05并且**p<0.01，如所示出的。外源GDF15不能誘導(dǎo)人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(HPAEC)中的TGFb信號(hào)傳導(dǎo)(圖7)，與微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HPMVEC)中的數(shù)據(jù)一致。在經(jīng)MCT處理的大鼠中，低劑量的TGFBRII-Fc(5mg/kg，每周兩次)顯示出了降低RVSP(圖10A)和右心室肥厚(圖10B)的趨勢(shì)。值得注意的是，低劑量的TGFBRII-Fc處理顯著阻止了MCT大鼠中的肺血管重塑。表1：使用RNA-Seq作為無(wú)偏差方法以對(duì)實(shí)驗(yàn)性PAH的新的致病靶標(biāo)進(jìn)行鑒別。GDF15是經(jīng)MCT處理的大鼠的肺中的TGFb超家族中的升高最多的配體。MCTvsPBS實(shí)施例2：選擇性TGF-β配體捕獲劑改善了肺動(dòng)脈高壓轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)配體充當(dāng)了發(fā)育和組織穩(wěn)態(tài)、通過(guò)I型和II型絲氨酸-蘇氨酸激酶受體進(jìn)行的信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，以調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄程序?；诿庖呓M織學(xué)和基因表達(dá)研究，過(guò)量的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)以及相關(guān)的轉(zhuǎn)錄和重塑活性牽涉入肺動(dòng)脈高壓(PAH)的發(fā)病機(jī)制，以及TGF-βI型受體(ALK5)抑制劑減弱實(shí)驗(yàn)性PAH的能力。然而，治療潛力受到與TGF-β配體的廣泛抑制相關(guān)的心血管毒性和全身毒性的限制。在本研究中，我們對(duì)選擇性TGF-β1/3配體捕獲劑(TGFBRII-Fc)是否可以影響實(shí)驗(yàn)性PAH和肺血管重塑進(jìn)行了研究。用TGFBRII-Fc處理減弱了SMAD2磷酸化、TGF-β轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)PAI-1的正?；磉_(dá)，并且減輕了經(jīng)野百合堿處理的大鼠和經(jīng)SUGEN-低氧處理的小鼠中的PAH和肺血管重塑。向建立了PAH的經(jīng)野百合堿處理的大鼠給予TGFBRII-Fc改善了肺部壓力、存活率和重塑。重要的是，未發(fā)現(xiàn)與TGFBRII-Fc處理相關(guān)的心臟結(jié)構(gòu)或瓣膜異常?？偟膩?lái)說(shuō)，我們的數(shù)據(jù)表明，對(duì)于矯正TGFβ介導(dǎo)的肺血管重塑和PH而言，選擇性TGF-β配體捕獲劑可能是有效且可耐受的策略。肺動(dòng)脈高壓(PAH)是高度病態(tài)的病癥，其特征在于由進(jìn)行性肺血管病變引起的升高的肺血管阻力(PVR)和動(dòng)脈壓力，這導(dǎo)致右心室肥厚(RVH)，并且常常導(dǎo)致右心室衰竭和死亡1,2。PAH的肺血管損傷包括由過(guò)度增殖性肌成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮譜系組成的新生內(nèi)膜和阻塞性的損傷、內(nèi)側(cè)肥厚，以及作為這種疾病的病證的多通道叢狀損傷。PAH的特發(fā)性和遺傳性形式與編碼骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)II型受體(BMPRII)的BMPR2中的雜合突變相關(guān)3,4，它是血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌以及其它組織的細(xì)胞生理學(xué)中具有許多重要功能的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)信號(hào)傳導(dǎo)家族的成員5-8。TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)家族包括超過(guò)30種配體，所述配體包括BMP、TGF-β、活化素、以及生長(zhǎng)和分化因子(GDF)，每種配體均作為多功能細(xì)胞因子對(duì)血管穩(wěn)態(tài)和疾病作出潛在的重要貢獻(xiàn)9-11。雖然BMPR2的PAH相關(guān)突變導(dǎo)致BMP信號(hào)傳導(dǎo)功能喪失，但長(zhǎng)期以來(lái)觀察到，來(lái)自人IPAH的肺組織通過(guò)TGF-β途徑的增強(qiáng)的活性具有顯著性12。實(shí)際上，肺高壓的多種動(dòng)物模型(包括由低氧誘導(dǎo)的模型、由野百合堿誘導(dǎo)的損傷模型或血吸蟲病感染模型)已經(jīng)顯示出升高的TGF-β配體表達(dá)和下游轉(zhuǎn)錄活性的類似證據(jù)13-16。這些模型中的增強(qiáng)的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)與伴隨有平滑肌肥厚、血管周圍纖維化和細(xì)胞外基質(zhì)重塑的PAH相關(guān)，所有這些都可以用TGF-βI型受體激酶ALK5的藥理學(xué)抑制劑來(lái)改善13,17，該抑制劑也抑制密切相關(guān)的同源活化素以及Nodal受體ALK4和ALK7。然而，這種策略的治療潛力的限制是觀察到經(jīng)由小分子的ALK4/5/7的有效抑制導(dǎo)致的處于出血性瓣膜壞死形式的顯著的心血管毒性，以及青春期動(dòng)物股脛關(guān)節(jié)中的骺板肥大和發(fā)育不良18。這顯示出識(shí)別TGF-β配體TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的中和單克隆抗體1D11也能夠在大鼠的野百合堿PAH模型中減弱肺動(dòng)脈高壓1,19。然而，在人類中使用類似的泛TGF-β中和抗體fresolimumab與劑量相關(guān)的副作用(包括皮疹和皮膚病變、鼻出血、牙齦出血和疲勞)有關(guān)20。目前還不清楚TGF-β家族的個(gè)體配體的任一者是否有可能是這些作用的主要原因。在本研究中，我們?cè)噲D確定選擇性TGF-β配體阻斷在使用重組TGFBRII-Fc細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域融合蛋白的肺血管重塑中的作用。該配體捕獲劑結(jié)合TGF-β1和TGF-β3，但不結(jié)合TGF-β2，其需要與TGFBRIII(β-聚糖)相互作用。如本文所述，這樣的策略可以改善動(dòng)物模型中的肺血管重塑和PAH方面，而不會(huì)由于抑制TGF-β2而帶來(lái)毒性負(fù)擔(dān)，已知在TGF-β配體中，TGF-β2是在心臟瓣膜形態(tài)發(fā)生、以及調(diào)節(jié)各種組織中的內(nèi)皮和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化方面唯一發(fā)揮作用的21-29。材料和方法細(xì)胞培養(yǎng)。人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC)購(gòu)自Lonza(CC-2581)，并維持在補(bǔ)充有可商購(gòu)的生長(zhǎng)因子(CC-3182)的SmGM-2培養(yǎng)基中。將CAGA-Luc和BRE-Luc細(xì)胞維持在補(bǔ)充有10％FBS的DMEM中。將細(xì)胞與不含生長(zhǎng)補(bǔ)充劑的0.5％FBS孵育，以在實(shí)驗(yàn)刺激前達(dá)到靜止。需要注意的是，在實(shí)驗(yàn)刺激前30分鐘，用TGFBRII-Fc(2000ng/ml)對(duì)靜止細(xì)胞進(jìn)行處理。實(shí)驗(yàn)性PAH模型。成年雄性Sprague-Dawley大鼠(150g-170g)和雄性C57BL/6J小鼠(20g-25g)購(gòu)自CharlesRiverLaboratory。所有實(shí)驗(yàn)和手術(shù)方案經(jīng)哈佛大學(xué)機(jī)構(gòu)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)批準(zhǔn)。將動(dòng)物在24℃下于12小時(shí)光-暗循環(huán)中飼養(yǎng)。隨意獲取食物和水。為了誘導(dǎo)PAH，使大鼠接受野百合堿(MCT，40mg/kg，Oakwood)的單次皮下注射。小鼠連續(xù)三次接受每周皮下注射VEGF受體拮抗劑(SU5416，20mg/kg)，同時(shí)通過(guò)輸注N2氣(FIO2＝10％，BioSpherics)將小鼠在調(diào)節(jié)室中暴露至常壓低氧環(huán)境下3周。經(jīng)MCT處理的大鼠中的預(yù)防。在給予MCT后24小時(shí)，將大鼠隨機(jī)分入接受TGFBRII-Fc(5mg/kg或15mg/kg，每周兩次)組或輔料組。對(duì)大鼠處理21天。在第14天，通過(guò)超聲心動(dòng)圖對(duì)心室功能和RV重塑進(jìn)行檢查。在第21天，對(duì)大鼠進(jìn)行侵入性血液動(dòng)力學(xué)和RVH測(cè)量。經(jīng)MCT處理的大鼠中的復(fù)蘇。為了測(cè)試TGFBRII-Fc逆轉(zhuǎn)已確立的PAH的能力，在MCT暴露后18天開始隨機(jī)選擇大鼠接受TGFBRII-Fc(15mg/kg，每周三次)或輔料。在第35天對(duì)血液動(dòng)力學(xué)和RVH進(jìn)行檢查。SUGEN/低氧小鼠中的預(yù)防。在PAH誘導(dǎo)后24小時(shí)，將小鼠隨機(jī)化并接受TGFBRII-Fc(15mg/kg，每周三次)。在第21天，對(duì)小鼠進(jìn)行血液動(dòng)力學(xué)和RVH測(cè)量。LV和RV功能的超聲心動(dòng)圖評(píng)估。在給予MCT后14天，用1.5％異氟烷對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，并保持仰臥位。使用VisualSonics小動(dòng)物高頻超聲探頭對(duì)肺血流加速度、右心室功能和肥厚以及左心室功能進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)施穿過(guò)二尖瓣和三尖瓣的多普勒，以確定TGFBRII-Fc治療是否導(dǎo)致瓣膜反流或瓣膜的結(jié)構(gòu)異常。侵入性血液動(dòng)力學(xué)測(cè)量和右心室肥厚評(píng)估。在指定時(shí)間點(diǎn)，用戊巴比妥(50μg/kgi.p.)對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉并通過(guò)氣管內(nèi)插管。使用嚙齒動(dòng)物通氣機(jī)(TV＝8ml/kg，f＝80/min)對(duì)大鼠進(jìn)行機(jī)械通氣，并如先前所述，使用流體填充導(dǎo)管經(jīng)RV頂點(diǎn)進(jìn)行壓力的侵入性血液動(dòng)力學(xué)測(cè)量19。用PBS對(duì)肺進(jìn)行灌注，切除一個(gè)右葉，并快速冷凍用于RNA和蛋白質(zhì)提取。肺部進(jìn)一步用1％多聚甲醛(PFA)灌注至肺動(dòng)脈中，隨后用氣管灌注1分鐘。將左葉包埋在石蠟中。為了獲得RVH的程度，移出心臟并從左心室加隔膜(LV+S)中解剖RV游離壁并分別稱重。根據(jù)RV/(LV+S)的比確定RVH的程度。將LV和間隔壁的剩余部分包埋在OCT中并切片。進(jìn)行H&E染色以檢查二尖瓣的解剖結(jié)構(gòu)。肺組織中的血管重塑和p-Smad2的定量。為了確定肺血管重塑的程度，用平滑肌α-肌動(dòng)蛋白和血管性血友病因子對(duì)肺組織切片進(jìn)行染色。以盲法的方式對(duì)遠(yuǎn)端腺泡內(nèi)血管(直徑10μm-50μm)的肌肉化進(jìn)行評(píng)分，分為無(wú)肌肉化、部分肌肉化和完全肌肉化，并且以總血管的百分比表示。對(duì)于完全肌肉化的腺泡內(nèi)膜血管，根據(jù)下式計(jì)算內(nèi)側(cè)壁厚度：內(nèi)側(cè)厚度-(外徑-內(nèi)徑)/外徑×100。通過(guò)免疫熒光染色檢查冷凍切片的肺組織(10μm)中的Smad2蛋白的磷酸化。表達(dá)研究。將冷凍肺樣品勻漿，并使用TRIZOL試劑提取總RNA。如所述的實(shí)施逆轉(zhuǎn)錄酶和定量PCR。通過(guò)Ct方法測(cè)定各感興趣的基因的相對(duì)表達(dá)水平，并以相對(duì)于β-肌動(dòng)蛋白的表達(dá)的比表示。試劑。在CHO細(xì)胞中將重組TGFBRII表達(dá)為具有IgGFc結(jié)構(gòu)域的融合蛋白(TGFBRII-Fc)，并如前所述進(jìn)行純化。針對(duì)磷酸化(p-)Smad3(p-Smad3)、p-Smad1/5、p-Smad2和總Smad3的一抗購(gòu)自CellSignaling。針對(duì)平滑肌α-肌動(dòng)蛋白和血管性血友病因子的一抗分別購(gòu)自Sigma和Dako。重組TGFβ-1、TGFβ-2、TGFβ-3和BMP4購(gòu)自R&D。統(tǒng)計(jì)分析。相對(duì)于處理組，以盲法的方式一致地進(jìn)行侵入性血液動(dòng)力學(xué)壓力測(cè)量的定量分析以及RVH和肺血管重塑的評(píng)估，所有動(dòng)物和組織樣品的身份由未參與數(shù)據(jù)收集的個(gè)體掩蔽。數(shù)據(jù)表示為平均值±測(cè)量值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)，并使用student'sT檢驗(yàn)、用于多重檢驗(yàn)的Bonferroni校正或ANOVA進(jìn)行組間比較。P<0.05被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的。結(jié)果TGFBRII-Fc是由TGFβII型受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域組成的重組融合蛋白。在誘導(dǎo)通過(guò)CAGA-Luc報(bào)告子細(xì)胞系測(cè)量的TGF-β轉(zhuǎn)錄活性方面，TGFBRII-Fc選擇性地抑制了TGFβ1和TGFβ3的活性，但不能阻抑或適度增強(qiáng)TGF-β2的活性(圖13A)。相比之下，在BRE-Luc報(bào)告子系中，用TGFBRII-Fc處理未抑制BMP介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性，事實(shí)上，在該試驗(yàn)中增強(qiáng)了多種配體的活性(圖13B)。這些結(jié)果與該配體捕獲劑對(duì)TGF-β配體子集的選擇性活性一致，并表明了如下反饋機(jī)制，籍此阻抑TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)可導(dǎo)致增強(qiáng)的BMP和TGF-β2信號(hào)傳導(dǎo)。一致地，在經(jīng)培養(yǎng)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HPASMC)中，TGFBRII-Fc阻止了TGFβ1和TGFβ3誘導(dǎo)的Smad2/3磷酸化(圖13C)，而不會(huì)影響TGFβ2誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)。一致地，TGFBRII-Fc在HPASMC中阻止了TGFβ1誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)。當(dāng)用TGF-β1刺激HPASMC時(shí)，通過(guò)qRT-PCR測(cè)量的平滑肌收縮表型基因(如鈣調(diào)素結(jié)合蛋白、平滑肌蛋白(smoothelin)，特別是調(diào)寧蛋白)的表達(dá)增強(qiáng)，所有這些都通過(guò)用TGFBRII-Fc對(duì)細(xì)胞共同處理而被有效地抑制(圖14)?？傊?，TGFBRII-Fc看起來(lái)是TGF-β1和TGF-β3的有效拮抗劑，并且可以在體外消除它們對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的作用。與先前的報(bào)道30一致，在大鼠MCT誘導(dǎo)的PAH模型中，我們證實(shí)了PAH的發(fā)展與減少的BMPR2/BMP介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)和全肺中的基因轉(zhuǎn)錄以及TGFβ介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄方面的顯著增加相關(guān)。在MCT處理后3周內(nèi)，經(jīng)受MCT的大鼠顯示出升高的右心室收縮壓(RVSP)和升高的Fulton's比，與以時(shí)間依賴性方式發(fā)展的右心臟肥厚(RVH)一致。如先前報(bào)道的，MCT暴露導(dǎo)致Pai1和Tgfb1mRNA水平的漸進(jìn)性增加。同時(shí)，在用MCT處理的大鼠中，Bmpr2和Id1mRNA的表達(dá)降低。通過(guò)Tgfb1和Pai1表達(dá)評(píng)估的TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)活性的增強(qiáng)與通過(guò)RVSP和Fulton’s比率測(cè)量的疾病嚴(yán)重性(通過(guò)Bmpr2和Id1表達(dá)評(píng)估的BMP信號(hào)傳導(dǎo)活性的損傷)直接相關(guān)。我們測(cè)試了TGFBRII-Fc可以作為選擇性配體捕獲劑以抑制體內(nèi)TGFβ1/3信號(hào)傳導(dǎo)活性并調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)性PAH中的疾病進(jìn)展的假說(shuō)。用低劑量TGFBRII-Fc(5mg/kg，每周兩次)的處理顯示出RVSP、RVH和小肺血管的肌肉化降低的非顯著趨勢(shì)，但是顯著降低了內(nèi)側(cè)壁厚度指數(shù)，隨后降低了MCT誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓。TGFBRII-Fc(15mg/kg，每周兩次)高劑量方案顯著降低了RVSP(46.72±4.68vs.32.99±2.08mmHg)以及RVH(0.52±0.04vs.0.41±0.02)。在該方案下的TGFBRII-Fc處理有效地防止了MCT大鼠中的血管重塑(圖4A至圖4M)。接受TGFBRII-Fc的經(jīng)MCT處理的大鼠表現(xiàn)出降低的Pai1的mRNA水平，并且出乎意料地還降低了總的肺提取物中的Tgfb1的水平(圖4A至圖4M)。在經(jīng)MCT處理的大鼠中的Bmpr2和Id1的mRNA水平的降低未受到TGFBRII-Fc處理的影響。我們還發(fā)現(xiàn)TGFBRII-Fc處理減少了MCT大鼠的肺中的Il6、Il1b和Icam(圖4A-4M)的mRNA水平。通過(guò)小鼠肺切片的免疫組織化學(xué)檢測(cè)，與TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)活性的增強(qiáng)一致，大鼠的MCT處理與主要在血管細(xì)胞的細(xì)胞核中的磷酸化SMAD2的表達(dá)增加相關(guān)。用TGFBRII-Fc進(jìn)行處理減弱了這種增加的磷酸化SMAD2的水平(數(shù)據(jù)未示出)。超聲心動(dòng)圖評(píng)估提供了RVH的替代測(cè)量，顯示出用TGFBRII-Fc進(jìn)行的處理減弱了在第14天于MCT大鼠中觀察到的RV游離壁厚度的增加(0.77±0.15vs.0.59±0.11mm，p<0.05)。我們還觀察到MCT大鼠中的縮短的肺加速時(shí)間(PAT)(19.83±2.60vs.32.64±2.16ms，p<0.05)，其未受到TGFBRII-Fc處理的影響。超聲心動(dòng)圖M模式和2D評(píng)估未顯示作為在正?；蚪?jīng)MCT處理的大鼠中給予TGFBRII-Fc的結(jié)果的瓣膜功能障礙或變性的證據(jù)。重要的是，無(wú)硬化或退化性重塑的證據(jù)，用TGFBRII-Fc進(jìn)行的處理也與二尖瓣結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化無(wú)關(guān)(圖17A至圖17B)。在正?；蚪?jīng)MCT處理的大鼠中，用TGFBRII-Fc進(jìn)行處理未改變輔料處理中所見的體重正常增加(圖18和圖19)。我們?cè)贛CT模型中測(cè)試了TGFBRII-Fc影響已確立的PAH的能力。在MCT暴露后18天開始TGFBRII-Fc(15mg/kg，每周三次)處理，并在35天對(duì)血液動(dòng)力學(xué)和RVH進(jìn)行測(cè)量。當(dāng)以這種延遲方式給予時(shí)，在確立了PAH的經(jīng)MCT處理的大鼠中，TGFBRII-Fc改善了存活率、降低了RVSP(43.18±3.46vs.33.29±0.77mmHg，p<0.01)和血管重塑(p<0.05)。然而，RVH未受到TGFBRII-Fc延遲處理的影響(0.44±0.03vs.0.42±0.02)。值得注意的是，以這種方式處理的復(fù)蘇群組(rescuecohort)中的血管重塑的改善比起預(yù)防群組中觀察到的更明顯。使用比起預(yù)防研究中所使用的更高劑量的TGFBRII-Fc進(jìn)行該觀察，表明該配體捕獲劑在血管重塑中的治療潛力是劑量敏感的，并且可以通過(guò)滴定(titrating)其劑量至最佳效果而最大化。我們還發(fā)現(xiàn)，TGFBRII-Fc處理降低了MCT大鼠的肺中的Tgfb1(圖15A)、Pai1(圖15B)、Il6(圖15C)、Il1b(圖15D)和Icam(圖15E)的mRNA表達(dá)。當(dāng)用TGFBRII-Fc處理確立了PAH的經(jīng)MCT處理的大鼠時(shí)，觀察到主要在血管細(xì)胞的核中觀察到的磷酸化SMAD2的減少(數(shù)據(jù)未示出)。接下來(lái)，我們檢查了TGFBRII-Fc在SUGEN/低氧模型中的效力。將小鼠用VEGFR抑制劑SU5416進(jìn)行處理并暴露至長(zhǎng)期低氧下3周，以提供PAH的機(jī)制上不同和互補(bǔ)的模型。在僅暴露至低氧的小鼠中，SUGEN和低氧的聯(lián)合處理引發(fā)更強(qiáng)健和一致的表型(圖20A至圖20B)。在經(jīng)SUGEN/低氧處理的小鼠中，用TGFBRII-Fc進(jìn)行的預(yù)防性處理顯著降低RVSP(43.38±5.66mmHgvs.35.42±5.85mmHg，p<0.05)和RVH(0.29±0.01mmHgvs.0.24±0.02，p<0.05)。TGFBRII-Fc處理減弱了經(jīng)SUGEN/低氧處理的小鼠的肺中的血管重塑(數(shù)據(jù)未示出)。我們還發(fā)現(xiàn)TGFBRII-Fc處理顯示出逆轉(zhuǎn)Tgfb1的上調(diào)的趨勢(shì)(圖16A)并且顯著降低了SUGEN/低氧小鼠的肺中的Pai1mRNA水平(圖16B)。討論基于TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)在肺血管功能和疾病中的已知的重要性以及這些配體的結(jié)構(gòu)和功能多樣性，我們嘗試確定TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)的選擇性抑制是否可減弱實(shí)驗(yàn)性肺高壓和肺血管重塑。我們將重組TGFBRII-Fc融合蛋白表征為TGFβ1和TGFβ3配體信號(hào)傳導(dǎo)的有效抑制劑，而不影響TGFβ2的信號(hào)傳導(dǎo)，TGFβ2是內(nèi)皮-至-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、細(xì)胞外基質(zhì)重塑和心臟瓣膜形成的重要調(diào)節(jié)劑25,27。與該活性一致，TGFBRII-Fc通過(guò)TGFβ1和TGFβ3阻斷規(guī)范的(canonical)SMAD2/3信號(hào)傳導(dǎo)，并阻止TGFβ1介導(dǎo)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞在體外從合成轉(zhuǎn)化為收縮表型31,32。我們假設(shè)TGFβ1/3主要負(fù)責(zé)介導(dǎo)PAH中見到的肺血管重塑，并且在兩種不同的PAH模型中發(fā)現(xiàn)TGFBRII-Fc處理矯正了過(guò)度的TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)活性并減弱了肺血管重塑、肺高壓和右心室肥厚。重要的是，TGFBRII-Fc不僅預(yù)防了此前已經(jīng)用野百合堿處理的大鼠中已確立的PAH和RVH的進(jìn)展，而且還改善了它們的存活率。這些現(xiàn)有數(shù)據(jù)是選擇性抑制TGFβ配體子集減弱了PAH的首次驗(yàn)證，因此在機(jī)理上不同的PAH模型中，使用該策略可能比非選擇性方法更耐受。TGFβ家族信號(hào)傳導(dǎo)分子代表了超過(guò)35種多功能細(xì)胞因子的結(jié)構(gòu)多樣的組，所述多功能細(xì)胞因子調(diào)節(jié)許多不同細(xì)胞類型(除了TGFβ1-3外，包括BMP、活化素、抑制素、生長(zhǎng)和分化因子(GDF)、lefty、Nodal和抗繆勒管激素)的分化、增殖、遷移和存活。TGFβ型配體在胚胎形成期間協(xié)調(diào)了許多過(guò)程，并且在血管和纖維化疾病中發(fā)現(xiàn)的病理生理學(xué)重塑中發(fā)揮關(guān)鍵作用，發(fā)揮了在治療應(yīng)用的阻斷中產(chǎn)生極大的興趣的作用20,33-37。非選擇性阻斷TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)已顯示有助于大鼠中野百合堿誘導(dǎo)的PAH。小分子抑制劑IN-1333、SD-208和SB-525334通過(guò)經(jīng)由其I型受體ALK5的活性來(lái)抑制TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)而減弱野百合堿誘導(dǎo)的PAH13,17,30。然而，所有這些分子展示出對(duì)密切相關(guān)的I型受體ALK4和ALK7的潛在活性38-40，并且不僅影響TGFβ1-3的活性，而且可能影響20種其它配體(其功能可能與血管系統(tǒng)中的TGFβ一致或可能不一致的配體，包括活化素、GDF和Nodal)的活性。此外，這些有效的TGFβ抑制劑在動(dòng)物中看起來(lái)具有引起出血性瓣膜壞死的廣譜作用18，可能是由于它們?nèi)狈x擇性，并存在對(duì)它們?cè)谌酥械氖褂锰岢隽颂魬?zhàn)。泛TGFβ1-3中和抗體1D11也已經(jīng)在減輕野百合堿誘導(dǎo)的PAH中起效20,39?；诮?jīng)處理的動(dòng)物與未經(jīng)處理的動(dòng)物的超聲心動(dòng)圖和組織學(xué)分析，給予TGFBRII-Fc不會(huì)影響心臟瓣膜的功能或結(jié)構(gòu)。不考慮非選擇性策略在耐受性方面可能的限制。改善肺血管重塑的這些不同的策略的整合(concordance)是這種信號(hào)傳導(dǎo)軸在PAH中的作用的強(qiáng)有力證據(jù)，然而，在臨床上推進(jìn)這一概念存在多個(gè)限制。這些現(xiàn)有研究的顯著限制依賴于野百合堿誘導(dǎo)的PAH的一個(gè)臨床前模型。大鼠中MCT誘導(dǎo)的PAH的肺具有擴(kuò)大的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)和促纖維化轉(zhuǎn)錄活性、阻抑BMPR2的表達(dá)和下游BMP信號(hào)傳導(dǎo)活性的分子標(biāo)記30，以及彌漫性炎癥和肺損傷的證據(jù)41，如同我們?cè)诋?dāng)前研究中發(fā)現(xiàn)的，可能使它們特別順從于(amenableto)TGFβ配體阻斷。雖然MCT-PAH的分子譜與某些類型的人類PAH疾病的分子譜相似，但對(duì)了解TGFβ拮抗作用是否可推廣到其它模型是有幫助的。當(dāng)我們檢查TGFBRII-Fc在機(jī)理上不同的SUGEN-低氧誘導(dǎo)的小鼠的PAH模型中的影響時(shí)，如最近由其他研究者驗(yàn)證的42、43，我們發(fā)現(xiàn)TGFβ轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)(如Pai1)的表達(dá)增加，但低于在經(jīng)MCT處理的大鼠中見到的程度。盡管如此，用TGFBRII-Fc處理這些動(dòng)物還可以改善PA壓力和RV肥厚。針對(duì)ALK5的小分子抑制劑的臨床部署受到了毒性的限制。TGFβ2信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于心臟瓣膜形態(tài)發(fā)生是必需的，與其在各種組織中的調(diào)節(jié)內(nèi)皮-至-間質(zhì)和上皮-至-間質(zhì)轉(zhuǎn)化方面的核心作用一致21-29。與在缺乏III型共受體β聚糖的情況下的天然TGF-βII型受體不轉(zhuǎn)導(dǎo)TGFβ2信號(hào)的觀念44-46一致，可溶性TGFBRII-Fc在體外不影響TGFβ2誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)，并且當(dāng)對(duì)小鼠和大鼠長(zhǎng)期以足以減輕PAH的劑量給予時(shí)，TGFBRII-Fc不會(huì)引起心臟瓣膜結(jié)構(gòu)或功能的任何可觀察到的變化，或不會(huì)引起以前用非選擇性TGFβ拮抗劑觀察到的死亡率的任何增加。相反，作為復(fù)蘇研究中的終點(diǎn)，用TGFBRII-Fc進(jìn)行處理被良好耐受并且改善了死亡率。PAH由涉及多種細(xì)胞類型的肺血管重塑引起。與來(lái)自Thomas和同事的觀察一致，我們觀察到共同定位于MCT大鼠的肺中的單核細(xì)胞的磷酸-Smad2染色增加17。還顯示出，浸潤(rùn)至MCT大鼠的受影響的肺中的CD68陽(yáng)性細(xì)胞有助于TGF-β1的過(guò)量產(chǎn)生30。不希望受理論的束縛，總之，這些數(shù)據(jù)表明浸潤(rùn)細(xì)胞可以是在實(shí)驗(yàn)性PAH中響應(yīng)于過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)活性的原代細(xì)胞類型。我們的數(shù)據(jù)顯示出，TGFβ1在體外調(diào)節(jié)了SMC表型，調(diào)節(jié)SMC表型是由TGFBRII-Fc逆轉(zhuǎn)的過(guò)程。本文提供了顯示出可溶性TGF-βII型受體作為針對(duì)TGF-β1/3的選擇性配體捕獲劑的數(shù)據(jù)，減輕了血管重塑并改善了同時(shí)伴有血管損傷和已確立的疾病的PAH。不同于以前的方法，這種選擇性配體捕獲劑的給予不會(huì)引起心臟瓣膜或其它毒性。因此，特異性TGF-β配體的選擇性配體捕獲劑可能是治療人PAH的有效且可耐受的方法。參考文獻(xiàn)1.MegalouAJ，GlavaC，OikonomidisDL，VilaetiA，AgelakiMG，BaltogiannisGG，PapaloisA，VlahosAP，KolettisTM，Transforminggrowthfactor-betainhibitionattenuatespulmonaryarterialhypertensioninrats.IntJClinExpMed.2010；3：332-3402.StrelauJ，SchoberA，SullivanA，SchillingL，UnsickerK.Growth/differentiationfactor-15(gdf-15)，anovelmemberofthetgf-betasuperfamily，promotessurvivaloflesionedmesencephalicdopaminergicneuronsinvitroandinvivoandisinducedinneuronsfollowingcorticallesioning.JNeuralTransmSuppl.2003：197-2033.DengZ，MorseJH，SlagerSL，CuervoN，MooreKJ，VenetosG，KalachikovS，CayanisE，F(xiàn)ischerSG，BarstRJ，HodgeSE，KnowlesJA.Familialprimarypulmonaryhypertension(genepph1)iscausedbymutationsinthebonemorphogeneticproteinreceptor-iigene.AmJHumGenet.，2000；67：737-7444.LaneKB，MachadoRD，PauciuloMW，ThomsonJR，PhillipsJA，3rd，LoydJE，NicholsWC，TrembathRC.Heterozygousgermlinemutationsinbmpr2，encodingatgf-betareceptor，causefamilialprimarypulmonaryhypertension.，Theinternationalpphconsortium.NatGenet.2000；26：81-845.WaiteKA，EngC.Fromdevelopmentaldisordertoheritablecancer：It'sallinthebmp/tgf-betafamily.NatRevGenet.2003；4：763-7736.YuPB，DengDY，BeppuH，HongCC，LaiC，HoyngSA，KawaiN，BlochKD.Bonemorphogeneticprotein(bmp)typeiireceptorisrequiredforbmp-mediatedgrowtharrestand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