本發(fā)明涉及含加米霉素的藥物組合物，屬于獸藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

加米霉素是一種畜禽專用的新一代半合成大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，是法國梅里亞開發(fā)的獸用抗生素zactran的主要有效成分。原料藥在水中不溶解，抗菌譜廣，抗菌活性強，耐藥性較低，對所有革蘭氏陽新菌、部分革蘭氏陰性菌、螺旋體、霉形體、支原體等均有抑制作用，該藥分別在2007、2010、2011年歐洲藥品局，加拿大保健產(chǎn)品與食品管理局和美國食品與藥品管理局批準用于防治溶血性曼氏桿菌、多殺性巴氏桿菌和睡眠嗜組織桿菌引起的牛呼吸道疾病。

加米霉素的靶組織是肺，在肺中可維持較長時間，加米霉素可有效預(yù)防和治療牛呼吸道疾病，其治療效果與泰拉霉素相當[1-2]，優(yōu)于長效土霉素[3]。牛、綿羊、豬、雞等動物的藥動學(xué)研究表明，皮下或肌肉注射給藥后，吸收快，對肺組織有很好的親和力，作用持久，且消除緩慢。加米霉素血漿蛋白結(jié)合率較低，在牛、豬和犬上的結(jié)合率分別為26.0％、23.1％、21.5％。不同動物體內(nèi)代謝產(chǎn)物不同，大鼠、犬、牛體內(nèi)代謝途徑相似，主要以原型藥物經(jīng)糞便排泄，其次為尿液。加米霉素給藥后1、5、10、15d后，牛肺組織與血漿中濃度的比值分別為265、410、329、247，肺中auc比血漿中auc高194倍，肺組織中半衰期長達90.4h。

加米霉素毒性較低，口服急性毒性和亞慢性毒性試驗中，可引起適度的胃腸功能紊亂，高劑量(300mg/kg)使用引起輕微的肝細胞損傷，但對動物主要器官系統(tǒng)無明顯副作用。加米霉素?zé)o致癌性，在體外具有潛在的致突變型。對人的健康危害不大，對皮膚和眼睛有輕微 的刺激性，因此，在使用過程中要注意保護皮膚和眼睛。加米霉素安全性高，適合畜牧業(yè)發(fā)展的需要。

梅里亞商品名為“zactran中”是一種加米霉素注射液，但其所用的甘油縮甲醛、琥珀酸、硫代甘油，原料成本較高，加上加米霉素是時間依賴型抗生素，因此如何降低加米霉素制劑成本提高其血藥濃度保持時間是本領(lǐng)域技術(shù)人員需要解決的技術(shù)問題。對不同劑型的需求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過以提供一種加米霉素組合物，所述的加米霉素組合物含有加米霉素、聚乙烯吡咯烷酮和以及藥學(xué)上可以接受的載體組成。

作為本發(fā)明的一個方面，所述的加米霉素組合物為注射液，所述的加米霉素組合物含有1％(w/v)-20％(w/v)的加米霉素，10％(w/v)-30％(w/v)的聚乙烯吡咯烷酮、0％-60％的有機溶劑。

所述的聚乙烯吡咯烷酮(pvp)是一種非離子型水溶性高分子化合物，具有膠體保護、增容或凝聚作用。極易溶于水，又溶于乙醇等。包括但不限于pvpk15、pvpk30、pvpk60、pvpk90的一種或者幾種混合。優(yōu)選pvpk30。

所述的藥學(xué)上可以接受的載體包括穩(wěn)定劑、賦形劑和ph調(diào)節(jié)劑。

如本發(fā)明所述術(shù)語“穩(wěn)定劑”是指能增加溶液、固體、混合物穩(wěn)定性的化學(xué)物質(zhì)，防止藥物被光、熱分解。包括：亞硫酸鈉、偏亞硫酸鈉、疏基乙醇及類似的人工合成水溶性穩(wěn)定劑。優(yōu)選疏基乙醇。

如本發(fā)明所述術(shù)語“穩(wěn)定劑”賦形劑水、有機溶劑或者二者的混合溶劑。優(yōu)選注射用水。

如本發(fā)明所述術(shù)語“穩(wěn)定劑”ph調(diào)節(jié)劑：無機酸或有機酸，優(yōu)選為鹽酸、磷酸、硫酸、硝酸、檸檬酸、酒石酸。

如本發(fā)明所述”有機溶劑為二甲基甲酰胺、丙二醇、甘油、乙醇中的一種或幾種。

本發(fā)明組合物的劑型優(yōu)選注射液和口服液，

作為本發(fā)明的另外一個方面，本發(fā)明提供一種組合物的制備方法，在水或水和有機溶劑的混合溶液中溶解聚乙烯吡咯烷酮，然后加入加米霉素溶解，用酸調(diào)整ph至所需的范圍，加入其它藥學(xué)上可以的載體。優(yōu)選地，所述地所述的的ph為5.5-6.5。

作為本發(fā)明的另外一個方面本發(fā)明提供一種組合物在制備用于治療豬副豬嗜血桿菌病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果

1)本發(fā)明的組合物血藥濃度保持時間長；

2)本發(fā)明的組合物成本較低。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。

一、加米霉素新藥物注射液的制備

實施例1-6是加米霉素新組合物注射液的制備，表1給出了本發(fā)明中的加米霉素注射液中個組分的質(zhì)量百分比(w/v)百分含量，按照表1中的各組分含量配制混合液，用純化水定容后過濾，灌封，100℃滅菌30min，即得到加米霉素新組合物注射液。

表1加米霉素新組合物注射液的制備

制備實施例：10％加米霉素注射液制備過程如下：

1)向容器中加入90ml純化水，然后向其中加入20g聚乙烯吡咯烷酮，攪拌使其溶解。

2)在攪拌狀態(tài)下，向上述溶液中加入一定量檸檬酸，使溶液的ph值在5.7-6.3之間。

3)向上述溶液中加入10g加米霉素，攪拌使其混合均勻。

4)向上述混合溶液中加入5ml巰基乙醇，攪拌使其混合均勻。

5)然后向上述溶液中再次加入一定量的檸檬酸，使溶液ph值在5.5-6.0之間。

6)用純化水定容至100ml。

7)用0.22μm的濾膜進行過濾后封存。即制備成濃度為10％的加米霉素注射液。

1.加米霉素新藥組合物穩(wěn)定性試驗

試驗藥物：注射液1：按本發(fā)明實施例3制備的10％加米霉素新組合物注射液。

注射液2：按本發(fā)明實施例4制備的20％加米霉素新組合物注射液。

注射液3：按本發(fā)明實施例5制備的10％加米霉素新組合物注射液。

注射液4：按本發(fā)明實施例6制備的10％加米霉素新組合物注射液。

注射液5：按本發(fā)明實施例7制備的10％加米霉素新組合物注射液。

注射液6：加米霉素10g(以加米霉素計)，加丙二醇至40ml，用一水檸檬酸調(diào)節(jié)至澄清，加水定容適量，并用一水檸檬酸調(diào)節(jié)ph至5.8，最終定容至100ml。

試驗儀器：spx-250ic人工氣候箱。

試驗過程：將上述注射液在40℃±2℃的條件下放置6個月，與試驗開始、試驗進行第1、2、3、6月取樣，考察性狀、ph值，含量等有關(guān)項目，與試驗起始時的檢測結(jié)果進行對比。

試驗結(jié)果見表2。

表2加米霉素注射液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

由表2可知，上述加速試驗結(jié)果表明本發(fā)明中的注射液1、注射液2、注射液3均比注射液4穩(wěn)定，注射液1、注射液2與注射液3之間的結(jié)果沒有顯著差異，但注射液4、注射液5在第6個月時含量下降均大于1％，而注射液1、注射液2、注射液3的下降值均小于1％，較注射液4 和注射液5要低。本發(fā)明所制備的加米霉素新組合物注射液樣品的性狀、ph值、含量均無明顯變化，說明本發(fā)明中的樣品在加有穩(wěn)定劑巰基乙醇的偏酸性條件下更加穩(wěn)定。

2.注射液的藥物動力學(xué)試驗：

30頭長白豬，依體重大小，隨機分3組，以6mg/kg體重肌肉注射給藥，試驗前禁食18h，第一組為按實施例3制備的加米霉素新組合物注射液(10％w/v)，給藥后5min、10min、15min、1h、2h、4h、8h、10h、1d、2d、3d、4d、5d、6d、8d、10d、12d、14d經(jīng)前腔靜脈采血5ml。第二組zactran(15％w/v)，給藥后5min、10min、15min、1h、2h、4h、8h、10h、1d、2d、3d、4d、5d、6d、8d、10d、12d、14d經(jīng)前腔靜脈采血5ml。第三組用于采集空白血漿，采集的血樣均用肝素鈉抗凝，離心去血漿，-80℃保存。

血漿藥物提取方法：1)取血漿0.5ml，加入乙腈5ml(色譜級)，5000r/min離心5min，收集上清。2)固相萃取柱預(yù)處理：1.5ml甲醇預(yù)洗，然后用2.5ml150mmol醋酸銨乙腈溶液(95:5)預(yù)洗。將血漿提取液過c18柱，最后用2ml甲醇洗脫至5ml玻璃試管中，50℃水浴氮氣吹干，取1ml甲醇溶解，0.22微米過濾后進樣。

色譜條件：以0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液(ph值8.2±0.2)-甲醇-乙腈(30:40:30)為流動相，watersacquityuplcbehc18色譜柱(2.1×50mm,1.7μm)；流速為0.2ml/min；檢測波長210nm，柱溫：35℃。

藥代動力學(xué)試驗結(jié)果如下表3所示。

表3加米霉素新組合物注射液和zactran在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)

表3中，cmax為血藥濃度達到峰值的濃度，tmax為血藥濃度達到峰值的時間。因加米霉素屬于時間依賴性藥物，因而在cmax相當?shù)那闆r下，acu值越大及曲線下面積越大(高于最小抑菌濃度mic以上的時間越長)，則臨床治療效果越好。表3中的acu數(shù)據(jù)可見本發(fā)明中的加米霉素新組合物注射液的臨床治療效果優(yōu)于zactran。

表3中，t1/2為消除半衰期，即血漿藥物濃度或體內(nèi)藥量降低50％所需的時間；mrt為藥物平均駐留時間。t1/2越大，mrt越大說明藥物在體內(nèi)代謝越慢，藥效越好。從表2中的t1/2和mrt數(shù)據(jù)可看出，本發(fā)明中的加米霉素新組合物注射液的藥效優(yōu)于zactran。

3.加米霉素新組合物注射液治療試驗：

試驗動物及試驗分組：河南省某豬場自然發(fā)病三元雜交仔豬，發(fā)病后經(jīng)臨床診斷、實驗室診斷確診為副豬嗜血桿菌病。選擇140頭，40-50日齡，體重14kg±1.5kg，出生后均未接種副豬嗜血桿菌疫苗，豬群按常規(guī)飼養(yǎng)。

臨床癥狀：病豬發(fā)熱40.5℃-42℃，精神沉郁，食欲下降或廢絕，生長緩慢，肌肉顫抖，呼吸困難，部分豬只出現(xiàn)跛行，后期病豬消瘦，被毛粗亂，咳嗽，呈腹式呼吸。

剖檢癥狀：剖檢病豬發(fā)現(xiàn)，胸腔、心包積液，肺臟肉樣實變，有纖維素性滲出物。

細菌分離培養(yǎng)：無菌采集肺、肝、心等樣品，分別接種于血液瓊脂平皿和肉湯中，置37℃溫箱中培養(yǎng)24h后觀察。結(jié)果：肉湯中渾濁，有細菌生長。血瓊脂平皿表面有許多針頭大小、邊緣整齊、灰白色半透明菌落，取少量涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢，可見到大量紅色短桿狀菌，為革蘭氏陰性桿菌。

分組：其中4組為加米霉素新組合物注射液：實施例1-4制備的加米霉素新組合物注射液，肌肉注射，每公斤體重6mg，一次給藥。

一組為泰樂菌素注射液：山東中抗藥業(yè)有限公司(10％)，每公斤體重0.05ml，一天一次，連用3天。

一組為zactran注射液對照組：每公斤體重6mg，給藥一次。

一組為感染對照組。每組的治療情況如表4所示。

表4不同組別的治療效果

由表4可以看出，加米霉素新組合物注射液對副豬嗜血桿菌病具有較好的治療效果，與早期大環(huán)內(nèi)酯類藥物相比，抗菌譜更廣。從實施例1-4與zactran對照組的數(shù)據(jù)可看出，含加米霉素10％-20％的組合物注射液，治療效果均優(yōu)于含加米霉素15％的zactran的治療效果。

二、10％(w/v)加米霉素口服液的制備：

(1)在容器中加入配制加米霉素口服液體積總量60-70％的水，攪

拌狀態(tài)下，加入20％的聚乙烯吡咯烷酮，至完全溶解。

(2)用濃度為85％的磷酸調(diào)節(jié)ph值至5.7-6.3。

(3)按量加入加米霉素。

(4)再用濃度為85％的磷酸調(diào)節(jié)ph值至5.5-6.0，使物料全部溶清。

(5)加入10％的丙二醇攪拌使溶解，加熱至50-60℃。

(6)加水至100ml，然后用0.45μm濾膜過濾，過濾后得到加米霉素口服液。

口服液的治療試驗：

1選擇健康三元雜交商品豬，雌雄各半，25kg±1kg，共80頭；隨機分為4組，每組20頭。第1組：加米霉素口服液(上述自制口服液)治療組；第2組：氟苯尼考溶液(10％，河南安進生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號20150409)治療組；第3組：攻毒不給藥對照組；第4組：健康對照組，不攻毒不給藥。第1、2組的每頭豬經(jīng)肌肉注射5×109個細菌，

2評價指標

2.1攻毒后，每隔4h測量一次體溫，體溫超過40℃后開始給藥治療，給藥后分別于4h、8h、12h、18h、24h、36h、48h、72h測量豬直腸體溫。

2.2臨床癥狀：每天定時觀察并記錄豬的臨床癥狀，如精神狀態(tài)、食欲、呼吸頻率、是否咳嗽等癥狀。

2.3病理檢查

對死亡豬進行剖檢，觀察并記錄病理變化。

2.4增重

試驗開始(第0天)至試驗結(jié)束(第7天)稱量每頭豬體重，比較增重情況。

2.5死亡率

3試驗結(jié)果

3.1體溫變化情況

攻毒5h后，豬體溫開始上升，測得平均體溫為40.8℃。第一組在使用加米霉素口服液治療后，感染副豬嗜血桿菌的病豬體溫能迅速下降；第二組使用氟苯尼考溶液治療的病豬體溫開始下降的時間要推遲，使用加米霉素口服液能及時減輕病豬的發(fā)熱癥狀。

3.2臨床癥狀

除健康對照組外，攻毒組均出現(xiàn)精神沉郁、食欲不振、呼吸困難，腹式呼吸、嘔吐等癥狀。陽性對照組病豬在攻毒40h后，開始出現(xiàn)死亡，至72h后，陽性對照組試驗豬全部死亡。

給藥18h后，加米霉素口服液治療組，病豬開始陸續(xù)進食，精神 狀態(tài)開始好轉(zhuǎn)；氟苯尼考溶液組精神恢復(fù)緩慢，病豬少食或不食。

3.3病理變化

死亡病豬剖檢發(fā)現(xiàn)，胸腔、腹腔有黃色纖維素性滲出物，個別豬胸、腹腔粘連。肺臟肉樣實變，呈橡皮肺。淋巴結(jié)充血，腫大。部分病豬肝臟有纖維素性滲出，腎臟正常。

3.4治療效果

給藥組對人工感染副豬嗜血桿菌病的治療效果如表5所示。

表5各組治愈率與相對增重率

上表中可以看出，本發(fā)明中的加米霉素口服液對人工感染豬副嗜血桿菌病具有較好的治療效果。