本發(fā)明涉及一種新型的α36雌激素受體激活劑，并提出該α36雌激素受體激活劑在制備各種形式的預(yù)防和治療雌激素降低引起的骨質(zhì)疏松癥、卵巢早衰、更年期綜合癥、月經(jīng)不調(diào)、不孕癥、陰道炎、尿道炎、骨關(guān)節(jié)炎性、椎間盤退變性疾病與免疫性疾病、心血管疾病、老年性癡呆、腫瘤骨轉(zhuǎn)移等疾病的藥物或保健食品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

雌激素降低會引起一系列疾病，包括骨質(zhì)疏松癥、卵巢早衰、更年期綜合癥、月經(jīng)不調(diào)、不孕癥、陰道炎、尿道炎、炎性骨病、椎間盤退變性疾病與免疫性疾病、心血管疾病、老年性癡呆、腫瘤骨轉(zhuǎn)移等一系列疾病，臨床上有雌激素替代療法，但副作用顯著。因此需要開發(fā)能與雌激素受體結(jié)合，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，且結(jié)合力持久及溫和的藥物或保健食品。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，希望提供一種能與雌激素受體結(jié)合，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，且結(jié)合力持久及溫和的α36雌激素受體激活劑，并提出其醫(yī)藥用途。

根據(jù)實(shí)施例，本發(fā)明技術(shù)方案的提出的一種α36雌激素受體激活劑，其有效成分為齊墩果酸，濃度為0.01μM-10μM。齊墩果酸是從中藥女貞子和墨旱蓮提取的有效組分，它可以競爭性與雌激素受體亞型α36結(jié)合，從而發(fā)揮廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，作用溫和、持久，且可以避免雌激素替代治療的諸多副作用。

根據(jù)實(shí)施例，本發(fā)明技術(shù)方案的提出是基于齊墩果酸作為α36雌激素受體激活劑，對雌激素受體具有競爭性激活作用。

根據(jù)一個實(shí)施例，本發(fā)明技術(shù)方案的提出是基于發(fā)現(xiàn)齊墩果酸作為α36雌激素受體激活劑，其在患處體液中的有效作用濃度為0.01μM-10μM。

根據(jù)一個實(shí)施例，本發(fā)明技術(shù)方案中，齊墩果酸與藥物學(xué)上可接受的藥物輔料混合形成散劑、膏劑、粉劑、針劑、水劑或注射劑。

根據(jù)實(shí)施例，齊墩果酸作為α36雌激素受體激活劑，為主要有效成分制備的各種形式的藥物或保健食品，可以用于預(yù)防和治療上述骨質(zhì)疏松癥、卵巢早衰、更年期綜合癥、月經(jīng)不調(diào)、不孕癥、陰道炎、尿道炎、骨關(guān)節(jié)炎癥性疾病、椎間盤退變性疾病與免疫性疾病、心血管疾病、老年性癡呆、腫瘤骨轉(zhuǎn)移等一系列疾病。在使用時可以采取皮下、靜脈注射或肛腸給藥；注射液的使用可以任意選用生理鹽水、葡萄糖、穩(wěn)定劑、防腐劑、懸浮劑或乳化劑等。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，齊墩果酸是從滋腎陰中藥女貞子、墨旱蓮中提取的天然產(chǎn)物，是一種新型的α36雌激素受體激活劑，它可以競爭性與雌激素受體亞型α36結(jié)合，從而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，并且作用溫和，可以避免雌激素治療帶來的諸多副作用。因此，以齊墩果酸為主要有效成分制備的各種形式的藥物或保健食品，可以用于預(yù)防和治療上述雌激素減少性疾病。

附圖說明

圖1A為齊墩果酸的結(jié)構(gòu)簡式。

圖1B為不同濃度的齊墩果酸對細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，細(xì)胞裂解后，α36雌激素受體被同位素標(biāo)記配體結(jié)合率變化柱狀圖。

圖2為α36雌激素受體的表達(dá)細(xì)胞種類示意圖。

圖3為齊墩果酸通過激活α36雌激素受體，抑制破骨細(xì)胞形成的柱狀圖。

圖4為齊墩果酸通過激活α36雌激素受體，抑制破骨細(xì)胞骨吸收功能的 柱狀圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等效變化和修改同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求所限定的范圍。

本發(fā)明以下實(shí)施例中，齊墩果酸(圖1A)采用市售品或按照中藥領(lǐng)域常用提取方法從滋腎陰中藥女貞子、墨旱蓮中提取。M為摩爾濃度，即mol/L；μM為微摩爾每升。

本發(fā)明以下實(shí)施例中，未特別標(biāo)示的實(shí)驗(yàn)方法，譬如同位素標(biāo)記配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、Western Blot、破骨細(xì)胞分化系統(tǒng)、骨吸收實(shí)驗(yàn)，均采用本領(lǐng)域通用的實(shí)驗(yàn)方法。

實(shí)施例1

齊墩果酸是一種新型的α36雌激素受體激活劑，對雌激素受體具有競爭性激活作用：蛇床子素(圖1A)是從滋腎陰中藥女貞子、墨旱蓮中提取的天然產(chǎn)物,分子量456.71。實(shí)驗(yàn)研究中，首先使用人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系(Ishikawa細(xì)胞株)，敲除雌激素受體β后，該細(xì)胞僅表達(dá)α36雌激素受體。用不同濃度的齊墩果酸對細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，細(xì)胞裂解后，通過對同位素標(biāo)記配體與受體的結(jié)合進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)齊墩果酸可以劑量依賴性的競爭性結(jié)合α36雌激素受體，表現(xiàn)為同位素標(biāo)記的配體與α36雌激素受體結(jié)合率隨著齊墩果酸濃度增大而逐漸降低。研究發(fā)現(xiàn)0.01μM齊墩果酸干預(yù)細(xì)胞時，有接近80％的α36雌激素受體仍被同位素標(biāo)記配體結(jié)合，0.1μM齊墩果酸干預(yù)細(xì)胞時，大約到50％的α36雌激素受體仍被同位素標(biāo)記配體結(jié)合，1μM齊墩果酸時,大約10％的α36雌激素受體仍被同位素標(biāo)記配體結(jié)合。5μM齊墩果酸時,僅有極少量(2％)α36雌激素受體仍被同位素標(biāo)記配體結(jié)合。而在10μM齊墩果酸干預(yù)細(xì) 胞時，完全無同位素標(biāo)記配體結(jié)合，即10μM齊墩果酸可以完全競爭性地結(jié)合α36雌激素受體(圖1B)。因此，齊墩果酸100％抑制率的濃度范圍在0.01μM-10μM之間，作用效果較為持久和溫和。

實(shí)施例2

首先通過Western Blot證明，破骨細(xì)胞中主要高表達(dá)α36雌激素受體(圖2)。在體外采用了原代外骨髓單核/巨噬細(xì)胞培養(yǎng)法，分別加入M-CSF(44ng/ml)和RANKL(100ng/ml)進(jìn)行干預(yù)后。同時采用骨骼系統(tǒng)內(nèi)的成骨細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行對照。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別檢測α36雌激素受體表達(dá)情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了α36雌激素受體在M-CSF和RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞的表達(dá)(圖2：破骨1和破骨2)顯著高于成骨細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)α36雌激素受體主要影響破骨細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。

實(shí)施例3

在體外采用了原代骨髓單核/巨噬細(xì)胞系分化培養(yǎng)法，驗(yàn)證了齊墩果酸競爭性結(jié)合α36雌激素受體后的生物學(xué)效應(yīng)。通過加入M-CSF(44ng/ml)和RANKL(100ng/ml)誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成，并給予適當(dāng)梯度齊墩果酸干預(yù)原代造血干細(xì)胞-破骨細(xì)胞前體細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)0.01μM齊墩果酸即可顯著抑制(P<0.01)破骨細(xì)胞形成，抑制作用隨著濃度增大而增強(qiáng)，10μM齊墩果酸可以完全抑制破骨細(xì)胞的形成。因此證明齊墩果酸與結(jié)合α36雌激素受體競爭性結(jié)合后，的確可以發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，抑制破骨細(xì)胞形成，從而可以用于雌激素降低引起的骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療(圖3)。

因此，齊墩果酸可以通過激活α36雌激素受體，預(yù)防和治療雌激素降低引起的骨質(zhì)疏松癥、卵巢早衰、更年期綜合癥、月經(jīng)不調(diào)、不孕癥、陰道炎、尿道炎、骨關(guān)節(jié)炎癥性疾病、椎間盤退變性疾病與免疫性疾病、心血管疾病、老年性癡呆、腫瘤骨轉(zhuǎn)移，可以用于制成防治上述疾病的藥物或保健食品中。

實(shí)施例4

應(yīng)用體外原代骨髓單核/巨噬細(xì)胞系分化培養(yǎng)法，驗(yàn)證了齊墩果酸競爭性結(jié)合α36雌激素受體后對破骨細(xì)胞功能的生物學(xué)效應(yīng)。通過采用M-CSF(44ng/ml)和RANKL(100ng/ml)誘導(dǎo)破骨細(xì)胞生成，在骨片檢測及破骨細(xì)胞的骨吸收功能，并給予不同濃度齊墩果酸干預(yù)破骨細(xì)胞的骨吸收功能，發(fā)現(xiàn)0.01μM齊墩果酸即可顯著抑制(P<0.01)破骨細(xì)胞骨吸收功能，抑制作用隨著濃度增大而增強(qiáng)，10μM齊墩果酸可以完全抑制生成的破骨細(xì)胞骨吸收功能(圖4)。

因此證明齊墩果酸與結(jié)合α36雌激素受體競爭性結(jié)合后，可以發(fā)揮抑制破骨細(xì)胞主導(dǎo)的骨吸收功能，影響人體的骨骼系統(tǒng)的功能，從而可以用于雌激素降低引起的骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療。