本發(fā)明屬于生物化學(xué)分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及的是一種白藜蘆醇自微乳制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
白藜蘆醇（Resveratrol，Res）是一種含有芪類(lèi)結(jié)構(gòu)的非黃酮類(lèi)多酚化合物，大量存在于葡萄、花生等一些人們常吃的食物中。白藜蘆醇對(duì)維護(hù)人類(lèi)的健康有重要作用，具有抗炎、抗癌、抗菌、抗氧化和保護(hù)心血管的作用。由于白藜蘆醇具有難溶于水、穩(wěn)定性差、生物利用度低、半衰期短、代謝和消除速率快等特性，大大限制了其臨床應(yīng)用。本發(fā)明根據(jù)白藜蘆醇的疏水性，制成自微乳制劑，旨在顯著提高白藜蘆醇的水溶性、穩(wěn)定性和生物利用度。
影響自微乳給藥系統(tǒng)形成的因素有很多，但關(guān)鍵在于其組成各部分的物理化學(xué)和
生物理化性質(zhì)，如油相、乳化劑、助乳化劑的種類(lèi)選擇、油相與乳化劑之間的比例以及藥物的油水分配系數(shù)、藥物的極性等，其中影響較大的還是油相、乳化劑、助乳化劑這三個(gè)成分的選擇。
油相在自微乳給藥系統(tǒng)中具有重要的作用，不僅能溶解難溶性藥物，增大藥物的溶解度和提高藥物的細(xì)胞膜滲透性，還能促進(jìn)藥物在胃腸道系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)運(yùn)。通常，選擇中鏈/ 長(zhǎng)鏈的飽和、不飽和或局部飽和的碳?xì)浠衔镒鳛橛拖?，包括植物油、礦物油、脂肪酸等。
乳化劑的選擇也是形成自微乳的關(guān)鍵，因?yàn)槿榛瘎┑奶匦匀缬H水/ 親油平衡值(HLB)、濁點(diǎn)、粘度、與油相的親和力、乳化劑在自微乳體系中的比例，這些性質(zhì)極大影響到自微乳體系的形成及自微乳滴的粒徑大小。一般，選擇HLB 較高的非離子型乳化劑，如聚氧乙烯氫化蓖麻油、吐溫、司盤(pán)、泊洛沙姆、十二烷基硫酸鈉(SLS)、磷脂、膽固醇、十二烷基苯磺酸鈉(Lab) 等。
助乳化劑能輔助溶解藥物，嵌入乳化劑分子中，兩者形成微乳的界面膜，增大界面膜流動(dòng)性，從而提高載藥量，調(diào)節(jié)自微乳體系的乳化時(shí)間，控制自微乳液滴形成大小。常用的助乳化劑有乙醇、丙二醇、異丙醇、聚乙二醇、甘油、乙二醇單乙醚等物質(zhì)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種白藜蘆醇自微乳制劑，將水溶性差的白藜蘆醇制備成自微乳制劑，增大白藜蘆醇的溶解度，提高白藜蘆醇的口服生物利用度。
本發(fā)明的另一目的在于提供這種白藜蘆醇自微乳制劑的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
一種白藜蘆醇自微乳制劑，它是由三乙酸甘油酯作為油相、聚氧乙烯蓖麻油（Cremophor EL）、聚氧乙烯氫化蓖麻油（CremophorRH40）、異丙醇組成，各組分之間的質(zhì)量比為三乙酸甘油酯：Cremophor EL：Cremophor RH40：異丙醇=1: 1-1.5: 0.5-0.7:1.5-2.0。
一種白藜蘆醇自微乳制劑的制備方法，包括以下制備步驟：
(1)按權(quán)利要求1 所述的處方組成及比例，稱(chēng)取三乙酸甘油酯、Cremophor EL、Cremophor RH40、異丙醇，在37℃水浴、攪拌下混合均勻；
(2)加入處方量的白藜蘆醇原料藥，在(37±2)℃水浴攪拌下混合均勻，得白藜蘆醇自微乳制劑。
上述的白藜蘆醇自微乳制劑能制成微乳液或軟膠囊劑型，或者作為粘合劑制備成顆粒劑、片劑或微丸劑型。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
(1) 稱(chēng)取三乙酸甘油酯1g、Cremophor EL1.5g、Cremophor RH40 0.5g、異丙醇1.5g，在37℃水浴、磁力攪拌作用下混合均勻。
(2)、加入0.4g 白藜蘆醇原料藥，在37℃水浴、磁力攪拌作用下，混合均勻，得白藜蘆醇自微乳制劑。
實(shí)施例2
(1)稱(chēng)取三乙酸甘油酯1g、Cremophor EL1g、Cremophor RH40 0.7g、異丙醇2.0g，在37℃水浴、磁力攪拌作用下混合均勻。
(2)加入0.4g 白藜蘆醇原料藥，在37℃水浴、磁力攪拌作用下，混合均勻，得白藜蘆醇自微乳制劑。
實(shí)施例3
(1)稱(chēng)取三乙酸甘油酯1g、Cremophor EL1.25g、Cremophor RH40 0.6g、異丙醇1.75g，在37℃水浴、磁力攪拌作用下混合均勻。。
(2)加入0.4g 白藜蘆醇原料藥，在37℃水浴、磁力攪拌作用下，混合均勻，得白藜蘆醇自微乳制劑。
實(shí)施例3 白藜蘆醇自微乳的鑒定
采用透射電鏡和粒徑檢測(cè)方法對(duì)白藜蘆醇自微乳的形成進(jìn)行驗(yàn)證。
采用透射電鏡和粒徑檢測(cè)方法對(duì)白藜蘆醇自微乳進(jìn)行驗(yàn)證。透射電鏡結(jié)果顯示，形成的納米乳液滴，外觀圓整，大小均一，粒徑在15nm左右。采用馬爾文粒度儀檢測(cè)粒徑，結(jié)果顯示粒徑在13—15nm，符合納米乳要求。表明白藜蘆醇自微乳制備成功。
實(shí)施例4 白藜蘆醇自微乳的質(zhì)量研究
建立HPLC法測(cè)定白藜蘆醇自微乳的含量和溶出度，并進(jìn)行方法學(xué)考察。以外觀、含量為指標(biāo)進(jìn)行影響因素和加速試驗(yàn)，考察其穩(wěn)定性情況。
結(jié)果表明，在10μg/mL～200μg/mL范圍內(nèi)白藜蘆醇濃度與峰面積有良好的線(xiàn)性關(guān)系，回收率、穩(wěn)定性、精密度均符合方法學(xué)要求。白藜蘆醇自微乳穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，在高溫40℃，相對(duì)濕度75%的條件下，其外觀仍為淡黃色澄清溶液，含量也無(wú)明顯變化。但在光照條件下，雖然外觀無(wú)明顯變化，但含量變化明顯，原因是白藜蘆醇在光照條件下會(huì)發(fā)生順?lè)串悩?gòu)反應(yīng)和降解反應(yīng)，故需避光操作和保存。
實(shí)施例5 大鼠在體單向腸灌流試驗(yàn)及藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)
以SD大鼠為受試動(dòng)物，自制白藜蘆醇混懸液為參比制劑。采用HPLC法測(cè)定腸灌流液中白藜蘆醇的濃度，通過(guò)重量法計(jì)算腸吸收速率、表觀分布系數(shù)，并對(duì)白藜蘆醇自微乳和混懸液的腸吸收情況進(jìn)行比較。
藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)：以SD大鼠為受試動(dòng)物，自制白藜蘆醇混懸液為參比制劑。采用HPLC法測(cè)定灌胃白藜蘆醇自微乳后大鼠血液中的藥物濃度，對(duì)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)和相對(duì)生物利用度進(jìn)行研究。
通過(guò)大鼠在體單向腸灌流試驗(yàn)得出，白藜蘆醇自微乳的吸收速率常數(shù)（Ka）（×10-2min-1）和表觀分布系數(shù)（Papp）（×10-3cm/min）分別為1.352±0.05860,1.497±0.07827；白藜蘆醇混懸液的吸收速率常數(shù)（Ka）（×10-2min-1）和表觀分布系數(shù)（Papp）（×10-3cm/min）分別為0.659±0.08570,0.657±0.08991，且具有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)果表明，白藜蘆醇自微乳的腸吸收情況明顯好于白藜蘆醇混懸液。
通過(guò)大鼠藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)得出，白藜蘆醇的血管外給藥符合單室模型，自制白藜蘆醇自微乳與白藜蘆醇混懸劑相比，血藥峰時(shí)間Tmax和MRT有所延長(zhǎng)，峰濃度Cmax和AUC明顯增加。結(jié)果表明：白藜蘆醇自微乳的處方制備工藝，簡(jiǎn)單可行，且重現(xiàn)性好。有效提高了白藜蘆醇的溶解性，在一定程度上改善了白藜蘆醇光照易分解的特性，增加了白藜蘆醇體內(nèi)吸收率，顯著提高其生物利用度，為今后白藜蘆醇的廣泛應(yīng)用，奠下了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。另一方面，本發(fā)明表明自微乳可以應(yīng)用于提高難溶性藥物的生物利用度，拓展難溶性藥物的臨床應(yīng)用。