本發(fā)明涉及一種軟膠囊保健品及其制備方法和應(yīng)用，具體涉及一種含有輔酶Q10的軟膠囊劑及其制備和應(yīng)用，屬于保健產(chǎn)品
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：免疫是指機(jī)體免疫系統(tǒng)識別自身與異己物質(zhì)，并通過免疫應(yīng)答排除抗原性異物，以維持機(jī)體生理平衡的功能。人體的免疫力有分為先天性免疫與獲得性免疫，兩者的獲得方式不同。當(dāng)各種不同的原因造成機(jī)體的免疫系統(tǒng)用失調(diào)，免疫系統(tǒng)的保護(hù)作用受到影響，從而導(dǎo)致了疾病的發(fā)生。免疫力低下往往表現(xiàn)出的就是容易生病、精神萎靡、容易疲勞、食欲降低等等癥狀。疲勞是一種生理性現(xiàn)象，對人來說是一種保護(hù)性機(jī)制。這是身體向我們發(fā)出應(yīng)該休息的信號，如果不管不顧，身體就會(huì)受到損害，最后積勞成疾。疲勞一般可分為體力疲勞、腦力疲勞、心理疲勞和病理疲勞。疲勞可導(dǎo)致大量能量被消耗，體內(nèi)產(chǎn)生疲勞毒素。疲勞毒素刺激中樞神經(jīng)，產(chǎn)生全身性疲勞反應(yīng)。由于能量不足，細(xì)胞活力下降，機(jī)體各系統(tǒng)功能減退，疲勞毒素在體內(nèi)聚積，體內(nèi)環(huán)境惡化，細(xì)胞中毒，興奮衰減。這些因素，極其易于誘發(fā)被動(dòng)死亡。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)機(jī)體的免疫力低下時(shí)，體內(nèi)的自由基，單腺肽氧就會(huì)產(chǎn)生過氧化作用。人體中輔酶Q10的總含量僅為500-1500mg并隨著年長而減少。在人的器官中輔酶Q10的含量在20歲時(shí)達(dá)到高峰，然后迅速減少。在心臟中輔酶Q10濃度的減少特別明顯。77歲的老人比20歲的年輕人心肌中的輔酶Q10減少了57％。輔酶Q10作為一種維生素類的輔酶在人體內(nèi)發(fā)揮重要的生理功能。它 參與線粒體氧化磷酸化與ATP的產(chǎn)生過程，調(diào)控細(xì)胞氧化還原環(huán)境。輔酶Q10具有代謝性強(qiáng)心功能，有強(qiáng)的清除自由基作用，在人體內(nèi)抗氧化酶的作用下，抑制自由基對生物膜的損傷，是天然的抗氧化劑和自由基清除劑。輔酶Q10是免疫環(huán)節(jié)的重要部分。當(dāng)體內(nèi)輔酶Q10的水平升高時(shí)，免疫系統(tǒng)可以從抗生素和抗病毒藥物的使用中得到更多的幫助。但是抗生素不能幫助免疫系統(tǒng)的重建，而輔酶Q10可以自然地刺激免疫系統(tǒng)，從而得到更大范圍的益處和抵御作用。同時(shí)，輔酶Q10還是維生素E增效劑。輔酶Q10在阻止低密度脂蛋白氧化的作用上比維生素E、胡蘿卜素及蕃茄紅素更強(qiáng)。雖然體內(nèi)防止脂質(zhì)氧化的主要物質(zhì)是維生素E，但是在體內(nèi)不同的條件下，維生素E反過來會(huì)加快脂質(zhì)的氧化。能夠阻止此現(xiàn)象的就是輔酶Q10。輔酶Q10使維生素E活力再生作用與維生素C類似，是唯一的一種天然存在的，在人體中能再生(轉(zhuǎn)化成活性形式)的脂溶性抗氧化劑。目前，市場上輔酶Q10已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥保健品和美容化妝品。室溫下輔酶Q10為黃色至橙黃色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)較低(49-52℃)，無臭無味，可溶解三氯甲烷、乙醚或石油醚等有機(jī)溶劑中，極微溶于乙醇，不溶于水和甲醇。輔酶Q10的生物利用度很差，不宜于人體吸收；輔酶Q10對光線敏感，遇光分解成紅色物質(zhì)，溫度和濕度對其影響較小。軟膠囊劑系指將一定量藥物、藥材提取物加適宜的輔料密封于球形、橢圓形或其他形狀的軟質(zhì)囊材中制成的劑型。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的就是滿足當(dāng)前亞健康人群的保健需要，以及應(yīng)對上述現(xiàn)有存在的技術(shù)問題提供一種增強(qiáng)免疫力、緩解疲勞功能的輔酶Q10軟膠囊及其制備方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):一種輔酶Q10軟膠囊，包括囊體及封入囊體中的囊芯，所述的囊芯由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1020-50重量份，維生素E15-60重量份、玉米油200-500重量份、蜂蠟5-20重量份。進(jìn)一步，所述的囊芯由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1030-40重 量份、維生素E25-55重量份、玉米油300-450重量份、蜂蠟5.5-18重量份。更進(jìn)一步，所述的囊芯由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1035-40重量份、維生素E45-50重量份、玉米油380-400重量份、蜂蠟10-15重量份。更進(jìn)一步，所述的囊芯由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1040重量份、維生素E50重量份、玉米油395重量份、蜂蠟15重量份。本發(fā)明所述輔酶Q10軟膠囊按如下方法制備：(1)囊芯料液的制備：按配方比例取蜂蠟、玉米油，加熱熔化蜂蠟；按配方比例取維生素E、輔酶Q10，與蜂蠟、玉米油混合，得囊芯料液；(2)囊皮膠液的制備：將純化水加熱，將明膠、甘油、二氧化鈦、焦糖色、紅曲紅加入到純化水中，加熱，攪拌，得囊皮膠液；(3)制備軟膠囊：將步驟(1)制得的囊芯料液以及步驟(2)制備好的囊皮膠液混勻，經(jīng)過壓丸、定型、干燥，制備得到輔酶Q10軟膠囊。進(jìn)一步，步驟(2)中所用的明膠、甘油及純水的重量份為1～5:0.5～2:2～8。更進(jìn)一步，所選用的明膠、甘油及純水的重量份為3:1:4。本發(fā)明提供一種組合物在制備具有增強(qiáng)免疫力、緩解疲勞作用的保健品中的應(yīng)用，所述組合物的原料由如下成分組成：輔酶Q1020-50重量份，維生素E15-60重量份、玉米油200-500重量份、蜂蠟5-20重量份。進(jìn)一步，由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1030-40重量份、維生素E25-55重量份、玉米油300-450重量份、蜂蠟5.5-18重量份。更進(jìn)一步，由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1035-40重量份、維生素E45-50重量份、玉米油380-400重量份、蜂蠟10-15重量份。更進(jìn)一步，由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1040重量份、維生素E50重量份、玉米油395重量份、蜂蠟15重量份。本發(fā)明提供一種組合物在制備具有祛除面部色素沉著作用的保健品中的應(yīng)用，所述組合物的原料由如下成分組成：輔酶Q1020-50重量份，維生素E15-60重量份、玉米油200-500重量份、蜂蠟5-20重量份。進(jìn)一步，由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1030-40重量份、維生 素E25-55重量份、玉米油300-450重量份、蜂蠟5.5-18重量份。更進(jìn)一步，由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1035-40重量份、維生素E45-50重量份、玉米油380-400重量份、蜂蠟10-15重量份。更進(jìn)一步，由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1040重量份、維生素E50重量份、玉米油395重量份、蜂蠟15重量份。本發(fā)明配方中的主要原料輔酶Q10(CoenzymeQ10)又名泛醌10，是一種醌環(huán)類化合物，其結(jié)構(gòu)類似于維生素K，不同來源的輔酶Q側(cè)鏈異戊烯單位的數(shù)目不同，人類和其他哺乳動(dòng)物的輔酶Q中，異戊烯基單位數(shù)目為10而得名，在人體的心、肝、腎、胰腺中均有存在，目前比較確定的功能有兩個(gè)方面，一是在營養(yǎng)物質(zhì)在線粒體內(nèi)轉(zhuǎn)化為能量的過程中起重要的作用，是細(xì)胞呼吸和代謝的激活劑；二是有明顯的抗脂質(zhì)過氧化作用，是重要的抗氧化劑；近年來，有學(xué)者觀察到，輔酶Q10對于惡性腫瘤、AIDS和潰瘍患者的癥狀均有一定的改善作用，于是提出輔酶Q10還具有增強(qiáng)免疫力的作用，在機(jī)體的非特異性具有免疫增強(qiáng)的作用。輔酶Q10化學(xué)名2，3-二甲氧基-5-甲基-6-癸異戊二烯苯醌，分子式C59H90O4，分子量862，結(jié)構(gòu)類似于維生素K，屬于醌環(huán)類化合物。在室溫下呈橙黃色晶體，無臭無味。其熔點(diǎn)為49℃，受溫度和濕度影響較小，但光照條件下不穩(wěn)定，易被分解。輔酶Q10結(jié)構(gòu)的醌環(huán)中苯醌具有羥基取代基而使它傾向于極性，而聚異戊二烯側(cè)鏈則使它在疏水環(huán)境中具有較低的自由能，這種特性使其能在線粒體內(nèi)膜中迅速擴(kuò)散并富集。另外，它的醌環(huán)具有典型的可逆性氧化還原特性。在氧化條件下以醌形式存在，在無氧條件下，可還原為對苯二酚，細(xì)胞中具有氧化型、還原型和自由基半醌的形態(tài)?；谝陨显?，輔酶Q10從線粒體復(fù)合體中接受氫后，一方面直接傳遞氫給自由基，在抗氧化酶作用下發(fā)生反應(yīng)，抑制自由基對細(xì)胞膜的破壞，另一方面將質(zhì)子釋放至線粒體基質(zhì)內(nèi)，電子則傳遞給細(xì)胞色素，促進(jìn)氧化磷酸化和電子主動(dòng)轉(zhuǎn)移，由此形成機(jī)體能力貯存的主要物質(zhì)ATP，并通過減少AMP損失來提高ATP水平，減少鈣離子流失，維持鈣離子通道完整性并穩(wěn)定細(xì)胞膜。在實(shí)際應(yīng)用中，輔酶Q10被認(rèn)為是一種天然良好的抗氧化劑和自由基清除劑，發(fā)揮緩解體力疲勞，提高免疫力等多種功效作用。因此輔酶Q10是一種免疫調(diào) 節(jié)劑，發(fā)揮增強(qiáng)免疫力的保健功能。此外，輔酶Q10的分子大、水溶性差，胃腸道吸收緩慢，口服給藥后到達(dá)有效濃度的時(shí)間較長，約需要5～10小時(shí)(平均6.5小時(shí))，因此本發(fā)明選用軟膠囊的劑型。維生素E是廣泛存在于天然動(dòng)植物中的一種脂溶性維生素，又稱生育酚，對酸和熱穩(wěn)定，當(dāng)有氧氣存在時(shí)，加熱到200℃仍能保持穩(wěn)定。維生素E具有多種生理功能，也是人體必需維生素之一是最主要的抗氧化劑之一。維生素E定位于細(xì)胞膜上，屬于脂溶性斷鏈型抗氧化劑，它向脂氧自由基提供氫離子，使脂質(zhì)過氧化鏈中斷，與超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物一起構(gòu)成體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)，保護(hù)細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)的核酸免受自由基的攻擊。此外，維生素E還能烊滅單線態(tài)氧，提高溶劑油的抗氧化能力。在本發(fā)明的配方中，添加維生素E作為輔料，可有效保護(hù)輔酶Q10的氧化失活。維生素E是由天然植物中提取精制而成，相比于合成維生素E安全性更高，維生素E比合成品吸收高3.5倍，半衰期更長，生理活性約是合成品的3-8倍。因而本發(fā)明選用維生素E作為添加的主要輔料。輔酶Q10屬于脂溶性物質(zhì)，依據(jù)相似相溶的原理，選油類物質(zhì)作為軟膠囊基質(zhì)。玉米油是一種由玉米胚提取的優(yōu)質(zhì)食用油，而且其天然抗氧化性和穩(wěn)定性相當(dāng)好，耐高溫煎炸。玉米油富含不飽和脂肪酸，其中亞油酸占油脂總量的50％以上，富含維生素E、植物甾醇、磷脂等，國際上把玉米油稱作營養(yǎng)保健油，常用于藥品及保健食品生產(chǎn)中。玉米油所含有的亞油酸是人體必需脂肪酸，它不僅是細(xì)胞膜的必要組成成分，也是機(jī)體合成前列腺素的基礎(chǔ)物質(zhì)，它能與膽固醇結(jié)合成酯，促進(jìn)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)，并促進(jìn)膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槟懰崤懦鲶w外，有良好的降脂作用，還能抑制血小板在血管壁上凝集，防止血栓形成，起到抗動(dòng)脈粥樣硬化，預(yù)心血管疾病的作用。玉米油植物的甾醇含量是其他食用油不能比擬的，甾醇具有直接、有效、快速降低膽固醇的作用。現(xiàn)代醫(yī)藥食品領(lǐng)域已開發(fā)玉米油用于心腦血管疾病的防治。同時(shí)，現(xiàn)代研究對小鼠進(jìn)行試驗(yàn)，研究人員發(fā)現(xiàn)長期攝入富含多不飽和脂肪酸的玉米胚芽油，可能改變了小鼠免疫細(xì)胞膜磷脂中脂肪酸的種類和水平，從而提高了小鼠的免疫力，提示具有增強(qiáng)小鼠免疫力的作用。本發(fā)明選用玉米油為軟膠囊的基質(zhì)，既可以解決輔酶Q10的難溶性問題，其中玉米油含有的多種成分 具有輔助降血脂功能，發(fā)明中玉米油相較于其他發(fā)明的配比用量大，其出發(fā)點(diǎn)是玉米油本身的食用性和安全性可靠，玉米油本身具有良好的保健功效，因此本發(fā)明提高玉米油的配比用量，旨在加強(qiáng)輔酶Q10抗氧化和調(diào)節(jié)降血脂的功能，二者相互應(yīng)用更加有益于產(chǎn)品的免疫保健功效。在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)單純利用玉米油對輔酶Q10進(jìn)行溶解不徹底，容易在軟膠囊的囊化前、囊化過程中以及囊化后的玉米油中產(chǎn)生固體物的沉降，以及在生產(chǎn)及舊貯過程中會(huì)緩慢沉降分層，為了保證助懸液具有良好的穩(wěn)定性，因此需在其中加入助懸劑，助懸劑可以起到防止沉降、分層，保證產(chǎn)品的助懸性，保證裝量的準(zhǔn)確。目前常用的油性助懸劑有蠟脂類、卵磷脂、單硬脂酸鋁等，考慮到原料的經(jīng)濟(jì)、實(shí)用與安全，使用蜂蠟最合適。蜂蠟是蜜蜂分泌的蠟，蜂巢經(jīng)排除或離心去除蜂蜜后制得的一種有機(jī)混合物，蜂蠟可通過影響體系粘度和流變學(xué)性質(zhì)，使各項(xiàng)穩(wěn)定性指標(biāo)發(fā)生變化。蜂蠟濃度越高，塑變值就越大，開始發(fā)生沉降的時(shí)間越延長，沉降速度越小，符合stokes公式。另外，由于蜂蠟的主要成分為棕櫚酸蜂蠟醇酯，同時(shí)含有少量的游離多元醇，因而具有一定的乳化性，降低表面張力，這也使得助懸液的沉降速度因受阻而減慢。蜂蠟安全，成本低廉，本發(fā)明使用特定濃度的蜂蠟作為助懸劑賦予產(chǎn)品良好的流動(dòng)性，有助于軟膠囊囊芯有效成分的裝量以及成品劑型的穩(wěn)定。目前國內(nèi)的生產(chǎn)工藝多采用干淀粉、磷酸氫鈣、硬脂酸鎂等輔料與輔酶Q10原料粉進(jìn)行簡單混合再分裝。由于輔酶Q10易受外界因素，如光、氧化劑等的影響，導(dǎo)致含量下降(最大降幅超過20％)。與普通的硬膠囊劑不同，本發(fā)明的劑型為軟膠囊劑?？诜浤z囊劑與其他傳統(tǒng)劑型如片劑、硬膠囊劑、顆粒劑以及溶液劑等相比，具有生物利用度高、藥物穩(wěn)定性良好、含量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。軟膠囊劑又稱作膠丸劑，是將油類或?qū)γ髂z無溶解作用的溶液、混懸液、甚至固體及半固體等封閉于軟膠殼中而成的一種制劑，多用于某些性質(zhì)不穩(wěn)定(如光敏感、易氧化或揮發(fā)、遇濕熱不穩(wěn)定等)的水不溶性或水溶性藥物以及有不良口味、氣味的藥物，可以起到增加穩(wěn)定性、改善生物利用度和掩味的作用。目前很多實(shí)驗(yàn)已比對得出，在固體制劑口服應(yīng)用中，軟膠囊克服了硬膠囊劑型易吸潮、穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，同時(shí)可以提高制劑的生物利用度。本發(fā)明以輔酶Q10與玉米油、維生素E、助懸劑等特定的比例進(jìn)行復(fù)配制得， 產(chǎn)品經(jīng)加速試驗(yàn)和長期穩(wěn)定性考察，質(zhì)量穩(wěn)定。產(chǎn)品優(yōu)于傳統(tǒng)的固體劑型制劑，以軟膠囊劑為劑型提高了產(chǎn)品的生物利用度，保證了產(chǎn)品質(zhì)量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以輔酶Q10為主要功效性成分，輔以維生素E、玉米油及蜂蠟制成軟膠囊制劑，具有增強(qiáng)免疫力的保健功能，主要用于增強(qiáng)免疫力、抗氧化、輔助調(diào)節(jié)血脂和緩解體力疲勞。本發(fā)明提供的產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、服用方便，符合國家食品藥品監(jiān)督管理局對保健食品的要求，安全有效，可長期服用，是免疫力低下人群理想的保健食品。實(shí)驗(yàn)例1對本實(shí)施例制備的輔酶Q10軟膠囊的增強(qiáng)免疫力功能進(jìn)行檢測。1、樣品：實(shí)施例5制備的輔酶10軟膠囊。2、試驗(yàn)動(dòng)物及環(huán)境:SPF級健康昆明種雄性小鼠288只，體重18g～22g，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號：NO.0051154。每48只小鼠為Ⅰ批，共6批。ⅥⅧ批，進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)；Ⅱ批，進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)；Ⅲ批，血清溶血素測定和抗體生成細(xì)胞數(shù)測定；Ⅳ～Ⅵ批，分別進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測定。實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度22±2℃，相對濕度50％±10％。3、劑量設(shè)計(jì)與受試物給予方式：本發(fā)明的輔酶Q10軟膠囊對人體的推薦劑量為每日1.0g/60kg體重，相當(dāng)于0.0167g/kg，BW，按相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30倍劑量確定小鼠的低中高三種劑量，本實(shí)施例中對小鼠的劑量分別設(shè)為0.083g/kg，BW，0.167g/kg，BW，0.50g/kg，BW，三種，經(jīng)口每日一次灌胃給予小鼠受試物，灌胃體積按10ml/kg，BW。灌胃前用玉米油配制受試物，低、中、高劑量組中受試物的濃度分別為8.33g/L、16.667g/L及50.00g/L，陰性對照組以等體積的蒸餾水代替受試物，溶劑對照組以等體積的玉米油代替受試物，30天后測試各項(xiàng)免疫指標(biāo)。小鼠以遠(yuǎn)交系小鼠專用飼料喂飼。4、實(shí)驗(yàn)方法4.1臟器體重比值測定小鼠稱重后頸椎脫白處死，取其胸腺、脾臟，去盡筋膜，用濾紙吸干臟器表面血污并稱重，計(jì)算胸腺體重比值與脾臟體重比值。所得數(shù)據(jù)用PEMS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。4.2ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能(MTT法)動(dòng)物連續(xù)給樣30天后，頸椎脫白處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106個(gè)/ml，將細(xì)胞懸液分為兩孔加入24孔培養(yǎng)板中國，每孔1ml，一孔加75μLConA液(相當(dāng)于7.Syg/ml)，另一孔作為對照，置5％C02，37℃培養(yǎng)68h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸取上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的PRMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT(5mg/ml)50μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解后，然后將液體移入96孔板中，每孔加3個(gè)平行樣，用酶標(biāo)儀在570nm波長進(jìn)行測量吸光度值(A值)，計(jì)算試驗(yàn)孔A值與對照孔A值之差，以表示淋巴細(xì)胞的增值能力。結(jié)果用方差分析進(jìn)行分析。若受試物組淋巴細(xì)胞的增殖能力高于對照組，且差異有顯著性，可判定該受試物有提高ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的作用。4.3遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(足跖增厚法)(DTH)取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2％(v/v，用生理鹽水配置)壓積SRBC(2000r/min，10min)0.2ml，致敏后4天，測量左右足跖厚度，同一部位測量3次，取平均值，然后在測量部位皮下注射20％(v/v，用生理鹽水配置)壓積SRBC20yl，注射后24小時(shí)測量左右足跖厚度，以攻擊前后足跖厚度之差表示DTH的程度。所得數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若受試物攻擊前后足跖厚度的差值高于對照組，且差異有顯著性(P<0.05)，可斷定該受試物有提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力的作用。4.4抗體生成細(xì)胞測定(Jerne改良玻片法)動(dòng)物連續(xù)給樣30天后，將脫纖維綿陽紅細(xì)胞免疫5天后，動(dòng)物頸椎脫白處死，取出脾臟，制成脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106個(gè)/ml。將表層培養(yǎng)基(Ig瓊脂糖加雙蒸水100ml)加熱溶解后，放入45℃水浴保溫，與等量pH7.2-7.4、2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加入 50μL10％SRBC，20μL脾細(xì)胞懸液，迅速混勻，傾倒于已刷瓊脂薄層的6cm平皿上，繼續(xù)溫育1.5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。結(jié)果用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。若受試物組淋巴細(xì)胞的增殖能力高于對照組，且差異有顯著性，可判定該受試物有增強(qiáng)小鼠抗體細(xì)胞數(shù)的作用。4.5小鼠血清溶血素試驗(yàn):取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只小鼠經(jīng)腹腔注射2％(用生理鹽水配制，體積比)壓積SRBC(2000r/min，10min)0.2ml，免疫5天后，摘除小鼠眼球取血于離心管中，放置約1小時(shí)，將凝固血與管壁剝離，離心，收集血清，用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度血清分別置于微量雪凝實(shí)驗(yàn)板內(nèi)，每孔100μL，再加入0.5％SRBC懸液100μL，混勻，置濕盒內(nèi)，在37℃溫箱孵育3小時(shí)，記錄血球凝集程度，計(jì)算抗體積數(shù)(血清對倍稀釋指數(shù)與凝集度乘積之和)。血清凝集度分為5級，按一下標(biāo)準(zhǔn)判定。O級:SRBC全部下沉，集中在孔底形成致密的圓點(diǎn)狀，四周液體清晰級＝SRBC大部分沉積在孔底部成圓點(diǎn)狀，四周有少量凝集的SRBC；11級:凝集的SRBC在孔底形成薄層，中心可以明顯看見一個(gè)疏松的紅點(diǎn)；111級:凝集的SRBC均與的鋪散在孔底成一薄層，中心隱約可見一個(gè)小紅點(diǎn)；IV級:凝集的SRBC均勻的鋪散在孔底成一薄層，凝塊有時(shí)成卷折狀。所得數(shù)據(jù)用PEMS軟件進(jìn)行方差分析，若受試物組血清溶血素抗體積數(shù)高于對照組，且差異有顯著性，可判定受試物有提高小鼠血清溶血素水平的作用。4.6小鼠碳廓清能力試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣30天后，尾靜脈注射1:5稀釋的印度墨汁，待墨汁注入，立即計(jì)時(shí)。注入墨汁后2、10分鐘，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20μL，并將其加到2ml碳酸鈉溶液中，用分光光度計(jì)在600nm波長處測試吸光度值，以碳酸鈉溶液做空白對照。根據(jù)動(dòng)物體重，肝重和脾重計(jì)算吞噬指數(shù)，結(jié)果以方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。若受試物組血清溶血素抗體積數(shù)高于對照組，且差異有顯著性，可判定受試物有提高小鼠單核-巨噬細(xì)胞的碳廓清能力的作用。4.7小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞(半體內(nèi)法)試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣30天后，每鼠腹腔注射20％雞紅細(xì)胞懸液1ml，間隔30分鐘，頸椎脫臼處死，固定在鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1分鐘，吸出腹腔洗液lml，分滴于2片玻璃片上，37℃孵箱濕孵30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸緩沖液染色3分鐘，再用蒸餾水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計(jì)算吞噬百分比和吞噬指數(shù)。其中，吞噬率(％)＝吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)×100；吞噬指數(shù)＝被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)。所得結(jié)果的吞噬率按X＝Sin-1P1/2進(jìn)行換算，式中P為吞噬百分率，用小數(shù)表示，若受試物的吞噬率或吞噬指數(shù)明顯高于對照組，且差異有顯著性，可判定受試物有提高巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的作用。4.8小鼠NK細(xì)胞活性測定:動(dòng)物連續(xù)給樣30天后，頸椎脫白處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液(效應(yīng)細(xì)胞)，取傳代后24hYAC-1細(xì)胞加1640完全培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105個(gè)/ml(靶細(xì)胞)，取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100μL效靶比(50:1)，加入U(xiǎn)形96孔培養(yǎng)板，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100μL，最大釋放孔加靶細(xì)胞和1％NP40各100μL，上述各項(xiàng)均設(shè)有三個(gè)復(fù)孔，與37℃、5％二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，每孔吸取上清液100u1置于平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100μL，反應(yīng)3min，每孔加入lmol/L的HCL30μL終止，用酶標(biāo)儀在490mm處測定A值。按以下公式計(jì)算NK細(xì)胞活性：NK細(xì)胞活性％＝(反應(yīng)孔A-自然釋放孔A)/(最大釋放孔A-自然釋放孔A)×100；NK細(xì)胞活性需按X＝Sin-1P1/2進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，式中P為NK細(xì)胞活性，用小數(shù)表示，若受試物的吞噬率或吞噬指數(shù)明顯高于對照組，且差異有顯著性，可判定受試物有提高小鼠NK細(xì)胞活性的作用。5實(shí)驗(yàn)結(jié)果5.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定增強(qiáng)免疫能力功能判定：在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性四個(gè)方面任意兩個(gè)方面結(jié)果陽性，即可判定該受試物具有增強(qiáng)免疫力功能作用。其中細(xì)胞免疫功能測定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性，或任一實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果為陽性，可判定細(xì)胞免疫功能測定結(jié)果為陽性。體液免疫功能測定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性或任一實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果為陽性，可判定體液免疫功能測定結(jié)果陽性。單核-巨噬細(xì)胞功能測定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽性或任一實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽性，可判定單核_巨噬細(xì)胞功能測定結(jié)果陽性。NK細(xì)胞活性測定實(shí)驗(yàn)的一個(gè)以上劑量組結(jié)果陽性，可判定NK細(xì)胞活性結(jié)果陽性。5.2輔酶Q10軟膠囊對小鼠體重的影響見表1表1樣品對免疫一組動(dòng)物體重(克)的影響從表1可以看出不同的劑量與對照組相比，小鼠的體重增重?zé)o顯著性差異，因此輔酶Q10軟膠囊對動(dòng)物的體重沒有明顯影響。5.3輔酶Q10軟膠囊對小鼠臟器體重比值的影響：見表2、表3。表2輔酶Q10軟膠囊對小鼠脾臟體重比值的影響(x±SD)組別動(dòng)物數(shù)(只)脾臟體重比值(mg/g)P水對照組105.04±0.410.773溶劑對照組104.98±0.62低劑量組104.93±0.61中劑量組104.85±0.80高劑量組104.69±0.68表3輔酶Q10軟膠囊對小鼠的胸腺體重比值的影響(x±SD)從表3可以看出不同的劑量與對照組相比，小鼠的胸腺體重比值無顯著性差異，因此輔酶Q10軟膠囊對動(dòng)物的胸腺體重比值沒有明顯影響。5.4輔酶Q10軟膠囊對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響A、輔酶Q10軟膠囊對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響見表4。表4輔酶Q10軟膠囊對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響(x±SD)由表4可見，水對照組、溶劑對照組和3個(gè)劑量組的小鼠足跖腫脹度的影響不同，中劑量組與高劑量組對小鼠足跖腫脹度的影響與對照組比有明顯差異，認(rèn)為輔酶Q10軟膠囊有提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的能力。B、輔酶Q10軟膠囊對ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的影響，見表5。表5輔酶Q10軟膠囊對ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的影響由表5可見，水對照組、溶劑對照組和3個(gè)劑量組對小鼠的淋巴細(xì)胞增殖能力之間無顯著性差異，認(rèn)為輔酶Q10軟膠囊對提高小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力沒有明顯影響。5.4輔酶Q10軟膠囊對小鼠體液免疫功能的影響A、輔酶Q10軟膠囊對小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響，見表6。表6輔酶Q10軟膠囊對小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響(x±SD)由表6可見，水對照組與中劑量組及高劑量組對空斑數(shù)的影響具有明顯的差異，認(rèn)為輔酶Q10軟膠囊具有增加小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的能力。B、輔酶Q10軟膠囊對小鼠血清溶血素水平的影響，見表7。表7輔酶Q10軟膠囊對小鼠血清溶血素水平的影響(x±SD)由表7可見，水對照組與中劑量組及高劑量組對抗體積數(shù)的影響具有明顯的差異，認(rèn)為輔酶Q10軟膠囊具有提高小鼠血清溶血素水平的能力。5.5輔酶Q10軟膠囊對小鼠單核_巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響A、輔酶Q10軟膠囊對小鼠單核_巨噬細(xì)胞碳廓清能力的影響，見表8。表8輔酶Q10軟膠囊對小鼠單核巨噬細(xì)胞碳廓清能力的影響(x±SD)由表8可見，水對照組、溶劑對照組和3個(gè)劑量組對小鼠的單核-巨噬細(xì)胞碳廓清能力之間無顯著性差異，認(rèn)為輔酶Q10軟膠囊對小鼠碳廓清能力沒有明顯影響。B、輔酶Q10軟膠囊對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響，見表9、表10。表9輔酶Q10軟膠囊對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞雞紅細(xì)胞吞噬率的影響(x±SD)表10輔酶Q10軟膠囊對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞雞紅細(xì)胞吞噬指數(shù)的影響(x±SD)由表9及表10可見，水對照組、溶劑對照組和3個(gè)劑量組對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力之間無顯著性差異，認(rèn)為輔酶Q10軟膠囊對小鼠腹 腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力沒有明顯影響。5.6輔酶Q10軟膠囊對小鼠NK細(xì)胞活性的影響，見表11。表11輔酶Q1q軟膠囊對小鼠NK細(xì)胞活性的影響(x±SD)由表11可見，水對照組、溶劑對照組和3個(gè)劑量組對小鼠NK細(xì)胞活性之間無顯著性差異，認(rèn)為輔酶Q10軟膠囊對小鼠NK細(xì)胞活性沒有明顯影響。綜上，經(jīng)口給予小鼠不同劑量組的輔酶Q10軟膠囊30天，對小鼠體重增長無不良影響，對小鼠脾臟和胸腺體重比值無影響，小鼠的體液免疫功能、細(xì)胞免疫功能測定結(jié)果均為陽性，單核巨噬細(xì)胞吞噬能力、NK細(xì)胞活性測定結(jié)果均為陰性，表明輔酶Q10軟膠囊具有增強(qiáng)免疫力功能的作用。具體實(shí)施方式實(shí)施例1一種輔酶Q10軟膠囊，包括囊芯和囊皮，囊芯由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1035g、維生素E35g、玉米油225g、蜂蠟7.5g；囊皮由以下組分及重量份的原料組成：明膠140g、甘油56g、純化水133g、二氧化鈦0.5g、紅曲紅1.2g、焦糖色1.0g；制備方法：(1)囊芯料液的制備：輔酶Q10原料預(yù)先過80目篩，備用。按配方比例取蜂蠟、玉米油，加熱至70℃熔化蜂蠟，攪拌混勻，得混合物料，放至室溫，備用。按配方比例取維生素E、輔酶Q10，加入到混合物料中，攪拌混勻，過膠體磨研磨成質(zhì)地細(xì)膩的漿狀物，靜置真空脫氣泡，備用。(2)囊皮膠液的制備：將純化水加熱至60℃時(shí)，將預(yù)先按配方比例稱好的明膠、甘油、二氧化鈦、焦糖色、紅曲紅加入到純化水中，加蓋密封，啟動(dòng) 攪拌槳攪拌，并加熱至70℃，攪拌使之成為均勻的膠液，停止攪拌，靜置真空脫氣泡1h，備用。(3)制備軟膠囊：將步驟(1)制得的囊芯料液輸以及步驟(2)制備好的囊皮膠液輸送到軟膠囊機(jī)的儲(chǔ)膠槽中混勻，備用。開動(dòng)軟膠囊機(jī)，經(jīng)過壓丸、定型、洗丸、干燥、揀丸和分裝步驟，制備得到輔酶Q10軟膠囊。實(shí)施例2與實(shí)施例1不同之處在于:囊芯由以下組分及重量份的原料組成:輔酶Q1038g、維生素E40g、玉米油226g、蜂蠟5.5g。實(shí)施例3與實(shí)施例1不同之處在于：囊芯由以下組分及重量份的原料組成:輔酶Q1040g、維生素E37g、玉米油260g、蜂蠟15g。實(shí)施例4與實(shí)施例1不同之處在于：囊芯由以下組分及重量份的原料組成：輔酶Q1030g、維生素E25g、玉米油286g、蜂蠟5.5g。實(shí)施例5與實(shí)施例1不同之處在于：囊芯由以下組分及重量份的原料組成:輔酶Q1040g、維生素E50g、玉米油395g、蜂蠟15g。實(shí)施例6與實(shí)施例1不同之處在于：囊芯由以下組分及重量份的原料組成:輔酶Q1038g、維生素E27g、玉米油200g、蜂蠟5.5g。實(shí)施例7與實(shí)施例1不同之處在于：囊芯由以下組分及重量份的原料組成:輔酶Q1040g、維生素E60g、玉米油250g、蜂蠟15g。實(shí)施例8與實(shí)施例1不同之處在于：囊芯由以下組分及重量份的原料組成:輔酶Q1040g、維生素E37g、玉米油200g、蜂蠟10g。對照實(shí)施例1囊芯：輔酶Q1048g、維生素E37g、玉米油860g、蜂蠟55g；囊皮組成成分以及軟膠囊制備方法同實(shí)施例1。對照實(shí)施例2囊芯：輔酶Q1010g、維生素E30g、玉米油950g、蜂蠟10g；囊皮組成成分以及軟膠囊制備方法同實(shí)施例1。對照實(shí)施例3囊芯：輔酶Q1040g、維生素E0.2g、玉米油140g、蜂蠟19.8g；囊皮組成成分以及軟膠囊制備方法同實(shí)施例1。效果實(shí)驗(yàn)：試用者660名，30-40歲，40-50歲(不含40歲)，50-70歲(不含50歲)各220人，分為11組，每組分別包括30-40歲，40-50歲，50-70歲各20人。三組試用者分別使用實(shí)施例1-8及對照實(shí)施例1-3的產(chǎn)品。試用人群皮膚暗淡無光，有色素沉著。試驗(yàn)方法：將實(shí)施例1-8及對照實(shí)施例1-3制備的輔酶Q10軟膠囊隨機(jī)發(fā)給試用者，每日1粒，60粒/瓶，試用2個(gè)月。評分標(biāo)準(zhǔn)：0分：自然光下觀察，無肉眼可見色素沉著；2分：自然光下觀察，輕度色素沉著，顏色淺褐色，在50cm或超過50cm的距離觀察不明顯，一般的化妝或胡須、體毛可遮蓋；4分：自然光下觀察，中度色素沉著，顏色黃褐色，在50cm或超過50cm的距離觀察不明顯，一般的化妝或胡須、體毛不易遮蓋；6分：自然光下觀察，重度色素沉著，顏色深褐色，在50cm外觀察也很明顯，一般的化妝或胡須、體毛不易遮蓋。療效評價(jià)：療效指數(shù)＝[(治療前評分一治療后評分)/治療前評分]*100％臨床疫愈：色素沉著全部消退，臨床癥狀消失，癥狀評分值減少≥95％。顯效：色素沉著大部分消退，臨床癥狀明顯減輕，95％﹥癥狀評分值減少≥70％。有效：色素沉著部分消退，臨床癥狀減輕，70％﹥癥狀評分值減少≥30％。無效：色素沉著消退不明顯，臨床癥狀未減輕或惡化，癥狀評分值減少﹤30％。有效率＝(痊愈+顯效+有效)/60*100％以調(diào)查問卷形式回訪試用效果。試用效果如下表：表12實(shí)施例1-8及對照實(shí)施例1-3產(chǎn)品的試用效果實(shí)施例1產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著16161680.00％實(shí)施例2產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著16181683.30％實(shí)施例3產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著16161781.60％實(shí)施例4產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著16161781.60％總有效率82.75％84.00％83.00％81.50％實(shí)施例5產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著18181687.30％實(shí)施例6產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著16161781.60％實(shí)施例7產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著18181683.30％實(shí)施例8產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著18161883.30％對照實(shí)施例1產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著16141574.20％對照實(shí)施例2產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著14141371.25％對照實(shí)施例3產(chǎn)品30-40歲/人40-50歲/人50-70歲/人有效率祛除色素沉著15151476.15％結(jié)論：由上述實(shí)例可見，本發(fā)明軟膠囊劑能有效祛除面部色素沉著，效果顯著優(yōu)于對照實(shí)施例1-3的產(chǎn)品，其中以實(shí)施例5的配方所制得產(chǎn)品的效果最佳，較其他同類配比組合物有效率更高，治療效果更好。當(dāng)前第1頁1 2 3