1.一種雞新城疫病毒滅活疫苗的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
1)制備原代CEF細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至單層時(shí)接種雞新城疫病毒。
2)當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)80%以上病變時(shí),收獲細(xì)胞培養(yǎng)物,反復(fù)凍融3次,得到含上清液的細(xì)胞毒液。
3)測(cè)定病毒效價(jià),病毒的效價(jià)應(yīng)≥106.5TCID50/0.1mL。
4)將檢驗(yàn)合格的細(xì)胞毒液置于無(wú)菌容器內(nèi)進(jìn)行滅活處理,加入甲醛溶液充分搖勻,甲醛溶液的加入量為滅活溶液體積的0.5‰-2‰,控制溫度在37℃滅活12-48h,轉(zhuǎn)速為180r/min。
5)將滅活的病毒進(jìn)行滅活檢驗(yàn),確定最佳的滅活時(shí)間及甲醛濃度。
6)將滅活的病毒液與進(jìn)口佐劑MONTANIDETMISA 206VG按1:1比例(w/w)或75:87比例(v/v)混勻,利用ATS Engineering Inc公司的AH100D型均質(zhì)機(jī)對(duì)疫苗進(jìn)行了乳化進(jìn)行乳化,制備的滅活疫苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞新城疫病毒滅活疫苗的制備方法,其特征在于步驟4)中所述滅活時(shí)間是16h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞新城疫病毒滅活疫苗的制備方法,其特征在于步驟4)中甲醛溶液的加入量為滅活溶液體積的1‰。