專利名稱：雞新城疫病毒hn基因亞單位疫苗及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物基因工程疫苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雞新城疫病毒HN基因亞單位疫苗及其制備方法。
背景技術(shù)：
近年來，由于科技的巨大進(jìn)步，使得養(yǎng)殖業(yè)得以迅速發(fā)展，但同時也帶來了隱患?？萍嫉倪M(jìn)步使養(yǎng)殖業(yè)向集約化和工廠化發(fā)展，畜禽對病原微生物的易感性增加，病害頻繁發(fā)生，交叉感染，混合感染嚴(yán)重，在生產(chǎn)上造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。隨著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，大型集約化雞場的相繼出現(xiàn)，隨之而來的疾病問題也接踵而至，各種畜禽疾病頻繁發(fā)生，由于各養(yǎng)殖場的技術(shù)力量參差不齊，診斷檢測設(shè)備也很有限，導(dǎo)致許多臨床獸醫(yī)在用藥方面較為混亂，濫用和無針對性的用藥問題成為普遍現(xiàn)象。這樣 就進(jìn)一步促使細(xì)菌耐藥株不斷產(chǎn)生，畜禽疾病的預(yù)防和治療更加困難，甚至治療無效。眾所周知，迄今為止病毒性傳染病還沒有有效的治療方法，近幾年因各種疾病死亡的畜禽至少占飼養(yǎng)總數(shù)的8 10%。目前病毒性傳染病主要靠接種疫苗來進(jìn)行預(yù)防和治療，為此我國投入了大量人力、財力開發(fā)各種疫苗產(chǎn)品，對控制疾病流行起到了關(guān)鍵作用。新城疫(Newcastle disease，ND)是一種由新城疫病毒引起的禽類高度接觸性、急性敗血性傳染病，是目前危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展最嚴(yán)重的傳染病之一，又稱亞洲雞瘟或偽雞瘟。常呈急性敗血雞新城疫癥狀。主要特征是呼吸困難、便稀、神經(jīng)紊亂、粘膜和漿膜出血，死亡率聞，對養(yǎng)雞業(yè)危害嚴(yán)重。有強毒株和弱毒株兩類，病毒分為低毒力型(即緩發(fā)型)、中等毒力型(即中發(fā)型)、強毒力型(即速發(fā)型)三種類型。多數(shù)高強度毒力株常屬嗜內(nèi)臟型新城疫病毒。雞科動物都可患罹本病，家雞最易感，雛雞比成年雞易感性更高。因此，目前對雞新城疫病主要以預(yù)防為主，疫苗在新城疫病的預(yù)防上發(fā)揮著重要的作用。HN基因是雞新城疫病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，具有良好的免疫原性和反應(yīng)原性。因此，構(gòu)建能高效表達(dá)雞新城疫病毒HN基因的亞單位疫苗，為我國雞新城疫病的防治提供了新了思路與手段。目前，新城疫在全國范圍內(nèi)的發(fā)生仍然比較普遍。對于該病的控制，接種疫苗仍是主要手段，常用的雞新城疫疫苗有活疫苗，需多次接種，但此方法有一定的副作用，可能引發(fā)疾病；滅活疫苗能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生高水平的抗體并持續(xù)較長時間，但接種滅活疫苗的機(jī)體產(chǎn)生的針對病毒的特異性抗體，干擾了臨床檢測和檢疫以及流行病學(xué)調(diào)查；基因工程疫苗的應(yīng)用大大改善了傳統(tǒng)疫苗出現(xiàn)的弊端，其中亞單位疫苗具有良好的免疫原性，且無副作用、不干擾臨床檢測和流行病學(xué)調(diào)查，因此具有良好的應(yīng)用前
旦
-5^ O

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種雞新城疫病毒HN基因亞單位疫苗及其制備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種雞新城疫病毒HN基因亞單位疫苗，其主要材料由雞新城疫病毒HN基因和原核表達(dá)載體pET-28a組成，該疫苗由雞新城疫病毒HN基因與原核表達(dá)載體pET_28a連接構(gòu)建重組載體質(zhì)粒，再經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、蛋白純化、收獲目的蛋白，配合佐劑而得。所述雞新城疫病毒HN基因亞單位疫苗的制備方法，其包括如下步驟I)從自然發(fā)病的雞新城疫病毒中，通過PCR擴(kuò)增出具有良好免疫原性的HN基因；2)將HN基因與原核表達(dá)載體pET_28a連接，構(gòu)建重組載體質(zhì)粒(pET-HN)；3)利用IPTG誘導(dǎo)重組載體質(zhì)粒(pET-HN)產(chǎn)生大量目的蛋白；4)用SDS-PAGE電泳檢測目的基因的蛋白的表達(dá)量；5)進(jìn)行westerm-blotting技術(shù)來檢測目的蛋白的反應(yīng)原性；6)利用蛋白純化技術(shù)對HN蛋白進(jìn)行純化；7)收獲目的蛋白，配合佐劑(殼聚糖)免疫動物檢測目的蛋白的免疫原性。所述的雞新城疫病毒HN基因是以雞新城疫病毒基因組為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增與克隆、并由重組菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)而得。本發(fā)明的研究內(nèi)容主要包括利用原核表達(dá)載體，篩選具有良好免疫原性的雞新城疫病毒HN基因作為靶基因，并對HN基因進(jìn)行克隆、鑒定；構(gòu)建能高效表達(dá)HN基因的原核表達(dá)載體，利用IPTG誘導(dǎo)其產(chǎn)生大量目的蛋白，SDS-PAGE電泳檢測目的基因的蛋白表達(dá)量，western-blotting技術(shù)檢測目的蛋白的反應(yīng)原性，摸索探討最佳誘導(dǎo)時間和誘導(dǎo)劑量，利用蛋白純化技術(shù)對HN蛋白質(zhì)進(jìn)行純化，收獲目的蛋白，配合佐劑免疫動物檢測目的蛋白的免疫原性。本發(fā)明通過采用基因工程等先進(jìn)技術(shù)，研發(fā)雞新城疫病毒HN基因亞單位疫苗，利用pET-28a作基因表達(dá)載體，與具有良好免疫原性的雞新城疫病毒HN基因連接構(gòu)建重組載體質(zhì)粒。該疫苗的生產(chǎn)技術(shù)具有安全、穩(wěn)定、可規(guī)?；葍?yōu)點，疫苗能夠達(dá)到良好的預(yù)防效果。本疫苗的研制和應(yīng)用，開拓了生物醫(yī)藥研發(fā)的新方向，使新一代動物生物制品更加安全、廉價、使用方便，有利于促進(jìn)我國家禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，造福廣大人民，對促進(jìn)社會和經(jīng)濟(jì)進(jìn)步意義重大，具有很好的社會和經(jīng)濟(jì)效益。


圖I中1-6為HN基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，M為Mark2000 ；圖2為重組質(zhì)粒(pET-HN)及重組質(zhì)粒的EcoRI和HindIII雙酶切鑒定；圖3為表達(dá)蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果，I :標(biāo)準(zhǔn)低分子量蛋白質(zhì)Mark ;2、3 :pET_HN重組菌的誘導(dǎo)表達(dá)；4 pET-28a載體的誘導(dǎo)表達(dá)；5 :未加IPTG誘導(dǎo)劑的pET-HN重組菌對照；圖4為表達(dá)產(chǎn)物的Westem-bloting鑒定，I :pET_HN表達(dá)蛋白的Western-blot檢·測；2 :標(biāo)準(zhǔn)低分子量蛋白質(zhì)Mark。
具體實施例方式以下通過實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。實施例I(一 )雞新城疫HN基因的擴(kuò)增與克隆根據(jù)gene bank上已發(fā)表的雞新城疫病毒HN基因組序列，設(shè)計了一對包含其結(jié)構(gòu)蛋白HN基因的PCR引物，引物Pl帶有EcoRI酶切位點，引物P2帶有HindIII酶切位點，Pl和P2引物之間所擴(kuò)增片斷長約1.8Kp。引物由寶生物工程(大連)有限公司合成。引物序列如下Pl 5 ; 一 ACAACATCCGTTCTACCACATCAC C — 3 'P2 5 ; 一 GTCGTCTTCCCAACCATCCTATGAT 一 3 '。( 二 )雞新城疫病毒基因組RNA的提取按照寶生物RNA試劑盒提取法對其RNA進(jìn)行提取。(三)RT-PCR及目的片段的回收以P1、P2為引物，以雞新城疫病毒基因組為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，RT-PCR反應(yīng) 采用50 μ L反應(yīng)體系，在50 μ L反應(yīng)體系中加入10XPCR buffer 5 μ L，dNTP 2yL，模板I μ L,上、下游引物各I μ L, Taq酶O. 5 μ L,滅菌水39. 5 μ L,總體積50 μ L。混合均勻后蓋緊管口放入PCR儀內(nèi)擴(kuò)增反應(yīng)，RT反應(yīng)條件如下70°C，5min，42°C，lh ;95°C，5min ; 4°C,5min。PCR反應(yīng)條件94°C預(yù)變性5min后進(jìn)入循環(huán)，94°C變性I min，58°C退火I min，72°C延伸2. 5min，30個循環(huán)后，72°C再延伸IOminj I %的瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產(chǎn)物，用tiangen凝膠回收試劑盒回收PCR產(chǎn)物，得到約I. 8Kp的PCR產(chǎn)物(見圖I)。(四)重組載體質(zhì)粒(pET-HN)的構(gòu)建用EcoR I和Hind III將PCR擴(kuò)增回收的HN基因及目的載體pE T _28a雙酶切，然后進(jìn)行連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞(DH5a)中，第二天挑取陽性單個菌落過夜培養(yǎng)后，提取質(zhì)粒進(jìn)行EcoR I和HindIII雙酶切，得到約I. 8kb和5. 3kb兩條片段與預(yù)期要求相符合(見圖2)，重組質(zhì)粒(pET-HN)構(gòu)建成功。(五)利用IPTG誘導(dǎo)重組載體質(zhì)粒(pET-HN)產(chǎn)生大量目的蛋白，并用SDS-PAGE電泳檢測目的基因的蛋白的表達(dá)量重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)將測序正確的陽性重組菌10 μ L接種至3mL、2XYT培養(yǎng)液(含100 μ g / mLAmp)中37°C振搖過夜。取過夜培養(yǎng)物200 μ L接種于20mL 2xYT培養(yǎng)液中，劇烈振搖至OD6tltl為O. 6 I. O時，加入IPTG至終濃度為O. 8mmol / L，37°C誘導(dǎo)表達(dá)，并每隔Ih收I次菌對不同的陽性克隆分別進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，篩選出表達(dá)量高的克隆，同時用未誘導(dǎo)的菌液空載體作為陰性對照。SDS-PAGE電泳洗凈玻璃板，固定在電泳槽上，用2. 0%瓊脂糖封邊。按《分子克隆實驗指南》上的配方配制12%的分離膠15mL，迅速注入兩玻璃板之間，膠頂覆蓋ImL雙蒸水。待分離膠凝固后傾出覆蓋層液體，用去離子水沖洗凝膠頂部數(shù)次，倒置控干液體，加入6mL 5%的積層膠(濃縮膠)溶液，插上梳子，垂直放置電泳槽使其凝固。小心移去梳子，在電泳裝置上、下槽間加入Tris-甘氨酸緩沖液，用注射器沖洗加樣孔數(shù)次，將電源負(fù)極與上槽相連。收集的菌液12000r / min離心lmin，用45yL超純水懸浮，加入15yL的5XSDS上樣buffer，混勻，水浴煮沸5min，用微量進(jìn)樣器上樣20 μ L，打開電源，用80V電壓電泳至溴酚藍(lán)進(jìn)入分離膠，把電壓提高到120V，繼續(xù)電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)凝膠底部。染色取下凝膠用蒸餾水沖洗，用凝膠5倍體積的考馬斯亮藍(lán)染色液浸泡凝膠，放在平緩搖動的平臺上室溫染色3h。脫色脫色液浸泡凝膠，在脫色操床上過夜，其間更換染色液3 4次。待藍(lán)色背景完全脫凈后，將凝膠浸入蒸餾水中終止脫色。
電泳結(jié)束后經(jīng)過染色和脫色后發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)菌在約74KD處有I粗條帶，而pET_28a和沒有加入IPTG誘導(dǎo)劑的對照在約74KD處沒有出現(xiàn)相同的條帶。與DNAStar軟件分析的74.6KD大相致同(見圖3)。(六)用western-blotting技術(shù)來檢測目的蛋白的反應(yīng)原性ffesterrn-blotting分析〈1>轉(zhuǎn)印剪8塊濾紙與I塊硝酸纖維素膜(NC),大小與凝膠相等，在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡5min，在正極板上按4層濾紙、NC膜、凝膠、4層濾紙的順序疊放整齊，確定無氣泡后蓋上負(fù)極板，按膠體積O. 65mA / cm2轉(zhuǎn)移2h。<2>封閉轉(zhuǎn)移完成后，取下NC膜，切下標(biāo)準(zhǔn)分子量Marker，置氨基黑染色液中浸染20min，取出后用漂洗脫色，直至背景藍(lán)色脫盡。其余NC膜用PBS沖洗，加入IOml封閉液，室溫輕輕振搖1.2h?！?>與抗體的結(jié)合封閉結(jié)束后，用PBS沖洗NC膜4 5次，加入PBST按照I 1000倍稀釋的偽狂犬陽性血清10mL，37°C結(jié)合3h，用PBST沖洗4 5次，每次在搖床·緩慢搖動。加入I : 500倍稀釋的兔抗豬IgG(二抗)，室溫下輕搖孵育lh，取出用PBST沖洗3 4次,每次IOmin0<4>底物顯色將NC膜轉(zhuǎn)移到IOmL底物溶液中，室溫避光輕搖3min觀察顯色情況，等出現(xiàn)明顯條帶時，立即轉(zhuǎn)入PBST緩沖液中終止顯色，室溫保存。原核表達(dá)的融合蛋白經(jīng)過SDS-PAGE電泳后,進(jìn)行Western-bloting鑒定,結(jié)果出現(xiàn)了一條特異性的抗一抗體結(jié)合帶，根據(jù)分子量的大小推測，這條帶的分子量與目的蛋白的分子量的大小相同，從而證明了該特異性條帶就是我們表達(dá)的目的蛋白的條帶；同時也證明了我們所表達(dá)的目的蛋白是有活性的，可以作為診斷抗原使用。因此我們可以進(jìn)一步的進(jìn)行蛋白的純化，為以后做診斷抗原建立一種診斷方法奠定了基礎(chǔ)(見圖4)。(七)對重組菌HN蛋白質(zhì)進(jìn)行變性、復(fù)性及純化將重組菌1(^1^接種至31^、2父￥1'培養(yǎng)液(10(^8/1111^&11+)中，37°C培養(yǎng)過夜。取過夜培養(yǎng)物2mL接種于500mL 2 X YT培養(yǎng)液中，劇烈振搖至OD6tltl為O. 6 I. O時，加入IPTG至終濃度O. 8mmol / L，37°C誘導(dǎo)表達(dá)4h以上。包涵體的制備與蛋白質(zhì)的變性溶解(I)將上述誘導(dǎo)后的重組菌5000r / min離心15min，棄上清，用蒸餾水洗2次，再用I / 10原培養(yǎng)體積的TEl緩沖液重懸細(xì)菌沉淀。
(2)裂解細(xì)菌在細(xì)菌懸液中加入溶菌酶至終濃度為200mg/L (約40μ 、50π^ / mL的貯液)和I / 10體積的1% TritonX-100，30°C作用15 30min后，于冰浴中超聲裂解細(xì)菌(80W、作用3s、間隔9s、99次)，此時溶液由粘稠變?yōu)榍辶痢?°C下IOOOOr / min離心lOmin，收集包涵體沉淀。(3)洗滌分別用TE2、TE3緩沖液各洗滌包涵體沉淀2次(重懸包涵體，分別作用IOmin)，4。。，10 OOOr / min離心lOmin，收集沉淀。(4)變性加IOmL變性液溶解沉淀，室溫放置Ih以上。4°C下12000r/min離心lOmin，收集變性溶解的上清液，去除不溶性雜質(zhì)。HN蛋白的復(fù)性及純化利用分光光度計測定變性溶解的重組菌HN蛋白濃度，分別在變性液中加入相應(yīng)體積的稀釋液，調(diào)整其蛋白終濃度在IOOmg / L以下，并使溶液中尿素濃度保持在lmol / L。然后加入還原型谷胱苷肽(GSH)和氧化型谷胱苷肽(GSSG)，使其終濃度分別達(dá)到0. 9mmol / L和0. Immol / L，4°C放置20h以上對HN蛋白進(jìn)行復(fù)性。復(fù)性后用緩沖液透析48h，每隔6h換液I次。透析完全后溶液中應(yīng)不含尿素，再用PEG-20000濃縮透析液。將復(fù)性后的蛋白過濾除菌。 復(fù)性的HN蛋白經(jīng)濃縮后，經(jīng)紫外分光光度計測定樣品在A26Qnm和A28(lnm波長的光吸收值，按照公式計算樣品中蛋白質(zhì)濃度蛋白質(zhì)濃度(mg / mL) = (1. 45 X A28tl—
O.74XA260) X稀釋倍數(shù)。蛋白質(zhì)純度測定用SDS-PAGE電泳檢測純化的蛋白，用薄層掃描儀掃描分析目的蛋白的純度。(八)收獲目的蛋白，配合佐劑免疫動物檢測目的蛋白的免疫原性將收獲的目的蛋白與佐劑(殼聚糖)I : I混合制成亞單位疫苗進(jìn)行動物實驗選取血清學(xué)為ND陰性的5日齡健康雛雞80只，隨機(jī)分成4組，即空白對照組、雞新城疫HN亞單位疫苗低、中、高劑量組，每組20只。雞新城疫HN亞單位疫苗低劑量為0.3ml /只、中劑量為O. 5ml /只、高劑量為O. 8ml /只，空白對照組(用常規(guī)菌體苗O. 5ml /只)分別頸部皮下接種。見表I。 表I試驗雞分組與處理
mij劑量/ (mi/只)j試驗雞數(shù)/只j給藥途徑
空白對照組07120頸部皮下接種
HN亞單位疫苗低劑量組 0 320頸部皮下接種
HN亞單位疫苗中劑量組 0 520頸部皮下接種
HN亞單位疫苗高劑量組 0 820頸部皮下接種免疫雞血清抗體的檢測所有免疫組于免疫后3、7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77d采血、分離血清，用間接法測定血清中的中和抗體效價。見表2。表2試驗雞各劑量組在不同時間段的抗體效價
各組效價~[3h [7h[l4h f^h[28h [35h[42h [49h [56 [63hf70h [77h
對照組 I 25 I 25 I 26 I 26 I 26 I 27 I 27 I 26 I 26 I 25 I 25 I 25
低劑量組~ I 25 I 25 I 26 I 27 I 27 I 28 I 28 I 27 I 26 I 26 I 26 I 26
中劑量組~ I 27 I 28 I 28 I 29 I 29 I 210 I 211 I 211 I 210 I 210 I 29 I 29
高劑量組~ I 29 I 29 I 210 I 210 I 211 I 211 I 212 I 212 I 211 I 211 I 210 I 29抗體效價與免疫保護(hù)相關(guān)性試驗根據(jù)抗體檢測結(jié)果，將不同抗體水平的試驗雞分成不同組，每組選取10只，分別用IO4個LD5tl(約IO8個菌)新城疫病毒株攻毒。隔離觀察，以雛雞死亡數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計保護(hù)率，對死亡雛雞剖檢，觀察病理變化，并從肝、脾中分離細(xì)菌。間接ELISA法檢測效價為I : 28_1 212的雛雞，用新城疫病毒攻毒后72h均100%健康存活，效價為I : 26-1 27的雛雞攻毒72h后，各有死亡，保護(hù)率分別為37. 5%和75%。而效價在I : 25以下的免疫雛雞攻毒后72h內(nèi)均死亡，表明ELISA效價與抗強毒保護(hù)呈正相關(guān)。死亡雛雞剖檢可見以各處粘膜和漿膜出血，特別是腺胃乳頭和賁門部出血。對照雛雞全部死亡。攻毒后發(fā)病雛雞的主要病變心包、氣管、喉頭、腸和腸系膜充血或出血，卵巢壞死、出血，卵泡破裂性腹膜炎等。消化道淋巴濾泡的腫大出血和潰瘍是ND的一個突出特征。非典型新城疫剖檢可見氣管輕度充血，有少量粘液。鼻腔有卡他性滲出物。氣囊混濁。少見腺胃乳頭出血等典型病變。HN亞單位疫苗免疫保護(hù)效力的檢測結(jié)果顯示接種O. 5ml組和O. 8ml組能激發(fā)明顯免疫應(yīng)答，持續(xù)產(chǎn)生高滴度體液抗體，能有效地抵抗相應(yīng)強毒的攻擊；接種O. 3ml的組也產(chǎn)生免疫應(yīng)答，但產(chǎn)生的抗體效價偏低，只能部分抵抗相應(yīng)強毒的攻擊。分析其原因可能是組接種的量太小，含量太少，不能產(chǎn)生足夠的免疫力O. 5ml組和O. 8ml組雛雞產(chǎn)生的免疫保護(hù)力相當(dāng)(差異不顯著)，可以確定O. 5ml亞單位疫苗為最佳免疫劑量。見表3。表3 HN亞單位疫苗免疫保護(hù)效力的檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種雞新城疫病毒HN基因亞單位疫苗，其特征在于其主要材料由雞新城疫病毒HN基因和原核表達(dá)載體pET-28a組成，該疫苗由雞新城疫病毒I-IN基因與原核表達(dá)載體pET-28a連接構(gòu)建重組載體質(zhì)粒，再經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、蛋白純化、收獲目的蛋白，配合佐劑而得。
2.權(quán)利要求I所述雞新城疫病毒HN基因亞單位疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 1)從自然發(fā)病的雞新城疫病毒中，通過PCR擴(kuò)增出具有免疫原性的HN基因； 2)將基因與原核表達(dá)載體pET-28a連接，構(gòu)建重組載體質(zhì)粒； 3)利用IPTG誘導(dǎo)重組載體質(zhì)粒產(chǎn)生大量目的蛋白； 4)用SDS-PAGE電泳檢測目的基因的蛋白的表達(dá)量； 5)進(jìn)行western-blotting技術(shù)檢測目的蛋白的反應(yīng)原性； 6)利用蛋白純化技術(shù)對HN蛋白進(jìn)行純化； 7)收獲目的蛋白，配合佐劑免疫動物檢測目的蛋白的免疫原性。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞新城疫病毒I-IN基因亞單位疫苗，其主要材料由雞新城疫病毒I-IN基因和原核表達(dá)載體pET-28a組成，該疫苗由雞新城疫病毒HN基因與原核表達(dá)載體pET-28a連接構(gòu)建重組載體質(zhì)粒，再經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、蛋白純化、收獲目的蛋白，配合佐劑而得。本發(fā)明通過采用基因工程等先進(jìn)技術(shù)，研發(fā)雞新城疫病毒I-IN基因亞單位疫苗，利用pET-28a作基因表達(dá)載體，與具有良好免疫原性的雞新城疫病毒HN基因連接構(gòu)建重組載體質(zhì)粒。該疫苗的生產(chǎn)技術(shù)具有安全、穩(wěn)定、可規(guī)模化等優(yōu)點，疫苗能夠達(dá)到良好的預(yù)防效果。
文檔編號C12N15/45GK102935227SQ20121049159
公開日2013年2月20日 申請日期2012年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月28日
發(fā)明者張遂平, 周紅霞, 楊慧敏, 郭芳茹, 王菊萍, 牛詠梅 申請人:河南亞衛(wèi)動物藥業(yè)有限公司