本發(fā)明涉及醫(yī)療材料領(lǐng)域，特別是涉及一種引導(dǎo)組織再生膜及其制備方法。

背景技術(shù)：

引導(dǎo)組織再生技術(shù)(Guided Tissue Regeneration，GTR)是目前能夠有效治療牙周病的一種最為先進的治療方法，其技術(shù)關(guān)鍵是利用生物屏障膜即組織再生引導(dǎo)膜的空間隔離作用，防止牙齦上皮和結(jié)蹄組織細胞向根面遷移，同時選擇性地使牙周細胞和牙槽骨細胞粘附于根面并分化形成牙周新附著。因此引導(dǎo)膜的作用至關(guān)重要。隨著GTR技術(shù)在臨床越來越廣泛的應(yīng)用，引導(dǎo)膜的類型及性能已成為制備其發(fā)展的關(guān)鍵因素。

傳統(tǒng)的臨床所用的引導(dǎo)膜主要分為可吸收和不可吸收兩類。由于不可吸收引導(dǎo)膜如膨化聚四氟乙烯植入后需要二次手術(shù)取出，給病人帶來不必要的痛苦和經(jīng)濟心理負擔(dān)，因此可吸收引導(dǎo)膜逐漸成為今后GTR發(fā)展的主要趨勢。膠原是結(jié)蹄組織的主要成分，作為引導(dǎo)組織再生膜，具有其他可吸收材料無法比擬的生物活性和生物相容性，但是其力學(xué)強度差、體內(nèi)降解速度過快成為是制約其應(yīng)用的一大難題。近年來隨著脫細胞生物技術(shù)的興起和發(fā)展，動物脫細胞基質(zhì)具有天然組織的三維結(jié)構(gòu)，具有良好的力學(xué)性能和具有更適宜組織生長的三維結(jié)構(gòu)，因而成為引導(dǎo)膜技術(shù)開發(fā)新的研究熱點。

隨著臨床技術(shù)的不斷更新，對引導(dǎo)組織再生膜功能的要求也不斷提升。引導(dǎo)組織再生膜不僅只起到屏障隔離的作用，還是一種引導(dǎo)骨組織再生和修復(fù)的材料。因而，要求引導(dǎo)組織再生膜具有一定的骨誘導(dǎo)骨傳導(dǎo)功能，以促進缺損骨的修復(fù)，縮短治療周期同時也減少病人的痛苦和經(jīng)濟心理負擔(dān)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

基于此，有必要提供一種具有骨誘導(dǎo)功能的引導(dǎo)組織再生膜及其制備方法。

一種引導(dǎo)組織再生膜的制備方法，包括如下步驟：

對哺乳動物的皮膚進行預(yù)處理后得到真皮層皮片；

對所述真皮層皮片依次進行脫細胞處理、病毒滅活處理和致密收縮處理，得到引導(dǎo)組織再生膜前體，所述引導(dǎo)組織再生膜前體具有光滑面與粗糙面的兩面結(jié)構(gòu)，其中，所述脫細胞處理的操作為：對所述真皮層皮片依次進行低滲-高滲鹽處理、酶處理以及去污劑處理；以及

將所述引導(dǎo)組織再生膜前體按照粗糙面朝上、光滑面朝下的方式設(shè)置在質(zhì)量百分濃度為0.01％～0.5％的摻鍶羥基磷灰石分散液中，室溫下震蕩1h～24h后取出，洗凈后干燥、滅菌，得到引導(dǎo)組織再生膜，其中，所述摻鍶羥基磷灰石中Sr/[Ca+Sr]的原子比為0.01～0.1：1。

在一個實施例中，所述對哺乳動物的皮膚進行預(yù)處理后得到真皮層皮片的操作為：用機械法對所述哺乳動物的皮膚進行初步脫脂及除毛，接著用取皮機將所述哺乳動物的皮膚去掉0.1mm～0.4mm的表皮與皮下脂肪組織后制成厚度為0.2mm～1mm的真皮層皮片。

在一個實施例中，所述哺乳動物的皮膚為豬、牛、羊或馬的皮膚。

在一個實施例中，還包括在對所述真皮層皮片依次進行脫細胞處理、病毒滅活處理和致密收縮處理的操作之前，將所述真皮層皮片浸泡在0℃～8℃的抗生素溶液中過夜的操作；

所述抗生素溶液的溶質(zhì)為青霉素-鏈霉素、慶大霉素、妥布霉素、萬古霉素或替考拉寧；

所述抗生素溶液的質(zhì)量百分濃度為0.001％～0.1％。

在一個實施例中，對所述真皮層皮片依次進行脫細胞處理、病毒滅活處理和致密收縮處理的操作中，所述脫細胞處理的操作具體為：將所述真皮層皮片分別在質(zhì)量百分濃度為0.1％～0.9％氯化鈉和質(zhì)量百分濃度為1.0％～10％氯化鈉溶液中循環(huán)浸泡1次～3次，每次浸泡的時間為4h～12h，再將所述真皮層皮片浸泡在質(zhì)量濃度為0.1％～1.0％的胰蛋白酶溶液或中性酶溶液中，置于5℃～37℃搖床中搖消化12h～48h，接著將所述真皮層皮片在質(zhì)量濃度為0.1％～1％的去污劑溶液中5℃～37℃洗滌2次～8次，每次洗滌的時間為2h～10h，最后用PBS或者生 理鹽水清洗所述真皮層皮片4次～10次，每次清洗的時間為2h～10h；其中，所述去污劑為十二烷基磺酸鈉、曲拉通或3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸。

在一個實施例中，對所述真皮層皮片依次進行脫細胞處理、病毒滅活處理和致密收縮處理的操作中，所述病毒滅活處理的操作具體為：將所述真皮層皮片浸入質(zhì)量百分濃度為0.5％～5％的過氧化氫的乙醇溶液或過氧乙酸的乙醇溶液中，室溫下浸泡30min～480min，隨后用純水清洗，并將所述真皮層皮片按照上表皮層朝上、下表皮真皮層朝下的方式固定后-80℃～-20℃預(yù)冷2h～12h，最后冷凍干燥24h～48h，其中，所述過氧化物為過氧化氫或過氧乙酸。

在一個實施例中，所述病毒滅活處理的操作具體為：將所述真皮層皮片按照上表皮層朝上、下表皮真皮層朝下的方式固定后-80℃～-20℃預(yù)冷2h～12h，接著冷凍干燥24h～48h，最后對冷凍干燥后的所述真皮層皮片進行干熱滅活，所述干熱滅活的溫度為50℃～120℃，所述干熱滅活的時間為3h～48h。

在一個實施例中，對所述真皮層皮片依次進行脫細胞處理、病毒滅活處理和致密收縮處理的操作中，所述致密收縮處理的操作具體為：將所述真皮層皮片按照上表皮層朝上、下表皮真皮層朝下的方式放置后以壓力為5MPa～50MPa保壓12h～48h，隨后將所述真皮層皮浸沒在丙酮中15min～600min，然后干燥。

在一個實施例中，所述洗凈后干燥、滅菌的操作中，所述干燥為冷凍干燥，所述滅菌為鈷60或高能電子輻照滅菌。

一種引導(dǎo)組織再生膜，采用上述的引導(dǎo)組織再生膜的制備方法制備得到。

這種引導(dǎo)組織再生膜的制備方法通過對真皮層皮片進行脫細胞處理、病毒滅活處理和致密收縮處理，得到的引導(dǎo)組織再生膜前體具有光滑面和粗糙面，光滑面能夠有效阻擋牙齦上皮和結(jié)蹄組織在根面生長，而粗糙面通過與摻鍶羥基磷灰石復(fù)合，得到的引導(dǎo)組織再生膜具有較強的機械性能，同時，復(fù)合了摻鍶羥基磷灰石的引導(dǎo)組織再生膜能夠向周圍缺損的骨組織緩慢釋放Sr²⁺和Ca²⁺，具有良好的骨誘導(dǎo)和骨傳導(dǎo)功能，從而能夠有效地促進周圍缺損骨組織的修復(fù)與再生。

附圖說明

圖1為一實施方式的引導(dǎo)組織再生膜的制備方法的流程圖；

圖2是實施例1制得的制備引導(dǎo)組織再生膜前體的光滑面的掃描電子顯微鏡照片；

圖3是實施例1制得的制備引導(dǎo)組織再生膜前體的粗糙面的掃描電子顯微鏡照片。

具體實施方式

下面主要結(jié)合附圖及具體實施例對引導(dǎo)組織再生膜及其制備方法作進一步詳細的說明。

如圖1所示的引導(dǎo)組織再生膜的制備方法，包括如下步驟：

S10、對哺乳動物的皮膚進行預(yù)處理后得到真皮層皮片。

對哺乳動物的皮膚進行預(yù)處理后得到真皮層皮片的操作為：用機械法對哺乳動物的皮膚進行初步脫脂及除毛，接著用取皮機將哺乳動物的皮膚去掉0.1mm～0.4mm的表皮與皮下脂肪組織后制成厚度為0.2mm～1mm的真皮層皮片。

一般的，可以將真皮層皮片剪成3cm×6cm～5cm～10cm大小的皮片。

哺乳動物的皮膚包括依次層疊的皮毛、表皮層、真皮層和皮下組織。

具體的，哺乳動物的皮膚為豬、牛、羊或馬的皮膚。優(yōu)選的，哺乳動物的皮膚為豬、牛、羊或馬的腹部皮膚。

得到的真皮層皮片可以低溫儲存?zhèn)溆?。具體的，得到的真皮層皮片可以儲存在-20℃下備用。

S10還包括將預(yù)處理后的得到真皮層皮片浸泡在0℃～8℃的抗生素溶液中過夜的操作。

抗生素溶液的溶質(zhì)為青霉素-鏈霉素、慶大霉素、妥布霉素、萬古霉素或替考拉寧。其中，青霉素-鏈霉素為青霉素和鏈霉素按照質(zhì)量比為3：5形成的混合物。

抗生素溶液的質(zhì)量百分濃度為0.001％～0.1％。

S20、對S10得到的真皮層皮片依次進行脫細胞處理、病毒滅活處理和致密收縮處理，得到引導(dǎo)組織再生膜前體。

得到的引導(dǎo)組織再生膜前體具有光滑面與粗糙面的兩面結(jié)構(gòu)。

脫細胞處理的操作為：對真皮層皮片依次進行低滲-高滲鹽處理、酶處理以及去污劑處理。

具體的，脫細胞處理的操作為：將真皮層皮片分別在質(zhì)量百分濃度為0.1％～0.9％氯化鈉和質(zhì)量百分濃度為1.0％～10％氯化鈉溶液中循環(huán)浸泡1次～3次，每次浸泡的時間為4h～12h，再將真皮層皮片浸泡在質(zhì)量濃度為0.1％～1.0％的胰蛋白酶溶液或中性酶溶液中，置于5℃～37℃搖床中搖12h～48h，接著將真皮層皮片在質(zhì)量濃度為0.1％～1％的去污劑溶液中5℃～37℃洗滌2次～4次，每次洗滌的時間為2h～4h，最后用PBS或者生理鹽水清洗真皮層皮片4次～10次，每次清洗的時間為2h～6h。其中，去污劑為十二烷基磺酸鈉、曲拉通或3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸。

脫細胞處理的操作為：對真皮層皮片進行滅活處理后，將經(jīng)過滅活處理的真皮層皮片按照上表皮層朝上、下表皮真皮層朝下的方式置于低溫冰箱中預(yù)冷后冷凍干燥。

具體的，病毒滅活處理的操作為：將真皮層皮片浸入質(zhì)量百分濃度為0.5％～5％的過氧化氫的乙醇溶液或過氧乙酸的乙醇溶液中，室溫下浸泡30min～480min，隨后用純水清洗，并將真皮層皮片按照上表皮層朝上、下表皮真皮層朝下的方式固定后-80℃～-20℃預(yù)冷2h～12h，最后冷凍干燥24h～48h。其中，過氧化物為過氧化氫或過氧乙酸。

或者，病毒滅活處理的操作具體為：將真皮層皮片按照上表皮層朝上、下表皮真皮層朝下的方式固定后-80℃～-20℃預(yù)冷2h～12h，接著冷凍干燥24h～48h，最后對冷凍干燥后的真皮層皮片進行干熱滅活。其中，干熱滅活的溫度為50℃～120℃，干熱滅活的時間為3h～48h。

具體的，致密收縮處理的操作為：將真皮層皮片按照上表皮層朝上、下表皮真皮層朝下的方式放置后以壓力為5MPa～50MPa保壓12h～36h，隨后將真皮層皮浸沒在丙酮中15min～600min，最后干燥。

S30、將S20得到的引導(dǎo)組織再生膜前體按照粗糙面朝上、光滑面朝下的方式設(shè)置在質(zhì)量百分濃度為0.01％～0.5％的摻鍶羥基磷灰石分散液中，室溫下震蕩1h～24h后取出，洗凈后干燥、滅菌，得到引導(dǎo)組織再生膜。

摻鍶羥基磷灰石中Sr/[Ca+Sr]的原子比為0.01～0.1：1。

洗凈后干燥、滅菌的操作中，干燥為冷凍干燥，滅菌為鈷60或高能電子輻照滅菌。

羥基磷灰石(HAP)是脊椎動物骨骼和牙齒的主要組成，人的牙釉質(zhì)中羥基磷灰石的含量約96Wt.％。羥基磷灰石具有優(yōu)良的生物相容性和生物活性，并可作為一種骨骼或牙齒的誘導(dǎo)因子，在口腔保健領(lǐng)域中對牙齒具有較好的再礦化、脫敏以及美白作用。鍶(Sr)是人體必需的微量元素，在骨中的含量約占骨質(zhì)量的0.01％。微量的鍶元素具有引導(dǎo)新生骨組織的形成，同時抑制骨的吸收的功能。在羥基磷灰石中引入鍶元素后，性能得到改善，使其兼具羥基磷灰石和鍶元素的雙重活性，在口腔保健領(lǐng)域中具有更好的生物相容性和生物活性。羥基磷灰石摻鍶后溶解性能和降解性能增加，在口腔中會使鈣、磷離子局部濃度增加，對牙釉質(zhì)的在礦化作用以及修復(fù)受損牙釉質(zhì)的效果要好于羥基磷灰石。

這種引導(dǎo)組織再生膜的制備方法通過對真皮層皮片進行脫細胞處理、病毒滅活處理和致密收縮處理，得到的引導(dǎo)組織再生膜前體具有光滑面和粗糙面，光滑面能夠有效阻擋牙齦上皮和結(jié)蹄組織在根面生長，而粗糙面通過與摻鍶羥基磷灰石復(fù)合，得到的引導(dǎo)組織再生膜具有較強的機械性能，同時，復(fù)合了摻鍶羥基磷灰石的引導(dǎo)組織再生膜能夠向周圍缺損的骨組織緩慢釋放Sr²⁺和Ca²⁺，具有良好的骨誘導(dǎo)和骨傳導(dǎo)功能，從而能夠有效地促進周圍缺損骨組織的修復(fù)與再生。

這種引導(dǎo)組織再生膜的制備方法采用低滲-高滲鹽聯(lián)合酶處理工藝，具有脫細胞徹底、且對組織細胞外基質(zhì)天然結(jié)構(gòu)的損害輕，保持了膠原纖維支架的完整性，有利于后期細胞的粘附與生長。

這種引導(dǎo)組織再生膜的制備方法采用致密收縮處理工藝，制備得到的引導(dǎo)膜具有光滑面與粗糙面的兩面結(jié)構(gòu)，具有天然的三維空間結(jié)構(gòu)與良好的機械性能，能夠為新生牙周組織提供充足的空間。

一實施方式的引導(dǎo)組織再生膜，采用上述的引導(dǎo)組織再生膜的制備方法制備得到。

這種引導(dǎo)組織再生膜通過上述的方法制備而成，具有光滑面與粗糙面的兩面結(jié)構(gòu)；通過采用酶與表面活性劑交替處理，處理過程中對真皮的支架結(jié)構(gòu)破壞較小，能很好的保證纖維支架的完整性，有利于后期細胞的粘附與生長。

這種引導(dǎo)組織再生膜通過上述的方法制備而成，具有光滑面與粗糙面的兩面結(jié)構(gòu)，光滑面能夠有效阻擋牙齦上皮和結(jié)蹄組織在根面生長，而粗糙面通過與摻鍶羥基磷灰石復(fù)合，得到的引導(dǎo)組織再生膜具有較強的機械性能，同時，復(fù)合了摻鍶羥基磷灰石的引導(dǎo)組織再生膜能夠向周圍缺損的骨組織緩慢釋放Sr²⁺和Ca²⁺，具有良好的骨誘導(dǎo)和骨傳導(dǎo)功能，從而能夠有效地促進周圍缺損骨組織的修復(fù)與再生。

下面為具體實施例。

實施例1

(1)真皮層皮片的制備

將健康豬的整張腹部皮用機械法進行初步脫脂，用鑷子把毛剔除干凈，用電動取皮機先將豬皮的皮下組織去掉，再去掉表皮0.4mm，制成厚度為0.3mm的真皮層皮片，再浸泡在質(zhì)量濃度為0.01％的青霉素-鏈霉素的水溶液中，置入4℃冰箱過夜后轉(zhuǎn)入-25℃低溫冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)引導(dǎo)組織再生膜前體的制備

脫細胞處理：將解凍后的真皮層皮片依次用質(zhì)量濃度為0.1％氯化鈉(低滲鹽)和質(zhì)量濃度為1.0％氯化鈉(高滲鹽)溶液循環(huán)浸泡2次，6h/次，通過低滲溶液處理促使組織吸水膨脹，從而使組織中的細胞破裂，同時組織中的膠原纖維結(jié)構(gòu)松開，從而使膠原束變得疏松，再通過高滲鹽溶液處理破碎細胞的DNA從組織蛋白中分離出來；再將真皮層皮片浸泡在質(zhì)量濃度為0.25％的胰蛋白酶溶液中，置于30℃搖床中消化24h，清洗掉組織中去除組織殘留的細胞碎片和細胞核；隨后將真皮層皮片在0.1％的十二烷基磺酸鈉溶液，35℃洗滌3次，2h/ 次，以去除組織中殘留的細胞和細胞核，徹底祛除組織的免疫原性，同時可以達到一定的去除組織中脂肪的效果；最后用PBS洗滌6次，2h/次。

病毒滅活處理：將脫細胞處理后的真皮層皮片浸入質(zhì)量濃度為2％過氧乙酸的乙醇溶液中，室溫下浸泡30min，隨后用純水清洗至PH7.4，最后將真皮層皮片平鋪于聚四氟乙烯模具中，其中上表皮層朝上，下表皮真皮層朝下，置于-80℃低溫冰箱預(yù)冷4h后立即轉(zhuǎn)入冷凍干燥機中進行干燥24h。

致密收縮處理：將凍干后的真皮層皮片按上表皮層朝上，下表皮真皮層朝下平鋪于不銹鋼平板上，置于壓片機中以壓力20MPa保壓24h，隨后將模壓后的引導(dǎo)膜先浸沒在丙酮中30min，然后干燥除去殘留的有機溶劑。

(3)引導(dǎo)組織再生膜的制備

將(2)制備的引導(dǎo)組織再生膜前體按光滑面朝下，粗糙面朝上放入模具中固定好，再將其一起浸入Sr/[Ca+Sr]原子比0.05的質(zhì)量百分濃度為0.1％的摻鍶羥基磷灰石分散液中，室溫下震蕩12h后取出，用清水沖洗干凈后冷凍干燥、鈷60滅菌，得到引導(dǎo)組織再生膜。

將實施例1制得的引導(dǎo)組織再生膜前體在掃描電子顯微鏡(SEM)下觀察，得到圖2和圖3。

由圖2和圖3可以看出，實施例1制得的引導(dǎo)組織再生膜前體具有良好的膠原纖維支架結(jié)構(gòu)，光滑面致密，粗糙面為多孔纖維結(jié)構(gòu)，有利于后期成骨細胞在粗糙面的粘附與生長。

實施例2

(1)真皮層皮片的制備

將健康豬的整張腹部皮用機械法進行初步脫脂，用鑷子把毛剔除干凈，用電動取皮機先將豬皮的皮下組織去掉，再去掉表皮0.1mm，制成厚度為0.9mm的真皮層皮片，，再浸泡在質(zhì)量濃度為0.1％的慶大霉素的水溶液中，置入4℃冰箱過夜后轉(zhuǎn)入-25℃低溫冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)引導(dǎo)組織再生膜前體的制備

脫細胞處理：將解凍后的真皮層皮片依次用質(zhì)量濃度為0.9％氯化鈉(低滲 鹽)和質(zhì)量濃度為9.0％氯化鈉(高滲鹽)溶液循環(huán)浸泡3次，4h/次，通過低滲溶液處理促使組織吸水膨脹，從而使組織中的細胞破裂，同時組織中的膠原纖維結(jié)構(gòu)松開，從而使膠原束變得疏松，再通過高滲鹽溶液處理破碎細胞的DNA從組織蛋白中分離出來；再將真皮層皮片浸泡在質(zhì)量濃度為0.1％的中性酶溶液中，置于35℃搖床中消化24h，清洗掉組織中去除組織殘留的細胞碎片和細胞核；隨后將真皮層皮片在0.1％的曲拉通溶液，35℃洗滌4次，4h/次，以去除組織中殘留的細胞和細胞核，徹底祛除組織的免疫原性，同時可以達到一定的去除組織中脂肪的效果；最后用生理鹽水洗滌4次，6h/次。

病毒滅活處理：將脫細胞處理后的真皮層皮片浸入質(zhì)量濃度為0.5％過氧乙酸的乙醇溶液中，室溫下浸泡240min，隨后用純水清洗后將真皮層皮片平鋪于聚四氟乙烯模具中，其中上表皮層朝上，下表皮真皮層朝下，置于-80℃低溫冰箱預(yù)冷4h后立即轉(zhuǎn)入冷凍干燥機中進行干燥24h。

致密收縮處理：將凍干后的真皮層皮片按上表皮層朝上，下表皮真皮層朝下平鋪于不銹鋼平板上，置于壓片機中以壓力5MPa保壓48h，隨后將模壓后的引導(dǎo)膜先浸沒在丙酮中300min，最后干燥除去殘留的有機溶劑。

(3)引導(dǎo)組織再生膜的制備

將(2)制備的引導(dǎo)組織再生膜前體按光滑面朝下，粗糙面朝上放入模具中固定好，再將其一起浸入Sr/[Ca+Sr]原子比0.10質(zhì)量百分濃度為0.01％的摻鍶羥基磷灰石分散液中，室溫下震蕩24h后取出，用清水沖洗干凈后冷凍干燥、鈷60滅菌，得到引導(dǎo)組織再生膜。

實施例3

(1)真皮層皮片的制備

將健康豬的整張腹部皮用機械法進行初步脫脂，用鑷子把毛剔除干凈，用電動取皮機先將豬皮的皮下組織去掉，再去掉表皮0.2mm，制成厚度為0.5mm的真皮層皮片，再浸泡在質(zhì)量濃度為0.1％的妥布霉素的水溶液中，置入4℃冰箱過夜后轉(zhuǎn)入-25℃低溫冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)引導(dǎo)組織再生膜前體的制備。

脫細胞處理：將解凍后的真皮層皮片依次用質(zhì)量濃度為0.5％氯化鈉(低滲鹽)和質(zhì)量濃度為5.0％氯化鈉(高滲鹽)溶液循環(huán)浸泡3次，12h/次，通過低滲溶液處理促使組織吸水膨脹，從而使組織中的細胞破裂，同時組織中的膠原纖維結(jié)構(gòu)松開，從而使膠原束變得疏松，再通過高滲鹽溶液處理破碎細胞的DNA從組織蛋白中分離出來；再將真皮層皮片浸泡在質(zhì)量濃度為1％的胰蛋白酶溶液中，置于25℃搖床中消化36h，清洗掉組織中去除組織殘留的細胞碎片和細胞核；隨后將真皮層皮片在1％的3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸溶液，35℃洗滌3次，2h/次，以去除組織中殘留的細胞和細胞核，徹底祛除組織的免疫原性，同時可以達到一定的去除組織中脂肪的效果；最后用PBS洗滌6次，2h/次。

病毒滅活處理：將脫細胞處理后的真皮層皮片平鋪于聚四氟乙烯模具中，其中上表皮層朝上，下表皮真皮層朝下，置于-20℃低溫冰箱預(yù)冷12h后立即轉(zhuǎn)入冷凍干燥機中進行干燥36h，然后在100℃干熱滅菌12h。

致密收縮處理：將凍干后的真皮層皮片按上表皮層朝上，下表皮真皮層朝下平鋪于不銹鋼平板上，置于壓片機中以壓力50MPa保壓12h，隨后將模壓后的引導(dǎo)膜先浸沒在丙酮中480min，最后真空干燥除去殘留的有機溶劑。

(3)引導(dǎo)組織再生膜的制備

將(2)制備的引導(dǎo)組織再生膜前體按光滑面朝下，粗糙面朝上放入模具中固定好，再將其一起浸入Sr/[Ca+Sr]原子比0.01質(zhì)量百分濃度為0.5％的摻鍶羥基磷灰石分散液中，室溫下震蕩4h后取出，用清水沖洗干凈后冷凍干燥、高能電子輻照滅菌，得到引導(dǎo)組織再生膜。

以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準。