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一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法與流程

文檔序號:12294902閱讀:來源:國知局
一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法與流程

技術(shù)特征:
1.一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法,其特征在于:包括以下步驟:步驟一、提?。簩⒉杌ǚ鄹稍?、粉碎,按料液比(W/V)1:10加入80%的乙醇水溶液,50℃水浴恒溫提取3次,每次6h,過濾,濾液合并,于50℃下減壓濃縮成浸膏,得到粗提物;步驟二、萃?。捍痔嵛锇戳弦罕?W/V)1:5~1:12加入蒸餾水,攪拌溶解,加入石油醚萃取2~5次,分離,在40~60℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑,得到石油醚萃取物;水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取3~5次,分離,在40~60℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑,干燥得到乙酸乙酯萃取物;步驟三、HSCCC純化:配制乙酸乙酯:正丁醇:水溶劑體系,體積比為1:1:10,充分搖勻后超聲脫氣,將其作為固定相以15~30ml/min流速泵入高速逆流色譜儀,待其充滿整個柱子后,調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至800~900rpm,同時以4~6mL/min流速將流動相按以下順序依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi):200~400mL的正己烷:乙酸乙酯體系,體積比為1:1;200~400mL的正己烷:乙酸乙酯體系,體積比為1:4;200~400mL的正丁醇:乙酸乙酯體系,體積比為1:4;300~600mL的正丁醇:乙酸乙酯體系,體積比為2:1;泵入流動相的同時將溶有1g乙酸乙酯萃取物的上相泵入主機(jī)螺旋管,通過紫外檢測器檢測流出物,檢測波長為254nm,按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥,得到酪氨酸酶抑制劑。2.如權(quán)利要求1所述的一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法,其特征在于:所述步驟二中,粗提物按料液比(W/V)1:9加入蒸餾水,攪拌溶解,加入石油醚萃取2次,分離,在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑,得到石油醚萃取物;水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取4次,分離,在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑,干燥得到乙酸乙酯萃取物。3.如權(quán)利要求1或2所述的一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法,其特征在于:所述步驟三中,配制乙酸乙酯:正丁醇:水溶劑體系,體積比為1:1:10,充分搖勻后超聲脫氣,將其作為固定相以25ml/min流速泵入高速逆流色譜儀,待其充滿整個柱子后,調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至800rpm,同時以5mL/min流速將流動相按以下順序依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi):200mL的正己烷:乙酸乙酯體系,體積比為1:1;200mL的正己烷:乙酸乙酯體系,體積比為1:4;200mL的正丁醇:乙酸乙酯體系,體積比為1:4;500mL的正丁醇:乙酸乙酯體系,體積比為2:1;泵入流動相的同時將溶有1g乙酸乙酯萃取物的上相泵入主機(jī)螺旋管,通過紫外檢測器檢測流出物,檢測波長為254nm,按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥,得到酪氨酸酶抑制劑。4.如權(quán)利要求1所述的一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法,其特征在于:所述步驟三中,HSCCC純化采用梯度洗脫的方式對樣品進(jìn)行洗脫,四個階段的流動相依次為:200~400mL的正己烷:乙酸乙酯體系,體積比為1:1;200~400mL的正己烷:乙酸乙酯體系,體積比為1:4;200~400mL的正丁醇:乙酸乙酯體系,體積比為1:4;300~600mL的正丁醇:乙酸乙酯體系,體積比為2:1。5.如權(quán)利要求1所述的一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法,其特征在于:所述步驟三中,HSCCC純化所用的乙酸乙酯萃取物用10~20mL的固定相溶解。
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