本發(fā)明涉及生物制品分離純化的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法。

背景技術(shù)：
酪氨酸酶又稱(chēng)酚氧化酶、多酚氧化酶、兒茶酚氧化酶，是結(jié)構(gòu)復(fù)雜的多亞基的含銅氧化還原酶，廣泛存在于微生物、動(dòng)植物及人體中。它是生物體內(nèi)催化黑色素生成的關(guān)鍵限速酶，而且與果蔬褐化、人體色素沉著性疾病(如雀斑、黃褐斑、老年斑等)及黑色素瘤的發(fā)生與治療有重要關(guān)系。酪氨酸酶抑制劑可通過(guò)抑制酪氨酸酶的活性來(lái)切斷黑色素的生物合成反應(yīng)鏈，以此達(dá)到阻礙黑色素生成、防止果蔬褐變等目的。目前酪氨酸酶抑制劑已廣泛應(yīng)用于美白護(hù)膚化妝品、害蟲(chóng)調(diào)控劑以及食品添加劑等各個(gè)方面。因此，對(duì)醫(yī)藥、化妝品和食品工業(yè)等多個(gè)領(lǐng)域而言，酪氨酸酶抑制成分的研究與開(kāi)發(fā)均具有重要的理論價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。當(dāng)前，酪氨酸酶抑制劑的來(lái)源以有機(jī)合成、商品化合物篩選以及天然植物或微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物的分離提取三個(gè)途徑為主。鑒于化學(xué)合成產(chǎn)物具有毒副作用強(qiáng)、成本較高、操作難度大等弊端，尋求天然來(lái)源的酪氨酸酶抑制劑仍然是引起食品科學(xué)家和藥物化學(xué)家高度興趣的研究課題。蜂花粉能夠防治腦心血管疾病，降血脂，調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能，在調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、提高機(jī)體免疫功能、抗衰老等方面有一定的效果。茶花粉是蜂花粉中的上品，不僅口感好、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量豐富，而且具有深層保養(yǎng)或改善肌膚的功效，能有效預(yù)防皮膚的各種不良現(xiàn)象，增強(qiáng)皮膚活力。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)蜂花粉中酪氨酸酶抑制活性的研究仍停留在粗提物水平，運(yùn)用HSCCC快速分離制備茶花粉酪氨酸酶抑制成分的研究還未見(jiàn)報(bào)道。有鑒于此，本發(fā)明人研究和設(shè)計(jì)了一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法，本案由此產(chǎn)生。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法，以茶花粉為原料，經(jīng)提取、萃取處理后，采用高速逆流色譜(HSCCC，high-speedcounter-currentchromatography)制備分離，收集組分，以獲得活性高的酪氨酸酶抑制劑。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種從茶花粉中快速分離酪氨酸酶抑制劑的方法，包括以下步驟：步驟一、提?。簩⒉杌ǚ鄹稍铩⒎鬯?，按料液比(W/V)1:10加入80％的乙醇水溶液，50℃水浴恒溫提取3次，每次6h，過(guò)濾，濾液合并，于50℃下減壓濃縮成浸膏，得到粗提物；步驟二、萃?。捍痔嵛锇戳弦罕?W/V)1:5～1:12加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取2～5次，分離，在40～60℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取3～5次，分離，在40～60℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物；步驟三、HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水溶劑體系，體積比為1:1:10，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以15～30ml/min流速泵入高速逆流色譜儀，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至800～900rpm，同時(shí)以4～6mL/min流速將流動(dòng)相按以下順序依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：200～400mL的正己烷：乙酸乙酯體系，體積比為1:1；200～400mL的正己烷：乙酸乙酯體系，體積比為1:4；200～400mL的正丁醇：乙酸乙酯體系，體積比為1:4；300～600mL的正丁醇：乙酸乙酯體系，體積比為2:1；泵入流動(dòng)相的同時(shí)將溶有1g乙酸乙酯萃取物的上相泵入主機(jī)螺旋管，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑。作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟二中，粗提物按料液比(W/V)1:9加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取2次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取4次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物。作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟三中，配制乙酸乙酯：正丁醇：水溶劑體系，體積比為1:1:10，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以25ml/min流速泵入高速逆流色譜儀，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至800rpm，同時(shí)以5mL/min流速將流動(dòng)相按以下順序依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：200mL的正己烷：乙酸乙酯體系，體積比為1:1；200mL的正己烷：乙酸乙酯體系，體積比為1:4；200mL的正丁醇：乙酸乙酯體系，體積比為1:4；500mL的正丁醇：乙酸乙酯體系，體積比為2:1；泵入流動(dòng)相的同時(shí)將溶有1g乙酸乙酯萃取物的上相泵入主機(jī)螺旋管，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑。作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟三中，HSCCC純化采用梯度洗脫的方式對(duì)樣品進(jìn)行洗脫，四個(gè)階段的流動(dòng)相依次為：200～400mL的正己烷：乙酸乙酯體系，體積比為1:1；200～400mL的正己烷：乙酸乙酯體系，體積比為1:4；200～400mL的正丁醇：乙酸乙酯體系，體積比為1:4；300～600mL的正丁醇：乙酸乙酯體系，體積比為2:1。作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟三中，HSCCC純化所用的乙酸乙酯萃取物用10～20mL的固定相溶解。采用本發(fā)明的技術(shù)方案后，具有以下有益效果：1、本發(fā)明中HSCCC可以快速有效地制備茶花粉中的酪氨酸酶抑制劑；2、本發(fā)明工藝操作簡(jiǎn)單，易實(shí)施，產(chǎn)品活性高；3、本發(fā)明所用茶花粉來(lái)源廣泛，分離組分具有顯著的抑制酪氨酸酶活性的作用且無(wú)毒副作用、安全性高，能夠應(yīng)用于美白化妝品、預(yù)防和治療由于人體黑色素過(guò)多導(dǎo)致的沉著性疾病。附圖說(shuō)明圖1為高速逆流色譜分離純化茶花粉酪氨酸酶抑制劑的色譜圖，收集圖中陰影部分并減壓濃縮干燥即得茶花粉中抑制酪氨酸酶的有效成分；圖2為本發(fā)明8個(gè)實(shí)施例分離組分對(duì)酪氨酸酶的抑制作用。具體實(shí)施方式以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式以對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。其中酪氨酸酶活性的測(cè)試以L(fǎng)-酪氨酸為底物，具體方法如下：將從茶花粉中提取酪氨酸酶抑制劑溶解于蒸餾水中，取80μl上述溶液，加入pH6.8，0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS)112μL，20μL酪氨酸酶溶液，37℃水10min，再加入0.03％L-酪氨酸溶液200μL于37℃反應(yīng)10min，在475nm下測(cè)定吸光值。酪氨酸酶抑制率計(jì)算如下：酪氨酸酶抑制率(％)＝[(a-b)-(c-d)]/[a-b]×100％a：未加提取物而加酶的混合液所測(cè)的吸光度；b：未加提取物也未加酶的混合液所測(cè)的吸光度；c：加提取物和酶的混合液所測(cè)的吸光度；d：加提取物而未加酶的混合液所測(cè)的吸光度。半抑制濃度(IC50)值得是對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率達(dá)到50％時(shí)所需的樣品濃度。實(shí)施例1第一步，提?。喝》鬯楦稍锏牟杌ǚ?00g，按1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，50℃水浴恒溫浸提6h，共提取3次，提取后過(guò)濾，合并濾液并于50℃真空濃縮成浸膏，得茶花粉粗提物148.76g；第二步，萃?。捍痔嵛锇戳弦罕?W/V)1:5加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取3次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物31.39g；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取3次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物9.21g；第三步，HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水(1:1:10)溶劑體系，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以15ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至800rpm，同時(shí)以4mL/min流速將流動(dòng)相按以下方案依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：正己烷：乙酸乙酯＝1:1(200mL)、正己烷：乙酸乙酯＝1:4(200mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝1:4(200mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝2:1(300mL)，泵入流動(dòng)相的同時(shí)將溶1g乙酸乙酯萃取物的上相泵入主機(jī)螺旋管，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，如圖1所示，按照色譜峰收集圖中陰影部分組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑0.37g，測(cè)得該抑制劑對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度為41.20μg/mL。實(shí)施例2第一步，提?。喝》鬯楦稍锏牟杌ǚ?00g，按1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，50℃水浴恒溫浸提6h，共提取3次，提取后過(guò)濾，合并濾液并于50℃真空濃縮成浸膏，得茶花粉粗提物136.87g；第二步，萃?。捍痔嵛锇戳弦罕?W/V)1:12加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取5次，分離，在60℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取33.24g；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取5次，分離，在60℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物10.65g；第三步，HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水(1:1:10)溶劑體系，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以20ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至850rpm，同時(shí)以5mL/min流速將流動(dòng)相按以下方案依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：正己烷：乙酸乙酯＝1:1(250mL)、正己烷：乙酸乙酯＝1:4(250mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝1:4(250mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝2:1(350mL)，泵入流動(dòng)相的同時(shí)進(jìn)樣，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓燥，得到酪氨酸酶抑制劑0.32g，測(cè)得該抑制劑對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度為41.64μg/mL。實(shí)施例3第一步，提?。喝》鬯楦稍锏牟杌ǚ?00g，按1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，50℃水浴恒溫浸提6h，提取3次，提取后過(guò)濾，合并濾液并于50℃真空濃縮成浸膏，得茶花粉粗提物150.29g；第二步，萃?。捍痔嵛锇戳弦罕?W/V)1:8加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取4次，分離，在50℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物34.47g；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取4次，分離，在50℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物10.65g；第三步，HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水(1:1:10)溶劑體系，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以25ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至850rpm，同時(shí)以6mL/min流速將流動(dòng)相按以下方案依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：正己烷：乙酸乙酯＝1:1(300mL)、正己烷：乙酸乙酯＝1:4(300mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝1:4(300mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝2:1(400mL)，泵入流動(dòng)相的同時(shí)進(jìn)樣，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑0.39g，測(cè)得該抑制劑對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度為37.75μg/mL。實(shí)施例4第一步，提?。喝》鬯楦稍锏牟杌ǚ?00g，按1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，50℃水浴恒溫浸提6h，共提取3次，提取后過(guò)濾，合并濾液并于50℃真空濃縮成浸膏，得茶花粉粗提物152.13g；第二步，萃?。捍痔嵛锇戳弦罕?W/V)1:10加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取3次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物31.07g；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取3次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物9.96g；第三步，HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水(1:1:10)溶劑體系，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以30ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至900rpm，同時(shí)以5mL/min流速將流動(dòng)相按以下方案依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：正己烷：乙酸乙酯＝1:1(350mL)、正己烷：乙酸乙酯＝1:4(350mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝1:4(350mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝2:1(450mL)，泵入流動(dòng)相的同時(shí)進(jìn)樣，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑0.33g，測(cè)得該抑制劑對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度為39.40μg/mL。實(shí)施例5第一步，提?。喝》鬯楦稍锏牟杌ǚ?00g，按1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，50℃水浴恒溫浸提6h，共提取3次，提取后過(guò)濾，合并濾液并于50℃真空濃縮成浸膏，得茶花粉粗提物152.13g；第二步，萃?。捍痔嵛锇戳弦罕?W/V)1:10加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取3次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物32.12g；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取3次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物9.33g；第三步，HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水(1:1:10)溶劑體系，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以30ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至900rpm，同時(shí)以6mL/min流速將流動(dòng)相按以下方案依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：正己烷：乙酸乙酯＝1:1(400mL)、正己烷：乙酸乙酯＝1:4(400mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝1:4(400mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝2:1(500mL)，泵入流動(dòng)相的同時(shí)進(jìn)樣，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑0.33g，測(cè)得該抑制劑對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度為42.72μg/mL。實(shí)施例6第一步，提?。喝》鬯楦稍锏牟杌ǚ?00g，按1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，50℃水浴恒溫浸提6h，共提取3次，提取后過(guò)濾，合并濾液并50℃真空濃縮成浸膏，得茶花粉粗提物152.13g；第二步，萃取：粗提物按料液比(W/V)1:9加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取2次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物32.12g；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取4次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物9.33g；第三步，HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水(1:1:10)溶劑體系，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以25ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至800rpm，同時(shí)以5mL/min流速將流動(dòng)相按以下方案依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：正己烷：乙酸乙酯＝1:1(200mL)、正己烷：乙酸乙酯＝1:4(200mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝1:4(200mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝2:1(500mL)，泵入流動(dòng)相的同時(shí)進(jìn)樣，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑0.32g，測(cè)得該抑制劑對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度為45.06μg/mL。實(shí)施例7第一步，提?。喝》鬯楦稍锏牟杌ǚ?00g，按1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，50℃水浴恒溫浸提6h，共提取3次，提取后過(guò)濾，合并濾液并于50℃真空濃縮成浸膏，得茶花粉粗提物152.13g；第二步，萃取：粗提物按料液比(W/V)1:7加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃取4次，分離，在50℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物32.12g；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取2次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物9.33g；第三步，HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水(1:1:10)溶劑體系，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以30ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至850rpm，同時(shí)以5mL/min流速將流動(dòng)相按以下方案依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：正己烷：乙酸乙酯＝1:1(200mL)、正己烷：乙酸乙酯＝1:4(300mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝1:4(400mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝2:1(500mL)，泵入流動(dòng)相的同時(shí)進(jìn)樣，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑0.29g，測(cè)得該抑制劑對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度為41.59μg/mL。實(shí)施例8第一步，提取：取粉碎干燥的茶花粉500g，按1:10的料液比加入80％的乙醇溶液，50℃水浴恒溫浸提6h，共提取3次，提取后過(guò)濾，合并濾液并于50℃真空濃縮成浸膏，得茶花粉粗提物152.13g；第二步，萃?。捍痔嵛锇戳弦罕?W/V)1:7加入蒸餾水，攪拌溶解，加入石油醚萃4次，分離，在50℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到石油醚萃取物32.12g；水層繼續(xù)用乙酸乙酯萃取2次，分離，在40℃下減壓蒸發(fā)除去溶劑，干燥得到乙酸乙酯萃取物9.33g；第三步，HSCCC純化：配制乙酸乙酯：正丁醇：水(1:1:10)溶劑體系，充分搖勻后超聲脫氣，將其作為固定相以30ml/min流速泵入高速逆流色譜儀(HSCCC)，待其充滿(mǎn)整個(gè)柱子后，調(diào)節(jié)逆流色譜儀轉(zhuǎn)速至850rpm，同時(shí)以5mL/min流速將流動(dòng)相按以下方案依次泵入HSCCC主機(jī)螺旋管內(nèi)：正己烷：乙酸乙酯＝1:1(200mL)、正己烷：乙酸乙酯＝1:4(300mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝1:4(400mL)、正丁醇：乙酸乙酯＝2:1(500mL)，泵入流動(dòng)相的同時(shí)進(jìn)樣，通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)流出物，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，按照色譜峰收集相應(yīng)的峰組分并減壓干燥，得到酪氨酸酶抑制劑0.29g，測(cè)得該抑制劑對(duì)酪氨酸酶的半抑制濃度為42.80μg/mL。將上述8個(gè)實(shí)施例的酪氨酸酶抑制劑進(jìn)行酪氨酸酶抑制效果驗(yàn)證：8個(gè)實(shí)施例分離組分抑制酪氨酸酶的平均半抑制濃度(IC50)及陽(yáng)性對(duì)照(VC及熊果苷)抑制酪氨酸酶的半抑制濃度見(jiàn)表1，結(jié)合圖2可得，應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)制備的酪氨酸酶抑制劑對(duì)酪氨酸酶具有顯著的抑制作用，并且呈現(xiàn)劑量依賴(lài)效應(yīng)，可以應(yīng)用于美容祛斑等藥物和保健品開(kāi)發(fā)，以及果蔬護(hù)色保鮮等領(lǐng)域。表1茶花粉分離組分及陽(yáng)性對(duì)照對(duì)酪氨酸酶的抑制作用