本發(fā)明涉及藥物化學(xué)和藥物治療學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一類磺酰胺基取代的酰胺類衍生物的醫(yī)藥用途。具體而言，涉及一類磺酰胺基取代的酰胺類衍生物在制備用于治療阿爾茨海默病的藥物中的用途。所述磺酰胺基取代的酰胺類衍生物具有保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用，整體動(dòng)物試驗(yàn)表明該類化合物具有改善老年性癡呆大鼠的記憶功能，可用于阿爾茨海默病的治療。
背景技術(shù)：
：阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)是一種進(jìn)行性神經(jīng)退行性病變,主要遭受不可逆性的神經(jīng)元死亡以及隨之而來的包括記憶和邏輯思維等損傷[CliveBSG,AnneC,CarolB,DagA,EmmaJ.Alzheimer’sdisease，Lancet,2011.]。目前全世界約有三千萬AD患者，并以每年460萬患者的速率遞增，全世界每年對(duì)AD患者的照顧費(fèi)用高達(dá)三千多億美元[2013Alzheimer’sdiseasefactsandfigures，AlzheimersDement,2013,9(2),208–245.]。我國已進(jìn)入老年化社會(huì)，我國的AD患者也逐年增加，未來幾十年內(nèi)，AD患者將急速增長，但是在臨床上，現(xiàn)有治療AD的藥物只能減緩患者的病癥，不能從實(shí)質(zhì)上減緩疾病的進(jìn)程，這將對(duì)我國的社會(huì)和醫(yī)療保健系統(tǒng)造成極大壓力，隨著新技術(shù)和新手段的介入，AD的發(fā)病機(jī)制已經(jīng)初窺端倪[HardyJ,SelkoeDJ,TheamyloidhypothesisofAlzheimer'sdisease:progressandproblemsontheroadtotherapeutics.Science,2002,297,353–356.]。AD患者尸檢顯示其腦組織出現(xiàn)明顯的萎縮，腦細(xì)胞，尤其是基底神經(jīng)節(jié)區(qū)的腦細(xì)胞，出現(xiàn)廣泛死亡，同時(shí)在這些部位還可見明顯的老年斑、神經(jīng)原纖維纏結(jié)等病變。年齡的增加導(dǎo)致線粒體功能和結(jié)構(gòu)逐漸衰退，使得活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的產(chǎn)生增加而積累，過多的ROS加速神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡[ReddyPH,ReddyTP.Mitochondriaasatherapeutictargetforagingandneurodegenerativediseases.CurrAlzheimerRes.,2011,8(4),393–409.]。線粒體功能缺失導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡將 形成一個(gè)惡性循環(huán)，由于線粒體DNA的非正常表達(dá)，引起β分泌酶激活，導(dǎo)致Aβ生成增加，同時(shí)使Tau蛋白高度磷酸化聚集，Aβ的增加進(jìn)一步導(dǎo)致線粒體功能障礙、ROS大量累積，引起細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激，從而激活線粒體相關(guān)凋亡通路，引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致AD患者出現(xiàn)明顯的癥狀以及腦組織萎縮等，最終導(dǎo)致死亡。因此減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞對(duì)于AD病理進(jìn)程具有重要作用，可能起到治療AD的作用。AD病人最重要的病理結(jié)果之一為腦內(nèi)神經(jīng)元大量死亡，并且導(dǎo)致病人腦組織出現(xiàn)大量萎縮，因此神經(jīng)元不可逆凋亡在AD病程中起著重要的作用。鏈脲佐菌素(STZ)能夠通過引起氧化應(yīng)激而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡，并在散發(fā)型AD造模中廣泛應(yīng)用，因此本申請(qǐng)發(fā)明人采用STZ誘導(dǎo)，在神經(jīng)母瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)細(xì)胞水平中模擬AD病征，然后檢測化合物對(duì)STZ誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡情況的作用，從而評(píng)價(jià)化合物是否具有可能的抗AD效應(yīng)。通過隨機(jī)篩選發(fā)現(xiàn)小分子化合物A-1具有保護(hù)被STZ刺激下的SH-SY5Y神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的作用；在雙側(cè)腦室STZ誘導(dǎo)癡呆大鼠模型上的體內(nèi)抗AD藥效學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)中，A-1能夠有效地改善STZ誘導(dǎo)大鼠的記憶力損傷。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的為提供一種用于治療阿爾茨海默病的通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的又一目的為提供一種用于治療阿爾茨海默病的藥物組合物，其包含治療有效量的通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種作為活性成分。所述藥物組合物任選地可以進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的輔料，如：載體、賦形劑、佐劑、或稀釋劑。本發(fā)明的另一目的是提供通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其藥物組合物在制備用于治療或預(yù)防老年性癡呆癥的藥物或改善記憶力的產(chǎn)品中的用途。本發(fā)明的再一目的為提供一種治療老年性癡呆癥或改善記憶力的方法，所述方法包括向具有該需要的患者給予治療有效量的選自通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種，或根據(jù)本發(fā)明的包含治療有效量的選自通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種作為活性成分的藥物組合物。在本發(fā)明的第一方面，提供了一類具有下面通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中：R1為取代或未取代的C6-C14芳基；優(yōu)選為取代或未取代的苯基；其中，所述取代的C6-C14芳基上的取代基和所述取代的苯基上的取代基各自獨(dú)立地為選自鹵素、C1-C6烷基、氰基、硝基、氨基(NH2)、羥基、羧基和C1-C6烷氧基中的1-3個(gè)取代基；優(yōu)選為選自鹵素、C1-C4烷基、氰基、硝基、氨基(NH2)、羥基、羧基和C1-C4烷氧基中的1-3個(gè)取代基；最優(yōu)選為選自鹵素、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基中的1-2個(gè)取代基；R1最優(yōu)選為苯基、4-甲基苯基或4-氟苯基；R2為取代或未取代的C6-C14芳基；優(yōu)選為取代或未取代的苯基；其中，所述取代的C6-C14芳基上的取代基和所述取代的苯基上的取代基各自獨(dú)立地為選自鹵素、C1-C6烷基、氰基、硝基、氨基(NH2)、羥基、羧基和C1-C6烷氧基中的1-3個(gè)取代基；優(yōu)選為選自鹵素、C1-C4烷基、氰基、硝基、氨基(NH2)、羥基、羧基和C1-C4烷氧基中的1-3個(gè)取代基；最優(yōu)選為選自鹵素、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基和丙氧基中的1-2個(gè)取代基；R2最優(yōu)選為2-甲氧基-5-氯苯基、4-氯苯基或4-甲氧基苯基；R3為取代或未取代的C6-C14芳基、取代或未取代的5-7元雜芳基、取代或未取代的金剛烷基、3,4-亞甲二氧基苯基、取代或未取代的咔唑基；優(yōu)選 為3,4-亞甲二氧基苯基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的吡啶基、9-乙基-咔唑-3-基、金剛烷-1-基、3,5-二甲基金剛烷-1-基；其中，所述取代的C6-C14芳基上的取代基、所述取代的5-7元雜芳基上的取代基、所述取代的金剛烷基上的取代基、所述取代的咔唑基上的取代基、所述取代的苯基上的取代基、所述取代的萘基上的取代基和所述取代的吡啶基上的取代基各自獨(dú)立地為選自鹵素、C1-C6烷基、氰基、硝基、氨基(NH2)、羥基、羧基和C1-C6烷氧基中的1-3個(gè)取代基；優(yōu)選為選自鹵素、甲基、乙基、丙基、丁基、氰基、硝基、氨基(NH2)、羥基、羧基、甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基中的1-3個(gè)取代基；R3最優(yōu)選為3,4-亞甲二氧基苯基(又稱苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯-5基)4-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、2-甲氧基苯基、4-硝基苯基、3,4-二甲氧基苯基、吡啶-4-基、萘-1-基、9-乙基-咔唑-3-基、金剛烷-1-基或3,5-二甲基金剛烷-1-基。在本發(fā)明中，術(shù)語“芳基”是指芳香族環(huán)基，如：苯基、萘基、聯(lián)苯基。在本發(fā)明中，術(shù)語“C1-C6烷基”是指主鏈上具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、已基等；優(yōu)選異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基。在本發(fā)明中，術(shù)語“C1-C6烷氧基”是指主鏈上具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基等；優(yōu)選甲氧基、乙氧基。在本發(fā)明中，術(shù)語“C3-C7環(huán)烷基”是指在環(huán)上具有3至7個(gè)碳原子的環(huán)狀烷基，非限制性地包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基；優(yōu)選環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。在本發(fā)明中，術(shù)語“5-7元雜芳基”是指在環(huán)上具有至少一個(gè)選自N、O和S中的雜原子的5-7元芳香環(huán)基，非限制性地包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、吡唑基和吡啶基；優(yōu)選吡咯基、咪唑基和吡啶基。在本發(fā)明中，術(shù)語“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。本發(fā)明中的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指與磷酸、硫酸、鹽酸等無機(jī)酸，或醋酸、酒石酸、檸檬酸、蘋果酸等有機(jī)酸，或天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸形成的鹽，或與上述酸成酯或酰胺后再與無機(jī)堿形成的鹽，如鈉、鉀、鈣、鋁鹽和銨鹽。本發(fā)明中，所述通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物優(yōu)選選自下列化合物中：在本發(fā)明的第二方面，還提供了一種制備根據(jù)本發(fā)明的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物的方法，所述方法如下：反應(yīng)式1(1)胺H與氯乙酰氯J發(fā)生?；磻?yīng)生成結(jié)構(gòu)式K所示的化合物。具體而言，將胺H溶于溶劑(例如，二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙腈等)中并加入堿(例如，碳酸鉀、碳酸鈉、三乙胺、吡啶等)，室溫下加入氯乙酰氯J，并攪拌反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)飽和碳酸鈉洗、干燥后濃縮，得到化合物K。(2)將K所示結(jié)構(gòu)的化合物在與胺L發(fā)生取代反應(yīng)生成M所示的化合物。具體而言，將化合物K溶于溶劑(例如，乙醇、二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙腈等)中并加入堿(例如，碳酸鉀、碳酸鈉、三乙胺、吡啶等)，室溫下加入胺L后，升溫至回流攪拌反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)水洗、干燥后濃縮，經(jīng)純化后得到化合物M。(3)將M所示結(jié)構(gòu)的化合物在與磺酰氯N發(fā)生磺?；磻?yīng)生成I所示的化合物。具體而言，將化合物M于溶劑(例如，乙醇、二氯甲烷、氯仿、吡啶等)中并加入堿(例如，碳酸鉀、碳酸鈉、三乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶等)，室溫下加入磺酰氯F后，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)水洗、干燥后濃縮，經(jīng)純化后得到化合物I。其中，R1至R3的定義如通式I中所定義。利用本發(fā)明所得的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽可給藥于人，可以口服、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、局部給藥(粉劑、軟膏劑或滴劑)。用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實(shí)例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時(shí)，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。除了這些惰性稀釋劑外，上述組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、噴射劑和吸入劑?；钚猿煞衷跓o菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時(shí)可能需要的推進(jìn)劑一起混合。因此，在本發(fā)明的第三方面，還提供了一種用于治療阿爾茨海默病的藥物組合物，它含有治療有效量的選自通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物和其藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種作為活性成分，以及任選的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、佐劑、輔料和/或稀釋劑。在本發(fā)明第四方面，提供了根據(jù)本發(fā)明通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽、和包含該衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物在制備用于治療阿爾茨海默病的藥物或改善記憶力的產(chǎn)品中的用途。所述藥物組合物進(jìn)一步包含其他藥學(xué)上可接受的治療劑，特別是其它治療阿爾茨海默病藥物。在本發(fā)明的第五方面，提供了一種治療阿爾茨海默病或改善記憶力的方法，所述方法包括向具有該需要的患者給藥治療有效量的選自根據(jù)本發(fā)明通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物和其藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種，或根據(jù)本發(fā)明的包含治療有效量的選自根據(jù)本發(fā)明通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物和其藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種作為活性成分的藥物組合物。有益效果本發(fā)明制備的通式I所示的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用，整體動(dòng)物試驗(yàn)表明該類化合物具有改善老年癡呆大鼠的記憶功 能，可用于阿爾茨海默病的治療。本發(fā)明化合物合成簡單，易于制備，且合成原料豐富。附圖說明圖1顯示A-1能夠縮短STZ-ICV大鼠的潛伏期。V：溶劑-ICV組，SV：STZ-ICV溶劑組，SL：STZ-ICV7mg/kg/day組，SH：STZ-ICV10mg/kg/day組。圖2顯示A-1能夠增加STZ-ICV大鼠的穿臺(tái)次數(shù)。V：溶劑-ICV組，SV：STZ-ICV溶劑組，SL：STZ-ICV7mg/kg/day組，SH：STZ-ICV10mg/kg/day組。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明不局限于此。下述制備例中，1H-NMR用VarianMercuryAMX300，400，500型儀器測定。MS用VGZAB-HS或VG-7070型以及Esquire3000plus-01005測定。所有溶劑在使用前均經(jīng)過重新蒸餾，所使用的無水溶劑均是按標(biāo)準(zhǔn)方法干燥處理獲得。除另有說明外，所有反應(yīng)均是在氬氣保護(hù)下進(jìn)行并用TLC跟蹤，后處理時(shí)均經(jīng)飽和食鹽水洗和無水硫酸鎂干燥過程。產(chǎn)品的純化除另有說明外均使用硅膠的柱色譜法，所使用的硅膠為200-300目，GF254為青島海洋化工廠或煙臺(tái)緣博硅膠公司生產(chǎn)。制備實(shí)施例實(shí)施例1：化合物A-1的合成取3,4-亞甲二氧基苯胺(3.022g，22mmol)及三乙胺(4.5mL，33mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，緩慢滴加氯乙酰氯(2.15mL，28.6mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)后反應(yīng)完全。反應(yīng)液用飽和碳酸鈉溶液洗2次后，用無水硫酸鈉干燥，過濾后，濾液經(jīng)減壓蒸餾去除溶劑后，得棕色固體氯乙酰胡椒胺K-1(4.6g，98％)。將化合物K-1(1.7g，8mmol)溶于乙醇(50mL)中，加入2-甲氧基-5-氯苯胺(1.2g，8mmol)、三乙胺(1.2mL，8mmol)，再加入碘化鈉(1.2mg，8mmol)催化反應(yīng)，反應(yīng)液加熱至回流攪拌反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束經(jīng)過濾除去不溶物，濾液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑后，加入乙酸乙酯溶解，再用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾后，濾液經(jīng)減壓蒸餾去除溶劑后經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體M-1(1g，38％)。將M-1(334mg，1mmol)溶于吡啶(15mL)中，加入4-二甲氨基吡啶(183mg，1.5mmol)，緩慢滴加苯磺酰氯(0.64mL，5mmol)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸餾除去溶劑后得粗品，粗品經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到淡黃色固體的產(chǎn)物A-1(450mg，95％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.08(s,1H),7.68-7.74(m,3H),7.57(t,J＝8.4Hz,2H),7.33(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.24(d,J＝2.0Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),6.88(d,J＝2.4Hz,1H),6.85(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,1H),5.97(s,2H),4.21(s,2H),3.79(s,3H)。13CNMR(125MHz,CDCl3)δ165.93,155.41,147.96,144.64,137.51,133.79,131.79,130.63,130.00,129.29,129.29,129.26, 128.15,128.15,126.17,113.96,113.26,108.23,102.82,101.43,56.61,55.39。ESI-MS((m/z)475，[M+H]+)。實(shí)施例2：化合物A-2的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用對(duì)甲基苯磺酰氯(380mg，2mmol)替代苯磺酰氯，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體A-2(163mg，54％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.11(s,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,2H),7.34(d,J＝8.2Hz,2H),7.31(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.21(d,J＝1.9Hz,1H),6.92(d,J＝8.9Hz,1H),6.87-6.80(m,2H),6.76(d,J＝8.3Hz,1H),5.95(s,2H),4.15(s,2H),3.82(s,3H),2.47(s,3H)。ESI-MS((m/z)489，[M+H]+)。實(shí)施例3：化合物A-3的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用對(duì)氟苯磺酰氯(488mg，2.5mmol)替代苯磺酰氯，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體A-3(98mg，40％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.01(s,1H),7.73-7.76(m,2H),7.35(d,J＝7.6Hz,1H),7.25-7.28(m,3H),6.93-6.94(m,2H),6.85(d,J＝8.0Hz,1H),6.78(d,J＝8.0Hz,1H),5.97(s,2H),4.20(s,2H),3.80(s,3H)。ESI-MS((m/z)493，[M+H]+)。實(shí)施例4：化合物B-1的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用對(duì)氯苯胺(127mg，1mmol)替代5-氯-2-甲氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體B-1(190mg，43％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),7.66(t,J＝7.4Hz,1H), 7.60(d,J＝7.3Hz,2H),7.52(t,J＝7.7Hz,2H),7.31(d,J＝8.7Hz,2H),7.15(d,J＝1.9Hz,1H),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),6.78(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.74(d,J＝8.3Hz,1H),5.95(s,2H),4.26(s,2H)。ESI-MS((m/z)445，[M+H]+)。實(shí)施例5：化合物B-2的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用對(duì)甲氧基苯胺(123mg，1mmol)替代5-氯-2-甲氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體B-2(162mg，37％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(s,1H),7.68-7.58(m,3H),7.51(t,J＝7.8Hz,2H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),7.00(d,J＝9.0Hz,2H),6.85-6.78(m,3H),6.75(d,J＝8.3Hz,1H),5.94(s,2H),4.25(s,2H),3.79(s,3H)。ESI-MS((m/z)441，[M+H]+)。實(shí)施例6：化合物C-1的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用甲氧基苯胺(246mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-1(320mg，35％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(s,1H),7.72(d,J＝7.5Hz,2H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.55(t,J＝7.7Hz,2H),7.43(d,J＝8.9Hz,2H),7.31(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.93-6.84(m,4H),4.21(s,2H),3.80(s,3H),3.76(s,3H)。ESI-MS((m/z)461，[M+H]+)。實(shí)施例7：化合物C-2的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用間甲氧基苯胺(246mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-2 (475mg，52％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.12(s,1H),7.72(d,J＝7.9Hz,2H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.55(t,J＝7.5Hz,2H),7.31(d,J＝9.0Hz,1H),7.28-7.20(m,2H),7.03(d,J＝7.8Hz,1H),6.93-6.84(m,2H),6.69(d,J＝7.4Hz,1H),4.21(s,2H),3.81(s,3H),3.78(s,3H)。ESI-MS((m/z)461，[M+H]+)。實(shí)施例8：化合物C-3的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用鄰甲氧基苯胺(246mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-3(306mg，33％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.18(s,1H),8.29(dd,J＝7.9,1.4Hz,1H),7.71-7.65(m,2H),7.61(t,J＝7.4Hz,1H),7.53(d,J＝2.6Hz,1H),7.49(t,J＝7.7Hz,2H),7.28(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.08(td,J＝7.8,1.6Hz,1H),6.95(t,J＝8.5Hz,2H),6.70(d,J＝8.9Hz,1H),4.36(s,2H),4.04(s,3H),3.32(s,3H)。ESI-MS((m/z)461，[M+H]+)。實(shí)施例9：化合物C-4的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用對(duì)硝基苯胺(276mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-4(335mg，35％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.54(s,1H),8.24(d,J＝9.1Hz,2H),7.78-7.67(m,5H),7.58(t,J＝7.7Hz,2H),7.34(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.94(d,J＝8.9Hz,1H),6.85(d,J＝2.5Hz,1H),4.22(s,2H),3.82(s,3H)。ESI-MS((m/z)476，[M+H]+)。實(shí)施例10：化合物C-5的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用4-氨基吡啶(188mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-5(190mg，22％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.34(s,1H),8.54(d,J＝6.1Hz,2H),7.70(dd,J＝13.2,7.4Hz,3H),7.57(t,J＝7.7Hz,2H),7.50(d,J＝6.2Hz,2H),7.33(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.93(d,J＝8.9Hz,1H),6.84(d,J＝2.5Hz,1H),4.20(s,2H),3.82(s,3H)。ESI-MS((m/z)432，[M+H]+)。實(shí)施例11：化合物C-6的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用金剛烷胺(302mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-6(362mg，37％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.64-7.71(m,3H),7.52(t,J＝8.8Hz,2H),7.32(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),6.85-6.87(m,2H),4.01(s,2H),3.66(s,3H),2.10(s,3H),2.00(s,6H),1.70(s,6H)。ESI-MS((m/z)489，[M+H]+)。實(shí)施例12：化合物C-7的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用3,4-二甲氧基苯胺(306mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-7(406mg，41％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.05(s,1H),7.68-7.75(m,3H),7.58(t,J＝8.0Hz,2H),7.32-7.35(m,2H),6.91-6.96(m,3H),6.84(d,J＝8.4Hz,1H),4.23(s,2H),3.91(s,3H),3.89(s,3H),3.77(s,3H)。ESI-MS((m/z)491，[M+H]+)。實(shí)施例13：化合物C-8的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用1-萘胺(286mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-8(140mg，15％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.65(s,1H),8.13(d,J＝8.4Hz,1H),7.91(t,J＝6.8Hz,2H),7.79-7.81(m,2H),7.70-7.86(m,2H),7.54-7.65(m,4H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.34(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.02(d,J＝2.4Hz,1H),6.89(d,J＝8.8Hz,1H),4.36(s,2H),3.57(s,3H)。ESI-MS((m/z)481，[M+H]+)。實(shí)施例14：化合物C-9的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用3,5-二甲基金剛烷胺(358mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-9(300mg，29％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.64-7.70(m,3H),7.54(t,J＝7.6Hz,2H),7.31(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.93(d,J＝2.4Hz,1H),6.92(s,1H),6.86(d,J＝8.8Hz,1H),3.99(s,2H),3.65(s,3H),2.15-2.18(m,1H),1.84(d,J＝2.0Hz,2H),1.67(d,J＝11.2Hz,2H),1.61(d,J＝11.2Hz,2H),1.41(d,J＝12Hz,2H),1.31(d,J＝12Hz,2H),1.13-1.22(m,2H),0.87(s,6H)。ESI-MS((m/z)517，[M+H]+)。實(shí)施例15：化合物C-10的合成反應(yīng)操作如A-1的制備，原料用3-氨基-9-乙基咔唑(420mg，2mmol)替代3,4-亞甲二氧基苯胺，經(jīng)柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)，得到黃色固體C-10(264mg，24％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),8.36(d,J＝1.2Hz,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,1H),7.69-7.73(m,3H),7.39-7.63(m,8H), 7.17(t,J＝8.0Hz,1H),7.02(d,J＝8.0Hz,1H),4.38-4.45(m,4H),3.38(s,3H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H)。ESI-MS((m/z)548，[M+H]+)。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1：細(xì)胞水平測試本發(fā)明磺酰胺基取代的酰胺類衍生物對(duì)STZ刺激下細(xì)胞的保護(hù)作用本發(fā)明在神經(jīng)母瘤細(xì)胞SH-SY5Y細(xì)胞上通過MTT比色法實(shí)驗(yàn)測試了磺酰胺基取代的酰胺類衍生物在鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡條件下對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用，結(jié)果表明這類衍生物對(duì)STZ刺激條件下的細(xì)胞具有保護(hù)作用。1.實(shí)驗(yàn)原理MTT是一種商品名為噻唑藍(lán)的黃色染料，能夠被活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓉并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓉，用酶標(biāo)儀在490nm波長處測定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)的范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與活細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值(OD值)，來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)。2.實(shí)驗(yàn)材料與方法(1)MTT購于sigma公司，細(xì)胞培養(yǎng)試劑均購于Gibico公司(2)SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)：SH-SY5Y細(xì)胞用DMEM/F12培養(yǎng)液(10％FBS)培養(yǎng)于48孔板中，于50％細(xì)胞密度時(shí)加入STZ(0.8mM)及A-1衍生物(20μM)孵育24小時(shí)，以DMSO為空白對(duì)照，以DMSO與STZ(0.8mM)為陽性對(duì)照，設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。(3)吸出含有化合物的培養(yǎng)基，加入新的含有0.5mg/mlMTT的培養(yǎng)基，孵育4小時(shí)后終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基。每孔加入200μLDMSO，置振板器低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果合成的磺酰胺基取代的酰胺類衍生物對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)的活性進(jìn)行了測試，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)化合物都具有對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)活性，其中，C-9和 C-10的EC50值分別為0.22和0.17μM，對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞顯示出了較高的保護(hù)活性。表1、磺酰胺基取代的酰胺類衍生物神經(jīng)保護(hù)活性評(píng)價(jià)化合物EC50(μM)化合物EC50(μM)A-115.80±1.34A-210.34±0.89A-316.48±1.10B-216.30±1.52C-116.20±1.10C-217.60±1.35C-315.50±1.28C-48.21±0.54C-522.30±1.77C-64.22±0.50C-722.57±2.33C-817.43±1.24C-90.22±0.02C-100.17±0.02試驗(yàn)實(shí)施例2：化合物A-1逆轉(zhuǎn)STZ雙側(cè)腦室定位注射(STZ-ICV)老年性癡呆模型大鼠記憶力損傷的作用本發(fā)明通過腹腔注射給藥給予STZ-ICV老年性癡呆模型大鼠化合物A-1，然后通過水迷宮實(shí)驗(yàn)測定化合物A-1對(duì)STZ-ICV模型大鼠記憶力損傷改善作用。結(jié)果表明化合物A-1能夠明顯逆轉(zhuǎn)老年性癡呆模型大鼠的記憶力損傷。1.實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)采用的為STZ雙側(cè)腦室定位注射(STZ-ICV)老年性癡呆模型大鼠。STZ是一種亞硝基脲衍生物，在中樞可以阻斷胰島素受體自身磷酸化和內(nèi)在的酪氨酸激酶活性，已證實(shí)STZ側(cè)腦室注射可以引起大鼠腦持久的葡萄糖代謝紊亂和能量生成障礙，引起海馬乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性降低、氧化應(yīng)激反應(yīng)及神經(jīng)元凋亡并最終導(dǎo)致學(xué)習(xí)和記憶障礙。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)(MorrisWaterMaze,MWM)儀器為一個(gè)直徑為1.5米，深60厘米的圓形水池。在水池中注入黑色渾濁的色素，并保持水溫為20℃，同時(shí)將一個(gè)直徑為10厘米的圓形平臺(tái)置于水面下約1.5厘米處。在訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)中，將圓形平臺(tái)置于第四象限中，并在水池的四周放置一些可見的標(biāo)志來幫助大鼠記憶平臺(tái)所在位置。在每天的訓(xùn)練中發(fā)明人分別將大鼠面向池壁置于水中，然后給大鼠60秒鐘時(shí)間去尋找平臺(tái)位置，大鼠在平臺(tái)上停留10秒鐘時(shí)間以幫助它記憶平臺(tái)位置，持續(xù)4天的時(shí)間。在此期間，大鼠找到平臺(tái)的時(shí)間稱為潛伏期，為大鼠記憶力的一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)，時(shí)間越短表明其記憶力越好。在第5天，在訓(xùn)練之后，大鼠會(huì)進(jìn)行平臺(tái)尋找實(shí)驗(yàn)。在這次實(shí)驗(yàn)中，潛于水面下的平臺(tái)被撤除，然后讓大鼠在水池中持續(xù)60秒鐘去尋找平臺(tái)，記錄大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)作為其記憶力的評(píng)價(jià)指標(biāo)，次數(shù)越多表明其記憶力越好。2.實(shí)驗(yàn)材料與方法(1)STZ雙側(cè)腦室定位注射(STZ-ICV)老年性癡呆模型大鼠為普通體質(zhì)量200g左右，SPF清潔級(jí)，Sprague-Dawley(SD)大鼠41只，購買于上海斯萊克公司，大鼠在標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)(12/12小時(shí)明暗循環(huán)，足夠水和食物，22℃的恒溫，60％的濕度)。(2)STZ-ICV大鼠模型制作：在預(yù)給藥2周后，大鼠體重達(dá)到約250g時(shí)進(jìn)行腦定位注射，大鼠經(jīng)10％水合氯醛(10mL/kg，ip)，麻醉后，固定于腦立體定向儀。75％乙醇消毒皮膚后，正中失狀切開，分離骨膜，錐顱器鉆開顱骨，暴露硬腦膜。微量注射器每側(cè)腦室各注射STZ10μL(約3mg/kg)，坐標(biāo)為前囟后1.0mm，矢狀縫左右旁開1.5mm，腦表面下3.5mm。(3)STZ-ICV大鼠給藥：大鼠隨機(jī)分為4組：不接受手術(shù)組(V，10只)、手術(shù)后溶劑組(SV，10只)、手術(shù)后A-1低劑量給藥組(SL，10只，7mg/kg)和手術(shù)后A-1高劑量給藥組(SH，11只,21mg/kg)。化合物A-1溶解于含有3％DMSO，5％吐溫80的生理鹽水中，預(yù)給藥2周后進(jìn)行腦定位注射手術(shù)，手術(shù)后繼續(xù)給藥3周后，開始行為學(xué)檢測(Morris水迷宮實(shí)驗(yàn))。(4)大鼠每天進(jìn)行三次訓(xùn)練，持續(xù)4天的時(shí)間。在三次訓(xùn)練中發(fā)明人分別將大鼠面向池壁于三個(gè)除平臺(tái)所在的象限中置于水中，然后給大鼠60秒鐘時(shí)間去尋找平臺(tái)位置，大鼠在平臺(tái)上停留10秒鐘時(shí)間以幫助它記憶平臺(tái)位置。在此期間，記錄大鼠找到平臺(tái)的時(shí)間即潛伏期。在第5天，在三次訓(xùn)練 之后，大鼠會(huì)進(jìn)行平臺(tái)尋找實(shí)驗(yàn)。在這次實(shí)驗(yàn)中，潛于水面下的平臺(tái)被撤除，然后讓大鼠在水池中持續(xù)60秒鐘去尋找平臺(tái)，記錄大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)作為其記憶力的評(píng)價(jià)指標(biāo)，次數(shù)越多表明其記憶力越好。所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作都嚴(yán)格遵守《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人采用雙側(cè)側(cè)腦室注射STZ的辦法制造AD模型。以囟門為原點(diǎn)，注射坐標(biāo)為-1.0,1.5,3.5。STZ注射濃度為3mg/kg，雙側(cè)10μL/側(cè)，溶劑為人工腦脊液。預(yù)給藥2周后進(jìn)行腦定位注射手術(shù)，手術(shù)時(shí)老鼠平均體重為220g，手術(shù)后繼續(xù)給藥3周，給藥濃度為7mg/kg/day和21mg/kg/day(相對(duì)于小鼠的10mg/kg/day和30mg/kg/day換算而來)，溶劑組為3％DMSO，5％吐溫80。發(fā)明人對(duì)STZ-ICV大鼠進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)(MorrisWaterMaze)，以檢測A-1對(duì)大鼠的認(rèn)知功能的影響。結(jié)果如圖1所示，隨著訓(xùn)練次數(shù)和天數(shù)的增加大鼠找尋到平臺(tái)的潛伏期逐漸縮短，而STZ-ICV大鼠的潛伏期縮短幅度明顯低于溶劑-ICV大鼠，并且在第2天的潛伏期測定中發(fā)明人發(fā)現(xiàn)STZ-ICV大鼠的潛伏期比溶劑-ICV大鼠有著顯著性的延長。這說明STZ-ICV大鼠AD造模成功，由于記憶功能受損已經(jīng)出現(xiàn)，對(duì)于平臺(tái)所在位置記憶不足。同時(shí)發(fā)明人發(fā)現(xiàn)10mg/kg/dayA-1給藥處理的STZ-ICV大鼠的潛伏期縮短幅度明顯低于溶劑(3％DMSO，5％的吐溫80)處理的STZ-ICV大鼠，并且在第3天的潛伏期測定中發(fā)明人發(fā)現(xiàn)7mg/kg/dayA-1給藥處理的STZ-ICV大鼠的潛伏期比溶劑處理的STZ-ICV大鼠有著顯著性的減少，而21mg/kg/dayA-1處理組在第4天亦顯示出明顯的記憶逆轉(zhuǎn)作用。這個(gè)結(jié)果表明A-1處理可以起到逆轉(zhuǎn)STZ-ICV大鼠記憶損傷的作用。第4天撤去平臺(tái)后的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)明人通過記錄大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)來檢測大鼠的記憶力情況。結(jié)果如圖2所示，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)明人發(fā)現(xiàn)STZ-ICV大鼠穿越原來平臺(tái)所在位置次數(shù)較溶劑-ICV大鼠少，同樣表明STZ-ICV大鼠記憶受損。但是7mg/kg/day和21mg/kg/dayA-1處理后的STZ-ICV大鼠穿越原來平臺(tái)所在位置次數(shù)明顯多于溶劑處理STZ-ICV大鼠，同樣表明7mg/kg/day和21mg/kg/dayA-1能夠逆轉(zhuǎn)STZ-ICV大鼠記憶損傷的作用。當(dāng)前第1頁1 2 3