本發(fā)明涉及維生素E在制藥領(lǐng)域的新用途，具體地說涉及維生素E在制備預(yù)防和/或治療缺血再灌注誘發(fā)的心律失常藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來冠心病發(fā)病率逐年上升并呈年輕化趨勢，急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)是冠心病最為嚴重的一種類型，我國每年將近百萬患者死于急性心肌梗死，因此，該病被視為“人類健康第一殺手”。急性心肌梗死最有效的治療措施是在冠狀動脈已開通的基礎(chǔ)上實現(xiàn)心肌組織的完全再灌注，即實現(xiàn)心肌微循環(huán)再灌注。目前常用的治療手段包括溶栓法和冠狀動脈介入手術(shù)治療法。但是，溶栓法和冠狀動脈介入手術(shù)治療后往往造成缺血再灌注損傷。如何防治缺血再灌注損傷及改善心肌組織再灌注已成為急需解決的難題。
心肌缺血再灌注損傷是一個極為復(fù)雜的病理生理變化過程，除了導(dǎo)致心肌梗死面積增加，心肌細胞損傷和心室肌壞死，也會導(dǎo)致嚴重的心律失常，甚至導(dǎo)致心臟猝死。研究表明QT間期延長會增加心律失常的發(fā)生率，所以可采用這個指標(biāo)評估心律失常發(fā)生的風(fēng)險。目前臨床沒有有效的藥物用于治療缺血再灌注誘發(fā)的心律失常，而常用的抗心律失常藥物常常具有致心律失常作用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種維生素E在制備預(yù)防和/或治療缺血再灌注誘發(fā)的心律失常藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：
本發(fā)明提供一種維生素E在制備預(yù)防和/或治療缺血再灌注誘發(fā)的心律失常藥物中的應(yīng)用。
所述的心律失常為室性、房性或竇性心律失常；
所述的心律失常為伴隨QT間期延長的心律失常；
所述的心律失常也可以是糖尿病、心肌肥大或高血壓等疾病引起的心律失常；
所述的維生素E通過減少活性氧對hERG電流的抑制而起預(yù)防和/或治療作 用；
所述的維生素E可以制成片劑、針劑或吸入制劑；
所述的維生素E可以是口服、靜脈注射、肌肉注射或經(jīng)肺吸入給藥方式；
所述的維生素E還可以和其它藥物或食品制成組合，用于治療用藥物的應(yīng)用。
一種組合藥物或食品，包含維生素E。
本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點及效果：
(1)研究表明維生素E能夠降低梗死心肌的面積，從而對心臟發(fā)揮保護作用。但維生素E對缺血再灌注引起QT間期延長及相關(guān)心律失常的治療或預(yù)防作用，至今未見報道。
(2)本發(fā)明針對上述問題經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)維生素E具有抗缺血再灌注導(dǎo)致心律失常的作用，把維生素E用于制備防治心臟缺血再灌注后QT間期延長及相關(guān)心律失常的藥物，此種藥物是作用靶點明確，分子結(jié)構(gòu)已知的新型抗缺血再灌注后QT間期延長的藥物。通過離體心臟缺血再灌注模型證明此種藥物可以減少缺血再灌注引起的QT間期延長，即可以減少相關(guān)心律失常發(fā)生的風(fēng)險。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
實施例1維生素E抗離體豚鼠心臟缺血再灌注后引起QT間期延長作用試驗
方法：于手術(shù)前準備手術(shù)器械，用75％(v/v)酒精浸泡過夜。配制好K-H溶液后，取適量倒入玻璃培養(yǎng)皿中，并把玻璃培養(yǎng)皿放在冰上(4℃左右)，充氧。采用腹腔注射方式給予0.5mL 1％(m/v)肝素，20～30min后，腹腔注射5％(m/v)戊巴比妥鈉(0.2mL/100g)麻醉，深度麻醉后，將豚鼠(Guinea pig)(成年普通級hartly豚鼠，購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心)仰面置于手術(shù)臺上，用醫(yī)用膠帶固定四肢，沿胸前壁正中剪開皮膚至劍突，用止血鉗夾穩(wěn)劍突，快速開胸暴露心臟和血管，用鑷子夾住心臟根部，剪斷上下腔靜脈、肺動脈、主動脈及心臟周圍組織，取出心臟，主動脈根部留0.5cm左右長度以備插管用。
心臟取出后立即置于預(yù)先氧飽和處理過的冷K-H液中，用手指輕壓心室以利于其中剩于血液的排出。用注射器從主動脈根部注入氧飽和處理過的冷K-H液，一方面能使心臟停止跳動從而減少能量消耗，另一方面可通過沖洗冠狀血管，清除殘流血液從而避免形成小凝血塊堵塞血管。將心臟迅速轉(zhuǎn)移，經(jīng)主動脈逆行插 管，用動脈夾夾住，以3-0手術(shù)絲線結(jié)扎并固定于power Lab心臟Langendorff灌流裝置(澳大利亞AD公司，型號ML176-220)上，用K-H液進行常規(guī)恒速(10mL/min)灌流，保持灌流液溫度恒定為37℃，并充95％(v/v)O2+5％(v/v)CO2飽和。將心電圖記錄裝置連好，按照文獻描述的離體心臟心電圖記錄方法，采用三根銀絲貼在心臟表面，正極在心尖，負極在右心耳，地線在主動脈根部處。心臟灌流開始后先穩(wěn)定20min，然后停止灌流使心臟造成全心缺血，30min后再灌注，正常組再灌注30min。維生素E組在再灌注15min后灌注含200μM維生素E的K-H液灌流。整個過程中都記錄心率和心電圖。信號的采集通過Power Lab自帶軟件Labchart中windows采集，QT間期采用ECG Analysis分析處理。QTc是經(jīng)過心率校準的QT間期。
結(jié)果表明相比于缺血前，再灌注后QT間期明顯增加，再灌注時給予200μM維生素E后QT間期恢復(fù)到缺血前狀態(tài)。QT間期在缺血前是361.10±5.90ms，再灌注后400.11±7.92ms，再灌注時給予200μM維生素E后368.69±5.99ms。具體見表1所示。
表1 對缺血再灌注后QT間期的影響
與正常組相比，**P<0.01；與缺血再灌注組相比，#p<0.05。
注：表中為同一心臟自身對照，總共6只豚鼠心臟。
實施例2維生素E減少缺血再灌注對IKr電流(hERG相關(guān)電流)的抑制作用試驗
心肌細胞分離方法：取出心臟部分見實施例1，取出心臟后，找到主動脈，將主動脈套在套管底部，注意不要插過主動脈瓣，并用縫合線扎緊。用無鈣臺氏液灌流4～5min，泵出血污，使心臟的血液完全排出。然后用95％(v/v)O2+5％(v/v)CO2氧飽和的15mL 0.4mg/mL II型膠原酶(worthington)酶液循環(huán)灌流。不斷檢查心臟硬度，心臟變軟后滴少量0.4mg/mL II型膠原酶酶液于倒置顯微鏡下觀察是否有心肌細胞，待視野中有幾個心肌細胞時立刻剪下心室部分，在新鮮10mL 0.4mg/mL II型膠原酶(worthington)中將心臟剪碎，并于37℃水浴中輕輕吹打，使細胞加速分離，吹打5min后用250μm的細胞篩過濾，用吸管將濾液吸至15mL圓底離心管中，離心(500rpm，1min)，舍棄上清。加入含50μM鈣臺氏液重懸細胞，待細胞自然沉降，依次加入到含200μM Ca2+，500μM Ca2+和 1mM Ca2+的臺氏液中復(fù)鈣，得到耐鈣心肌細胞；最后把細胞重懸于M199培養(yǎng)基中并于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)待細胞貼壁(培養(yǎng)皿中加入laminin(sigma)促進細胞貼壁)1h后細胞貼壁可用于膜片鉗實驗。將已貼壁的待用心肌細胞置于35mm的培養(yǎng)皿中，加入2mL缺血液模擬缺血過程，缺血液中分別加入2-脫氧葡萄糖(糖酵解抑制劑，sigma)，乳酸(模擬乳酸堆積，阿拉丁)，將pH調(diào)至6.5模擬酸中毒，加入1mM連二亞硫酸鈉(sigma)并用封口膜封住培養(yǎng)皿造成缺氧，置于37℃培養(yǎng)箱中，缺血1小時后，用正常臺氏液洗2次，加入2mL臺氏液再灌注15min，待做膜片鉗試驗。利用全細胞膜片鉗電壓鉗模式記錄心肌細胞IKr電流，結(jié)果表明，缺血再灌注對IKr電流具有顯著的抑制作用。缺血前IKr尾電流密度為1.44±0.06pA·pF-1，缺血再灌注后IKr尾電流密度為0.52±0.04pA·pF-1，再灌注時加入100μM維生素E后，IKr電流密度為0.94±0.09pA·pF-1。同時在再灌注給予10μM對照藥線粒體ROS清除劑Mito-tempo(sigma)后，IKr電流也增加，其電流密度為0.97±0.08pA·pF-1；具體見表2所示。添加外源性活性氧(reactive oxygen species，ROS)成分過氧化氫對心肌細胞進行預(yù)處理10min，再利用全細胞膜片鉗電壓鉗模式記錄心肌細胞IKr電流，發(fā)現(xiàn)IKr電流也被抑制，且抑制程度與缺血再灌注抑制程度相當(dāng)；具體見表3所示。
表2 對缺血再灌注后IKr電流的影響
與正常組相比，**P<0.01；與缺血再灌注組相比，#p<0.05。
表3 過氧化氫預(yù)處理對IKr電流的影響
與正常組相比，**P<0.01。
上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。