本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及淋巴示蹤用異硫藍(lán)注射液及其制備方法。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)疾病，全世界每年新增癌癥病人為800萬(wàn)，世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究中心日前公布的一份研究報(bào)告稱，根據(jù)目前癌癥的發(fā)病趨勢(shì)，2020年全世界癌癥發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50％，全球每年新增癌癥患者人數(shù)將達(dá)到1500萬(wàn)人。前哨淋巴結(jié)(SLN)是最先接受腫瘤區(qū)域淋巴引流并最先發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的第一站淋巴結(jié)。如果前哨淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移，該區(qū)域其他淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性很小，此時(shí)可縮小手術(shù)范圍。反之如果前哨淋巴結(jié)已發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，則癌細(xì)胞可能已發(fā)生擴(kuò)散，此時(shí)則需要擴(kuò)大手術(shù)全面清掃。有研究表明，前哨淋巴結(jié)發(fā)生“跳躍”轉(zhuǎn)移的可能性微乎其微。因此，可通過(guò)前哨淋巴結(jié)狀態(tài)來(lái)反映該區(qū)域淋巴結(jié)狀態(tài)。準(zhǔn)確判斷前哨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)臺(tái)是診斷腫瘤是否擴(kuò)散和制定治療方案的重要依據(jù)。與傳統(tǒng)淋巴結(jié)清掃術(shù)相比，前哨淋巴結(jié)活檢(SLNB)是通過(guò)一定的技術(shù)手段對(duì)前哨淋巴結(jié)進(jìn)行定位，再以微侵入的方式將其取出進(jìn)行活檢，從而判斷該區(qū)域淋巴結(jié)狀態(tài)。該技術(shù)可避免手術(shù)不必要的擴(kuò)大，減少病人痛苦，是腫瘤外科上的一個(gè)重大突破。然而腫瘤區(qū)域淋巴結(jié)通常隱匿在結(jié)締組織中，與周圍重要的管道系統(tǒng)和器官關(guān)系密切，容易造成誤傷，手術(shù)難度增加。因此，淋巴示蹤劑目前在國(guó)內(nèi)外惡性腫瘤的臨床治療中已發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，在原發(fā)病灶附近注射淋巴示蹤劑，可迅速將惡性腫瘤附近的淋巴結(jié)染色。1.使臨床淋巴結(jié)的清掃與活檢更安全更高效。2.減少組織損傷，縮短手術(shù)時(shí)間，且達(dá)到徹底清掃淋巴結(jié)的目的。3.對(duì)于腫瘤患者的生存期延長(zhǎng)及預(yù)后生存質(zhì)量的提高有著重要的價(jià)值。常用的前哨淋巴結(jié)活檢的方法有染料法、核素法和二者聯(lián)合應(yīng)用三種。核素法因價(jià)格昂貴、需專業(yè)儀器等原因限制了其在臨床中的應(yīng)用。染料法因其操作簡(jiǎn)便、價(jià)格適當(dāng)而在臨床上應(yīng)用更為廣泛。目前國(guó)內(nèi)唯一批準(zhǔn)上市應(yīng)用于臨床的淋巴示蹤劑是納米炭，商品名為卡納琳，主要用于胃癌區(qū)域引流淋巴結(jié)的示蹤。該制劑是使用納米炭(平均粒徑150nm)、聚乙烯吡咯烷酮和生理鹽水制備而成的納米混懸注射液。納米炭示蹤的基本原理是納米炭被巨噬細(xì)胞吞噬后不進(jìn)入血管而進(jìn)入淋巴管內(nèi)，并沿淋巴引流途徑著色，從而實(shí)現(xiàn)淋巴系統(tǒng)，特別是淋巴結(jié)的示蹤作用。但不可否認(rèn)的是，納米炭不被代謝，進(jìn)入血液和淋巴循環(huán)有堵塞毛細(xì)管的危險(xiǎn)，且對(duì)于癌組織質(zhì)地較硬、脆，直接瘤內(nèi)注射可引起瘤組織壞死、脫落而引起出血。由于其粒徑較大，無(wú)法到達(dá)N3、N4遠(yuǎn)站淋巴結(jié)及細(xì)小淋巴結(jié)，對(duì)細(xì)微淋巴結(jié)的清掃作用并 不理想。對(duì)于一些較為晚期的病例，肉眼可辨的腫大淋巴結(jié)，可能是由于區(qū)域淋巴管已為癌細(xì)胞栓塞，致引流受阻因而黑染并不滿意。此外，臨床上常用的淋巴示蹤劑還有亞甲藍(lán)。亞甲藍(lán)，又名次甲藍(lán)，美藍(lán)，為一氧化還原劑，根據(jù)其在體內(nèi)的不同濃度，對(duì)血紅蛋白有兩種不同的作用。高濃度時(shí)可抑制氰化物對(duì)組織中毒的毒性。近年來(lái)，亞甲藍(lán)作為淋巴示蹤劑已廣泛應(yīng)用于乳腺癌、宮頸癌、結(jié)直腸癌、胃癌、甲狀腺乳頭癌等多種癌癥手術(shù)治療中。但已有研究表明，MB在淋巴管中吸收不佳，采用MB作為染料行乳腺癌前哨淋巴結(jié)活檢的成功率并不一致，有的在90％以上，有的僅為69％；由于注射液中亞甲藍(lán)以溶解狀態(tài)存在，組織間隙及血管等被廣泛染色而發(fā)生彌散現(xiàn)象，不能有效的勾勒出病灶范圍，影響手術(shù)視野觀測(cè)；且亞甲藍(lán)消除迅速，維持藍(lán)染時(shí)間短，不利用手術(shù)中定位尋找淋巴結(jié)。異硫藍(lán)(IsosulfanBlue，IB)，2，5-二磺酸三苯甲烷單鈉鹽，是一種薔薇苯胺類染料?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示；分子式：C27H31N2O6S2Na分子量：561.13性狀：本品為藍(lán)色或類藍(lán)色結(jié)晶性粉末，具有金屬光澤。無(wú)臭。有引濕性。本品在水中易溶解，乙醇中溶解，三氯甲烷中不溶。IB是第一個(gè)也是唯一一個(gè)被FDA批準(zhǔn)用于淋巴管造影術(shù)的染料。它是一種生理惰性染料，沒(méi)有藥理作用。經(jīng)皮下注射后，IB在軟組織中彌散度低，并與間質(zhì)蛋白微弱結(jié)合，選擇性的與淋巴管結(jié)合，因此淋巴管和淋巴結(jié)可被明顯藍(lán)染從而與周圍組織區(qū)分開(kāi)來(lái)，具有簡(jiǎn)便、快捷、直觀等特點(diǎn)，是國(guó)外最常用的染料示蹤劑，成功率可達(dá)到90％以上。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種異硫藍(lán)注射液的制備方法，可增加淋巴攝取率，提高淋巴示蹤染色效果，減少藥物進(jìn)入血液循環(huán)的比例。該注射液作為優(yōu)良淋巴示蹤劑的優(yōu)勢(shì)在于：(1)快速染色，準(zhǔn)確定位。小鼠體內(nèi)試驗(yàn)證明，異硫藍(lán)能在皮下注射5min內(nèi)藍(lán)染一、二、三級(jí)淋巴結(jié)，10min達(dá)最強(qiáng)藍(lán)染效果；(2)滿足手術(shù)藍(lán)染時(shí)間需要。小鼠實(shí)驗(yàn)證明，異硫藍(lán)在皮下注射2h內(nèi)能維持肉眼可見(jiàn)藍(lán)染狀態(tài)，滿足臨床需要；(3)組織間隙不彌散；(4)注射部位可快速消除，不產(chǎn)生蓄積和殘留。異硫藍(lán)注射液的處方為：本發(fā)明中所用到的主要輔料為pH調(diào)節(jié)劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑。其中，pH調(diào)節(jié)劑為磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀中的一種或幾種，其中優(yōu)選磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀中的一種或幾種，磷酸氫二鈉用量為0.2％～1.0％(g/mL)，優(yōu)選為0.5％～0.8％(g/mL)；磷酸二氫鉀用量為0.2％～0.6％(g/mL)，優(yōu)選為0.2％～0.4％(g/mL)?；旌媳壤秊榱姿釟涠c：磷酸二氫鉀＝1:1～4:1，優(yōu)選1:1～3:1，最佳2.44:1。所述滲透壓是影響淋巴示蹤效果的重要因素。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞間的連接有重疊、嵌插、端端三種方式，重疊連接最多，相鄰的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞呈疊瓦狀連接，彼此可重疊幾個(gè)微米，重疊連接的方式松散，缺乏連接復(fù)合體，從而使構(gòu)成連接的兩個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞在功能需要時(shí)可相互改變位置，形成開(kāi)放連接。淋巴內(nèi)皮細(xì)胞這種非緊密連接方式可形成“微閥”或“入口閥”的作用。因此，當(dāng)組織間隙壓力過(guò)大時(shí)，淋巴管擴(kuò)張，“閥門”因此被打開(kāi)。這說(shuō)明，當(dāng)組織間隙滲透壓增高時(shí)，可提高組織液進(jìn)入淋巴管的可能，因此滲透壓是影響淋巴示蹤注射液的一個(gè)重要因素。本發(fā)明使用的滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉、葡萄糖、PEG、甘露醇中的一種或幾種，其中優(yōu)選氯化鈉、葡萄糖中的一種或幾種，其用量為氯化鈉0.25％～4.0％(g/mL)，優(yōu)選為1.2％～2.8％(g/mL)，最佳為2.0％(g/mL)；葡萄糖1％～15％(g/mL)，優(yōu)選為5％～12％(g/mL)，最佳為10％(g/mL)。從而調(diào)節(jié)滲透壓約在300-1500mmol/kg范圍內(nèi)，優(yōu)選為600-1200mmol/kg，最佳為900mmol/kg。在此比例下，可獲得淋巴示蹤效果更好，且不產(chǎn)生局部注射刺激性的異硫藍(lán)注射液。制備工藝如下：1)濃配：稱取處方量的磷酸鹽pH調(diào)節(jié)劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15-20min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約15-20min使溶解，投入0.1％～0.5％針用活性炭，于40℃～60℃(優(yōu)選50℃)攪拌吸附10～30min(優(yōu)選20min)。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10-15min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(1～10mL每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。所述異硫藍(lán)注射液可用于描繪定位淋巴結(jié)及淋巴管的示蹤術(shù)方面的應(yīng)用。包括黑色素瘤、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、腸癌、睪丸癌、宮頸癌、卵巢癌、甲狀腺癌、肺癌、肝癌等惡性腫瘤；原發(fā)性及繼發(fā)性淋巴水腫；乳糜尿、乳糜腹水或乳糜胸等。附圖說(shuō)明圖1、異硫藍(lán)結(jié)構(gòu)式；圖2、皮下注射10min后異硫藍(lán)氯化鈉注射液各組淋巴結(jié)染色情況(n＝5)；圖3、皮下注射10min后異硫藍(lán)葡萄糖注射液各組淋巴結(jié)染色情況(n＝5)；圖4、注射腳掌病理切片：(A)空白腳掌；(B)196mmol/kg組；(C)938mmol/kg；(D)1503mmol/kg組。具體實(shí)施方式：實(shí)施例1：異硫藍(lán)注射液的制備1.1處方：1.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和氯化鈉，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于40℃攪拌吸附10min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為6.0，滲透壓約為278mmol/kg。實(shí)施例2：異硫藍(lán)注射液的制備2.1處方：2.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和氯化鈉，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于40℃攪拌吸附10min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為8.0，滲透壓約為346mmol/kg。實(shí)施例3：異硫藍(lán)注射液的制備3.1處方：3.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和氯化鈉，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于50℃攪拌吸附20min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為7.2，滲透壓約為307mmol/kg。實(shí)施例4：異硫藍(lán)注射液的制備4.1試驗(yàn)方法取KM小鼠15只(體重20±2g)，隨機(jī)分為3組，分別給予劑量為4mg/kg實(shí)施例1所制異硫藍(lán)注射液(278mmol/kg)、實(shí)施例2所制異硫藍(lán)注射液(346mmol/kg)、實(shí)施例3所制異硫藍(lán)氯化鈉注射液(307mmol/kg)，于給藥后10min處死小鼠取各級(jí)淋巴結(jié)，拍照并評(píng)分記錄。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下(0-10分)：0分-淋巴結(jié)顏色無(wú)改變；2分-可見(jiàn)淋巴結(jié)輕微藍(lán)染或呈輕微藍(lán)綠色半透明狀改變；4分-可見(jiàn)淋巴結(jié)輕度藍(lán)染或呈藍(lán)綠色半透明狀改變；6分-可見(jiàn)淋巴結(jié)中度藍(lán)染；8分-可見(jiàn)淋巴結(jié)明顯藍(lán)染；10分-可見(jiàn)整個(gè)淋巴結(jié)深度藍(lán)染，呈深藍(lán)色甚至黑色。染色只要達(dá)到4分以上即可判為淋巴示蹤陽(yáng)性。4.2試驗(yàn)結(jié)果由淋巴結(jié)藍(lán)染數(shù)量及藍(lán)染程度作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，實(shí)施例1、實(shí)施例2及實(shí)施例3各組淋巴結(jié)藍(lán)染效果無(wú)顯著差別。因此，pH在6.0-8.0范圍內(nèi)的變化對(duì)異硫藍(lán)淋巴攝取能力無(wú)影響。綜述所述，選擇最佳pH調(diào)節(jié)劑比例磷酸氫二鈉：磷酸二氫鉀＝0.66％：0.27％為下述實(shí)施例pH調(diào)節(jié)劑用量。實(shí)施例5：異硫藍(lán)注射液的制備5.1處方：5.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和氯化鈉，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于50℃攪拌吸附20min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為7.2，滲透壓約為938mmol/kg。實(shí)施例6：異硫藍(lán)注射液的制備6.1處方：6.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和氯化鈉，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于50℃攪拌吸附20min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為7.2，滲透壓約為1503mmol/kg。實(shí)施例7：異硫藍(lán)注射液的制備7.1處方：7.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和葡萄糖，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于60℃攪拌吸附30min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為7.2，滲透壓約為298mmol/kg。實(shí)施例8：異硫藍(lán)注射液的制備8.1處方：8.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和葡萄糖，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于60℃攪拌吸附30min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為7.2，滲透壓約為911mmol/kg。實(shí)施例9：異硫藍(lán)注射液的制備9.1處方：9.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀和葡萄糖，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于60℃攪拌吸附30min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為7.2，滲透壓約為1487mmol/kg。實(shí)施例10：異硫藍(lán)注射液的制備10.1處方：10.2制備工藝1)濃配：稱取處方量的磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀，加入處方量80％的注射用水，攪拌約15min 使溶解，再加入處方量藥物，攪拌約20min使溶解，投入0.1％針用活性炭，于60℃攪拌吸附30min。2)稀配：濃配液經(jīng)3μm炭棒過(guò)濾后轉(zhuǎn)至稀配罐中，沖洗并合并沖洗液。補(bǔ)加注射用水至稀配罐內(nèi)藥液體積達(dá)到規(guī)定量后，攪拌約10min。經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，檢驗(yàn)可見(jiàn)異物。3)滅菌：可見(jiàn)異物檢驗(yàn)合格的藥液充氮、灌封(5ml每支)。121℃滅菌15min。檢漏，燈檢。經(jīng)測(cè)定，所得注射液pH約為7.2，滲透壓約為196mmol/kg。實(shí)施例11：異硫藍(lán)注射液小鼠淋巴攝取研究11.1不同滲透壓淋巴示蹤能力考察1)試驗(yàn)方法取KM小鼠35只(體重20±2g)，隨機(jī)分為7組，分別給予劑量為4mg/kg實(shí)施例3所制異硫藍(lán)氯化鈉注射液(307mmol/kg)、實(shí)施例5所制異硫藍(lán)氯化鈉注射液(938mmol/kg)、實(shí)施例6所制異硫藍(lán)氯化鈉注射液(1503mmol/kg)、實(shí)施例7所制異硫藍(lán)葡萄糖注射液(298mmol/kg)、實(shí)施例8所制異硫藍(lán)葡萄糖注射液(911mmol/kg)、實(shí)施例9所制異硫藍(lán)葡萄糖注射液(1487mmol/kg)、實(shí)施例10所制異硫藍(lán)注射液(196mmol/kg)，于給藥后10min處死小鼠取各級(jí)淋巴結(jié)，拍照并評(píng)分記錄。2)試驗(yàn)結(jié)果(1)淋巴結(jié)檢出情況：不同滲透壓異硫藍(lán)示蹤劑小鼠淋巴結(jié)檢出情況見(jiàn)表1。小鼠淋巴結(jié)染色效果圖見(jiàn)圖2、圖3。由表中結(jié)果可以看出，在各組中一級(jí)淋巴結(jié)均可被100％檢測(cè)到；二級(jí)淋巴結(jié)中，滲透壓低組檢出率低，滲透壓高組檢出率高；三級(jí)淋巴結(jié)中，淋巴結(jié)檢出率隨滲透壓增高而提高這一現(xiàn)象則更加明顯。表1皮下注射10min后各級(jí)淋巴結(jié)檢出率(n＝5)樣品實(shí)施例10實(shí)施例3實(shí)施例5實(shí)施例6實(shí)施例7實(shí)施例8實(shí)施例9一級(jí)淋巴結(jié)100100100100100100100二級(jí)淋巴結(jié)408010010060100100三級(jí)淋巴結(jié)/2010010020100100/：未檢測(cè)到藍(lán)染淋巴結(jié)(2)淋巴結(jié)染色程度：不同滲透壓IB示蹤劑小鼠淋巴結(jié)染色效果評(píng)分匯總見(jiàn)表2。由結(jié)果可見(jiàn)看出，各組中一級(jí)淋巴結(jié)染色得分均>4分，即各示蹤劑示蹤效果均呈陽(yáng)性；二級(jí)淋巴結(jié)中，低滲組染色評(píng)分均低于4分，呈陰性藍(lán)染，其余各組染色得分均>4分，且隨高滲增高染色得分越高，染色效果越好；三級(jí)淋巴結(jié)中，低滲及等滲組得分均<4分，其余各高滲組染色得分>4分。由此可見(jiàn)，對(duì)于異硫藍(lán)注射液，隨著滲透壓的增加，淋巴結(jié)染色效果顯著提高， 表明淋巴結(jié)染色程度與異硫藍(lán)注射液滲透壓呈依賴關(guān)系。表2皮下注射10min后各級(jí)淋巴結(jié)染色評(píng)分情況(Mean±SD,n＝5)樣品實(shí)施例10實(shí)施例3實(shí)施例5實(shí)施例6實(shí)施例7實(shí)施例8實(shí)施例9一級(jí)淋巴結(jié)4.7±0.6**5.4±0.5**6.4±0.3*7.2±0.25.0±0.4△△5.8±0.4△7.0±0.4二級(jí)淋巴結(jié)3.1±0.1**4.2±0.3**5.4±0.4*6.2±0.54.0±0.1△△4.9±0.6△6.0±0.3三級(jí)淋巴結(jié)/2.2**4.4±0.2*5.0±0.42.0△△4.2±0.2△4.7±0.5與實(shí)施例4比較，**P<0.01，*P<0.5；與實(shí)施例7比較，**P<0.01，*P<0.5；/：未檢測(cè)到藍(lán)染淋巴結(jié)11.2不同滲透壓局部給藥刺激性考察盡管提高滲透壓可以增加異硫藍(lán)注射液淋巴示蹤效果，但是另一方面，提高滲透壓也會(huì)產(chǎn)生局部給藥刺激性。因此，考察不同滲透壓異硫藍(lán)注射液局部給藥部位組織病理學(xué)變化十分必要。1)試驗(yàn)方法KM小鼠隨機(jī)分為3組(n＝5)，分別于右后腳掌皮下注射實(shí)施例10、實(shí)施例5、實(shí)施例6、各組溶液，給藥劑量為4mg/kg。2d后，頸椎脫臼處死小鼠，取注射部位，固定于10％甲醛溶液中，并進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè)。2)試驗(yàn)結(jié)果不同滲透壓IB注射液注射部位病理切片如圖4所示。可以看出，196、938mmol/kg兩組局部給藥后，并沒(méi)有發(fā)生明顯組織學(xué)改變；當(dāng)滲透壓提高到1503mmol/kg時(shí)，注射腳掌產(chǎn)生炎癥、水腫等病理變化。該結(jié)果表明，當(dāng)IB滲透壓低于938mmol/kg時(shí)，局部皮下給藥是安全的，不會(huì)產(chǎn)生炎癥等刺激性反應(yīng)。因此，從安全性角度考慮，最終選擇2.0％氯化鈉或10.0％葡萄糖作為異硫藍(lán)注射液最佳滲透壓處方量。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3