針對h3n2犬流感病毒ha2蛋白的單克隆抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種針對H3N2犬流感病毒HA2蛋白的單克隆抗體，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。利用2010年分離的H3N2犬流感病毒江蘇分離株JS/10，接種10日齡SPF雞胚，收集血凝效價大于等于6的尿囊液，純化病毒接種MDCK細(xì)胞，皮內(nèi)多點(diǎn)注射接種小鼠，細(xì)胞融合后，經(jīng)三次ELISA檢測已生成細(xì)胞集落的細(xì)胞上清，篩選出抗H3亞型雜交瘤細(xì)胞株mAbD7，中和抗體效價達(dá)1:12800，識別抗原鑒定證實(shí)其針對保守的HA2蛋白，抗體亞類為IgG2b。本發(fā)明制備針對H3N2犬流感病毒株JS/10的保守的HA2蛋白單克隆抗體，為H3N2犬流感病毒感染的治療提供了重要的免疫制劑，具有潛在的應(yīng)用前景。
CCTCC No:C2014176
2014.09.18
【專利說明】針對H3N2犬流感病毒HA2蛋白的單克隆抗體

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及針對H3N2犬流感病毒HA2蛋白的單克隆抗體，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。標(biāo) 準(zhǔn)的雜交瘤技術(shù)，以一株H3N2犬流感病毒株JS/10為試驗(yàn)毒株，最終通過血凝抑制、中和試 驗(yàn)以及Westernblotting篩選得到針對保守蛋白HA2的單克隆抗體D7,為H3N2犬流感病毒 感染的治療提供重要的免疫制劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 雜交瘤技術(shù)的原理是利用聚乙二醇（PEG)為細(xì)胞融合劑，使免疫小鼠的脾細(xì)胞與 具有體外長期繁殖能力的小鼠骨髓瘤細(xì)胞融為一體，在HAT選擇性培養(yǎng)基的作用下，只讓 融合成功的雜交瘤細(xì)胞生長，經(jīng)過反復(fù)的免疫學(xué)檢測、篩選和單個細(xì)胞培養(yǎng)（克隆化），最 終獲得既能產(chǎn)生所需單克隆抗體，又能長期繁殖的雜交瘤細(xì)胞系。將這種雜交瘤細(xì)胞擴(kuò) 大培養(yǎng)，接種于小鼠腹腔，在小鼠腹腔積液中即可得到高效價的單克隆抗體。而具有中和 活性的單克隆抗體，可通過阻止病毒吸附或病毒與宿主細(xì)胞間的融合，發(fā)揮抗病毒感染作 用。有研究表明，具有中和活性的單克隆抗體能有效預(yù)防流感病毒感染[SkehelILWiley DC.Receptor binding and membrane fusion in virus entry: the influenza hemagglutinin. Annu Rev Biochem2000, 69:531-569. ]〇
[0003] 流感病毒屬于正黏病毒科的一種單鏈負(fù)股RNA病毒，分為A、B、C三個型，其中A型 流感病毒是一種具有高度傳染性的病原體，可感染禽類和多種哺乳動物宿主。犬流感病毒 (canine influenza virus, CIV)是一種新發(fā)現(xiàn)的能在犬中引起流行的高度接觸性呼吸道 傳染病。犬流感病毒不僅對犬類的生存和健康帶來嚴(yán)重的危害，同時也給人類健康帶來巨 大的風(fēng)險。一方面，流感病毒通過在犬等哺乳動物體內(nèi)的適應(yīng)，可能會更容易獲得感染人的 能力，犬是人類最親密的伴侶動物，與人密切接觸機(jī)會較多，犬有可能會作為中間宿主將流 感病毒傳播給人類；另一方面，研究表明多種亞型的流感病毒能夠感染犬類，當(dāng)犬類感染兩 種以上的流感病毒時，流感病毒可能會在犬體內(nèi)經(jīng)過基因重配形成能夠感染人的重組流感 病毒。有學(xué)者推測，犬可能成為下一個引起大流行的新型流感病毒"混合器"。因此控制犬 流感病毒的傳播和流行非常必要，在公共衛(wèi)生上具有重要意義。
[0004] 自從2004年馬源H3N8亞型犬流感在美國爆發(fā)，引起人們極大的關(guān)注，改變了 此前人們認(rèn)為犬對流感病毒具有抵抗力的觀點(diǎn)。2007年，H3N2亞型犬流感病毒在韓國 首次報道，隨后，在中國陸續(xù)分離到此亞型的犬流感病毒。目前H3N2亞型犬流感病毒 已經(jīng)成為中國犬群中流行的主要亞型[Zeng XJ，Lin Y，Zhao YB et al, Experimental infection of dogs with H3N2canine influenza virus from China. Epidemiol Infect2013, 141:2595-2603.]。
[0005] 疫苗接種是預(yù)防和控制流感病毒感染的主要措施，目前對CIV疫苗研究已取得一 些進(jìn)展。2009年，美國農(nóng)業(yè)部門（USDA)批準(zhǔn)的H3N8亞型CIV疫苗上市，有效減少了病毒 的傳播[Deshpande MS, Jirjis FFj Tubbs AL, et al. Evaluation of the efficacy of a canine influenza virus (H3N8)vaccine in dogs following experimental challenge. Vet Ther2009, 10:103-112.]。2012 年，韓國針對 H3N2CIV 的疫苗也已授權(quán)[Cho YS, Ha GW, Oh JS, et al. Canine influenza virus and vaccine therefore. United States Patent2012, Patent No:US8, 246, 962B2.]。盡管如此，疫苗接種仍有一定的局限性，在幼 年、老年及免疫力低下的犬群中疫苗接種有相當(dāng)大的風(fēng)險。而有中和活性的單克隆抗體，通 過抑制病毒對宿主細(xì)胞的吸附或復(fù)制過程而中和病毒；還可能參與體內(nèi)其他的抗病毒保護(hù) 機(jī)制如免疫調(diào)理作用、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒（ADCC)作用等，從而激活患犬體內(nèi)的 細(xì)胞免疫，達(dá)到清除病毒的作用。目前為止，還沒有針對犬流感病毒制備單克隆抗體進(jìn)行治 療的報道。
[0006] 血凝素（HA)是流感病毒的主要抗原蛋白，參與病毒受體結(jié)合以及病毒入侵靶細(xì) 胞。HA分為兩個亞單位HAl和HA2,流感病毒只有當(dāng)HA裂解為HAl和HA2時才能發(fā)揮病毒 感染作用，因此制備針對HA抗原位點(diǎn)的具有中和活性的單克隆抗體一直被作為評價流感 病毒保護(hù)性的標(biāo)準(zhǔn)。然而，由于HAl氨基酸序列的高度變異性，針對HAl的單抗中和活性有 限[de Jong JC, Palache AM, Beyer ff, et al. Haemagglutination-inhibiting antibody to influenza virus. Dev Biol (Basel) 2003, 115:63-73.];而 HA2 位于 HA 的莖部，是所有 亞型流感病毒HA的保守區(qū)域，對病毒的黏附以及病毒入侵宿主細(xì)胞膜起到關(guān)鍵作用。本發(fā) 明制備針對H3N2犬流感病毒株JS/10的保守的HA2蛋白單克隆抗體，為H3N2犬流感病毒 感染的治療提供了重要的免疫制劑，具有潛在的應(yīng)用前景。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 技術(shù)問題
[0008] 本發(fā)明的目的在于制備針對H3N2犬流感病毒JS/10株的HA2蛋白單克隆抗體，為 H3N2犬流感病毒感染的治療提供重要的免疫制劑。
[0009] 技術(shù)方案
[0010] 本發(fā)明將H3N2犬流感病毒江蘇分離株JS/10擴(kuò)增純化后，用標(biāo)準(zhǔn)的雜交瘤技術(shù)獲 得針對該毒株的mAbs，通過血凝抑制試驗(yàn)、細(xì)胞中和試驗(yàn)以及分段表達(dá)HA蛋白后Western blotting分析，最終鑒定獲得針對HA2保守蛋白的mAb。步驟包括：
[0011] 1.通過雞胚接種擴(kuò)增H3N2犬流感病毒JS/10株，并采用差速離心和蔗糖密度梯度 超速離心純化病毒；
[0012] 2.純化病毒接種犬腎細(xì)胞（MDCK)，培養(yǎng)后測定半數(shù)組織細(xì)胞感染量（TCID5tl);
[0013] 3.采用雜交瘤技術(shù)制備H3N2犬流感病毒單克隆抗體以及制備腹水；
[0014] 4.單克隆抗體特性分析，包括血凝抑制抗體效價、中和抗體效價測定，以及抗原特 性鑒定等；
[0015] 5.單抗對3株流感病毒株的動物交叉保護(hù)試驗(yàn)。
[0016] 本發(fā)明提供了一種分泌針對H3N2犬流感病毒HA2蛋白的單克隆抗體的雜交瘤細(xì) 胞，該雜交瘤細(xì)胞株mAb D7于2014年9月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中 國武漢武漢大學(xué)，保藏編號為CCTCC No :C2014176,分類命名：雜交瘤細(xì)胞株mAb D7。
[0017] 用所述雜交瘤細(xì)胞株mAb D7制備的單克隆抗體，可以在制備預(yù)防或控制流感病毒 的藥物或免疫制劑中應(yīng)用，或者在制備預(yù)防或控制流感病毒的藥物或免疫制劑組合物中得 到應(yīng)用。
[0018] 有益效果
[0019] 本發(fā)明針對H3N2犬流感病毒HA2蛋白的單克隆抗體制備方法，為防控該病毒引起 的犬群感染，以及應(yīng)對其對人類健康和公共衛(wèi)生構(gòu)成的潛在威脅奠定基礎(chǔ)。在本發(fā)明中，術(shù) 語"半數(shù)組織細(xì)胞感染量（TCID 5tl) "是指能夠引起半數(shù)組織細(xì)胞感染的病毒量，用來判定病 毒的毒力。
[0020] 在本發(fā)明中，術(shù)語"雜交瘤技術(shù)"是指骨髓瘤細(xì)胞與免疫動物脾細(xì)胞融合，形成能 分泌針對免疫抗原的特異性抗體即單克隆抗體的技術(shù)。該技術(shù)生產(chǎn)的單克隆抗體具有高特 異性、高純度、重復(fù)性好、敏感性強(qiáng)、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。
[0021] 本發(fā)明有以下創(chuàng)新點(diǎn)：
[0022] 1.采用注射單克隆抗體的方法預(yù)防和控制流感病毒的感染，具有特異性強(qiáng)、效價 高等優(yōu)點(diǎn)。與傳統(tǒng)的疫苗接種手段相比，取代了后者的不易大范圍推廣以及對犬群接種對 象的局限性的缺點(diǎn)，降低了風(fēng)險性，提高了安全性；
[0023] 2.所獲單抗具有中和活性，中和效價高達(dá)1 :12800,可阻止病毒吸附或病毒與宿 主細(xì)胞間的融合，從而有效預(yù)防流感病毒的感染；
[0024] 3.本發(fā)明所獲單抗針對HA2蛋白，而針對HA抗原位點(diǎn)的具有中和活性的單克隆抗 體一直被作為評價流感病毒保護(hù)性的標(biāo)準(zhǔn)。
[0025] 由于HAl氨基酸序列的高度變異性，針對HAl的單抗中和活性有限，而HA2位于HA 的莖部，是所有亞型流感病毒HA的保守區(qū)域，并且對病毒的吸附以及病毒入侵宿主細(xì)胞膜 起到關(guān)鍵作用，因此本發(fā)明制備的針對H3N2犬流感病毒HA2蛋白的單克隆抗體可對H3N2 亞型不同犬流感病毒株，甚至其他流感病毒株均具有良好的保護(hù)效果，具有潛在的應(yīng)用前 旦 -5^ 〇

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1 :利用差速離心及蔗糖密度梯度離心法純化的病毒電鏡學(xué)觀察，圖片放大倍 數(shù)為 130000。
[0027] 圖2 :H3N2犬流感病毒株感染MDCK后的細(xì)胞病變情況
[0028] A圖為病毒感染組，可見細(xì)胞出現(xiàn)明顯的空泡、拉絲結(jié)網(wǎng)現(xiàn)象；B圖為對照組，即未 接毒的MDCK細(xì)胞，細(xì)胞菱形且排列較整齊。
[0029] 圖3 :mAbD7的抗原鑒定，即D7對重組蛋白HA、HA1和HA2的Western Blotting結(jié) 果，1-4泳道分別為蛋白Marker、D7針對HA蛋白、D7針對HAl蛋白和D7針對HA2蛋白。
[0030] 圖4 :mAb D7預(yù)處理小鼠感染H3N2犬流感病毒株JS/10 (A)和⑶/12 (B)以及豬流 感病毒株SD/05(C)后的體重變化。結(jié)果用體重百分比表示，*，P〈0.05和**，P〈0.01，分別 指mAbD7處理組的小鼠體重相比病毒感染組差異顯著和極顯著；#，P〈0.05,指mAb D7處理 組的小鼠體重相比PBS對照組差異顯著。
[0031] 圖5 :mAb D7預(yù)處理小鼠感染H3N2犬流感病毒株JS/10 (A)和⑶/12 (B)以及豬流 感病毒株SD/05 (C)后的肺臟病毒載量檢測。結(jié)果以IoglO為底數(shù)的每克肺臟組織中RNA 病毒拷貝數(shù)表示。*，P〈〇. 05和**，P〈0. 01，分別指單抗D7組相比于其他兩組差異顯著和極 顯著。
[0032] 圖6 :mAb D7預(yù)處理小鼠感染H3N2犬流感病毒株JS/10和⑶/12以及豬流感病 毒株SD/05后的肺臟病變計(jì)分?；诜闻K病理組織學(xué)變化給予0-3分的計(jì)分。*，P〈0. 05 和**，P〈0.01，分別指mAb D7處理組的小鼠肺臟病變計(jì)分相比病毒感染組差異顯著和極顯 著。
[0033] 生物保藏
[0034] 雜交瘤細(xì)胞株mAb D7于2014年9月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址： 中國武漢武漢大學(xué)，保藏編號為CCTCC N〇:C2014176,分類命名：雜交瘤細(xì)胞株mAb D7。

【具體實(shí)施方式】
[0035] 下面結(jié)合具體實(shí)施例。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常采用常規(guī)條件， 例如《分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊》（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) (Sambrook等人）中所述的條件，或按照制造廠商所建議的方法。而標(biāo)準(zhǔn)的雜交瘤技術(shù)，則 參照[Vareckova E, Betakova T, Mucha V，et al. Preparation of monoclonal antibodies for the diagnosis of influenza A infection using different immunization protocols. J Immunol Methodsl995, 180:107-116] 〇
[0036] (一）H3N2犬流感病毒HA2蛋白的單克隆抗體的制備
[0037] 1 ?標(biāo)準(zhǔn)毒株的選擇
[0038] 本發(fā)明中所使用的標(biāo)準(zhǔn)毒株為犬流感病毒病毒株A/Canine/ Jiangsu/06/2010 (H3N2)(簡稱 JS/10)，其 GenBank 序列號從 JN247615 到 JN247623。毒株 及其序列參照網(wǎng)址：http://www. ncbi. nlm. nih. gov/nuccore。
[0039] 2. H3N2犬流感病毒JS/10株的擴(kuò)增與純化
[0040] 將病毒株JS/10的懸液接種10日齡SPF雞胚尿囊腔，每個雞胚接種0. 2mL。無菌 收取接種病毒后48-96h雞胚尿囊液，選擇血凝效價大于等于26的尿囊液；分別采用3000， 5000和8000rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行差速離心，使流感病毒充分釋放出來，再用20 %，40 %及60 %的 蔗糖密度梯度離心，使病毒沉降后，PBS重懸洗滌一次后，沉降的病毒顆粒用PBS重懸。純 化的病毒電鏡結(jié)果見圖1。
[0041] 3. JS/10細(xì)胞毒的獲得以及TCID5tl的測定
[0042] JS/10株雞胚尿囊液接種MDCK細(xì)胞，感染48_96h后，當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)明顯的空泡、拉絲 結(jié)網(wǎng)細(xì)胞病變現(xiàn)象時，收集細(xì)胞毒，細(xì)胞病變（CPE)見圖2。
[0043] TCID5tl試驗(yàn)：感染前l(fā)d，96孔細(xì)胞板鋪上單層MDCK細(xì)胞。第二天，JS/10株尿囊 液100 y L接種MDCK細(xì)胞，橫向依次倍比稀釋，倒數(shù)第二列為陽性對照，最后一列為空白對 照，每個稀釋度3個重復(fù)。每日觀察CPE，記錄各稀釋度出現(xiàn)細(xì)胞病變的孔數(shù)。病毒滴度表 示為 TCID5Q/mL，測得 JS/10 毒株毒價為 10713TCID5Q/mL。
[0044] 4. H3N2犬流感病毒單抗的制備
[0045] 1)動物免疫
[0046] 純化的病毒JS/10用PBS稀釋后接種6周齡BALB/c小鼠，一免加弗氏完全佐劑 (Sigma)皮內(nèi)多點(diǎn)注射200 iiL，其中含有IOOiig的病毒。二免和三免采用弗氏不完全佐劑 (Sigma)皮內(nèi)多點(diǎn)注射，免疫劑量與一免相同。三免兩周后眶下叢毛細(xì)管采血。ELISA檢測 血清抗體效價達(dá)到1 :25600。血清抗體效價達(dá)到峰值后進(jìn)行最后一次加強(qiáng)免疫，即腹腔注 射PBS稀釋的100 ii g純化病毒200 ii L，3d取小鼠脾臟，進(jìn)行細(xì)胞融合。
[0047] 2)飼養(yǎng)細(xì)胞的制備與細(xì)胞融合
[0048] 飼養(yǎng)細(xì)胞的制備：將1只BALB/c小鼠處死，體表酒精消毒。無菌剪開腹部皮膚，露 出腹膜，用無菌注射器吸取SmLHAT完全培養(yǎng)基（Sigma)注入腹腔，用酒精棉球輕輕按壓腹 腔數(shù)次，吸出培養(yǎng)基，置于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，計(jì)數(shù)后補(bǔ)加HAT完全培養(yǎng)基，使細(xì)胞密度為2 X IO5 個/mL，在融合前12h，每孔100 ii L加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。
[0049] 細(xì)胞融合：無菌取脾，制備免疫脾細(xì)胞，與對數(shù)生長期的sp2/0細(xì)胞按1:6的比例 混合，IOOOrpm離心lOmin，棄上清。用手掌輕擊離心瓶底，使沉淀的細(xì)胞打散。將離心瓶底 部放入40°C水浴中，邊旋轉(zhuǎn)邊加入融合用的PEG50001mL，在Imin內(nèi)加完，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)同時加 入無血清1640培養(yǎng)基15mL，在90s內(nèi)加完，由慢到快，前5s加lmL。室溫靜置IOmin后， IOOOrpm離心5min，棄上清，將HAT選擇培養(yǎng)液加入到細(xì)胞融合物中，懸浮細(xì)胞，分配到已有 飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，置于37°C、5% CO2的溫箱中培養(yǎng)。細(xì)胞融合后5d，用HAT培 養(yǎng)基半換液，IOd后用HT培養(yǎng)基（Sigma)全換液，篩選獲得生長良好的雜交瘤細(xì)胞。
[0050] 3)亞克隆與腹水的制備
[0051] 亞克?。河邢尴♂尫ㄟM(jìn)行。每次亞克隆均通過ELISA方法檢測上清效價，三次亞 克隆均陽性的單個克隆擴(kuò)大培養(yǎng)并及時凍存。通過血凝抑制試驗(yàn)篩選得到7株可分泌針對 JS/10病毒株的特異性單抗的雜交瘤細(xì)胞株。
[0052] 腹水制備：10周齡的經(jīng)產(chǎn)母鼠預(yù)先腹腔注射液體石蠟，一周后腹腔注射擴(kuò)大培養(yǎng) 的PBS稀釋的雜交瘤細(xì)胞，一周后觀察母鼠腹部及其精神狀態(tài)，待其腹部隆起明顯時，收集 腹水，離心后取上清56°C水浴30min滅活，-20°C冷凍保存。
[0053] (二）針對H3N2犬流感病毒JS/10株的單克隆抗體的鑒定
[0054] 1 ?血凝抑制（HI)效價測定
[0055] 將腹水用PBS稀釋5倍后做血凝抑制試驗(yàn)。
[0056] 首先進(jìn)行血凝試驗(yàn)，以確定H3N2犬流感病毒JS/10株尿囊液的血凝效價。首先在 一次性血凝板的第一排的1-12孔加入50 ii L PBS，其次在第一孔加入50 ii L病毒尿囊液，混 勻后吸50 ii L到第3孔，依次倍比稀釋直到第10孔，混勻后棄去50 iiL。最后兩孔（11、12) 為紅細(xì)胞對照。接著每孔加入50iiLl%紅細(xì)胞輕輕搖動混勻。手動震蕩，37°C靜置30min 后觀察結(jié)果。以50%的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液的最高稀釋度作為該病毒液的紅細(xì)胞凝 集效價。JS/10株尿囊液的血凝效價為2 6。
[0057] 做血凝抑制試驗(yàn)前，首先用PBS稀釋病毒尿囊液以獲得4個血凝單位的犬流感病 毒。血凝抑制試驗(yàn)的步驟如下：
[0058] (1)在血凝版的1-12孔加入25 ii L PBS，最后兩孔加入50 ii L分別作為陽性與陰 性對照。
[0059] (2)第一孔加入待撿已稀釋的腹水25 L，混勻后吸25 L至第2孔，倍比稀釋至 第10孔，混勻后棄25 iiL。
[0060] (3)在1-10孔，每孔加稀釋好的25 ii L4個血凝單位的病毒懸液，37°C靜置20min， 讓病毒與腹水，即抗原抗體充分反應(yīng)。
[0061] (4)將1 %紅細(xì)胞輕輕搖動混勻，在1-12孔中每孔加入50 ii L。
[0062] (5)手動震蕩Imin后，37°C靜置30min后觀察結(jié)果。
[0063] 能將病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全抑制的血清的最高稀釋倍數(shù)即為該稀釋腹水的 紅細(xì)胞凝集抑制效價。7株單抗的HI效價見表1。
[0064] 2?細(xì)胞中和效價測定
[0065] 將5倍稀釋的腹水作倍比稀釋（具體方法是在96孔板中先加入50 y L營養(yǎng) 液DMEM，再加50 L已稀釋的腹水，混勻后吸50 L至下一孔直至倒數(shù)第三孔），每支單 抗的腹水做3個重復(fù)。然后各孔內(nèi)加入50iiL稀釋至200TCID5(I的JS/10細(xì)胞毒（毒價 為10 713TCID5(l/mL)37°C孵育Ih后，吸出每孔液體，加至長滿單層的MDCK細(xì)胞孔中。倒 數(shù)第二列為陽性對照，即細(xì)胞僅與病毒作用；最后一列為空白對照，即正常的MDCK細(xì)胞。 Reed-Muench法計(jì)算細(xì)胞中和效價。同時，將7株獲得的H3N2犬流感病毒單抗用小鼠單克 隆抗體Ig類/亞類鑒定ELISA試劑盒（Tiangen公司）對7株單抗亞類進(jìn)行鑒定。HI效價 和中和效價及其抗體亞類見表1。單抗株D7中和效價高達(dá)I :12800。
[0066] 表17株針對H3N2犬流感病毒JS/10株的單抗特性
[0067]

【權(quán)利要求】
1. 一種分泌針對H3N2犬流感病毒HA2蛋白的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，該雜交瘤細(xì)胞 株mAb D7于2014年9月18日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國武漢武漢大 學(xué)，保藏編號為CCTCC No :C2014176,分類命名：雜交瘤細(xì)胞株mAb D7。
2. 用權(quán)利要求1所述雜交瘤細(xì)胞株mAb D7制備的單克隆抗體。
3. 權(quán)利要求2所述單克隆抗體的應(yīng)用。
4. 權(quán)利要求2所述單克隆抗體在制備預(yù)防或控制流感病毒的藥物或免疫制劑中的應(yīng) 用。
5. 權(quán)利要求2所述單克隆抗體在制備預(yù)防或控制流感病毒的藥物或免疫制劑組合物 中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P31/16GK104293739SQ201410535918
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月11日
【發(fā)明者】劉永杰, 謝星, 龐茂達(dá), 林焱, 趙艷兵, 梁珊, 陸承平 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)