人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，將以上五種堿基應用于腫瘤的治療領域，制成口服制劑、注射劑、緩釋劑或靶向制劑，經(jīng)過標準品抗腫瘤作用對照證明：參與人體代謝的五種正常堿基，在體內(nèi)、外達到一定濃度時，具有不同程度的誘導腫瘤細胞凋亡和抗腫瘤血管生成作用；本發(fā)明的優(yōu)點在于：五種堿基與其它抗腫瘤藥相比，具有廣譜、低毒的抗腫瘤作用，可用于胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌和生殖系統(tǒng)等惡性腫瘤的化學治療，抗腫瘤作用明顯，常規(guī)用量無骨髓抑制和重要臟器損害，與正常核苷相比其抗腫瘤作用增強。
【專利說明】人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用
[0001]本申請為申請?zhí)?011103613136、申請日2011年11月15日、發(fā)明名稱“人體五種
正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用”的分案申請。
【技術領域】
[0002]本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物，具體地說是人體代謝的五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，屬于腫瘤藥物領域。
【背景技術】
[0003]人正常堿基包括腺嘌呤(Adenine ) CAS =73-24-5,分子式:C5H5N5，分子量:135.13 ;鳥嘌呤(Guanine )CAS:73-40-5,分子式:C5H5N50,分子量:151.13 ；胞嘧啶(Cytosine) CAS:71-30_7，分子式:(C4H5N30)，分子量:111.11 ;胸腺嘧啶(Thymin) CAS:65-71-4，分子式:C5H6N202,分子量:126.11 ;尿嘧啶(Uracil) CAS =66-22-8,分子式:C4H4N202，分子量:112.09。
[0004]堿基在DNA和RNA中多以一磷酸核苷的形式存在，但是其配對關系的形成主要取決于堿基。人正常的堿基在核酸類物質(zhì)消化吸收過程中可以產(chǎn)生，也是核酸類物質(zhì)補救合成的重要原料。但是正常的核苷酸代謝可以不經(jīng)過堿基出現(xiàn)直接形成代謝廢物排出體外，如:腺苷一次黃嘌呤核苷一黃嘌呤核苷一尿酸排出體外。
[0005]以上五種堿基均可以在體外用不同方法得到，是重要的藥物和保健品中間體。其中腺嘌呤，又稱維生素 B4，在體內(nèi)參與RNA和DNA合成。當白細胞缺乏時，它能促進白細胞增生，一般用藥2~4周，白細胞數(shù)目可增加，是腫瘤化療病人白細胞降低時用于升高白細胞的藥物。人體五種堿基之一的腺嘌呤因為能夠參入DNA和RNA等核酸的合成，能夠在合成ATP等物質(zhì)中其重要作用，目前腺嘌呤，又稱維生素B4，可用于腫瘤病人化療等所致的白細胞下降的治療。體外可用于血液的保存。
[0006]目前，在學術界中普遍認可的治療腫瘤理論是:通過在正常堿基上添加不同元素或取代基，形成正常堿基類似物來阻滯細胞DNA或RNA的合成，從而抑制腫瘤的擴散。例如，名稱為“協(xié)同抗癌組合物”、專利號為“CN200480036362.0”的專利申請，公開了使用抗代謝堿基類似物作為抗腫瘤的成分，抗腫瘤抗代謝堿基類似物通過抑制細胞核酸合成酶，抑制或預防癌癥的生長以及干擾細胞核酸合成。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于，提供了人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，這五種堿基分別是腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶；將上述五種堿基制成口服制劑、注射劑、緩釋劑或靶向制劑，抗治腫瘤效果明顯，且多種堿基組合作為治療腫瘤的藥物成分使用，較單獨應用能夠達到明顯提高抗腫瘤效果，減少毒副作用和延緩耐藥性發(fā)生的目的。
[0008]本發(fā)明的技術方案為:人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，所述的堿基包括:腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶。
[0009]優(yōu)選地，所述的堿基為腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶中的一種或多種；
優(yōu)選地，所述的堿基為鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿嘧啶中的一種或兩種與腺嘌呤的組合。
[0010]所述的藥物為口服片劑、注射劑或緩釋劑。
[0011]所述的口服片劑的制備方法為:將所述的堿基加入不同輔料如淀粉，堿基和輔料的重量比例為1:1，制成口服片劑，所述的堿基總含量為10-30mg/片，片劑的重量大小例如可以是lg、2g或5g等，對其治療和使用不會產(chǎn)生影響；
所述的注射劑的制備方法為:將所述的堿基溶解于濃度為5-25mg/mL的磷酸緩沖溶液，制成堿基總濃度為5-25mg/mL的注射劑，每只注射劑體積為2_10mL ；
所述的緩釋劑的制備方法為:用藥物脂質(zhì)體、微囊或膠束釋藥系統(tǒng)將所述的堿基制成5-25mg/mL緩釋劑，然后將緩釋劑做成注射劑。
[0012]進一步地，上述各堿基組合的摩爾數(shù)相同。
[0013]所述的腫瘤包括胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、白血病、生殖系統(tǒng)腫瘤等多種常見惡性腫瘤。
[0014]通過研究發(fā)現(xiàn):鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶抗腫瘤作用低于腺嘌呤，因腺嘌呤的副作用很小可與其它堿基組合作為抗腫瘤藥。不同的腺嘌呤組合用藥比單一用藥血液中的單一藥物濃度降低，因而毒副作用下降。同時多種藥組合用藥可延緩腫瘤耐藥性的發(fā)生。通過組合用藥，能夠降低各成分單一用藥時的用藥量，而每種具體核苷的絕對濃度明顯下降，藥物對機體的毒副作用就下降；同時，二種或多種化療藥物組合用藥可大大降低耐藥性的發(fā)生。將腺苷與其它人正常堿基組合后，用在制備治療上述腫瘤的藥物中，可加輔料制成口服制劑或者加緩沖鹽等增加其溶解度制成注射劑，進行注射使用；注射劑可以是常規(guī)注射劑，也可是各種類型的緩釋注射劑。
[0015]不同腫瘤有不同的核酸代謝與組成特點，對不同腫瘤細胞每種堿基有不同的抑制強度，但腺嘌呤的抗腫瘤作用最強，體外實驗當濃度達到0.3mg/mL時，72小時腫瘤抑制率在90%以上。單一腺嘌呤治療腫瘤瘤體大小的30%完全緩解，有效率在93.0%以上。
[0016]使用劑量低，為0.001~0.05mmol/Kg/天，肌注或靜脈點滴；口服給藥可增加藥量
0.5-1.5 倍。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)點在于:
1、腺嘌呤與其它人正常堿基組合用于制備治療胃癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、生殖系統(tǒng)腫瘤等多種常見惡性腫瘤的藥物，抗腫瘤效果明顯，具有高效、廣譜、低毒的特點；
2、腺嘌呤與其它人正常堿基組合的抗腫瘤作用明顯高于各類核苷及其組合；
3、腺嘌呤與其它 人正常堿基組合用藥比單一用藥血液中的單一藥物濃度降低，從而毒副作用降低；
4、腺嘌呤與其它人正常堿基組合用藥可延緩腫瘤耐藥性的發(fā)生。
【具體實施方式】[0018]以下對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0019]實施例1
不同濃度的腺嘌呤與5-FU體外抑瘤對照實驗。
[0020]一、試驗方法
將人宮頸癌Hela腫瘤細胞(中國科學院上海細胞所提供)，用含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，取對數(shù)生長期的細胞，用0.25%胰蛋白酶消化后以3X IO3個/孔接種于96孔板,置于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時,每組設8個復孔,試驗組分別設復孔藥物濃度為 0.005,0.01,0.02,0.04,0.08,0.16,0.32,0.64mg/mL 共 8 個總濃度，培養(yǎng)液每孔200 μ L，對照組的5-FU與試驗組濃度相同，用無血清培養(yǎng)基稀釋，0.22 μ m的無菌微孔濾膜過濾。在擬定的測量時間48小時，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)并拍照，然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時，終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)的上清液，每孔加入150 μ L DMS0，震蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解后，以自動酶標儀(Thermo，型號MULTISKAN MK3)測量570mn處吸光度。每一板每組設8個復孔，每個實驗重復3次，表1中數(shù)據(jù)為三次實驗的平均數(shù)。
[0021]腫瘤細胞生長抑制率計算公式如下:
腫瘤細胞存活率(%)=加藥孔的實際OD值/陰性對照孔的OD值；
腫瘤細胞生長抑制率(%)=100% —細胞存活率。
[0022]表1:腺嘌呤對Hela細胞的48小時抑制率(％)
藥物濃度 0,005 0.01 0.02 0.04 0.08 0.16 0,32.0,64 Adenine 6M 12 28 I 33 51 63 75 89 5-FU 7.5 13 30 32 48 60` 77 90
其中:Adenine為腺嘌呤，5-FU為5-氟尿嘧啶。
[0023]二、結(jié)果與分析
經(jīng)計算腺嘌呤與5-FU在0.005至0.64濃度范圍內(nèi)48小時對Hela細胞的抑制率無統(tǒng)計學差異0°>0.5);腺嘌呤IC50為70ug/mL左右。
[0024]實施例2
五種人正常堿基的體外抑瘤實驗。
[0025]一、試驗方法
將人肺癌SPC腫瘤細胞(中國科學院上海細胞所提供)，用含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，取對數(shù)生長期的細胞，用0.25%胰蛋白酶消化后以3 X IO3個/孔接種于96孔板,置于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時,每組設8個復孔,試驗組加入五種堿基,五種堿基及對照組5-FU的每個復孔藥物濃度為0.5mg/mL,培養(yǎng)液每孔200 yL,0.22 μ m的無菌微孔濾膜過濾。在擬定的測量時間48小時，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)并拍照，然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時，終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)的上清液，每孔加入150 μ L DMS0，震蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解后，以自動酶標儀(Thermo，型號MULTISKAN MK3)測量570mn處吸光度。每一板每組設8個復孔，每個實驗重復3次，表2中數(shù)據(jù)為三次實驗的平均數(shù)。
[0026]腫瘤細胞生長抑制率計算公式如下:
腫瘤細胞存活率(%)=加藥孔的實際OD值/陰性對照孔的OD值；
腫瘤細胞生長抑制率(%)=100% —細胞存活率。
[0027]表2:人正常五種堿基對人肺癌SPC腫瘤細胞48、72小時抑制率(％)
【權(quán)利要求】
1.人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，所述五種堿基包括腺嘌呤、鳥嘌呤。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，其中，所述堿基為腺嘌呤或/和鳥嘌呤。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，其中，所述腫瘤為肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、食管癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、生殖系統(tǒng)腫瘤或膠質(zhì)瘤。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，其中所述藥物為口服片劑、注射劑、緩釋劑或靶向制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，所述口服片劑的制備方法是將所述的堿基加入輔料中，堿基和輔料的重量比例為1:1，制成堿基含量為10-30mg/片口服片劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，所述注射劑的制備方法為將所述的堿基直接溶解于磷酸緩沖溶液中，制成堿基總濃度為5-25mg/mL的注射劑，每只注射劑體積為2-10mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求4 所述的人體五種正常堿基在制備治療腫瘤藥物中的應用，所述緩釋劑的制備方法為:用藥物脂質(zhì)體、微囊或膠束釋藥系統(tǒng)將所述的堿基制成緩釋劑，然后將緩釋劑做成注射劑。
【文檔編號】A61K31/52GK103720693SQ201310713021
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月15日
【發(fā)明者】張始狀, 程鑫, 高志琴, 韓明, 趙榮榮, 趙瑤 申請人:張始狀