一種安腎丸的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種安腎丸的制備方法,由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、茯苓96g、鹽炙蒺藜96g、粉萆薢96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥制成,采用超臨界萃取萃取制備而成,使得含量有很大提高,服用量減少,本發(fā)明還提供了安腎丸在制備抑制人大細(xì)胞肺癌NCI-H460細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】一種安腎丸的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】,具體涉及一種安腎丸的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]安腎丸記載于衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-0275-90,處方為甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、茯苓96g、鹽炙蒺藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g,以上十二味,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,即得。能補(bǔ)腎散寒。用于腎不納氣,濕寒侵襲引起的夢遺滑精,腎囊濕冷,遺淋白濁,臍腹作痛,精神倦怠,健忘失眠,腰腿酸痛,頭暈耳鳴二便不利。 [0003]現(xiàn)有技術(shù)中,尚未有安腎丸在提取制備方面采用超臨界技術(shù)的報(bào)道,而采用打粉的方法,工藝粗糙、落后,雜質(zhì)多,導(dǎo)致患者用量過大,不方便服用,嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]發(fā)明目的:為了解決上述問題,本發(fā)明的目的在于提供一種安腎丸的制備方法。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種安腎丸在制備抑制人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]一種安腎丸的制備方法,由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥制成,所述的方法由下列步驟組成:取甘草炙巴戟天96g、酒炎肉灰蓉96g、鹽炎補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g,加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%,萃取壓力15-30MPa,溫度30-500C,CO2流量l-3ml/g生藥.π?η,萃取時(shí)間150_180min,得超臨界萃取物,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,即得500g,100粒6g。
[0008]上述一種安腎丸的制備方法,所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0009]上述一種安腎丸的制備方法,所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C,CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時(shí)間160min。
[0010]上述一種安腎丸在制備抑制人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用,安腎丸由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲考鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥制成,制備方法由下列步驟組成:取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g,加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%,萃取壓力15-30MPa,溫度30_50°C,CO2流量l_3ml/g生藥.π?η,萃取時(shí)間150-180min,得超臨界萃取物,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,即得500g,100粒6g。
[0011]上述安腎丸在制備抑制人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用,安腎丸制備方法中所述C02超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0012]上述安腎丸在制備抑制人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用,安腎丸制備方法中所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C,C02流量2ml/g生藥.min,萃取時(shí)間160min。
[0013]現(xiàn)有技術(shù)中,按本處方的量,安腎丸能制得1000g,每100粒6g,每次6g,一日3次,采用本發(fā)明處方制備成的安腎丸500g,也是每100粒6g,但每丸含有的藥材量是原來的2倍,因此每次3g,一日3次,在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下通過實(shí)施例形式,對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明,但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例,凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0015]實(shí)施例1
[0016]取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g加入到C02超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%,萃取壓力15MPa,溫度30°C,C02流量lml/g生藥.π?η,萃取時(shí)間150min,得超臨界萃取物,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,即得500g,100粒6g。
[0017]實(shí)施例2
[0018]取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%,萃取壓力30MPa,溫度50°C,CO2流量3ml/g生藥.π?η,萃取時(shí)間180min,得超臨界萃取物,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,即得500g,100粒6g。
[0019]實(shí)施例3
[0020]取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%,萃取壓力20MPa,溫度40°C,C02流量2ml/g生藥.π?η,萃取時(shí)間160min,得超臨界萃取物,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,即得500g,100粒6g。實(shí)施例4:安腎丸抑制人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0021]1實(shí)驗(yàn)材料
[0022]1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0023]人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞,南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫,DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。[0024]1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0025]研究藥物:本發(fā)明安腎丸:按實(shí)施例3方法制備。
[0026]藥液儲(chǔ)液:稱取IOOmg安腎丸,溶于5ml無水乙醇中,0.2 μ m濾器過濾,500 μ Idoff管分裝,-20°C存儲(chǔ),同時(shí)0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0027]1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0028]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419);NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387);Trypsin (AMRESC0 公司批號:2010/04);EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號:2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批號:2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號:080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ; PBS (實(shí)驗(yàn)室自配);1.4實(shí)驗(yàn)器材
[0029]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRA MAX190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號:3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號:ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號:SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司);細(xì)胞計(jì)數(shù)板;離心管、移液管、Tips若干。
[0030]2實(shí)驗(yàn)方法
`[0031 ] I)人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(10cm培養(yǎng)皿),當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時(shí),收集細(xì)胞,棄去培養(yǎng)液,PBS輕洗3遍,加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.0496EDTA,37°C消化2min后,向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng),吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中,1000rpm離心5min,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X IO4個(gè)/ml。
[0032]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中,每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1,培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C,5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
[0033]3)根據(jù)細(xì)胞生長情況,一般長至50%_70%,加入安腎丸溶液,繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0034]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml,即 0.5%MTT),繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0035]5) 4h后扣板法倒去上清,用吸水紙輕輕拍干,每孔加入200 μ I 二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩lOmin,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞,只加培養(yǎng)液),對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜),每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0036]7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示:
[0037]細(xì)胞增值抑制率(%)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0038]3統(tǒng)計(jì)處理
[0039]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn),數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0040]4實(shí)驗(yàn)結(jié)果[0041]MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,與對照組比較,當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí),對人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖抑制有差異(P〈0.05),劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(Ρ〈0.01),當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0042]表1安腎丸對人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖抑制影響研究(X土SD)
[0043]
【權(quán)利要求】
1.一種安腎丸的制備方法,由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥制成,其特征在于所述的方法由下列步驟組成:取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g,加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%,萃取壓力15-30MPa,溫度30-50°C,C02流量l-3ml/g生藥.min,萃取時(shí)間150_180min,得超臨界萃取物,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,即得500g,100粒6g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種安腎丸的制備方法,其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種安腎丸的制備方法,其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時(shí)間160min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種安腎丸在制備抑制人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用,其特征在于安腎丸由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥制成,制備方法由下列步驟組成:取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補(bǔ)骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白術(shù)96g、山藥96g、茯苓96g、鹽炙蒺藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g,加入到CO2超臨界萃取器中,乙醇作為夾帶劑,夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%,萃取壓力15-30MPa,溫度30_50°C,CO2流量l-3ml/g生藥.min,萃取時(shí)間150_180min,得超臨界萃取物,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻,用水泛丸,干燥,即得500g,100粒6g。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種安腎丸在制備抑制人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用,其特征在于安腎丸制備方法中所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種安腎丸在制備抑制人大細(xì)胞肺癌NC1-H460細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用,其特征在于安腎丸制備方法中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2 流量 2ml/g 生藥.min,萃取時(shí)間 160min。
【文檔編號】A61K36/8984GK103638322SQ201310624323
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】陳軍 申請人:常州科立信醫(yī)療器械有限公司