一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法
【專利摘要】一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，屬于獸用生物制品【技術領域】。其包括以下工藝步驟：1）益生菌的制備；2）混合制劑的凍干；3）泡騰片制備。本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明所制備的復合微生態(tài)制劑泡騰片，降低了產(chǎn)品的運輸要求，增加了用戶使用的便利性；本發(fā)明所制備的復合微生態(tài)制劑泡騰片可以在飲水免疫活疫苗的同時進行微生態(tài)制劑的飼喂，減少了人力物力，減少了對雞群的應激；本發(fā)明所制備的復合微生態(tài)制劑泡騰片可增強雞群免疫力，提高雞群飼料利用率，提高雞群產(chǎn)蛋率，降低雞舍氨氣排放量，改善雞群生活環(huán)境。
【專利說明】一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于獸用生物制品【技術領域】，具體涉及一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法。
【背景技術】
[0002]益生菌對人畜都有益生作用。微生態(tài)制劑中的益生菌可以產(chǎn)生抗菌物質，并與有害細菌競爭生態(tài)位，抑制致病菌的生長繁殖，調整恢復腸道的菌群平衡。此外，微生態(tài)制劑可成為非特異性免疫因子，通過細菌本身或細胞壁成分刺激宿主細胞，激活免疫系統(tǒng)，提高機體抗體水平或巨噬細胞活性，從而增強機體抵抗力。微生態(tài)制劑中的有益菌群在消化道繁衍，能促進消化道內多種氨基酸、維生素等一系列營養(yǎng)成分的有效合成和吸收利用，從而促進畜禽生長發(fā)育和增重。同時在環(huán)保方面，可以清除糞尿惡臭，凈化生態(tài)環(huán)境。微生態(tài)制劑中的益生菌通過對有害物質進行發(fā)酵分解和合成，有效的降低了有毒有害物質的含量。
[0003]黃酮類化合物是自然界中存在的多元酚類物質，也是自然界藥用植物中的主要活性成分之一。它是指具有15個碳原子并以C6-C3-C6的方式構成的三環(huán)天然有機物，是植物在長期自然選擇中產(chǎn)生的二級代謝產(chǎn)物，現(xiàn)在已分離鑒定的有4000多種。它廣泛存在于果蔬、中草藥中，無毒副作用，它具有顯著的清除機體內自由基、抗老化、抗突變、調血脂降血壓等藥理保健功能，是一類極具開發(fā)前景的天然有機抗氧化劑，這些抗氧化活性物質可以減少和清除機體內自由基，具有預防疾病的作用。
[0004]多糖是中藥活性成分之一，大量研究表明，多糖及糖復合物在生物體內不僅是作為能量資源和構成材料，更重要的是它存在于一切細胞膜結構中，參與生命現(xiàn)象中細胞的各種活動。多糖類物質是所有生命有機體的重要組成部分，具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂質過氧化的能力。
[0005]目前，市售微生態(tài)制劑大都是凍干粉，可以直接拌于飼料中，經(jīng)口服方式被動物體吸收。這種飼喂方式雖然簡單方便，但由于微生態(tài)制劑大多為乳酸菌，其生命力較為脆弱，拌于飼料中會顯著降低活菌數(shù)。此外，由于同飼料共同飼喂，很難保證動物吸收的準確計量，從而影響療效。另外凍干狀態(tài)的產(chǎn)品在使用的整個貯存和運輸過程中都要保持在較低的溫度狀態(tài)下的“冷鏈”環(huán)境，這給產(chǎn)品的貯存和運輸以及用戶的使用帶來諸多不便。

【發(fā)明內容】

[0006]針對現(xiàn)有技術存在的問題，本發(fā)明的目的在于設計提供一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法的技術方案。
[0007]所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟:
1)益生菌的制備
對乳酸菌和芽孢桿菌分別培養(yǎng)，得到乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液；
2)混合制劑的凍干
將乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液在無菌條件下混合均勻，調整至所需菌數(shù)，得到益生菌混合菌液，將益生菌混合菌液與凍干保護劑混合均勻，分裝后經(jīng)冷凍真空干燥制成混合制劑凍干粉；
所述的凍干保護劑為每1000ml磷酸緩沖液中含有中藥多糖30~80g、中藥黃酮20~50g、維生素組合6~10g、明膠4~6g和鹿糖40~70g,所述的中藥多糖和中藥黃酮由丹參、甘草、銀杏葉、黃苗、人參、黨參和枸杞中提取得到；
3)泡騰片制備
將混合制劑凍干粉與泡騰材料混合均勻，用壓片機壓制成片劑，定量分裝，即得到復合微生態(tài)制劑泡騰片。
[0008]所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中乳酸菌的培養(yǎng)具體包括:將MRS液體培養(yǎng)基預熱至37°C，同時按2%接種量接種乳酸菌種子液，37°C靜置培養(yǎng)18~24小時，收獲菌液至4°C保存?zhèn)溆?；芽孢桿菌的培養(yǎng)具體包括:將芽孢桿菌培養(yǎng)基預熱至37°C，同時按I %接種量接種芽孢桿菌種子液，37°C靜置培養(yǎng)18~24小時，收獲菌液至4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0009]所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中乳酸菌為兩歧雙歧桿菌 Cfeci77w5.7icA<9/7i/br?i5.)、乳酸乳桿菌{Lactobacillus I act is) >布氏乳桿菌(Zac tobaci Ilus buchneri )、長雙歧桿菌dobac teri um longum )中的一種或幾種；芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌{Bacillus凝結芽孢桿菌{BacilluscoagWafls)、枯草芽抱桿菌subtil is)中的一種或幾種。
[0010]所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中益生菌混合菌液與凍干保護劑的體積比為1:1~3。
[0011]所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中每1000ml磷酸緩沖液中含有中藥多糖40~70g、中藥黃酮30~40g、維生素組合7~9g、明膠5~6g和鹿糖50~60g。
[0012]所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的維生素組合中含有維生素C 20~40%、維生素E 10~30%、維生素D3 5~15%、維生素BI 15~35%、維生素K 10~20%、維生素B2 5~20%。[0013]所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的中藥多糖和中藥黃酮按以下步驟制得:
a、按丹參10~30份、甘草10~20份、銀杏葉10~30份、黃芪10~30份、人參10~20份、黨參10~30份、枸杞10~30份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小時，熬制過程中每10分鐘攪拌一次；
b、棄去步驟a中藥洛,收集藥液,室溫冷卻后經(jīng)1000Orpm離心10分鐘,棄去沉淀,收集上清；
C、將步驟b中上清進行醇沉，沉淀即為粗制中藥多糖，上清即為粗制中藥黃酮；
d、用滅菌純化水洗滌步驟c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后經(jīng)1000Orpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
e、將步驟d中上清液經(jīng)0.22um濾膜過濾除菌后，進行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液；
f、將步驟e中中藥多糖濃縮液進行真空冷凍干燥即得到中藥多糖；
g、將步驟c中粗制中藥黃酮進行減壓真空濃縮，濃縮物用次滅菌注射用水稀釋清洗，再次進行減壓真空濃縮，如此三次后，再經(jīng)0.22um濾膜過濾除菌，然后經(jīng)冷凍真空干燥即得到中藥黃酮。
[0014]本發(fā)明具有以下有益效果:
1、本發(fā)明所制備的復合微生態(tài)制劑泡騰片，降低了產(chǎn)品的運輸要求，增加了用戶使用的便利性。
[0015]2、本發(fā)明所制備的復合微生態(tài)制劑泡騰片可以在飲水免疫活疫苗的同時進行微生態(tài)制劑的飼喂，減少了人力物力，減少了對雞群的應激。
[0016]3、本發(fā)明所制備的復合微生態(tài)制劑泡騰片可增強雞群免疫力，提高雞群飼料利用率，提高雞群產(chǎn)蛋率，降低雞舍氨氣排放量，改善雞群生活環(huán)境。
【具體實施方式】
[0017]為了使本發(fā)明更加容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按常規(guī)實驗方法進行。
[0018]實施例1:益生菌的制備
(I)生產(chǎn)用種子制備 乳酸菌的培養(yǎng)
將MRS液體培養(yǎng)基預熱至37 °C，同時按2%接種量接種乳酸菌種子液，37°C靜置培養(yǎng)18~24小時，收獲菌液至-4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0019]芽孢桿菌的培養(yǎng)
將芽孢桿菌培養(yǎng)基預熱至37°C，同時按I %接種量接種芽孢桿菌種子液，37°C靜置培養(yǎng)18~24小時，收獲菌液至4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0020]所述的乳酸菌菌為:兩歧雙歧桿菌dobac teri um bi fi dum )、乳酸乳桿菌(Lactobacillus I act is)、布氏乳桿菌{Lactobacillus buchneri )、長雙歧桿菌(.Bi fi dobac teri um 1ngum )中的一種或幾種。
[0021]所述的芽孢桿菌為:地衣芽孢桿菌QBaci Ilus Ii cheni formi s )、凝結芽孢桿菌{Bacillus枯草芽抱桿菌subtil is)中的一種或幾種。
[0022]所述的MRS液體培養(yǎng)基為:
蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母膏5.0 g、檸檬酸氫二銨2.0 g、葡萄糖20.0 g、吐溫80 1.0ml、乙酸鈉5.0 g、磷酸氫二鉀2.0 g、硫酸鎂0.58 g、硫酸錳0.25 g、瓊脂18.0 g、蒸餾水 1000 ml, ρΗ6.2-6.6。
[0023]所述的芽孢桿菌培養(yǎng)基為:葡萄糖20g、蛋白胨15g、牛肉膏0.5g、氯化鈉5g、硫酸猛lg、磷酸氫二鉀3g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.5g、氯化鐵0.1g
碳酸鈣0.lg、蒸餾 水1000ml，116°C高壓滅菌25分鐘。
[0024]實施例2:復合中藥多糖與中藥黃酮的制備
a、按丹參20份、甘草15份、銀杏葉20份、黃芪20份、人參15份、黨參20份、枸杞20份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至900C，并保持在90°C，熬制2小時，熬制過程中每10分鐘攪拌一次；
b、棄去a中藥渣，收集藥液，室溫冷卻后經(jīng)1000Orpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上
清；
C、將b中上清進行醇沉，沉淀即為粗制中藥多糖，上清即為粗制中藥黃酮；
d、用滅菌純化水洗滌c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后經(jīng)1000Orpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清；
e、將d中上清液經(jīng)0.22um濾膜過濾除菌后，進行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液；
f、將e中中藥多糖濃縮液進行真空冷凍干燥即得到中藥多糖；
g、將c中粗制中藥黃酮進行減壓真空濃縮，濃縮物用次滅菌注射用水稀釋清洗，再次進行減壓真空濃縮，如此三次后，再經(jīng)0.22um濾膜過濾除菌，然后經(jīng)冷凍真空干燥即得到中藥黃酮。
[0025]該實施例中步驟a中也可以按丹參10份、甘草10份、銀杏葉10份、黃芪10份、人參10份、黨參10份、枸杞10份稱取各中藥原料，也可以按丹參30份、甘草20份、銀杏葉30份、黃芪30份、人參20份、黨參30份、枸杞30份稱取各中藥原料。
[0026]實施例3:凍干保護劑制備
每1000ml磷酸緩沖液包含以下組分:中藥多糖40g、中藥黃酮30g、維生素組合8g (維生素C 1.6g、維生素E 0.8g、維生素D3 0.6g、維生素BI 2.2g、維生素K 1.6g、維生素B2
1.2g)、明膠5g、蔗糖50g ;或每1000ml磷酸緩沖液包含以下組分:中藥多糖70g、中藥黃酮40g、維生素組合7g (維生素C 1.4g、維生素E 1.75g、維生素D3 0.7g、維生素BI 1.4g、維生素K 0.7g、維生素B2 1.058)、明膠68、蔗糖6(^。所述的中藥多糖和中藥黃酮由實施例2制得。
[0027]制備方法:精確稱取各組分，溶解于1000ml的磷酸緩沖溶液，無菌條件下經(jīng)
0.22um濾膜過濾除菌，4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0028]磷酸緩沖液由氯化鈉6~10g，氯化鉀0.05~0.5g,磷酸氫二鈉I~L 2g,磷酸二氫鉀0.05~0.5g，氯化鈣0.05~0.2g，含6個結晶水的氯化鎂0.05~0.2g溶于1000ml雙蒸水中，經(jīng)116°C，高壓滅菌30分鐘得到。
[0029]實施例4:泡騰材料的制備
a、酸性材料的制備
按質量份分別稱取檸檬酸15份、乳糖10份、EDTA 15份、亮藍指示劑0.5份，將上述成分充分混合，40~65°C烘干后過8~12目篩，制得酸性顆粒備用；
b、堿性材料的制備
按質量份分別稱取碳酸氫鈉15份、乳糖10份、亮藍指示劑1份，將上述成分充分混合，40~65°C烘干后過8~12目篩，制得堿性顆粒備用；
C、將上述堿性材料與酸性材料按1:1混合均勻，并加入0.5~I質量份的左旋咪唑，經(jīng)Co-60輻射滅菌制得泡騰材料。
[0030]實施例5:—種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法
a、將實施例1得到的乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液混合均勻，并調整至160億/ml (其中乳酸菌80億/ml、芽孢桿菌80億/ml)，得到益生菌混合菌液。
[0031]b、將a中益生菌混合菌液按1: 1、1:2或1:3 (V:V)比例加入含實施例3制得的凍干保護劑，分裝后經(jīng)冷凍真空干燥制成微生態(tài)制劑復合凍干粉。
[0032]e、泡騰片制備
將按上述制備的凍干制劑與實施例4中的泡騰材料按2:1-3混合均勻后，用壓片機壓制成片劑，定量分裝。
[0033]試驗例I本發(fā)明復合微生態(tài)制劑泡騰片的應用 I材料
1.1復合微生態(tài)制劑泡騰片 按本發(fā)明實施例5制得。
[0034]1.2試驗用雞180日齡海蘭蛋雞1500只；10日齡三黃肉雞1500只。
[0035]2 方法
2.1將1500只180日齡海蘭蛋雞分為兩組，第一組500只，作為實驗一組，在飼喂全價飼料(參考雞飼養(yǎng)標準NY/33-2004)的同時飼喂本發(fā)明復合微生態(tài)制劑泡騰片5片；第二組500只，作為實驗二組，在飼喂全價飼料(參考雞飼養(yǎng)標準NY/33-2004)的同時飼喂本發(fā)明復合微生態(tài)制劑泡騰片10片；第三組500只，作為對照組，只飼喂全價飼料。試驗實施期記錄各組產(chǎn)蛋率、蛋重、死淘率、新城疫抗體水平等指標，觀察期為四周。
[0036]2.2將1500只10日齡三黃肉雞分為兩組，第一組500只，作為實驗一組，在飼喂全價飼料(參考雞飼養(yǎng)標準NY/33-2004)的同時飼喂本發(fā)明復合微生態(tài)制劑泡騰片5片；第二組500只，作為實驗二組，在飼喂全價飼料(參考雞飼養(yǎng)標準NY/33-2004)的同時飼喂本發(fā)明復合微生態(tài)制劑泡騰片10片；第三組500只，作為對照組，只飼喂全價飼料。試驗實施期記錄各組平均日增重、死淘率和新城疫抗體水平，觀察期為4周。
[0037]3 結果
3.1崩解時限結果
取I片泡騰片，置盛有200ml水的250ml燒杯中，水溫15_25°C，觀察并記錄完全溶解的時間，結果見表1。
[0038]表1崩解時限檢驗結果
【權利要求】
1.一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟: 1)益生菌的制備 對乳酸菌和芽孢桿菌分別培養(yǎng)，得到乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液； 2)混合制劑的凍干 將乳酸菌菌液和芽孢桿菌菌液在無菌條件下混合均勻，調整至所需菌數(shù)，得到益生菌混合菌液，將益生菌混合菌液與凍干保護劑混合均勻，分裝后經(jīng)冷凍真空干燥制成混合制劑凍干粉； 所述的凍干保護劑為每1000ml磷酸緩沖液中含有中藥多糖30~80g、中藥黃酮20~50g、維生素組合6~10g、明膠4~6g和鹿糖40~70g,所述的中藥多糖和中藥黃酮由丹參、甘草、銀杏葉、黃苗、人參、黨參和枸杞中提取得到； 3)泡騰片制備 將混合制劑凍干粉與泡騰材料混合均勻，用壓片機壓制成片劑，定量分裝，即得到復合微生態(tài)制劑泡騰片。
2.如權利要求1所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中乳酸菌的培養(yǎng)具體包括JfMRS液體培養(yǎng)基預熱至37°C，同時按2%接種量接種乳酸菌種子液，37°C靜置培養(yǎng)18~24小時，收獲菌液至4°C保存?zhèn)溆?；芽孢桿菌的培養(yǎng)具體包括:將芽孢桿菌培養(yǎng)基預熱至37°C，同時按I %接種量接種芽孢桿菌種子液，37°C靜置培養(yǎng)18~24小時，收獲菌液至4°C保存?zhèn)溆谩?br> 3.如權利要求1或2所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中乳酸菌為兩歧雙歧桿菌(Maci I Ius Ii cheni formi s ) >乳酸乳桿菌(Lactobacillus I act is)、布氏乳桿菌{Lactobacillus buchneri )、長雙歧桿菌(Bi fi dobac teri um 1ngum')中的一種或幾種；芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌QBacillusIi cheni formi 5 ) > 凝結芽抱桿舊{Bacillus coagulans ) > 枯草芽抱桿 1MiMacillussubtil is、中的一種或幾種。
4.如權利要求1所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中益生菌混合菌液與凍干保護劑的體積比為1:1~3。
5.如權利要求1所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中每1000ml磷酸緩沖液中含有中藥多糖40~70g、中藥黃酮30~40g、維生素組合7~9g、明膠5~6g和鹿糖50~60g。
6.如權利要求1或5所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的維生素組合中含有維生素C 20~40%、維生素E 10~30%、維生素D3 5~15%、維生素BI 15~35%、維生素K 10~20%、維生素B2 5~20%。
7.如權利要求1或5所述的一種復合微生態(tài)制劑泡騰片的制備方法，其特征在于所述的中藥多糖和中藥黃酮按以下步驟制得: a、按丹參10~30份、甘草10~20份、銀杏葉10~30份、黃芪10~30份、人參10~20份、黨參10~30份、枸杞10~30份稱取各中藥原料，切碎、洗凈后用冷水浸泡過夜，再加入原料重量15倍的純化水，水浴至90°C，并保持在90°C，熬制2小時，熬制過程中每10分鐘攪拌一次； b、棄去步驟a中藥洛,收集藥液,室溫冷卻后經(jīng)1000Orpm離心10分鐘,棄去沉淀,收集上清； C、將步驟b中上清進行醇沉，沉淀即為粗制中藥多糖，上清即為粗制中藥黃酮； d、用滅菌純化水洗滌步驟c中粗制中藥多糖，洗滌后用20倍量的42°C滅菌純化水進行溶解，溶解后，按0.5%比例加入活性炭4°C吸附過夜，吸附后經(jīng)1000Orpm離心10分鐘，棄去沉淀，收集上清； e、將步驟d中上清液經(jīng)0.22um濾膜過濾除菌后，進行10倍濃縮，制得中藥多糖濃縮液； f、將步驟e中中藥多糖濃縮液進行真空冷凍干燥即得到中藥多糖； g、將步驟c中粗制中藥黃酮進行減壓真空濃縮，濃縮物用次滅菌注射用水稀釋清洗，再次進行減壓真空濃縮，如此三次后，再經(jīng)0.22um濾膜過濾除菌，然后經(jīng)冷凍真空干燥即得到中藥黃酮。`
【文檔編號】A61P37/04GK103550401SQ201310579858
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月19日 優(yōu)先權日:2013年11月19日
【發(fā)明者】張秀文, 李陽, 閆艷麗, 劉雪, 王二先, 盛璐絲 申請人:浙江美保龍生物技術有限公司