一種治療白血病的藥物組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療白血病的藥物組合物及其制備方法，其特征是：這種藥物組合物是按重量份由以下原料藥制成：毛蓮菜1-3份、阿爾泰狗娃花3-5、齒緣草2-4份、沙龍子1-2份、青金石4-6份。上述各原料藥粉碎過80目-200目篩，制成丸劑等，或經(jīng)提取精制而成。本發(fā)明的藥物組合物能提高NCK、IL-2、IL-6、IFN-γ活性，對(duì)治療白血病具有良好的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】一種治療白血病的藥物組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種治療白血病的藥物組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】 [0002]白血病(Leukemia)是一種造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，其特征為白細(xì)胞及其幼稚細(xì)胞也有幼稚紅細(xì)胞或巨核細(xì)胞(即白血病細(xì)胞)在骨髓或其它造血組織中進(jìn)行性、失控性的異常增生，浸潤全身各種組織與臟器，并進(jìn)入外周血液中。根據(jù)白血病細(xì)胞成熟的程度和白血病的自然過程，白血病主要可分為急性白血病和慢性白血病兩大類。急性白血病起病急驟，因正常紅細(xì)胞的減少而導(dǎo)致貧血、出血、繼發(fā)感染和發(fā)熱等癥狀。另外，因白血病細(xì)胞廣泛浸潤各組織臟器，亦導(dǎo)致肝、脾、淋巴結(jié)腫大及其它器官功能障礙。慢性白血病起病緩，病程較長，早期患者可無臨床癥狀，最早出現(xiàn)的自覺癥狀往往是乏力、低熱、多汗、盜汗、體重減輕等代謝亢進(jìn)的表現(xiàn)，個(gè)別患者多于體檢或其他檢查時(shí)被發(fā)現(xiàn)。
[0003]白血病較為常見，約占癌癥總發(fā)病率的5%左右,尤其以兒童和青年居多。在我國各年齡組惡性腫瘤的死亡率中白血病占第6位(男性)和第8位(女性)，在兒童及35歲以下的人群中則占第I位。白血病的分布是世界性的
中醫(yī)無白血病這一名詞，但對(duì)白血病在臨床出現(xiàn)的發(fā)熱、貧血、出血、肝脾及淋巴結(jié)腫大等癥狀卻早有記載，屬于“虛老”、“急老”、“熱老”等范疇，由于有出血亦屬于“血證”，而發(fā)熱又類似于“溫病”。肝脾腫大明顯者，可稱為“癥積”(陰陽不和，臟腑虛弱，風(fēng)邪搏之，是以為積)，淋巴結(jié)腫大明顯者可稱為:“痰核”。說明祖國醫(yī)學(xué)對(duì)白血病的認(rèn)識(shí)是陰虛火動(dòng)病本是內(nèi)在虛損，陰陽不和，在臟腑虛弱的基礎(chǔ)上，風(fēng)邪熱毒乘虛而入所致，而臨床表現(xiàn)為虛實(shí)挾雜的綜合表現(xiàn)。
[0004]現(xiàn)代白血病的治療手段主要是化學(xué)療法和骨髓移植療法。近年來，隨著聯(lián)合化療用于臨床及完全緩解后維持、鞏固治療等策略的逐漸完善，以及新的抗白血病藥物如去甲氧基柔紅霉素(IDA),米托蒽醌(MIT)，鬼臼乙叉苷(VP-16)及阿糖胞苷(Ara-C)的出現(xiàn)，白血病的治療水平有了突破性進(jìn)展。但因?yàn)榛熕幬锏亩靖弊饔煤凸撬鑱碓蠢щy等許多未能解決的問題，迫使人們一直在尋找新的治療策略。中醫(yī)藥治療白血病來由已久，以清熱解毒、益氣養(yǎng)陰為基本大法。近來越來越多的研究表明，中藥在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化、逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞多藥耐藥和免疫調(diào)節(jié)等方面有明顯的優(yōu)勢和特色，為白血病的根治提供了新的研究思路和線索。從中藥中提取、研制了較多的抗白血病藥物和制劑，實(shí)驗(yàn)證實(shí)這些中藥確實(shí)具有抗白血病的作用，其作用機(jī)制包括抑制白血病細(xì)胞DNA、RNA合成，促進(jìn)凋亡或誘導(dǎo)分化等。
[0005]三尖杉酯:從三尖杉植物中提取出的三尖杉酯堿和高三尖杉酯堿，能抑
制DNA合成，是一種細(xì)胞周期非特異性藥物。有三尖杉酯堿或高三尖杉酯堿與阿糖胞苷組成的HA方案廣泛用于急性非淋巴細(xì)胞白血病的治療，療效較好。
[0006]羥基喜樹堿，羥基喜樹堿是從我國特有的植物喜樹種子中分離提取的一種微量生物堿。在體外主要抑制核酸尤其DNA合成，為S期特異性藥物，拓?fù)洚悩?gòu)酶I是其主要的作用部位。對(duì)治療CML有一定療效。
[0007]紫杉醇，紫杉醇能與微管結(jié)合使微管穩(wěn)定性增強(qiáng)，抑制微管解聚，使細(xì)胞周期阻滯于分裂期。對(duì)淋巴瘤Raji細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用，經(jīng)紫杉醇(4 μ g/ml)作用48小時(shí)后，細(xì)胞生長抑制率達(dá)82.6%,經(jīng)形態(tài)學(xué)及流式細(xì)胞儀分析顯示，細(xì)胞呈G2/M期阻滯和細(xì)胞凋亡。
[0008]大蒜素，隨著大蒜素濃度和作用時(shí)間的增加，人白血病細(xì)胞株K562的S期細(xì)胞含量明顯下降，g2/m期細(xì)胞含量有明顯上升趨勢，提示大蒜素的作用是通過將細(xì)胞阻留于g2/m期的結(jié)果。
[0009]青黛、靛玉紅、甲異靛，青黛是在當(dāng)歸蘆薈丸治療CML有效的基礎(chǔ)上逐一篩選發(fā)現(xiàn)的有效成分之一。靛玉紅是從青黛中分離出的有效成分，可經(jīng)化學(xué)合成制得。靛玉紅對(duì)未經(jīng)治療的慢粒幼稚粒細(xì)胞增殖有不同程度的抑制作用，其作用原理可能是通過抑制白血病細(xì)胞DNA合成而抑制其增殖。甲異靛是合成靛玉紅的類似產(chǎn)物，療效高于靛玉紅。最近的研究表明，甲異靛治療CML的機(jī)制可能與甲異靛引起白血病細(xì)胞增殖受抑和細(xì)胞發(fā)生凋亡有關(guān)。
[0010]砒霜，《本草綱目》早有記載:“砒乃大熱大毒之藥，而砒霜之毒尤烈”。砒石經(jīng)過升華成為砒霜，而砒霜的主要化學(xué) 成分為三氧化二砷或亞砷酸。三氧化二砷可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，降低細(xì)胞中bcl-2基因的表達(dá)可能是其作用的分子機(jī)制之一。
[0011]葛根，對(duì)葛根有效成分S86019的研究發(fā)現(xiàn)，S86019可抑制HL-60細(xì)胞增殖，使細(xì)胞由早幼粒細(xì)胞階段發(fā)育為趨向成熟的細(xì)胞，且作用隨著藥物濃度的增加亦趨增強(qiáng)。S86019確是一個(gè)有效的HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)分化劑。
[0012]欖香烯，從莪術(shù)中提取的欖香烯對(duì)人原始巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞系Himeg細(xì)胞周期有明顯的影響，其作用環(huán)節(jié)主要是影響細(xì)胞周期S期向G2/M期的轉(zhuǎn)變過程，將白血病細(xì)胞阻滯在S期，減少進(jìn)入g2/m期的細(xì)胞數(shù)量，抑制白血病細(xì)胞生長代謝，減少其有絲分裂，并導(dǎo)致受影響的腫瘤細(xì)胞快速凋亡。
[0013]巴豆，有人通過302種中藥對(duì)HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)分化及細(xì)胞毒的篩選實(shí)驗(yàn)，初步證實(shí)巴豆具有較顯著的誘導(dǎo)白血病細(xì)胞想正常細(xì)胞分化的作用，該結(jié)果提示巴豆中某些成分可望成為治療白血病的有效藥物。
[0014]苦參，苦參對(duì)老年急性非淋巴細(xì)胞性白血病有較好的治療作用，其機(jī)制可能是:對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷作用；直接作用于耙DNA發(fā)揮其抗腫瘤作用；通過影響細(xì)胞周期發(fā)揮其抗腫瘤作用；通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮其抗腫瘤作用；通過誘導(dǎo)微粒體細(xì)胞色素P450發(fā)揮協(xié)同作用；通過免疫機(jī)制增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤活性等。
[0015]青黃散，青黃散【青黛、雄黃(As2S3)】。用青黃散治療CML有良好的療效，用藥后癥狀明顯好轉(zhuǎn)或消失時(shí)間為11.4天，平均10.1天脾臟開始縮小。實(shí)驗(yàn)研究表明，青黃散對(duì)L615、S180細(xì)胞的DNA、RNA合成有不同程度的抑制作用，其特點(diǎn)是抑制作用快，藥物作用于細(xì)胞30分鐘即達(dá)高峰；藥物作用存在量效關(guān)系；對(duì)DNA,RNA均有明顯抑制作用。在治療過程中，利用造血干細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)方法觀察青黃散及馬利蘭對(duì)小鼠多能干細(xì)胞、粒系及紅系祖細(xì)胞、末梢血象等各種細(xì)胞的影響，結(jié)果表明馬利蘭對(duì)上述各類細(xì)胞有明顯抑制作用，而青黃散則無抑制作用，提示青黃散對(duì)白血病細(xì)胞可能具有選擇性抑制作用。對(duì)CML患者骨髓細(xì)胞進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)白血病細(xì)胞主要發(fā)生以核溶解、核固縮、破碎及混合性為特征的變性壞死，表明青黃散治療CML產(chǎn)生的療效與其促進(jìn)白血病細(xì)胞變性壞死的藥理作用有關(guān)，即通過變性最終導(dǎo)致白血病細(xì)胞死亡。
[0016]癌靈I號(hào)，癌靈I號(hào)(吡石、輕粉)是當(dāng)前我國中醫(yī)中藥治療白血病特別是早幼粒細(xì)胞白血病最為有效的藥物之一。其藥理原理為中醫(yī)的以毒攻毒作用。砷劑為中藥中傳統(tǒng)毒藥，辛溫有大毒。實(shí)驗(yàn)研究證明，砷化合物能與組織(蛋白質(zhì))中的巰基(一SH)結(jié)合，使蛋白質(zhì)失去活性，因而抑制了白血病細(xì)胞增殖，起到了治療白血病的作用。其次，對(duì)癌細(xì)胞有選擇性細(xì)胞毒作用。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)癌靈I號(hào)在癌細(xì)胞和正常細(xì)胞之間有選擇性，即使長期用藥對(duì)骨髓造血功能亦無抑制，反而刺激造血功能。第三，具有誘導(dǎo)分化作用。運(yùn)用三氧化二砷注射液治療APL，觀察CR病人的血象及骨髓象是發(fā)現(xiàn)77.3%的患者治療后白細(xì)胞逐漸上升，于7-20天達(dá)高峰，在白細(xì)胞升高的同時(shí)，發(fā)現(xiàn)分類中早幼粒細(xì)胞比例減少，而中、晚幼粒細(xì)胞可分別達(dá)到0.12和0.15。第四，有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。運(yùn)用砷劑治療白血病時(shí)發(fā)現(xiàn)，治療CR后的病人骨髓中可見到粒細(xì)胞退行性改變，胞漿及核有空泡變性，和染色質(zhì)固縮，凝集不均及核破裂一 “凋亡小體”，用流失細(xì)胞儀檢測可見凋亡細(xì)胞峰。 [0017]六神丸，六神丸(珍珠粉、牛黃、麝香、蟾酥、冰片)具有清熱解毒、化瘀止痛之功。藥理證明六神丸中的牛黃含膽紅素、麥角固醇，有促進(jìn)紅細(xì)胞新生、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、強(qiáng)心等作用；蟾酥含蟾酥二烯醇、腎上腺素、麥角醇、兒茶酚胺類化合物，具有強(qiáng)心、升壓、抗癌等作用；雄黃含三硫化二砷，能抑制巰基酶系統(tǒng)以影響細(xì)胞代謝，因而對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長有抑制作用，其他尚有珍珠、冰片、麝香等有抗霉菌、抑制細(xì)菌、興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用。六神丸治療白血病，用于誘導(dǎo)緩解，對(duì)粒細(xì)胞系統(tǒng)有明顯抑制作用，但對(duì)骨髓抑制則不甚明顯，并可預(yù)防和治療口腔潰瘍、扁桃體炎等。
[0018]復(fù)方青黛片，復(fù)方青黛片(青黛、太子參、丹參、雄黃等)實(shí)驗(yàn)研究表明，雄黃具有誘導(dǎo)APL細(xì)胞(NB4)和HL-60細(xì)胞凋亡的作用。
[0019]血復(fù)康，血復(fù)康(青黛、莪術(shù)、葛根等)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，血復(fù)康能抑制K562細(xì)胞生長并使其發(fā)生凋亡。
[0020]毛蓮菜為菊科植物毛蓮菜(Picris japonica T hunb.)的干燥地上部分。夏、秋二季花開時(shí)采收，除去雜質(zhì)，曬干。收載于1998年《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)》。性涼、糙，味苦。殺“粘”，止痛，清熱，消腫，解毒。用于瘟疫，結(jié)喉，乳腺炎，胸刺痛，腮腺炎，陣刺痛。為我國藏蒙等少數(shù)民族地區(qū)的常用藥物。但有關(guān)毛蓮菜的基礎(chǔ)研究尚十分有限，使該藥材的后續(xù)推廣和應(yīng)用受到限制?，F(xiàn)代研究表明，毛蓮菜含有毛連菜苷(picriside) A、B、C，山萵苣素(lactucin)，11 β-13-二氫山萵苣素(11 β -13-dihydrolactucin),假還陽參式(caepidiaside) A 及苦荬菜內(nèi)酯(ixerin) F 等，還含有多糖和黃酮類化合物，其他化學(xué)成分不詳；藥理作用研究表明，毛蓮菜水提取，過DlOl大孔樹脂，水洗脫部分具有降血糖，調(diào)節(jié)血脂作用。
[0021]阿爾泰狗娃花為菊科植物阿爾泰狗娃花(Heteropappus altaicus (Willd)Novopokr.)的干燥頭狀花序。夏、秋二季花開時(shí)采收，陰干。收載于1998年《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)》，其味甘、苦，性涼、淡、澀輕，功能為殺“粘”，清熱，解毒，用于瘟疫、麻疹、猩紅熱、血熱、毒熱，“寶日”熱。
[0022]齒緣草為紫草科植物石生齒緣草(Eritrichium rupestre (Pall.)Bunge)的干燥地上部分。夏季花開時(shí)采收，除去根及雜質(zhì)，陰干。收載于1998年《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)》，其性涼，味苦、甘。具有殺“粘”，清熱，解毒。用于溫?zé)崃鞲?，“協(xié)日”人脈癥，“協(xié)日”熱。
[0023]沙龍子為石龍子科動(dòng)物沙龍子(Scinncus officinalis Linnaeus)的干燥體。全年均可捕捉，除去內(nèi)臟，體內(nèi)放入鹽，曬干。收載于1998年《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊(cè)》。具有壯陽強(qiáng)身，強(qiáng)筋利尿，驅(qū)寒止痛。用于性欲不振，陽事不舉，精少體弱，偏癱肢顫，關(guān)節(jié)骨痛，小便不利。
[0024]青金石為硅酸鹽類礦物青石，主含Na6Ca[AlSiOJ6 (SO4, C1，S)2。采挖后，除去泥沙及雜石。收載于1998年《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊(cè)》。具有清除異常體液，防治體液燃燒，防治異常黑膽質(zhì)產(chǎn)生，養(yǎng)心理血，通經(jīng)通滯的功效。用于憂郁心煩，躁動(dòng)不安，心弱血阻，閉經(jīng)咳喘。
[0025]現(xiàn)有文獻(xiàn)及專利等，尚未見本發(fā)明的藥物組合物即:毛蓮菜、阿爾泰狗娃花、齒緣草、沙龍子、青金石組成的組合物用于制備治療白血病藥物的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0026]本發(fā)明的目的在于提供一種治療白血病的藥物組合物及其制備方法。
[0027]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
本發(fā)明所用原料
毛蓮菜為菊科植物毛蓮菜(Picris japonica T hunb.)的干燥地上部分；阿爾泰狗娃花為菊科植物阿爾泰狗娃花(Heteropappus altaicus (Willd) Novopokr.)的干燥頭狀花序；齒緣草為紫草科植物石生齒緣草(Eritrichium rupestre (Pall.) Bunge)的干燥地上部分；沙龍子為石龍子科動(dòng)物沙龍子(Scinncus officinalis Linnaeus)的干燥體；青金石為硅酸鹽類礦物青石，主含Na6Ca[AlSiOJ6 (S04, C1，S)2。
[0028]本發(fā)明一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于:是按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜1_3份、阿爾泰狗娃花3_5份、齒緣草2_4份、沙龍子1-2份、青金石4_6份。
[0029]本發(fā)明一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于:是按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜2份、阿爾泰狗娃花4份、齒緣草3份、沙龍子1.5份、青金石5份。
[0030]本發(fā)明的一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于:是按如下方法制成:把各原料藥粉碎過80目-200目篩，制成散劑或片劑或丸劑。
[0031]本發(fā)明的一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于:是按如下方法制成:毛蓮菜、阿爾泰狗娃花、齒緣草，三味藥材用水作為提取溶劑，在70°C _95°C提取，提取次數(shù)為2-5次，每次提取時(shí)間為2-6小時(shí)，每次溶劑用量為毛蓮菜重量的8-15倍；濾過，合并提取液，濃縮，干燥，得提取物A ;沙龍子、青金石粉碎成細(xì)粉，與提取物A混勻，即得。
[0032]本發(fā)明的治療白血病的藥物組合物，在制備通過提高NCK、IL-2、IL_6、IFN-Y活性治療白血病藥物中的應(yīng)用。
[0033]本發(fā)明所得藥物組合物，可通過調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群比例及促進(jìn)這些細(xì)胞因子的分泌發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用，恢復(fù)自身受抑的免疫功能來殺傷殘留的白血病細(xì)胞，從而證實(shí)其具有誘生IL-2，IL-6和IFN-Y的作用，對(duì)白血病的治療機(jī)免疫功能重建有一定的作用。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，本發(fā)明所得藥物組合物具有增強(qiáng)IL-2和NCK活性作用，說明本發(fā)明藥物組合物對(duì)化療后P388白血病小鼠的免疫抑制有一定的保護(hù)作用。推測其作用機(jī)理可能與增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫粘附功能，促使紅細(xì)胞釋放NCK激活因子，調(diào)節(jié)NCK-1FN-1L-2免疫網(wǎng)絡(luò)有關(guān)。
[0034]本發(fā)明的藥物組合物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的治療白血病藥物。
[0035]本發(fā)明的治療白血病的藥物組合物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成通過提高NCK、IL-2、IL-6、IFN- Y活性治療白血病藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0036]下面通過具體實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的一種治療白血病藥物組合物及其制備方法做進(jìn)一步說明，但不限于本發(fā)明。
[0037]實(shí)施例1:藥物組合物及其制備方法
藥物組合物按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜2份阿爾泰狗娃花4份齒緣草3份沙龍子1.5份青金石5份；
藥物組合物制備方法:把各原料藥粉碎過150目篩，混勻，加適量水泛丸，干燥，即得。
[0038]實(shí)施例2:藥物組合物及其制備方法
藥物組合物按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜1份阿爾泰狗娃花5份齒緣草2份沙龍子1份青金石6份；
藥物組合物制備方法:把各 原料藥粉碎過80目篩，混勻，即得。
[0039]實(shí)施例3:藥物組合物及其制備方法
藥物組合物按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜3份阿爾泰狗娃花3份、齒緣草4份、沙龍子2份、青金石4份；
藥物組合物制備方法:把各原料藥粉碎過200目篩，混勻，用稀乙醇制成顆粒，干燥，加入淀粉、硬脂酸鎂，壓片，即得。
[0040]實(shí)施例4:藥物組合物及其制備方法
藥物組合物按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜3.5kg阿爾泰狗娃花3.5kg齒緣草4.5kg沙龍子2.5kg青金石4.8kg ；
藥物組合物制備方法:毛蓮菜、阿爾泰狗娃花、齒緣草，三味藥材用水作為提取溶劑，在70°C提取，提取次數(shù)為5次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為三味藥材重量的8倍；濾過，合并提取液，濃縮，干燥，即得；
可添加常規(guī)輔料制成藥劑學(xué)上各種劑型。
[0041]實(shí)施例5:藥物組合物及其制備方法
藥物組合物按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜2.5kg阿爾泰狗娃花3.3kg齒緣草3.8kg沙龍子2 kg青金石3.5kg ；
藥物組合物制備方法:毛蓮菜、阿爾泰狗娃花、齒緣草，三味藥材用水作為提取溶劑，在95°C提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為6小時(shí)，每次溶劑用量為三味藥材重量的15倍；濾過，合并提取液，濃縮，干燥，得提取物A ;沙龍子、青金石粉碎成細(xì)粉，與提取物A混勻，即得；
添加常規(guī)輔料制成藥劑學(xué)上各種劑型。
[0042]實(shí)驗(yàn)例1:藥物組合物對(duì)L615白血病小鼠的藥效試驗(yàn)
1.造模方法:在無菌條件下取L615白血病小鼠脾制成25%生理鹽水細(xì)胞懸液，給成年L615小鼠皮下接種，結(jié)果均發(fā)生白血病，用發(fā)病小鼠脾瘤細(xì)胞在同系小鼠連續(xù)移植，建立穩(wěn)定的L615白血病模型。
[0043]L615白血病細(xì)胞株的建立，去L615白血病小鼠的脾，在Hanks液內(nèi)將脾剪碎，使白血病細(xì)胞游離出來，通過離心收集游離細(xì)胞，然后用RPMI1640培養(yǎng)液(含10%小牛血清)稀釋成8*106/ml的細(xì)胞液，在37°C下培養(yǎng)。培養(yǎng)20d發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物中有貼壁的棱形細(xì)胞，其周圍有增殖的圓形細(xì)胞小島。將兩種形態(tài)不同的細(xì)胞分開培養(yǎng)時(shí)，梭形細(xì)胞可以正常貼壁生長，而懸浮細(xì)胞生長緩慢；再將兩種細(xì)胞重新混合培養(yǎng)，兩種細(xì)胞生長旺盛，45d后，將懸浮生長的圓形細(xì)胞再次單獨(dú)培養(yǎng)，一直傳到12代，細(xì)胞生長良好，從而建立此細(xì)胞株。
[0044]2.藥物組合物治療白血病藥效試驗(yàn)。
[0045]材料:昆明種小鼠(山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例4得到藥物組合物，環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)，標(biāo)準(zhǔn)重組人白介素-2 (北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司)，Yackl及IL-2依賴細(xì)胞株CTLL (中國科學(xué)院上海生命科學(xué)院細(xì)胞資源中心)，RPMII640細(xì)胞培養(yǎng)液及胎牛血清(華美生物工程公司);四甲基偶氮唑鹽(MTT)，十二烷基磺酸鈉及刀豆球蛋白，二甲基甲酰胺為(Sigma公司產(chǎn)品)；加樣器，0)2培養(yǎng)箱，ELX-800酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek公司)；96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板，Epics流式細(xì)胞儀(美國Beckman公司)。
[0046]方法:按上述方法造模。實(shí)驗(yàn)分組第一組為正常對(duì)照組，20只615系小鼠，常規(guī)飼養(yǎng)Iw后，腹腔注射生理鹽水0.2ml/d，生理鹽水灌腸0.3ml,上、下午各I次。第2組為模型組，常規(guī)飼養(yǎng)Iw后，接種L615白血病細(xì)胞，接種后處理同正常對(duì)照組。第3組為西藥組，20只常規(guī)飼養(yǎng)一周后，接種L615白血病細(xì)胞，接種后第3天開始ip環(huán)磷酰胺，200mg/kg，l次/d。第4組-第6組分別為藥物組合物組(實(shí)施例1)、藥物組合物組(實(shí)施例2)、藥物組合物組(實(shí)施例4)，分別取20 只常規(guī)飼養(yǎng)Id后，接種L615白血病細(xì)胞，接種后第3天分別給予藥物組合物組(實(shí)施例1)、藥物組合物組(實(shí)施例2)、藥物組合物組(實(shí)施例4)灌胃，0.3ml,上、下午各I次。以上各組動(dòng)物 每組取10只于第5天處死，取脾臟進(jìn)行相關(guān)免疫指標(biāo)檢測，余下各動(dòng)物進(jìn)行生存期觀察。
[0047]觀察指標(biāo):①生存期觀察。②T細(xì)胞亞群測定。③IL-2，IL-6，IFN- Y活性測定。
[0048]統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:數(shù)據(jù)以士 s表示,采用M1-crosoft Excel進(jìn)行t檢驗(yàn)。
[0049]結(jié)果:
生存期:本發(fā)明藥物組合物組生存期較模型組和西藥組明顯延長，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異P〈0.01，見表 1.表1各實(shí)驗(yàn)組生存期比
【權(quán)利要求】
1.一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于:是按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜1-3份、阿爾泰狗娃花3-5份、齒緣草2-4份、沙龍子1-2份、青金石4_6份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于:是按重量份由以下原料藥組成:毛蓮菜2份、阿爾泰狗娃花4份、齒緣草3份、沙龍子1.5份、青金石5份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于是按如下方法制成:把各原料藥粉碎過80目-200目篩，制成散劑或片劑或丸劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療白血病的藥物組合物，其特征在于:是按如下方法制成:毛蓮菜、阿爾泰狗娃花、齒緣草，三味藥材用水作為提取溶劑，在70°C _95°C提取，提取次數(shù)為2-5次，每次提取時(shí)間為2~6小時(shí)，每次溶劑用量為三味藥材重量的8-15倍；濾過，合并提取液，濃縮，干燥，得提取物A ;沙龍子、青金石粉碎成細(xì)粉，與提取物A混勻，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2所述的治療白血病的藥物組合物，在制備通過提高NCK、IL-2、IL-6、IFN-Y活性治療白血病藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2所述的治療白血病的藥物組合物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的治療白血病藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2所述的治療白血病的藥物組合物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成通過提高NCK、IL-2、IL-6、IFN- Y活性治療白血病藥物。
【文檔編號(hào)】A61K35/56GK103585240SQ201310525385
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】孔倩倩 申請(qǐng)人:濟(jì)南星懿醫(yī)藥技術(shù)有限公司