一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種采用低表面張力的載氧脂質(zhì)體的制備方法。該方法的具體步驟為：先將磷脂，膽固醇，四丁酚醛，十六醇，棕櫚酸，溶解于有機(jī)溶劑中，超聲混合均勻，然后在溶液中加入氟碳化合物，繼續(xù)超聲混合均勻。將所得到的混合溶液慢慢滴加至鹽溶液中，攪拌溶液，攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，即可以得到包裹氟碳化合物的載氧脂質(zhì)體。本發(fā)明制備的載氧脂質(zhì)體，具有相對(duì)較低的表面張力，便于肺部給藥時(shí)得到鋪展，增大接觸面積。能夠在緊急供氧藥物，急性供血等方面得到應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明屬于納米材料的制備領(lǐng)域，涉及一種水溶性納米級(jí)載氧脂質(zhì)體及其制備技術(shù)。
技術(shù)背景
[0002]全氟碳化合物是一類氟原子取代碳?xì)浠衔镏袣湓铀玫降幕衔?，常溫下一般為無(wú)色透明液體，密度高，性質(zhì)穩(wěn)定不易發(fā)生代謝分解，具有充分?jǐn)y載氧氣和二氧化碳的功能，是理想的液態(tài)呼吸介質(zhì)。采用肺內(nèi)途徑，可以為急性呼吸窘迫癥，突發(fā)事件等情況提供治療。
[0003]采用直接液體通氣法，即直接向肺內(nèi)注入氧合的氟碳化合物進(jìn)行氣體交換，雖然能夠改善呼吸窘迫癥患者的肺順應(yīng)性和氧合情況，但容易引起額外肺損傷，在臨床上應(yīng)用困難(J.Pediatr., 1990, 117:106., Am.J.Pespir.Crit.Care.Med., 2002,165:781)。采用吸入通氣，不僅可以改善肺順應(yīng)性和氧合情況，也能減輕肺部炎癥反應(yīng)(解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2009，34:746.)，具有潛在的研究?jī)r(jià)值。該方法的相關(guān)報(bào)道較少，其用于臨床仍需進(jìn)一步研究。
[0004]目前，脂質(zhì)體包裹的全氟碳化合物得到了一定的研究，但仍不能提供一種滿足臨床所需的載氧脂質(zhì)體。采用注入法能夠制備出較小粒徑的氟碳脂質(zhì)體，但只采用磷脂作為成膜基材，獲得的脂質(zhì)體溶液具有相對(duì)較高的表面張力，很難在肺泡表面進(jìn)行鋪展，從而限制了其應(yīng)用。在磷脂類的成膜基材中，加入能夠降低表面張力的四丁酚醛，十六烷醇，棕櫚酸，降低了氟碳脂質(zhì)體的表面張力，更好的提高了鋪展性，增大了氣體交換面積，從而使氣體交換的效率得到增強(qiáng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體及其制備方法。
[0006]一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體，其特征在于，每100毫升脂質(zhì)體溶液中含有
0.1-50克氟碳化合物，1-50克磷脂，1-10克的膽固醇，0-5克的四丁酚醛，0_5克的十六醇，0-5克的棕櫚酸，余量為水水，所述溶液中的脂質(zhì)體平均粒徑在30-150納米。
[0007]—種低表面張力的載氧脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
Cl)按重量份數(shù)計(jì)，將1-500份磷脂、1-50份的膽固醇、0-20份的四丁酚醛、0_20份的十六醇、0-20份的棕櫚酸，溶解于1000份的有機(jī)溶劑中，超聲混合均勻；
(2)在溶有磷脂的有機(jī)溶劑中加入氟碳化合物10-500份，繼續(xù)超聲混合均勻；
(3)將步驟(2)所得到的溶液慢慢滴加至1000-5000份的鹽溶液中，攪拌溶液，攪拌速度為500-2500轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，時(shí)間約2小時(shí)，即可以得到包裹氟碳化合物的載氧脂質(zhì)體。
[0008]將磷脂，膽固醇，四丁酚醛，十六醇，棕櫚酸，溶解于有機(jī)溶劑中，加入氟碳化合物使其混合均勻，所得的混合溶液加入到鹽溶液中，攪拌使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，即可以得到包裹氟碳化合物的載氧脂質(zhì)體。
[0009]所述的有機(jī)溶劑為石油醚，氯仿，二氯甲燒，乙醚，正己燒，乙酸乙酯，甲醇，甲苯中的一種或其組合。
[0010]所述的磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化蛋磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、1-肉豆寇酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-亞油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、氫化二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酸、二肉豆寇酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蓮酰磷脂酰乙二醇胺、二棕櫚酰磷脂耽乙二醇胺、腦磷脂酰絲氨酸、二肉豆寇酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆寇酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、腦鞘磷脂、二棕櫚酰鞘磷脂或二硬脂酰鞘磷脂中的一種或其組合。
[0011]所述鹽溶液為生理鹽水，磷酸鹽緩沖液，醋酸鹽緩沖液，三羥甲氨基甲烷緩沖液，巴比妥緩沖液，甲酸鈉緩沖液，枸櫞酸鹽緩沖液，氨-氯化銨緩沖液，硼砂一氯化鈣緩沖液，醋酸-鋰鹽緩沖液，醋酸一醋酸鈉緩沖液，醋酸一醋酸鉀緩沖液，醋酸一醋酸銨緩沖液，磷酸-三乙胺緩沖液中的一種。
[0012]所述氟碳化合物為二(F-烷基)乙烯，具體為二(F-丁基)乙烯、二(F-己基)乙烯；F-萘烷；F-金剛胺(FA) ；F-甲基金剛胺(FMA) ;F_1，3-二甲基金剛胺(FDMA);全氟代-2，2,4, 4-四甲基戊烷；F-二或F-三甲基二環(huán)[3，3，I]壬烷；C7_12全氟化的胺類，具體為F-三丙胺、F-4-甲基八氫喹嗪(FMOQ)、F-n-甲基-十氫異喹啉(FMIQ)、F-η-甲基十氫喹啉(FHQ)、F-n-環(huán)己基吡咯烷(FCHP)；溴化全氟碳化合物，具體為全氟溴辛烷(C8F17Br )、1-溴十五氟庚烷(C7F15Br)U-溴十三氟己烷(C6F13Br),中的一種或其組合。
`[0013]本發(fā)明的目的在于提供一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體的制備方法，所制備的這種載氧脂質(zhì)體包封率高，粒徑小，表面張力低，毒性小，適合作為肺部供氧使用，并且方法簡(jiǎn)便，便于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
(I)本發(fā)明制備的載氧脂質(zhì)體，表面張力低，能夠在肺表面得到較好鋪展，從而實(shí)現(xiàn)肺部給氧。
[0015](2)采用氟碳化合物為溶氧物質(zhì)，氧含量高，能夠迅速實(shí)現(xiàn)氣體交換。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1實(shí)施例1中載氧脂質(zhì)體的透射電鏡圖片。
[0017]圖2實(shí)施例3中載氧脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)。
[0018]圖3實(shí)施例3中載氧脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)。
[0019]左:不有載氧脂質(zhì)體的磷酸鹽緩沖溶液中的細(xì)胞；右:含有載氧脂質(zhì)體的磷酸鹽緩沖液中的細(xì)胞?！揪唧w實(shí)施方式】
[0020]以下通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步描述。以下的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，而不限于本發(fā)明的范圍。
[0021]實(shí)施例1:載氧脂質(zhì)體的制備。
[0022]按重量份計(jì)，配方如下:
生理鹽水2000份；
大豆卵磷脂200份；
全氟溴辛烷200份；；
二氯甲烷1000份；
棕櫚酸5份；
四丁酚醛2份。
[0023]制備工藝:
(1)按重量份數(shù)計(jì)，將200份大豆卵磷脂，5份棕櫚酸，2份四丁酚醛溶解于2000份的乙醚中，超聲混合均勻；
(2)在乙醚溶液中加入全氟溴辛烷200份，繼續(xù)超聲混合均勻；
(3)將步驟(2)所得到的溶液慢慢滴加至2000份的生理鹽水中，攪拌溶液(攪拌速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘)，攪拌至乙醚揮發(fā)完全，時(shí)間約2小時(shí)。即可以得到包裹全氟溴辛烷的載氧脂質(zhì)體。該載氧脂質(zhì)體制劑為乳白色溶液，稀釋10倍可得到淡淡的白色帶藍(lán)色乳光的透明溶液。該制劑的表面張力為29 mN/m脂質(zhì)體大小約在40--100 nm的范圍內(nèi)分布(其透射電鏡圖片如附圖1所示)，全氟溴辛烷的包封率約為95 %。
[0024]實(shí)施例2:載氧脂質(zhì)體的制備。
[0025]按重量份計(jì)，配方如下:
磷酸鹽緩沖液2000份；
蛋黃卵磷脂200份；
FC-77 (全氟辛烷和全氟環(huán)辛醚的混合物)200份；
乙醚 1000份；
十六烷醇1份；
四丁酚醛1份。
[0026]制備工藝:
(1)按重量份數(shù)計(jì)，將200份大豆卵磷脂，2份十六烷醇，1份四丁酚醛溶解于1000份的乙醚中，超聲混合均勻；
(2)在乙醚溶液中加入FC-77(全氟辛烷和全氟環(huán)辛醚的混合物)200份，繼續(xù)超聲混合均勻；
(3)將步驟(2)所得到的溶液慢慢滴加至2000份的生理鹽水中，攪拌溶液(攪拌速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘)，攪拌至乙醚揮發(fā)完全，時(shí)間約2小時(shí)。即可以得到包裹全氟溴辛烷的載氧脂質(zhì)體。該載氧脂質(zhì)體制劑為 乳白色溶液，稀釋10倍可得到淡淡的白色帶藍(lán)色乳光的透明溶液。該制劑的表面張力為33 mN/m脂質(zhì)體大小約在50--90 nm的范圍內(nèi)分布，F(xiàn)C-77的包封率約為80 %。
[0027]實(shí)施例3載氧脂質(zhì)體毒性評(píng)價(jià)。[0028]取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的單層培養(yǎng)HEK293上皮細(xì)胞，用0.25%膜蛋白酶和0.025%乙二胺四乙酸二鈉鹽溶液消化單層培養(yǎng)細(xì)胞，用含10%胎牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基配成單細(xì)胞懸液，以每孔I X IO4個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中，每孔體積100微升，將培養(yǎng)板移入二氧化碳培養(yǎng)箱中，在37°C，5% 二氧化碳及飽和濕度條件下培養(yǎng)過(guò)夜，使細(xì)胞貼壁。次日，用含磷酸鹽溶液配制一系列不同濃度的氟碳載氧脂質(zhì)體溶液(采用實(shí)施例2所制備的載氧脂質(zhì)體)。將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液吸出，加入載氧脂質(zhì)體溶液，37°C孵育不同時(shí)間，吸棄上清液。用磷酸鹽溶液洗兩次，每孔加入100微升濃度為5毫克/毫升的噻唑藍(lán)溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。加入100微升10%的十二烷基磺酸鈉溶液，培養(yǎng)4小時(shí)后采用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)試，吸收波長(zhǎng)采用570 nm。結(jié)果如附圖2所示。可以看出，在脂質(zhì)體存在條件下培養(yǎng)4個(gè)小時(shí)，細(xì)胞沒(méi)有出現(xiàn)明顯的活性降低，表明該載氧脂質(zhì)體對(duì)上皮細(xì)胞基本沒(méi)有毒性。
[0029]實(shí)施例4載氧脂質(zhì)體毒性評(píng)價(jià)。
[0030]取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的單層培養(yǎng)HEK293上皮細(xì)胞，用0.25%膜蛋白酶和0.025%乙二胺四乙酸二鈉鹽溶液消化單層培養(yǎng)細(xì)胞，用含10%胎牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基配成單細(xì)胞懸液，以每孔IXlO5個(gè)細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，每孔體積I毫升，將培養(yǎng)皿移入二氧化碳培養(yǎng)箱中，在37°C，5% 二氧化碳及飽和濕度條件下培養(yǎng)過(guò)夜，使細(xì)胞貼壁。次日，配制氟碳載氧脂質(zhì)體的磷酸鹽溶液(采用實(shí)施例2所制備的載氧脂質(zhì)體)。以磷脂含量計(jì)，脂質(zhì)體溶液的濃度為20毫克/毫升。將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液吸出，加入載氧脂質(zhì)體溶液，37°C孵育4個(gè)小時(shí)，吸棄上清液。用磷酸鹽溶液洗3次，置于熒光顯微鏡明場(chǎng)下進(jìn)行觀察，并拍照。圖片如附圖3所示。從圖中可以看出，采用含有載氧脂質(zhì)體的溶液培養(yǎng)的細(xì)胞，與不含載氧脂質(zhì)體的磷酸鹽溶液培養(yǎng)的細(xì)胞，在數(shù)量和形貌上沒(méi)有明顯差異，表明該載氧脂質(zhì)體對(duì)上皮細(xì)胞基本沒(méi)有毒性。`
【權(quán)利要求】
1.一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體，其特征在于，每100毫升脂質(zhì)體溶液中含有0.1-50克氟碳化合物，1-50克磷脂，1-10克的膽固醇，0-5克的四丁酚醛，0-5克的十六醇，0-5克的棕櫚酸，余量為水水，所述溶液中的脂質(zhì)體平均粒徑在30-150納米。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: （l)按重量份數(shù)計(jì)，將1-500份磷脂、1-50份的膽固醇、0-20份的四丁酚醛、0_20份的十六醇、0-20份的棕櫚酸，溶解于1000份的有機(jī)溶劑中，超聲混合均勻； (2)在溶有磷脂的有機(jī)溶劑中加入氟碳化合物10-500份，繼續(xù)超聲混合均勻； (3)將步驟(2)所得到的溶液慢慢滴加至1000-5000份的鹽溶液中，攪拌溶液，攪拌速度為500-2500轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌至有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，時(shí)間約2小時(shí)，即可以得到包裹氟碳化合物的載氧脂質(zhì)體。
3.將磷脂，膽固醇，四丁酚醛，十六醇，棕櫚酸，溶解于有機(jī)溶劑中，加入氟碳化合物使其混合均勻，所得的混合溶液加入到鹽溶液中，攪拌使有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，即可以得到包裹氟碳化合物的載氧脂質(zhì)體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑為石油醚，氯仿，二氯甲烷，乙醚，正己烷，乙酸乙酯，甲醇，甲苯中的一種或其組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述的磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化蛋磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、1-肉豆寇酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-棕櫚酰磷脂酰膽堿、1-棕櫚酰-2-油酰磷脂酰膽堿、1-硬脂酰-2-亞油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、氫化二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆寇酰磷脂酸、二肉豆寇酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酸、二硬脂酰磷脂酸、二肉豆蓮酰磷脂酰乙二醇胺、二棕櫚酰磷脂耽乙二醇胺、腦磷脂酰絲氨酸、二肉豆寇酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、蛋磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆寇酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、腦鞘磷脂、二棕櫚酰鞘磷脂或二硬脂酰鞘磷脂中的一種或其組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述鹽溶液為生理鹽水，磷酸鹽緩沖液，醋酸鹽緩沖液，三羥甲氨基甲烷緩沖液，巴比妥緩沖液，甲酸鈉緩沖液，枸櫞酸鹽緩沖液，氨-氯化銨緩沖液，硼砂一氯化鈣緩沖液，醋酸-鋰鹽緩沖液，醋酸一醋酸鈉緩沖液，醋酸一醋酸鉀緩沖液，醋酸一醋酸銨緩沖液，磷酸-三乙胺緩沖液中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種低表面張力的載氧脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述氟碳化合物為二(F-烷基)乙烯，具體為二(F-丁基)乙烯、二(F-己基)乙烯；F-萘烷；F-金剛胺(FA) ；F-甲基金剛胺(FMA) ；F-1, 3- 二甲基金剛胺(FDMA);全氟代_2，2，4，4-四甲基戊烷；F-二或F-三甲基二環(huán)[3，3，I]壬烷；C7-12全氟化的胺類，具體為F-三丙胺、F-4-甲基八氫喹嗪(FMOQ)、F-n-甲基-十氫異喹啉(FMIQ)、F_n_甲基十氫喹啉(FHQ)、F_n-環(huán)己基吡咯烷(FCHP);溴化全氟碳化合物，具體為全氟溴辛烷(C8F17Br)U-溴十五氟庚烷(C7F15Br)、1-溴十三氟己烷(C6F13Br` )，中的一種或其組合。
【文檔編號(hào)】A61K9/127GK103505419SQ201310438079
【公開(kāi)日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2013年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月24日
【發(fā)明者】劉璐, 魏岱旭, 朱君, 王丹 申請(qǐng)人:上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司