一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗及其制備方法，該二價活疫苗由抗原和凍干保護劑組成，其中抗原包括保藏編號為：CCTCC-V201320的雞腎型傳染性支氣管炎病毒K136株和雞呼吸型傳染性支氣管炎病毒H120株。本發(fā)明中所述二價疫苗的制備方法是：將IBV-K136株和H120株分別經(jīng)雞胚擴大培養(yǎng)后，將培養(yǎng)產(chǎn)物混合均勻制備成疫苗抗原，再將疫苗抗原和凍干保護劑混合均勻后凍干制成疫苗。本發(fā)明制備的二價苗可同時預防雞呼吸型和腎型傳染性支氣管炎，符合我國當前雞傳染性支氣管炎的流行特征，解決了我國目前針對雞腎型流行性傳染性支氣管炎無苗可用的問題，可以大范圍的推廣和使用。
【專利說明】一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于畜禽用生物新醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是涉及一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]雞傳染性支氣管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是雞的一種急性、高度接觸性傳染病，它主要侵害呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)和消化系統(tǒng)。本病最早由美國Schalk和Hawn報道，臨床以患雞咳嗽、噴嚏和氣管啰音的呼吸道癥狀為主，之后陸續(xù)在世界各國發(fā)生，1936年Beach和Schalm確定病原為病毒(呼吸型IBV)，后命名為雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV),歸入冠狀病毒科,是冠狀病毒的代表株。1972年鄺榮祿等首次在廣東證實我國也有該病發(fā)生。傳染性支氣管炎病毒血清型較多，常見的有 MassachussettS、Connecticat、lowa97>1wa609、Hotle、JMK、Clark333、SEl7、Florida、Arkanass99 和 Australian “T”。1962 年 Wintefield 等首次報道了腎型 IBV,主要引起腎臟腫大，尿酸鹽沉積，外觀呈現(xiàn)典型的“花斑腎”。
[0003]雞傳染性支氣管 炎呈世界性分布，對養(yǎng)雞業(yè)的危害極大，它能使成雞的增重和飼料報酬降低，雞蛋的產(chǎn)量、質(zhì)量和孵化率下降，并直接導致雛雞死亡、腎臟病變和輸卵管永久性退化；另外，IB還經(jīng)常做為病因之一參與混合感染，例如誘發(fā)慢性呼吸道病(CRD)的爆發(fā)。由于IBV基因組核酸RNA復制的不連續(xù)機制及RNA聚合酶的不完全校對機制，使得病毒RNA在復制過程中易發(fā)生基因點突變、插入、缺失或重組，因此造成大量IBV變異株的出現(xiàn)。目前世界上已分離到的IB血清型已達30種之多，不同血清型毒株疫苗之間僅有部分或無交叉保護作用，IB的多血清型性為其免疫預防增加了難度。
[0004]近年來，世界范圍內(nèi)雞傳染性支氣管炎的流行呈上升趨勢，尤其是腎病變型IB已蔓延至數(shù)十個國家和地區(qū)，給當?shù)仞B(yǎng)雞業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。據(jù)流行病學調(diào)查結(jié)果顯示，目前IBV在中國大部分地區(qū)流行，且以多種致病型同時存在，主要以“腎型”及“呼吸型”病毒為主。現(xiàn)階段我國用于制備疫苗防治呼吸型IB的弱毒主要包括H120株、M41株等，經(jīng)典的腎型弱毒主要包括W93株、Ma5株等。隨著IBV病毒的變異，大部分經(jīng)典的呼吸型弱毒株制備的疫苗逐漸被市場淘汰，而H120株制備的疫苗由于符合我國目前流行的呼吸型IB被市場所追捧，與大多數(shù)呼吸型IB經(jīng)典株類似的是W93株也逐漸喪失了對我國目前流行的腎型IB的防治效力，且用該毒株制備的疫苗由于其副反應(yīng)較大，不適合對我國的流行株的防治，因此篩選獲得新的保護力好的腎型IB毒株并用于制備針對目前中國流行的腎型傳染性支氣管炎病毒活疫苗就顯得尤為重要。
[0005]目前我國尚沒有能同時防治雞腎型和呼吸型傳染性支氣管炎的商品化二價疫苗，為能有效防治“腎型”及“呼吸型”病毒對我國養(yǎng)雞業(yè)的肆掠，常需要用相應(yīng)的單價疫苗對養(yǎng)殖雞群反復免疫，加大了對受免雞群的免疫應(yīng)激，同時極大的增強了人力、物力成本的消耗，更為重要的是現(xiàn)有市售疫苗往往對腎型雞傳染性支氣管炎不具有保護作用，往往導致免疫失敗。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是在于提供一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，實現(xiàn)能夠同時有效預防呼吸型和腎型雞傳染性支氣管炎的效果，解決目前國內(nèi)現(xiàn)有IBV疫苗對上述兩種類型雞傳染性支氣管炎只能提供部分預防或甚至無任何預防效果的問題，從而更大程度上避免雞傳染性支氣管炎的廣泛發(fā)生與流行。
[0007]本發(fā)明的目的還在于提供上述一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗的制備方法，即將腎型雞傳染性支氣管炎弱毒K136株和呼吸型雞傳染性支氣管炎弱毒H120株分別經(jīng)雞胚擴大培養(yǎng)后，將收獲的培養(yǎng)產(chǎn)物等比混合制成疫苗抗原，再將疫苗抗原與凍干保護劑等體積混合后凍干制成疫苗產(chǎn)品。
[0008]為實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，所采用的技術(shù)方案如下:
[0009]一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，該活疫苗由抗原和凍干保護劑組成，所述抗原包括雞腎型傳染性支氣管炎病毒和雞呼吸型傳染性支氣管炎病毒。所述凍干保護劑包括10%蔗糖和5%脫脂乳。
[0010]在上述二價活疫苗中，所述抗原中包括的雞腎型傳染性支氣管炎病毒是指保藏編號為CCTCC-V201320的K136株；所述抗原中包括的雞呼吸型傳染性支氣管炎病毒是指H120 株。
[0011]抗原中包括的雞傳染性支氣管炎病毒H120株均是經(jīng)典的疫苗抗原，用其制備的疫苗對我國流行的新城疫和雞呼吸型傳染性支氣管炎有良好的防治效果?？乖邪ǖ腒136株病毒是由發(fā)明人針 對我國目前流行的雞腎型傳染性支氣管炎病毒連續(xù)雞胚傳代136代致弱的。其有效的克服了以W93株為代表的經(jīng)典腎型毒株在疫苗制備過程中副反應(yīng)大、不適合我國流行株防治的缺點，本發(fā)明中用K136株做抗原制備疫苗尚屬首次。
[0012]本發(fā)明還提供了一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗的制備方法，所述制備方法的特征在于是選用雞傳染性支氣管炎病毒K136株和H120株并分別經(jīng)雞胚擴大培養(yǎng)后，將培養(yǎng)產(chǎn)物混合均勻制備成疫苗抗原，再將疫苗抗原和凍干保護劑混合均勻后凍干制成疫苗。
[0013]一種上述二價活疫苗的制備方法，其中包括以下步驟:
[0014]I)選用雞傳染性支氣管炎病毒K136株和H120株；
[0015]2)分別將IBV-K136株和IBV-H120株經(jīng)尿囊腔接種雞胚，進行病毒擴大培養(yǎng)；
[0016]3)分別收獲上述兩種病毒擴大培養(yǎng)液，經(jīng)無菌處理并進行病毒含量測定后，等體積混合均勻制備成本發(fā)明疫苗的抗原；
[0017]4)將疫苗抗原與凍干保護劑等體積混合均勻后凍干，制備成本發(fā)明中的疫苗。
[0018]上述制備方法具體包括以下步驟:
[0019]I)選用保藏的雞傳染性支氣管炎病毒K136株和H120株,用于病毒擴大培養(yǎng)；
[0020]2)分別將腎型雞傳染性支氣管炎弱毒K136株和呼吸型雞傳染性支氣管炎弱毒H120株經(jīng)尿囊腔接種于10日齡SPF雞胚；37°C孵育50-60小時后分別收獲全部雞胚尿囊液作為病毒擴大培養(yǎng)液；
[0021]3)將上述培養(yǎng)產(chǎn)物分別進行無菌處理并測定病毒含量后，將兩種病毒擴大培養(yǎng)液產(chǎn)物等比混合作為半成品，即為本發(fā)明中疫苗的抗原；
[0022]4)將疫苗抗原與凍干保護劑按照體積比1:1進行配比，經(jīng)冷凍干燥后36_48h后即得疫苗，即為成品。
[0023]本發(fā)明制備的二價苗可同時預防呼吸型和腎型雞傳染性支氣管炎，符合我國當前雞傳染性支氣管炎的流行特征，可以大范圍的推廣和使用。而且本發(fā)明篩選獲得的K136株為我國目前流行毒株多次傳代弱毒株，其產(chǎn)品填補了我國目前針對流行性腎型雞傳染性支氣管炎無苗可用的空白，同時將其與經(jīng)典的呼吸型雞傳染性支氣管炎H120株制成二價疫苗，可以有效降低受免雞群的免疫應(yīng)激，同時極大的降低了人力、物力成本的消耗。
【具體實施方式】
[0024]為能進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容、特點及功效，茲例舉以下實施例進一步描述本發(fā)明。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的前提下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍。
[0025]實施例1:雞傳染性支氣管炎腎型株K136株的篩選
[0026]本公司從2003年-2005年分別在我國不同雞場采集疑似雞傳染性支氣管炎病毒分離毒株。病雞主要表現(xiàn)為精神不振、咳嗽，常聽到呼嚕聲，病理剖檢發(fā)現(xiàn)除氣管環(huán)有小出血點外腎臟還有明顯病變，經(jīng)過初步鑒定獲得4株腎型傳染性支氣管炎病毒毒株，分別命名為 CK/IBV/QD03 株、CK/IBV/ZC03 株、CK/IBV/YT04 株和 CK/IBV/SD05 株。使用 10 日齡SPF雞胚對四株毒株進行連續(xù)傳代致弱，每代通過尿囊腔接種4枚雞胚，37°C孵育，接種后36h凍死雞胚，收獲尿囊液用于下一代接種，連傳至136代。期間進行致弱評價，其評價方法是取第 2、20、40、50、60、70、80、90、100、110、120、124、128、132、134、136、140 代的毒株感染I日齡雛雞，觀察雛雞發(fā)病情況。
[0027]結(jié)果見表1:
[0028]表1 4種分離株不同代次對SPF雞的致病結(jié)果
[0029]
【權(quán)利要求】
1.一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，該活疫苗由抗原和凍干保護劑組成，其特征在于所述抗原包括雞腎型傳染性支氣管炎病毒和雞呼吸型傳染性支氣管炎病毒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，其特征在于所述抗原中包括的雞腎型傳染性支氣管炎病毒是指保藏編號為CCTCC-V201320的K136株；所述抗原中包括的雞呼吸型傳染性支氣管炎病毒是指H120株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，其特征在于所述抗原中包括的K136株病毒是由發(fā)明人針對我國目前流行的雞腎型傳染性支氣管炎病毒連續(xù)雞胚傳代136代致弱獲得的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，其特征在于所述抗原中包括的K136株病毒在傳代致弱評價中，傳至第80代病毒株受試雞開始無死亡，第100代病毒株受試雞開始無眼觀病變，第120代病毒株開始受試雞開始無組織學病變。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗，其特征在于所述抗原中包括的K136株病毒在免疫評價中，傳至第136代病毒株免疫組分毒率為0/10，對照組分毒率為10/10。
6.一種雞傳染性 支氣管炎二價活疫苗的制備方法，其特征是在于選用雞傳染性支氣管炎病毒K136株和H120株并分別經(jīng)雞胚擴大培養(yǎng)后，將培養(yǎng)產(chǎn)物混合均勻制備成疫苗抗原，再將疫苗抗原和凍干保護劑混合均勻后凍干制成疫苗。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟: 1)選用雞傳染性支氣管炎病毒K136株和H120株； 2)分別將IBV-K136株和IBV-H120株經(jīng)尿囊腔接種雞胚，進行病毒擴大培養(yǎng)； 3)分別收獲上述兩種病毒擴大培養(yǎng)液，經(jīng)無菌處理并進行病毒含量測定后，等體積混合均勻制備成本發(fā)明疫苗的抗原； 4)將疫苗抗原與凍干保護劑等體積混合均勻后凍干，制備成本發(fā)明中的疫苗。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗的制備方法，其特征在于在抗原制備過程中兩種病毒的擴大培養(yǎng)液是等體積混合的。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的一種雞傳染性支氣管炎二價活疫苗的制備方法，其特征在于在疫苗制備過程中抗原和凍干保護劑是等體積混合的。
【文檔編號】A61K39/295GK103599532SQ201310438028
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】孫美玉, 何召慶, 楊保收, 陳冰, 邢婧珉, 李云霞, 梁武, 李守軍 申請人:天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司