專利名稱：一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及屬于獸用生物制品培育技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法。
背景技術(shù)：
在對(duì)生物制品中對(duì)活疫苗的鑒別檢驗(yàn)和外源病毒檢驗(yàn)時(shí)，特異性血清中和試驗(yàn)是常用的方法。目前國(guó)內(nèi)外制備特異性血清時(shí)，通常是用同源的SPF動(dòng)物作為免疫受體。所謂的SPF動(dòng)物，即無(wú)特定病原體動(dòng)物(指動(dòng)物體內(nèi)無(wú)特定的微生物和寄生蟲(chóng))是不攜帶潛在感染或條件致病菌，但帶有非特定的微生物和寄生蟲(chóng)的動(dòng)物。制備特異性血清對(duì)SPF動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)要求較高，很難獲得。而采用普通級(jí)的同源動(dòng)物作為免疫受體制備的特異性血清，則很容易受到其它病毒的污染，進(jìn)而影響血清的特異性和可靠性。因此制備特異性血清時(shí)能否采用非同源的免疫受體進(jìn)行制備，以及制備的特異血清的品質(zhì)成為目前獸用生物制品領(lǐng)域內(nèi)研究的方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提出一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法，該方法采用健康的家兔制備抗雞傳染性支氣管(IB)特異血清，避免了同源的污染，得到的抗體滴度高，品質(zhì)穩(wěn)定，且操作方便，實(shí)驗(yàn)條件要求低，易于實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的技術(shù)方案是通過(guò)如下步驟來(lái)實(shí)現(xiàn)的
一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法，其制備方法及步驟如下
(O挑選體重在2-3kg的健康家兔；
(2)制備傳染性支氣管炎毒株注射液，對(duì)家兔采用耳緣靜脈注射的方式進(jìn)行傳染性支氣管炎毒株的免疫，免疫劑量采用逐次遞加方式，每次免疫劑量為l_4ml，每間隔7天免疫一次，共免疫4次；
(3)采集不同免疫次數(shù)后的等量O.5ml血液，進(jìn)行HI實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，檢測(cè)兔血血清中抗體滴度是否達(dá)到21°以上，以確定采血時(shí)間；
(4)當(dāng)兔血血清中抗體滴度達(dá)到21°以上時(shí)，采集血液，將采集后的血液放到37°C恒溫箱恒溫放置I小時(shí)，然后放入4°C冰箱放置8-12小時(shí)，然后取出血液，將血液分出血清，用4000r/min離心機(jī)對(duì)血清離心IOmin,然后用O. 22um濾膜過(guò)濾,將過(guò)濾后的血清進(jìn)行無(wú)菌分裝、保存；
(5)無(wú)菌條件下對(duì)分裝保存的血清進(jìn)行HI實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，確定純凈和滴度。其中步驟(3)中采血時(shí)間一般定為第4次免疫后的第5天。本發(fā)明創(chuàng)造性的應(yīng)用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清，并且對(duì)血清制備過(guò)程中的免疫劑量、免疫次數(shù)、免疫間隔、免疫方式、采血時(shí)間、血清處理和檢測(cè)等做了系統(tǒng)調(diào)整。使通過(guò)家兔制備得到的雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清，得到的抗體滴度高，避免了同源的污染，品質(zhì)更加穩(wěn)定，而且該方法簡(jiǎn)化了條件，操作方便，節(jié)約了時(shí)間和原材料，易于實(shí)施， 具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的技術(shù)方案更加清楚明白，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例
本發(fā)明實(shí)施例中，除另有說(shuō)明外，所有份數(shù)和百分比均按體積計(jì)算。材料制造本品用傳染性支氣管炎毒株為H120毒株和H52毒株，檢測(cè)用的為荷蘭購(gòu)買(mǎi)的M41抗原,體重2. 5kg的健康家兔一只。實(shí)施步驟
(I)先將H120毒株和H52毒株等量混合，做3倍稀釋，然后向家兔耳緣靜脈注射O. 5ml，注射7天后采集血液O. 5ml，檢測(cè)抗體為22。(2)第一次免疫后7天進(jìn)行第二次免疫，將H120毒株和H52毒株等量混合，做2倍稀釋，然后向家兔耳緣靜脈注射1ml，注射7天后采集血液O. 5ml，檢測(cè)血清抗體為27。(3)第二次免疫后7天進(jìn)行第三次免疫，將Hl20毒株和H52毒株等量混合，不做稀釋，然后向家兔耳緣靜脈注射1ml，注射7天后采集血液O. 5ml，檢測(cè)血清抗體為29。(4)第三次免疫后7天進(jìn)行第四次免疫，將Hl20毒株和H52毒株等量混合，不做稀釋，然后向家兔耳緣靜脈注射2ml，分別于注射后3天、5天采集血液O. 5ml，其中免后5天采集的血液中，檢測(cè)血清抗體為211，此時(shí)進(jìn)行心臟采血。(4)將采集后的血液放到37 V恒溫箱恒溫放置I小時(shí),然后取出放到4°C冰箱放置8-12小時(shí)，然后取出血液，將血液分出血清，用4000r/min離心機(jī)對(duì)血清離心lOmin，然后用O. 22um濾膜過(guò)濾,過(guò)濾后進(jìn)行無(wú)菌分裝,O. 5ml/瓶。(5)無(wú)菌條件下對(duì)分裝保存的血清進(jìn)行HI實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，HI檢測(cè)21°以上，即雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清制備完成。
權(quán)利要求
1.一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法，其特征在于制備方法及步驟如下(O挑選體重在2-3kg的健康家兔；(2)制備傳染性支氣管炎毒株注射液，對(duì)家兔采用耳緣靜脈注射的方式進(jìn)行傳染性支氣管炎毒株的免疫，免疫劑量采用逐次遞加方式，每間隔7天免疫一次，共免疫4次；(3)采集不同免疫次數(shù)后的等量血液，進(jìn)行HI實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，檢測(cè)兔血血清中抗體滴度是否達(dá)到21°以上，以確定采血時(shí)間；(4)當(dāng)兔血血清中抗體滴度達(dá)到21°以上時(shí)，采集血液，將采集后的血液放到37°C恒溫箱恒溫放置I小時(shí)，然后放入4°C冰箱8-12小時(shí)，然后將血液分出血清，對(duì)血清進(jìn)行離心過(guò)濾，將過(guò)濾后的血清進(jìn)行無(wú)菌分裝、保存；(5)無(wú)菌條件下對(duì)分裝保存的血清進(jìn)行HI實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，確定純凈和滴度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法，其特征在于每次免疫劑量為l_4ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法，其特征在于步驟(3)中采血時(shí)間定為第4次免疫后的第5天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法，其特征在于步驟(4)中采用4000r/min離心機(jī)對(duì)血清離心IOmin,然后用O. 22um濾膜過(guò)濾。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用家兔制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清的方法，該方法創(chuàng)造性的用家兔作為免疫受體，制備雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清，并且對(duì)血清制備過(guò)程中的免疫劑量、免疫次數(shù)、免疫間隔、免疫方式、采血時(shí)間、血清處理和檢測(cè)等做了系統(tǒng)調(diào)整。使通過(guò)家兔制備得到的雞傳染性支氣管炎陽(yáng)性血清，得到的抗體滴度高，避免了同源的污染，品質(zhì)更加穩(wěn)定，而且該方法簡(jiǎn)化了條件，操作方便，節(jié)約了時(shí)間和原材料，易于實(shí)施，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)G01N33/531GK103018436SQ20121054206
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月14日
發(fā)明者孟照潔, 馬景霞, 賈紅梅 申請(qǐng)人:山東濱州沃華生物工程有限公司