專利名稱：一種酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療腫瘤的藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合物。
背景技術(shù)：
酪氨酸激酶抑制劑(TKI)為一類能抑制酪氨酸激酶活性的化合物。酪氨酸激酶是一類催化ATP上Y -磷酸轉(zhuǎn)移到蛋白酪氨酸殘基上的激酶，能催化多種底物蛋白質(zhì)酪氨酸殘基磷酸化，在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化中具有重要作用。迄今發(fā)現(xiàn)的蛋白酪氨酸激酶中多數(shù)是屬于致癌RNA病毒的癌基因產(chǎn)物，也可由脊椎動(dòng)物的原癌基因產(chǎn)生。酪氨酸激酶抑制劑可作為三磷酸腺苷(ATP)與酪氨酸激酶結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，也可作為酪氨酸的類似物，阻斷酪氨酸激酶的活性，抑制細(xì)胞增殖，已經(jīng)開發(fā)為數(shù)種抗腫瘤藥物。目前，臨床上最常用抑制劑有伊馬替尼、達(dá)沙替尼和尼羅替尼等。組蛋白去乙?；?histone deacetylase, HDACs)是一組在細(xì)胞染色質(zhì)水平、通過誘導(dǎo)組蛋白去乙酰化來調(diào)控包括染色質(zhì)重組、轉(zhuǎn)錄活化或抑制、細(xì)胞周期、細(xì)胞分化及細(xì)胞凋亡等一系列生物學(xué)效應(yīng)的酶，特別是與細(xì)胞活化后的基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)調(diào)控有關(guān)。目前研究發(fā)現(xiàn)，組蛋白去乙?；敢种苿?histone deacetylases inhibitors,HDACIs)通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)化療和放療敏感性，緩解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤，逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移性腫瘤的惡性表型等表現(xiàn)出一定的抗腫瘤效應(yīng)。目前，組蛋白去乙?；敢种苿┲饕?鍛煉脂肪酸類:如丁酸類、丙戊酸類等；異羥肟酸類:如曲古菌素A等；環(huán)四肽類；苯甲酰胺類。因此，通過科學(xué)的技術(shù)途徑制備一種酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合物來解決酪氨酸激酶抑制劑單一靶點(diǎn)治療腫瘤時(shí)療效不足，耐藥性差，臨床用藥劑量大的問題，成為 目前抗腫瘤技術(shù)領(lǐng)域迫切需要解決的難題。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服酪氨酸激酶抑制劑單一靶點(diǎn)治療腫瘤時(shí)療效不足，耐藥性差，臨床用藥劑量大問題，本發(fā)明提供一種酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合物。為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn):一種應(yīng)用于治療腫瘤的酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合物，其特征在于，制得的該藥物組合物由酪氨酸激酶抑制劑和組蛋白去乙?；敢种苿┌促|(zhì)量配比0.5:1" :4組成。所述的酪氨酸激酶抑制劑是伊馬替尼、達(dá)沙替尼和尼羅替尼或吉非替尼；所述的組蛋白去乙?；敢种苿┦清憻捴舅犷悺惲u肟酸類、環(huán)四肽類或苯甲酰胺類，其中，所述的鍛煉脂肪酸類是丁酸類、丙戊酸類，所述的異羥肟酸類是曲古菌素A ;所述的丙戊酸類是丙戊酸鹽。所述的丙戊酸鹽的劑量采用低細(xì)胞毒性劑量，與臨床相關(guān)的劑量為IOO-1OOOmg/d ;所述的伊馬替尼的劑量采用臨床劑量，與臨床相關(guān)的劑量為50-800mg/d，并且與丙戊酸鹽以組合的用藥方式用藥。所述的伊馬替尼是甲磺酸伊馬替尼；所述的丙戊酸鹽是指在能分解為丙戊酸根離子的鹽類，包括丙戊酸鈉、丙戊酸半鈉或丙戊酸鎂；并且伊馬替尼和丙戊酸鹽兩者以同時(shí)、分別或者連續(xù)的方式用藥；且伊馬替尼在丙戊酸鹽用藥之前或者之后給藥。還包括適量的防腐劑、抗氧化劑、矯味劑、著色劑、表面活性劑、崩解劑、pH調(diào)節(jié)劑、黏合劑、增塑劑、潤(rùn)滑劑、合成高分子化合物、天然高分子化合物，制備成藥物制劑學(xué)上接受片劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、眼用制劑、丸劑、植入劑、氣霧劑、膜劑、口服劑或貼劑。本發(fā)明的酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙酰化酶抑制劑的藥物組合物，在伊馬替尼等酪氨酸激酶抑制劑針對(duì)酪氨酸激酶為靶點(diǎn)進(jìn)行抑制的基礎(chǔ)上，提出多靶點(diǎn)治療腫瘤。提出酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑穆?lián)合使用，其中優(yōu)選伊馬替尼與丙戊酸鹽，丙戊酸鹽針對(duì)組蛋白去乙?；缸鳛榘悬c(diǎn)，兩者聯(lián)合使用表現(xiàn)出了顯著的增效、減量和延遲耐藥的效果。


圖1為丙戊酸鹽對(duì)K562的增殖抑制作用的量效關(guān)系。丙戊酸半鈉處理K562細(xì)胞72h后用MTT法測(cè)定丙戊酸半鈉對(duì)K562細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率并計(jì)算IC5(I，獨(dú)立重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，n=3。圖2為伊馬替尼聯(lián)合丙戊酸半鈉對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制作用的影響。藥物處理細(xì)胞72h后用MTT法測(cè)定抑制率并計(jì)算各`組的IC5tl，各組獨(dú)立重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，n=3。圖3為伊馬替尼聯(lián)合丙戊酸半鈉對(duì)K562細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。藥物處理細(xì)胞72h后用Annexin V/PI雙染法通過流式細(xì)胞儀測(cè)定早期凋亡率，各組獨(dú)立重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，n=3。圖4為伊馬替尼聯(lián)合丙戊酸半鈉對(duì)K562細(xì)胞周期的作用表。藥物處理細(xì)胞72h后用PI染色法通過流式細(xì)胞儀測(cè)定各個(gè)細(xì)胞周期的比例，各組獨(dú)立重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，n=3。圖5為丙戊酸半鈉對(duì)K562G的增殖抑制作用的量效關(guān)系。丙戊酸鹽處理K562細(xì)胞72h后用MTT法測(cè)定丙戊酸鹽對(duì)K562G細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率并計(jì)算IC5(I，獨(dú)立重復(fù)3次實(shí)驗(yàn),n=3。圖6為伊馬替尼聯(lián)合丙戊酸半鈉對(duì)K562G細(xì)胞的增殖抑制作用的影響。藥物處理細(xì)胞72h后用MTT法測(cè)定抑制率并計(jì)算各組的IC5tl，各組獨(dú)立重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，n=3。圖7為伊馬替尼聯(lián)合丙戊酸半鈉對(duì)K562G細(xì)胞周期的作用表。藥物處理細(xì)胞72h后用PI染色法通過流式細(xì)胞儀測(cè)定各個(gè)細(xì)胞周期的比例，各組獨(dú)立重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，n=3。下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
具體實(shí)施例方式按照本發(fā)明的技術(shù)方案，本實(shí)施例給出一種酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合，所述的酪氨酸激酶抑制劑選擇伊馬替尼，組蛋白去乙?；敢种苿┻x擇丙戊酸半鈉，兩者按質(zhì)量配比0.5:Γ1:4組合，僅僅是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，并非對(duì)具體的酪氨酸激酶抑制劑與具體的組蛋白去乙?；敢种苿┞?lián)合用藥進(jìn)行限制。所述的丙戊酸鹽的劑量采用低細(xì)胞毒性劑量，與臨床相關(guān)的劑量為IOO-1OOOmg/d ;所述的伊馬替尼的劑量采用臨床劑量，與臨床相關(guān)的劑量為50-800mg/d，并且與丙戊酸鹽以組合的用藥方式用藥。所述的酪氨酸激酶抑制劑包含但不局限于伊馬替尼、達(dá)沙替尼和尼羅替尼、吉非替尼等；所述的組蛋白去乙?；敢种苿┌ǖ痪窒抻?鍛煉脂肪酸類:如丁酸類、丙戊酸類；異羥肟酸類:如曲古菌素A等；環(huán)四肽類；苯甲酰胺類。其中，丙戊酸類是丙戊酸鹽。所述的伊馬替尼選用甲磺酸伊馬替尼；丙戊酸鹽是指在能分解為丙戊酸根離子的鹽類，包括丙戊酸、丙戊酸鈉、丙戊酸半鈉或丙戊酸鎂等。并且將兩者以同時(shí)、分別或者連續(xù)的方式用藥。例如甲磺酸伊馬替尼在丙戊酸鹽用藥之前或者之后給藥。本實(shí)施例中，酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合，還可以以適量的防腐劑、抗氧化劑、矯味劑、著色劑、表面活性劑、崩解劑、PH調(diào)節(jié)劑、黏合劑、增塑齊 、潤(rùn)滑劑、合成高分子化合物、天然高分子化合物，制備成藥物制劑學(xué)上接受片劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、眼用制劑、丸劑、植入劑、氣霧劑、膜劑、Π服劑或貼劑。所優(yōu)選的伊馬替尼和丙戊酸半鈉抗腫瘤對(duì)Κ562細(xì)胞作用如下，但只是對(duì)細(xì)胞學(xué)進(jìn)一步說明，目的是針對(duì)臨床抗腫瘤機(jī)理內(nèi)容做進(jìn)一步闡述，并未對(duì)酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合做限制。1、伊馬替尼-丙戊半鈉聯(lián)合用藥對(duì)Κ562細(xì)胞的抗腫瘤作用1.1對(duì)伊馬替尼與丙戊酸鹽聯(lián)合使用當(dāng)中，伊馬替尼的使用可參考臨床使用用量，而丙戊酸鹽需要確定其使用劑量。申請(qǐng)人:具體采用MTT法，以Κ562細(xì)胞(1975年Lozzio等由慢性粒細(xì)胞型白血病病人急變期培育出的含Ph+染色體的細(xì)胞株)作為作用對(duì)象，選擇與伊馬替尼聯(lián)用的丙戊酸鹽劑量:
Κ562細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組:溶劑對(duì)照組(0.01%DMS0組)；丙戍酸半鈉(0.003mmol/L 30mmol/L)組。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)胞離心后配制成濃度為0.2X105細(xì)胞/mL的細(xì)胞懸液，按2000個(gè)/孔接種于96孔板，每孔加100 μ L,加入含不同濃度藥物(丙戊酸半鈉0.003、0.01,0.03,0.1,0.3、l、3、10、30mmol/L 組)及相應(yīng)溶劑對(duì)照(0.01%DMS0 組)，每孔力口 100 μ L(DMS0終濃度彡0.01%),每組設(shè)6個(gè)平行孔，于37°C，5%C02,飽和濕度下培養(yǎng)72h后，每孔加入5 μ mo I/L MTT溶液20 μ L，于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4h，加入二甲亞砜(DMSO)溶液終止反應(yīng)，置搖床上至結(jié)晶溶解，用酶標(biāo)儀于570nm檢測(cè)，取平行孔OD值的均數(shù)。用下面公式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率，并用prism軟件做出量效曲線求出IC5tl和ICltl，將< ICltl的劑量作為與伊馬替尼聯(lián)用的劑量。
權(quán)利要求
1.一種應(yīng)用于治療腫瘤的酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙酰化酶抑制劑的藥物組合物，其特征在于，制得的該藥物組合物由酪氨酸激酶抑制劑和組蛋白去乙酰化酶抑制劑按質(zhì)量配比0.5:1 I:4組成。
2.按權(quán)利要求1所述應(yīng)用于治療腫瘤的酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合物，其特征在于，所述的酪氨酸激酶抑制劑是伊馬替尼、達(dá)沙替尼和尼羅替尼或吉非替尼；所述的組蛋白去乙酰化酶抑制劑是鍛煉脂肪酸類、異羥肟酸類、環(huán)四肽類或苯甲酰胺類，其中，鍛煉脂肪酸類是丁酸類、丙戊酸類，異羥肟酸類是曲古菌素A ;所述的丙戊酸類是丙戊酸鹽。
3.按權(quán)利要求2所述的應(yīng)用于治療腫瘤的酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合物，其特征在于，所述的丙戊酸鹽的劑量采用低細(xì)胞毒性劑量，與臨床相關(guān)的劑量為100-1000mg/d ;所述的伊馬替尼的劑量采用臨床劑量，與臨床相關(guān)的劑量為50-800mg/d,并且與丙戊酸 鹽以組合的用藥方式用藥。
4.按權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用于治療腫瘤的酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙?；敢种苿┑乃幬锝M合物，其特征在于，所述的伊馬替尼是甲磺酸伊馬替尼；所述的丙戊酸鹽是指在能分解為丙戊酸根離子的鹽類，包括丙戊酸鈉、丙戊酸半鈉或丙戊酸鎂；并且伊馬替尼和丙戊酸鹽兩者以同時(shí)、分別或者連續(xù)的方式用藥；且伊馬替尼在丙戊酸鹽用藥之前或者之后給藥。
5.按權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用于治療腫瘤的酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙酰化酶抑制劑的藥物組合物，其特征在于，還包括適量的防腐劑、抗氧化劑、矯味劑、著色劑、表面活性劑、崩解劑、PH調(diào)節(jié)劑、黏合劑、增塑劑、潤(rùn)滑劑、合成高分子化合物、天然高分子化合物，制備成藥物制劑學(xué)上接受片劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、眼用制劑、丸劑、植入劑、氣霧劑、膜劑、口服劑或貼劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種酪氨酸激酶抑制劑與組蛋白去乙酰化酶抑制劑的藥物組合物，制得的該藥物組合物由酪氨酸激酶抑制劑和組蛋白去乙酰化酶抑制劑按質(zhì)量配比0.51~14組成。酪氨酸激酶抑制劑選擇伊馬替尼、達(dá)沙替尼和尼羅替尼、吉非替尼等；組蛋白去乙?；敢种苿┻x擇鍛煉脂肪酸類如丁酸類、丙戊酸類等；異羥肟酸類如曲古菌素A等；環(huán)四肽類；苯甲酰胺類。此組合物較酪氨酸激酶抑制劑單一靶點(diǎn)治療腫瘤產(chǎn)生的療效強(qiáng)，耐藥性高，臨床用藥劑量小，并以給藥制劑形式應(yīng)用臨床。
文檔編號(hào)A61P35/00GK103083671SQ20131000083
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年1月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月4日
發(fā)明者林蓉, 張繼業(yè), 張建豐, 楊廣德, 毛幼樺, 熊俊峰 申請(qǐng)人:毛幼樺, 林蓉