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皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)的制作方法

文檔序號(hào):1250105閱讀:195來源:國(guó)知局
皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種包括含有纖維原細(xì)胞、角化細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上細(xì)胞的層的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其中所述層多于或等于一層,以及利用所述系統(tǒng)的皮膚美白物質(zhì)篩選方法。另外,本發(fā)明公開了一種含有由皮膚美白物質(zhì)篩選方法篩選出的物質(zhì)作為有效成分的皮膚美白用組合物。
【專利說明】皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)及皮膚美白物質(zhì)篩選方法。
【背景技術(shù)】
[0002]迄今為止,在開發(fā)新的皮膚美白物質(zhì)時(shí),使用下述方法,即,將候選物質(zhì)對(duì)黑色素生成細(xì)胞即黑素細(xì)胞(melanocyte)進(jìn)行直接處理后,確認(rèn)是否抑制黑色素生成,或者對(duì)黑素細(xì)胞照射紫外線,確認(rèn)候選物質(zhì)是否屏蔽了此時(shí)產(chǎn)生的黑色素生成信號(hào)。但是,實(shí)際上在皮膚中,黑素細(xì)胞并不是單獨(dú)存在的,而是直接或間接地受到其它的周邊細(xì)胞或微生境的物理或化學(xué)影響而生成黑色素,如果僅有黑素細(xì)胞則無法再現(xiàn)上述的實(shí)際皮膚組織的狀態(tài)。
[0003]另外,雀斑、斑點(diǎn)、黑痣這些皮膚色素沉著癥的產(chǎn)生要因或機(jī)理與由于紫外線導(dǎo)致黑色素生成增加不同,雖然存在由于紫外線照射而該癥狀會(huì)惡化的趨勢(shì),但即使不存在紫外線等產(chǎn)生的刺激,黑色素的生成和分散也會(huì)繼續(xù)增加。由此,在基于現(xiàn)有的紫外線照射方法開發(fā)出的皮膚美白物質(zhì)的情況下,在實(shí)際臨床上,大多無法展現(xiàn)出抑制人的皮膚色素沉著癥的效果。此外,如果為了研究皮膚色素沉著癥而對(duì)被檢測(cè)者的色素沉著部位處的皮膚進(jìn)行活檢并使用,則費(fèi)用和花費(fèi)的精力非常大,并且很難得到人的皮膚組織,除此之外,與紫外線照射樣本不同,得到皮膚色素沉著癥的動(dòng)物樣本也是很困難的。
[0004]因此,存在不僅與人的皮膚組織構(gòu)造、特別是存在皮膚色素沉著癥的人的皮膚組織的構(gòu)造非常近似、且可以簡(jiǎn)單地篩選皮膚美白物質(zhì)的系統(tǒng)及篩選方法的需求。
[0005]專利文獻(xiàn)1:韓國(guó)注冊(cè)專利第10 — 0840144號(hào)(2008年6月16日注冊(cè))說明書?!?br/>【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的一個(gè)方面在于,提供可以高效且簡(jiǎn)單地篩選臨床上有用的皮膚美白物質(zhì)的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)及利用該系統(tǒng)的皮膚美白物質(zhì)篩選方法。
[0007]本發(fā)明的另一方面在于,提供含有由所述皮膚美白物質(zhì)篩選方法篩選出來的物質(zhì)作為有效成分且示出優(yōu)異的美白效果的皮膚美白用組合物。
[0008]另外,本發(fā)明的另一方面在于,提供含有與皮膚的黑色素生成相關(guān)的基因自身作為有效成分的皮膚美白用組合物或皮膚外用藥劑組合物。
[0009]本發(fā)明的一個(gè)方案在于,提供包括含有成纖維細(xì)胞(fibroblast)、角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte)及黑素細(xì)胞(melanocyte)中的一種以上細(xì)胞的層的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其中所述層多于或等于一層。
[0010]本發(fā)明的另一個(gè)方案在于,提供一種皮膚美白物質(zhì)篩選方法,其在對(duì)候選物質(zhì)進(jìn)行處理后,還包括確認(rèn)在成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上細(xì)胞中的WIFl、WNTl、WNT5a&NFATC2中的一種以上的表達(dá)的程度或磷酸化程度的步驟。
[0011 ] 本發(fā)明的另一個(gè)方案在于,提供含有由所述皮膚美白物質(zhì)篩選方法篩選出來的物質(zhì)作為有效成分的皮膚美白用組合物,或者含有WIFl自身作為有效成分的皮膚美白用組合物及皮膚外用藥劑組合物。
[0012]發(fā)明的效果
本發(fā)明所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)由于設(shè)計(jì)為接近實(shí)際的皮膚組織,因此即使在離體(in vitro)狀態(tài)下,也可以以較少的時(shí)間和費(fèi)用而簡(jiǎn)單地篩選臨床上具有美白效果的物質(zhì)。特別地,與將候選物質(zhì)對(duì)黑素細(xì)胞進(jìn)行處理后通過照射紫外線而篩選美白物質(zhì)的現(xiàn)有方法不同,本發(fā)明所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)具有與示出色素沉著癥的實(shí)際皮膚組織的基因表達(dá)程度及信息傳遞物質(zhì)的磷酸化程度相類似的條件,因此,在利用本發(fā)明所涉及的系統(tǒng)的情況下,可以簡(jiǎn)單地篩選出皮膚美白物質(zhì)、特別是有效改善色素沉著癥的物質(zhì)。從很難得到用于色素沉著癥研究的人及動(dòng)物樣本這一點(diǎn)來說,本發(fā)明所涉及的系統(tǒng)能夠成為用于開發(fā)新的皮膚美白物質(zhì)、具體地說開發(fā)色素沉著癥改善物質(zhì)的系統(tǒng)或工具。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1是對(duì)被檢測(cè)者的正常皮膚(N)和皮膚色素沉著部位(L)之間的WIFl基因的表達(dá)程度之差進(jìn)行比較的圖。
[0014]圖2是對(duì)被檢測(cè)者的正常皮膚(N)和皮膚色素沉著部位(L)之間的WNTl及WNT5a的表達(dá)程度之差進(jìn)行比較的圖。
[0015]圖3是對(duì)黑素細(xì)胞(MC)、角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)及成纖維細(xì)胞(FB)中的WIFl基因的表達(dá)程度之差進(jìn)行比較的圖。
[0016]圖4表不在含有抑制WIFl表達(dá)的成纖維細(xì)胞的美白篩選系統(tǒng)中,酪氨酸酶(tyrosinase)的表達(dá)增加的情況。
[0017]圖5表示在含有抑制WIFl表達(dá)的成纖維細(xì)胞的美白篩選系統(tǒng)中,黑色素體的移動(dòng)增加的情況。·
[0018]圖6表示在含有抑制WIFl表達(dá)的成纖維細(xì)胞的美白篩選系統(tǒng)中,NFATC2脫磷酸化的情況。
[0019]圖7是表示在含有抑制WIFl表達(dá)的角質(zhì)形成細(xì)胞的美白篩選系統(tǒng)中,酪氨酸酶的表達(dá)增加的情況的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0020]圖8表示在含有抑制WIFl表達(dá)的角質(zhì)形成細(xì)胞的美白篩選系統(tǒng)中,黑色素體的移動(dòng)增加的情況。
[0021]圖9表示在含有抑制WIFl表達(dá)的角質(zhì)形成細(xì)胞的美白篩選系統(tǒng)中,NFATC2脫磷酸化的情況。
[0022]圖10表示對(duì)通過基因重組技術(shù)制造的人WIFl在黑素細(xì)胞中進(jìn)行處理后,黑素細(xì)胞的WIFl表達(dá)增加的情況。
[0023]圖11表示在如圖10所示誘發(fā)了 WIFl表達(dá)的黑素細(xì)胞中,酪氨酸酶的表達(dá)減少的情況。
[0024]圖12表示在將通過基因重組技術(shù)制造的人WIFl在含有黑素細(xì)胞的美白篩選系統(tǒng)中進(jìn)行處理后,黑色素體的移動(dòng)減少的情況。
[0025]圖13表示在如圖10所示誘發(fā)了 WIFl表達(dá)的黑素細(xì)胞中,NFATC2發(fā)生磷酸化的情況?!揪唧w實(shí)施方式】
[0026]在本說明書中,“皮膚”是指覆蓋動(dòng)物體表的組織,不僅是指覆蓋面部或身體等體表的組織,是還包括頭皮及毛發(fā)在內(nèi)的最廣義的概念。
[0027]皮膚的黑素細(xì)胞(melanocyte)是制造決定皮膚顏色的黑色素(melanin)的細(xì)胞,位于作為皮膚的真皮和表皮的邊界線起作用的基底膜上。從胚胎學(xué)角度可知,黑素細(xì)胞是如下所述分化而成的,即,從神經(jīng)嵴細(xì)胞(neural-crest cells)起源,經(jīng)由黑素細(xì)胞干細(xì)胞(Melanocyte stem cell)、作為前體細(xì)胞的成黑素細(xì)胞(melanoblast)而向皮膚移動(dòng),并最終分化為可以生成黑色素的色素細(xì)胞即黑素細(xì)胞。
[0028]如上所述分化后的黑素細(xì)胞并非在皮膚內(nèi)單獨(dú)存在,而是受到與位于其上方的角質(zhì)形成細(xì)胞即角質(zhì)形成細(xì)胞的結(jié)合、以及位于下方的真皮中存在的成纖維細(xì)胞的影響而生成黑色素。由黑素細(xì)胞制造的黑色素,經(jīng)由細(xì)胞樹突(dendrite)而向周邊的角質(zhì)形成細(xì)胞移動(dòng),廣泛地分散在皮膚表面,從而保護(hù)皮膚不受到紫外線等有害因素影響,呈現(xiàn)皮膚顏色。正常皮膚在發(fā)生紫外線這種刺激時(shí),與正常情況相比生成更多的黑色素,并增加黑色素的分散,然后,如果該刺激消失,則黑色素的生成和分散再次恢復(fù)較低水平。
[0029]如上述所示,通過現(xiàn)有方法開發(fā)出的美白物質(zhì),其中特別是基于紫外線照射方法開發(fā)出的皮膚美白物質(zhì),由于并沒有反應(yīng)出實(shí)際皮膚條件,即黑素細(xì)胞在皮膚內(nèi)受其它細(xì)胞們或周圍的微生境的物理化學(xué)因素的綜合影響而生成黑色素這一實(shí)際皮膚條件,所以在改善皮膚的色素沉著癥這一方面,大多展示出在臨床上較差的效果。由于皮膚色素沉著癥具有多種產(chǎn)生原因并由于特殊的機(jī)理而使皮膚黑化的,所以,為了開發(fā)可以有效改善皮膚色素沉著癥的美白物質(zhì),需要制作與實(shí)際皮膚類似的實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,并利用該模型開發(fā)美白物質(zhì)。
[0030]下面,詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0031]本發(fā)明的一個(gè)方案在于,提供包括含有成纖維細(xì)胞(fibroblast)、角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte)及黑素細(xì)胞(m·elanocyte)中的一種以上細(xì)胞的層的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),所述層多于或等于一層。本發(fā)明的另一個(gè)方案在于,提供一種包括含有成纖維細(xì)胞的成纖維細(xì)胞層、含有角質(zhì)形成細(xì)胞的角質(zhì)形成細(xì)胞層、及含有黑素細(xì)胞的黑素細(xì)胞層的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)。此時(shí),優(yōu)選為了與實(shí)際皮膚條件類似而將成纖維細(xì)胞層層疊在最下層,在其上方層疊黑素細(xì)胞層,在黑素細(xì)胞層上方層疊角質(zhì)形成細(xì)胞層。本發(fā)明的另一個(gè)方案所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),包括含有成纖維細(xì)胞的成纖維細(xì)胞層、以及含有角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上細(xì)胞的層,可以在同一層中含有角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞。此時(shí),可以將成纖維細(xì)胞層層疊在下層,在其上方層疊含有黑素細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞的層。所述皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)是層疊有皮膚細(xì)胞層的三維立體構(gòu)造的系統(tǒng),不僅具有黑素細(xì)胞,還具有周邊的細(xì)胞,由此,可以正確反映實(shí)際的皮膚狀態(tài)。本發(fā)明的另一個(gè)方案所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)也可以去除成纖維細(xì)胞層,而包括含有已知對(duì)黑色素生成具有重要作用的黑素細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞在內(nèi)的層。
[0032]本發(fā)明的一個(gè)方案所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)的成纖維細(xì)胞層,是用于再現(xiàn)真皮層的層,包括在膠原蛋白中含有成纖維細(xì)胞的層。具體地說,所述成纖維細(xì)胞層可以是在膠原蛋白液中放入成纖維細(xì)胞,進(jìn)行凝結(jié)而制造成的層。在本發(fā)明的另一個(gè)方案中,所述膠原蛋白可以占皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)的整體重量中的0.001重量%~30重量%,優(yōu)選0.01重量%~20重量%,更優(yōu)選為0.1重量%~10重量%。在所述范圍內(nèi)含有膠原蛋白的情況下,適于展示出本發(fā)明所希望的效果,從費(fèi)用/效果比這一方面來說,在所述范圍中使用比較適當(dāng)。
[0033]在本發(fā)明的一個(gè)方案所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)中,成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上的細(xì)胞包括從人、鼠、天竺鼠、雞等鳥類及豬中選擇的一種以上的動(dòng)物中的細(xì)胞。
[0034]本發(fā)明的一個(gè)方案所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),也可以不僅選擇具有皮膚美白效果的物質(zhì)、具體地說具有改善由于紫外線導(dǎo)致皮膚黑化的效果的物質(zhì),還可以有效地篩選特別對(duì)雀斑、斑點(diǎn)、黑痣等皮膚色素沉著癥具有改善效果的物質(zhì)。
[0035]本申請(qǐng)的發(fā)明人們發(fā)現(xiàn),在出現(xiàn)色素沉著癥的皮膚中,與胚發(fā)育調(diào)節(jié)相關(guān)的細(xì)胞外信號(hào)傳遞因子即 WIFl (Wnt inhibitory factor I, ACCESSION NP _ 009122, VERSIONNP _ 009122.2 G1: 111125011)基因的表達(dá)減少,具體地說,WIFl基因的表達(dá),在皮膚細(xì)胞中,并非在作為黑色素生成細(xì)胞的黑素細(xì)胞中減少,而是在角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中減少,由此對(duì)黑素細(xì)胞的黑色素生成有影響。另外,在WIFl基因的表達(dá)減少的皮膚中,與黑色素生成相關(guān)的酪氨酸酶的表達(dá)增加的同時(shí),黑色素向角質(zhì)形成細(xì)胞的擴(kuò)散增加,因此,確認(rèn)了 WIFl與皮膚色素沉著癥之間存在密切關(guān)系。此時(shí),確認(rèn)到WIFl基因的表達(dá)干涉GSK-3 β (Glycogen synthasekinase-3 β )和 β -連環(huán)蛋白(β-catenin)的憐酸化、以及MITF (microphthalmia-associated transcription factor)的表達(dá),對(duì)皮膚色素沉著有影響。
[0036]因此,本發(fā)明的一個(gè)方案提供抑制成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上細(xì)胞的WIFl表達(dá)的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),具體地說,提供抑制角質(zhì)形成細(xì)胞或成纖維細(xì)胞的WIFl表達(dá)的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)。在本發(fā)明的另一個(gè)方案中,所述皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)含有利用siRNA以抑制WIFl表達(dá)的細(xì)胞。所述篩選系統(tǒng)反映角質(zhì)形成細(xì)胞或成纖維細(xì)胞中WIFl表達(dá)減少的色素沉著癥的皮膚狀態(tài),能夠與實(shí)際情況大致類似地再現(xiàn)有色素沉著癥的皮膚狀態(tài)?!び纱?,在利用所述篩選系統(tǒng)的情況下,可以有效地選出具有皮膚美白功能的物質(zhì),特別可以選出具有改善皮膚色素沉著癥的功能的物質(zhì)。
[0037]另外,本申請(qǐng)的發(fā)明人們確認(rèn)到在出現(xiàn)色素沉著癥的皮膚中,原癌基因(proto-oncogene) 前體 WNTl (Wingless-type MMTV integration site family,member I, ACCESSION NP _ 005421, VERSION NP _ 005421.1 G1:4885655)及蛋白質(zhì) WNT5a (Wingless-type MMTV integration site family, member 5a, ACCESSIONNP _ 001243034, VERSION NP _ 001243034.1 G1: 371502087)基因的表達(dá)增加,作為信息傳遞物質(zhì)的 NFATC2 (nuclear factor of activated T cells, cytoplasmic,calcineurin-dependent 2)脫磷酸化,因此,本發(fā)明的一個(gè)方案提供成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中一種以上的細(xì)胞為WNTl及WNT5a的表達(dá)增加了的細(xì)胞或NFATC2脫磷酸化了的細(xì)胞的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)。所述篩選系統(tǒng)由于可以非常接近實(shí)際地再現(xiàn)出現(xiàn)色素沉著癥的皮膚狀態(tài),所以可以有效地選出具有皮膚美白功能的物質(zhì),特別可以選出具有改善皮膚色素沉著癥的功能的物質(zhì)。
[0038]在此之前,通過將天然物質(zhì)、其提取物或化學(xué)合成物質(zhì)等所謂候選物質(zhì)僅對(duì)黑素細(xì)胞進(jìn)行處理,從而評(píng)價(jià)是否存在美白效果?;谏鲜霈F(xiàn)有方法的情況下,必須將稀釋在細(xì)胞培養(yǎng)液中的候選物質(zhì)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行直接處理,另外,在將候選物質(zhì)制成霜或乳液這種實(shí)際使用的劑型的狀態(tài)下,無法對(duì)黑素細(xì)胞進(jìn)行處理。由此,在現(xiàn)有的方法中,以實(shí)施臨床試驗(yàn)后才能確認(rèn)含有候選美白物質(zhì)的劑型中是否具有臨床上的實(shí)際美白效果。與此相對(duì),本發(fā)明所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)當(dāng)然可以如現(xiàn)有方法那樣,將候選物質(zhì)稀釋在培養(yǎng)液中使用而評(píng)價(jià)其有無美白效果,也可以使用含有候選物質(zhì)的霜或乳液等劑型評(píng)價(jià)其有無美白效果。此時(shí),用于對(duì)劑型評(píng)價(jià)有無美白效果的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),可以是將含有成纖維細(xì)胞、黑素細(xì)胞及角質(zhì)形成細(xì)胞中的一種以上的多個(gè)層進(jìn)行層疊后,暴露在空氣中而制造成為人工皮膚。如上所述,本發(fā)明所涉及的皮膚美白篩選系統(tǒng),由于具有與實(shí)際的皮膚類似的生理、化學(xué)特征,即使用實(shí)際使用的劑型也可以對(duì)其美白效果進(jìn)行評(píng)價(jià),因此,能夠在更短時(shí)間內(nèi),以較少的費(fèi)用高效且簡(jiǎn)單地選出在實(shí)際臨床上具有美白效果的物質(zhì)。
[0039]本發(fā)明的一個(gè)方案提供一種皮膚美白物質(zhì)篩選方法,其在對(duì)候選物質(zhì)進(jìn)行了處理的所述皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)中,包括確認(rèn)在成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上細(xì)胞中的WIFl、WNTl、WNT5a&NFATC2中的一種以上的表達(dá)的程度或磷酸化程度的步驟。如前面所述,WIFl、WNTl、WNT5a及NFATC2都與皮膚的黑色素表達(dá)及擴(kuò)散的程度有關(guān)。具體地說,WIFl的表達(dá)減少、WNTl或WNT5a的表達(dá)增加、或者NFATC2的脫磷酸化程度增加,意味著與黑色素生成有關(guān)的酶即酪氨酸酶的表達(dá)增加,黑色素向角質(zhì)形成細(xì)胞的擴(kuò)散增加。由此,通過確認(rèn)候選物質(zhì)對(duì)WIFl、WNT1、WNT5a及NFATC2中的一種以上的表達(dá)的程度或磷酸化的程度產(chǎn)生何種影響,可以評(píng)價(jià)所述候選物質(zhì)是否具有皮膚美白效果。
[0040]本發(fā)明的一個(gè)方案所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選方法,也可以在確認(rèn)WIFl表達(dá)的程度的步驟之后,還含有將使得WIFl表達(dá)的程度增加的物質(zhì)判斷為皮膚美白物質(zhì)的步驟。本發(fā)明的另一個(gè)方案所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選方法,也可以在確認(rèn)WNTl或WNT5a表達(dá)的程度的步驟之后,還含有將使得WNTl或WNT5a表達(dá)的程度減少的物質(zhì)判斷為皮膚美白物質(zhì)的步驟。本發(fā)明的另一個(gè)方案所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選方法,也可以在確認(rèn)NFATC2的磷酸化程度的步驟之后,還含有將使得NFATC2的磷酸化程度增加的物質(zhì)判斷為皮膚美白物質(zhì)的步驟。特別地,由于含有WIFl的表達(dá)減少、或者WNTl或WNT5a的表達(dá)增加、或者NFATC2進(jìn)行了脫磷酸化的成纖維細(xì)胞、黑素細(xì)胞及角質(zhì)形成細(xì)胞中的一種以上細(xì)胞的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),再現(xiàn)了皮膚黑化·的實(shí)際皮膚條件,所以通過對(duì)候選物質(zhì)使所述調(diào)整后的系統(tǒng)的WIFl、WNTl或WNT5a基因的表達(dá)程度或信息傳遞物質(zhì)NFATC2的磷酸化程度以何種方式變化進(jìn)行評(píng)價(jià),可以確認(rèn)候選物質(zhì)是否為具有美白效果的物質(zhì),特別可以確認(rèn)候選物質(zhì)是否為可以改善皮膚色素沉著癥的物質(zhì)。
[0041]本發(fā)明的一個(gè)方案提供作為有效成分而含有通過所述皮膚美白物質(zhì)篩選方法篩選出的物質(zhì)的皮膚美白用組合物。如前面所述,由于可以將使得成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上細(xì)胞中的WIFl的表達(dá)增加、或者WNTl或WNT5a的表達(dá)減少、或NFATC2的脫磷酸化的程度增加的物質(zhì),判斷為具有皮膚美白效果、具體地說具有皮膚色素沉著癥改善效果的物質(zhì),所以作為有效成分而含有該物質(zhì)的組合物,能夠獲得皮膚美白效果、具體地說是皮膚色素沉著癥改善效果。
[0042]本發(fā)明的另一個(gè)方案,通過提供含有所述的本發(fā)明所涉及的基因即WIFl自身的美白用組合物或皮膚外用藥劑組合物,從而抑制WIFl的酪氨酸酶表達(dá),抑制黑色素向角質(zhì)形成細(xì)胞的擴(kuò)散,從而能夠獲得皮膚美白及皮膚色素沉著癥改善效果。[0043]本發(fā)明的另一個(gè)方案所涉及的美白用組合物包括化妝品組合物、藥劑組合物及食品組合物。
[0044]對(duì)于本發(fā)明的一個(gè)方案所涉及的組合物的劑型例,在下面進(jìn)行說明,但也可以應(yīng)用其它各種劑型,這些例子并不限定本發(fā)明,僅用于進(jìn)行具體說明。
[0045][制劑例I]營(yíng)養(yǎng)化妝水
根據(jù)下述表1所記載的組成,使用通常方法制造營(yíng)養(yǎng)化妝水。
[0046]【表1】
【權(quán)利要求】
1.一種皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其特征在于,包括含有成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上細(xì)胞的層,所述層多于或等于一層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其特征在于,該皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)包括: 含有所述成纖維細(xì)胞的成纖維細(xì)胞層;以及 含有所述角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上的層。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其特征在于,所述成纖維細(xì)胞層是在膠原蛋白中含有成纖維細(xì)胞的層。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其特征在于,所述膠原蛋白占所述皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)的整體重量的0.0Ol重量%~30重量%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其特征在于,所述成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上的細(xì)胞是WIFl (Wnt inhibitory factor I)的表達(dá)被抑制的細(xì)胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其特征在于,所述成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上的細(xì)胞是WNTl或WNT5a的表達(dá)增加后的細(xì)胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其特征在于,所述成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上的細(xì)胞是使NFATC2 (nuclear factor of activated Tcells, cytoplasmic 2)脫磷酸化后的細(xì)胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其中,所述成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上的細(xì)胞是來自于人、鼠、天竺鼠、雞等鳥類及豬中的一種以上的動(dòng)物的細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的皮膚 美白物質(zhì)篩選系統(tǒng),其特征在于,皮膚美白物質(zhì)含有改善皮膚的色素沉著癥的皮膚美白物質(zhì)。
10.一種皮膚美白物質(zhì)篩選方法,其特征在于,包括:在對(duì)候選物質(zhì)進(jìn)行處理后的權(quán)利要求I~9中任意一項(xiàng)所涉及的皮膚美白物質(zhì)篩選系統(tǒng)中,對(duì)所述成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞及黑素細(xì)胞中的一種以上的細(xì)胞中的WIFl、WNTl、WNT5a及NFATC2中的一種以上的表達(dá)的程度或磷酸化程度進(jìn)行確認(rèn)的步驟。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的皮膚美白物質(zhì)篩選方法,其特征在于,在確認(rèn)表達(dá)程度或磷酸化程度的步驟之后,還含有將使得WIFl的表達(dá)程度增加的物質(zhì)判斷為皮膚美白物質(zhì)的步驟。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的皮膚美白物質(zhì)篩選方法,其特征在于,在確認(rèn)表達(dá)程度或磷酸化程度的步驟之后,還含有將使得WNTl或WNT5a的表達(dá)程度減少的物質(zhì)判斷為皮膚美白物質(zhì)的步驟。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的皮膚美白物質(zhì)篩選方法,其特征在于,在確認(rèn)表達(dá)程度或磷酸化程度的步驟之后,還含有將使得NFATC2的磷酸化程度增加的物質(zhì)判斷為皮膚美白物質(zhì)的步驟。
14.一種皮膚美白用組合物,其特征在于,含有由權(quán)利要求10所記載的篩選方法篩選出的物質(zhì)作為有效成分。
15.一種皮膚美白用組合物,其特征在于,作為有效成分而含有WIFl。
16.一種皮膚外用藥劑組合物,其特征在于,作為有效成分而含有WIFl。
17.根據(jù)權(quán)利要求15·或16所述的組合物,其特征在于,所述組合物為化妝品組合物。
【文檔編號(hào)】A61K31/7088GK103857802SQ201280051510
【公開日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2012年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月18日
【發(fā)明者】李愛榮, 李泰龍, 崔賢貞 申請(qǐng)人:株式會(huì)社愛茉莉太平洋, 東國(guó)大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)
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