本發(fā)明屬于獸用藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種獸用的艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：
由大腸埃希菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌等引起的呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)及腸道的疾病，長(zhǎng)久以來(lái)一直困擾著我國(guó)的畜牧養(yǎng)殖業(yè)，成為養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的一大障礙，給我國(guó)的養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，為了控制此類疾病，國(guó)家投入了大量的物力和財(cái)力?；前奉愃幬锬芤种拼蠖鄶?shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌，在控制細(xì)菌性感染疾病中發(fā)揮了巨大的作用，對(duì)非產(chǎn)酶金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、克雷伯菌屬、沙門菌屬、變形桿菌屬、摩根菌屬、志賀菌屬等腸桿菌科細(xì)菌、淋球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌均具有良好抗菌作用，尤其是大腸埃希菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌，能有效控制抑制以上細(xì)菌引起的呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等的疾病。目前磺胺類藥物中抗菌最強(qiáng)而且較常用的為磺胺甲基異惡唑(SMZ)和甲氧芐氨嘧啶(Trimethoprim，TMP)制成的復(fù)方制劑，但是此復(fù)方制劑存在一些問(wèn)題：在動(dòng)物體內(nèi)的生物半衰期相對(duì)較短，達(dá)不到長(zhǎng)期抗菌的作用；表觀分布容積小，不適合全身性感染的治療。艾地普啉(ADP)是由瑞士的Roche公司首先研發(fā)合成出來(lái)的一種新型的動(dòng)物專用抗菌增效劑(AntibacterialSynerists)，為二氫葉酸還原酶(dihydrofolatere-ductase，DHFR)抑制劑類抗菌增效劑，結(jié)構(gòu)與TMP相似，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌都有抑菌效果。與TMP相比，ADP的組織滲透力和親和力較強(qiáng)，給藥后肌肉內(nèi)的藥物濃度高于血液中的；與纖維組織有很強(qiáng)的結(jié)合能力，消除半衰期比較短、生物半衰期長(zhǎng)、生物利用度高、表觀分布容積大、體內(nèi)分布廣泛，具有更為廣闊的應(yīng)用前景。磺胺類藥物和DHFR抑制劑類抗菌增效劑在臨床上通常呈協(xié)同作用，推測(cè)把ADP和SMZ做成復(fù)方制劑，如配伍得當(dāng)，可以提高藥物的抗菌活性、擴(kuò)大藥物的抗菌譜、降低藥物的毒性、減少藥物的用量、降低藥物的成本等；能延長(zhǎng)藥物的半衰期，達(dá)到長(zhǎng)期抗菌的作用；能增大藥物的表觀分布容積小，適合全身性感染的治療，是目前國(guó)內(nèi)外研制新獸藥的一個(gè)有效 的方法，能為合理使用抗菌素、增強(qiáng)抗菌療效、減少耐藥菌的產(chǎn)生提供有力武器。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明以艾地普啉(ADP)和磺胺甲基異惡唑(SMZ)為原料藥，注射用水為溶媒，加入助溶劑丙二醇、三乙醇胺、抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉和乳酸等輔料，成功研制出一種工藝簡(jiǎn)單、穩(wěn)定高效的艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑。本發(fā)明的制劑具有達(dá)峰時(shí)間短，吸收快，表觀分布容積大，適用于全身感染性治療的特點(diǎn)。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的制備方法，該注射液的有效成分為艾地普啉和磺胺甲基異惡唑，藥物的溶劑體系主要為注射用水，與附加劑制成成鹽體系，使艾地普啉和磺胺甲基異惡唑能有效溶解。再將各種輔料及其注射溶媒加入其中，持續(xù)攪拌得到艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑，其步驟包括：(1)向艾地普啉中加入少量注射用水，再加入乳酸成鹽，得到成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑用三乙醇胺成鹽，得到成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系2中加入助溶劑，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)的成鹽體系1和步驟(3)的成鹽體系2，并攪拌，使之充分溶解，得到混合體系；(5)向步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得成品；其中，所述的艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的配方包括：艾地普啉和磺胺甲基異惡唑原料藥，其在制劑中重量/體積百分比濃度分別為2％和10％；所述的助溶劑為丙二醇，其在制劑中重量/體積百分比濃度為50％；所述的溶媒為注射用水；所述的抗氧化劑為無(wú)水硫代硫酸鈉，其在制劑中重量/體積百分比濃度為0.15％。申請(qǐng)人提供了一種獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑，按配方量的組分及配比如下：(1)艾地普啉原料藥，占制劑中重量/體積百分比濃度2％；(2)磺胺甲基異惡唑原料藥，占制劑中重量/體積百分比濃度10％；(3)注射用水(4)助溶劑為丙二醇，按重量/體積百分比濃度為50％(5)抗氧化劑為無(wú)水硫代硫酸鈉，按重量/體積百分比濃度為0.15％；它是按照下述步驟制備得到的：(1)向艾地普啉中加入少量注射用水，再加入乳酸成鹽，得到成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑用三乙醇胺成鹽，得到成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系2中加入助溶劑，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)成鹽體系1和步驟(3)的成鹽體系2，并攪拌，使之充分溶解，得到混合體系；(5)向步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得成品。本發(fā)明的艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑有效成分含量為96％～101％，總雜質(zhì)不超過(guò)1.5％。本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑可應(yīng)用于在畜禽呼吸道疾病感染中的治療。本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的具體應(yīng)用方法為：肌肉注射，一次量，每公斤體重艾地普啉5mg，磺胺甲基異惡唑25mg。本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑在豬體內(nèi)的休藥期為24d。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)本發(fā)明制得的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑在豬體內(nèi)具有較大的分布容積，較長(zhǎng)的消除半衰期，相對(duì)生物利用度高。一次給藥(肌肉注射)1mL/10kg(含有艾地普啉2mg，磺胺甲基異惡唑10mg)劑量可維持有效血藥濃度1天，臨床用量一般為1mL/10kg體重，嚴(yán)重病例可在1天后再注射一次。本發(fā)明得到的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑工藝簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性良好，質(zhì)量可靠，可以提高藥物的抗菌活性、擴(kuò)大藥物的抗菌譜、降低藥物的毒性、減少藥物的用量、降低藥物的成本等；經(jīng)肌肉注射后，在豬體內(nèi)能維持較長(zhǎng)時(shí)間的有效濃度，達(dá)到長(zhǎng)期抗菌的作用；能增大藥物的表觀分布容積小，適合全身性感染的治療。附圖說(shuō)明圖1：是本發(fā)明有效成分磺胺甲基異惡唑的紫外吸收?qǐng)D譜。圖2：是本發(fā)明有效成分艾地普林的紫外吸收?qǐng)D譜。圖3：是豬空白血漿色譜圖。圖4：是豬空白血漿添加艾地普啉的樣品色譜圖。圖5：是豬空白血漿添加磺胺甲基異惡唑的樣品色譜圖。圖6：是豬肌肉注射本發(fā)明所得制劑后豬血漿中艾地普啉的色譜圖。圖7：是豬肌肉注射本發(fā)明所得制劑后豬血漿中磺胺甲基異惡唑的色譜圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不以任何形式限制本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。所述百分比濃度如無(wú)特別說(shuō)明均為質(zhì)量/體積(w/V)百分比濃度或體積/體積(V/V)百分比濃度。試驗(yàn)中藥物粒徑形態(tài)觀察使用常用的光學(xué)顯微鏡，粒徑測(cè)定使用常用的顯微鏡測(cè)微尺，復(fù)方注射液的藥物含量采用常用的高效液相色譜-紫外檢測(cè)法。實(shí)施例1獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-1具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉原料藥(0.2g)中加入少量注射用水(1mL)，再加入乳酸(295μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1340μl)城鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系2中加入丙二醇(4.5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)向步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉(0.005g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、 不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的99.9％和99.7％。實(shí)施例2獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-2具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉(0.2g)中加入少量注射用水1mL，再加入乳酸(300μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1340μl)成鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系中加入丙二醇(5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)向步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉(0.0075g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的100％和99.9％。實(shí)施例3獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-3具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉(0.2g)中加入少量注射用水1mL，再加入乳酸(305μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1340μl)成鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系2中加入丙二醇(5.5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)向步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉(0.01g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的99.7％和99.9％。實(shí)施例4獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-4具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉(0.2g)中加入少量注射用水1mL，再加入乳酸(295μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1360μl)成鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系2中加入丙二醇(5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)向步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉(0.01g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的100.1％和100.3％。實(shí)施例5獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-5具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉(0.2g)中加入少量注射用水1mL，再加入乳酸(300μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1360μl)成鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系2中加入丙二醇(5.5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)向步驟4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉(0.005g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的99.8％和99.7％。實(shí)施例6獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-6具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉(0.2g)中加入少量注射用水1mL，再加入乳酸(305μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1360μl)成鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟2)的成鹽體系2中加入丙二醇(4.5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)向步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉(0.0075g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方 注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的99.6％和100％。實(shí)施例7獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-7具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉(0.2g)中加入少量注射用水1mL，再加入乳酸(295μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1380μl)成鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系1中加入丙二醇(4.5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)向步驟4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水疏代硫酸鈉(0.0075g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的99.8％和99.7％。實(shí)施例8獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-8具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉(0.2g)中加入少量注射用水1mL，再加入乳酸(300μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1380μl)成鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系2中加入丙二醇(4.5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)用步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉(0.01g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的99.9％和100.1％。實(shí)施例9獸用艾地普林-磺胺甲基異惡唑注射劑制備工藝-9具體工藝步驟如下：(1)向艾地普啉中(0.2g)加入少量注射用水1mL，再加入乳酸(305μl)成鹽，即為成鹽體系1；(2)將磺胺甲基異惡唑(1g)用三乙醇胺(1380μl)成鹽，即為成鹽體系2；(3)向步驟(2)的成鹽體系2中加入丙二醇(5mL)，并攪拌，使之充分溶解，置室溫下備用；(4)混合步驟(1)和步驟(3)的兩種成鹽體系，并攪拌，使之充分溶解，即為混合體系；(5)向步驟(4)的混合體系中加入抗氧化劑無(wú)水硫代硫酸鈉(0.005g)，并攪拌，使之充分溶解；(6)用注射用水定容；(7)用普通濾紙和0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行粗濾、精濾，迅速灌裝封口；(8)于100℃熱壓滅菌20min，檢漏，燈檢，包裝即得產(chǎn)品。參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2005版，對(duì)本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，外觀性狀、不溶性顆粒、pH值、可見(jiàn)異物、熱源檢查等各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求，本發(fā)明的獸用艾地普啉和磺胺甲基異惡唑藥物含量分別為投藥量的99.8％和99.9％。實(shí)施例10應(yīng)用實(shí)施例(本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的質(zhì)量研究)外觀性狀：觀察復(fù)方注射劑的外觀，色澤，表明本品為無(wú)色或淡黃色澄明液體，pH值為 7.6左右。鑒定：(1)化學(xué)法?；前芳谆悋f唑：取本品約0.1g，加水與0.4％氫氧化鈉溶液各3mL，振搖使溶解，濾過(guò)，取濾液，加硫酸銅試液1滴，生成草綠色沉淀。艾地普林：取本品約20mg，加稀硫酸2mL溶解后，加碘試液2滴，生成棕褐色沉淀。(2)UV檢測(cè)?；前芳谆悋f唑：將樣品溶解于甲醇，以甲醇作為參比溶液，在Agilent8453紫外分光光度計(jì)上測(cè)定，在270nm處有最大吸收(見(jiàn)圖1)。艾地普林：將樣品溶解于甲醇，以甲醇作為參比溶液，在Agilent8453紫外分光光度計(jì)上測(cè)定，在284nm處有最大吸收(見(jiàn)圖2)。(3)色譜法?；前芳谆悋f唑：按照含量檢測(cè)方法進(jìn)行HPLC檢測(cè)，同時(shí)配制相同濃度的對(duì)照品溶液進(jìn)行HPLC檢測(cè)，記錄兩者的色譜圖，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的獸用復(fù)方注射劑中SMZ與對(duì)照品溶液的保留時(shí)間一致。艾地普林：按照含量檢測(cè)方法進(jìn)行HPLC檢測(cè)，同時(shí)配制相同濃度的對(duì)照品溶液進(jìn)行HPLC檢測(cè)，記錄兩者的色譜圖，本發(fā)明的獸用復(fù)方注射劑中SMZ與對(duì)照品溶液的保留時(shí)間一致?？梢?jiàn)異物：取供試品20支，擦凈容器外壁，輕輕旋轉(zhuǎn)和翻轉(zhuǎn)容器使藥液中存在的可見(jiàn)異物懸浮，置供試品于遮光板邊緣處，在明視距離，分別在黑色和半色背景下，用目檢視，均不少于5秒鐘，未發(fā)現(xiàn)可見(jiàn)異物。不溶性微粒：取供試品，用水將容器外壁洗凈，在層流凈化臺(tái)上小心翻轉(zhuǎn)20次，使混合均勻，立即小心開(kāi)啟容器，用適宜的方法直接抽取每個(gè)容器中的全部溶液，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預(yù)處理的濾器(濾膜直徑13mm)中，靜置1分鐘，緩緩抽濾至濾膜近干，再用微粒檢查用水適量，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干，然后用平頭鑷子將濾膜移置平皿上(必要時(shí)，可涂抹極薄層的甘油使濾膜平整)，微啟蓋子使濾膜適當(dāng)干燥后，將平皿閉合，置顯微鏡載物臺(tái)上。調(diào)好入射光，放大100倍進(jìn)行顯微測(cè)量，調(diào)節(jié)顯微鏡至濾膜格柵清晰，移動(dòng)坐標(biāo)軸，分別測(cè)定有效濾過(guò)面積上最長(zhǎng)粒徑大于10μm和25μm的微粒數(shù)。在顯微鏡下觀察，制劑符合不溶性微粒檢查的要求，每個(gè)供試品容器中含10μm以上的微粒不超過(guò)3000粒，含25μm以上的微粒不超過(guò)300粒。無(wú)菌檢查法：按《2005年中華人民共和國(guó)藥典第二部》附錄XIH對(duì)本發(fā)明的獸用復(fù)方注射劑進(jìn)行無(wú)菌檢查。無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)和局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。采用直接接種法，取適宜裝量的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8管，分別加入金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、 銅綠假單胞菌、生孢梭菌的菌液各兩管；取適宜裝量的改良馬丁培養(yǎng)基4管，分別加入白色念珠菌、黑曲霉菌菌液各兩管。每管加菌量小于100cfu。其中1管接入規(guī)定量的供試品，另1管作為陽(yáng)性對(duì)照，各試驗(yàn)管按相應(yīng)規(guī)定的溫度，培養(yǎng)3～5天。熱原檢查：按《2005年中華人民共和國(guó)藥典第二部》附錄XIIIA對(duì)本發(fā)明的獸用復(fù)方注射劑進(jìn)行熱原檢查。每個(gè)供試樣品用家兔3只，在測(cè)定正常體溫后15分鐘內(nèi)給藥，自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38℃的供試品溶液，然后每隔30分鐘按前法測(cè)量其體溫1次，共測(cè)6次，以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度(℃)。如3只家兔中有1只體溫升高0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔體溫升高均低于0.6℃，但體溫升高的總和達(dá)1.4℃或1.4℃以上，應(yīng)另取5只家兔復(fù)試，檢查方法同上。結(jié)果見(jiàn)表1在初試3只家兔中，體溫升高均低于0.6℃，并且3只家兔體溫升高總和為0.81℃，低于1.4℃；復(fù)試的5只家兔中，體溫升高均低于0.6℃，按藥典計(jì)算，8只受試動(dòng)物的升溫總和為1.28℃，低于3.5℃，判為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。表1熱源實(shí)驗(yàn)結(jié)果裝量差異：取供試品5支，開(kāi)啟時(shí)注意避免損失，將內(nèi)容物分別用相應(yīng)體積的干燥注射器及注射針頭抽盡，然后注入經(jīng)標(biāo)化的量具內(nèi)(量具的大小應(yīng)使待測(cè)體積至少占其額定體積的40％)，在室溫下檢視。準(zhǔn)確讀取每個(gè)量筒中內(nèi)容物的裝量，并求平均值，平均裝量不得少于標(biāo)識(shí)裝量的95％，每個(gè)量筒裝量不得少于標(biāo)識(shí)裝量的93％。三批注射液的裝量在96.4％～98.0％之間(如表2)，均值在96.7％～97.3％之間，均高于注射劑所規(guī)定的最低裝量93％。有關(guān)物質(zhì)：精密吸取本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑(約相當(dāng)于SMZ50mg)置于100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲振蕩5min，使充分溶解后，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密吸取5mL，置于50mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；用流動(dòng)相稀釋供試品溶液100倍以作為對(duì)照溶液，HPLC檢測(cè)。分別測(cè)定供試品溶液和對(duì)照溶液，記錄色譜圖至主成分保留時(shí)間的5倍，將供試品溶液色譜圖中各雜質(zhì)峰面積總和與對(duì)照溶液主峰面積進(jìn)行比較。表2注射液的最低裝量三批注射液中ADP的有關(guān)物質(zhì)分別為1.41％、1.39％和1.43％，總雜質(zhì)不超過(guò)1.5％。三批注射液中SMZ的有關(guān)物質(zhì)分別為1.21％、1.38％和1.27％，總雜質(zhì)不超過(guò)1.5％，結(jié)果見(jiàn)表3和4。表3本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方制劑中艾地普啉的有關(guān)物質(zhì)檢查含量測(cè)定：精密吸取本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑(約相當(dāng)于SMZ50mg)置于100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲振蕩5min，使充分溶解后，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密吸取5mL，置于50mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。兩種藥物均按下列公式計(jì)算含量：C混＝C對(duì)·A樣/A對(duì)C混：復(fù)方劑中藥物的含量；C對(duì)：對(duì)照品的含量；A樣：樣品峰面積；A對(duì)：對(duì)照品峰面積。表4本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑中磺胺甲基異惡唑的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)三批復(fù)方注射劑中ADP的相對(duì)含量分別為96.8％、97.3％和98.4％，介于90～110％；SMZ的相對(duì)含量分別為98.5％、99.3％和101.4％，介于90～110％(表5)。表5本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的含量測(cè)定實(shí)施例11應(yīng)用實(shí)施例(艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑的穩(wěn)定性研究)影響因素試驗(yàn)：(1)高溫試驗(yàn)：取同批復(fù)方ADP-SMZ注射劑，置密封潔凈容器中，在60℃條件下放置10天，于第5天和第10天取樣，檢測(cè)有關(guān)指標(biāo)。如供試品發(fā)生顯著變化(如制劑含量下降5％)，則在40℃下同法進(jìn)行試驗(yàn)。如60℃無(wú)顯著變化，則不必進(jìn)行40℃試驗(yàn)。(2)強(qiáng)光照射試驗(yàn)：取同批復(fù)方ADP-SMZ注射劑，置密封潔凈容器中，在照度(4500±5001x)的條件下放置10d。分別于0、5、10d取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目對(duì)復(fù)方ADP-SMZ注射劑 含量、性狀、pH值等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)并記錄。結(jié)果顯示，制劑的顏色、性狀、pH值、含量等重點(diǎn)檢測(cè)項(xiàng)目的變化(見(jiàn)表6)，由此看出本發(fā)明的獸用艾地普啉磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑在高溫和強(qiáng)光條件下不穩(wěn)定，不適宜在高溫和強(qiáng)光條件下保存。表6ADP-SMZ復(fù)方制劑影響因素實(shí)驗(yàn)*有關(guān)物質(zhì)按面積歸一化法計(jì)算加速實(shí)驗(yàn)：取3批本發(fā)明制備的復(fù)方ADP-SMZ注射劑適量，模擬上市包裝，在溫度30℃±2℃、相對(duì)濕度60％±5％的條件下放置6個(gè)月。分別于0、1、2、3、6月末取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目對(duì)復(fù)方ADP-SMZ注射劑含量、性狀、pH值等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)并記錄。注射液樣品顏色、性狀、pH值、含量等各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，表明本制劑對(duì)溫度、濕度穩(wěn)定(見(jiàn)表7)。表7本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑注射劑加速試驗(yàn)結(jié)果表7的說(shuō)明：*有關(guān)物質(zhì)按面積歸一化法計(jì)算。長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)：取3批本發(fā)明制備的復(fù)方ADP-SMZ注射劑適量，模擬上市包裝，在溫度25±2℃、相對(duì)濕度60±5％的條件下放置12個(gè)月。分別于0、3、6、9、12月末取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目對(duì)復(fù)方ADP-SMZ注射劑含量、性狀、pH值等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)并記錄。12個(gè)月以后，仍需繼續(xù)考察，分別與18、24、36月末取樣進(jìn)行檢測(cè)，將結(jié)果與0月比較以確定藥品的有效期(見(jiàn)表8)。表8本發(fā)明的獸用艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果*有關(guān)物質(zhì)按面積歸一化法計(jì)算。有效期的計(jì)算：按長(zhǎng)期試驗(yàn)測(cè)定的數(shù)值，以標(biāo)示量％對(duì)時(shí)間做直線回歸，得到回歸方程。求出各時(shí)間點(diǎn)標(biāo)示量的計(jì)算值，計(jì)算出標(biāo)示量95％單側(cè)可信限的置信區(qū)間，按回歸方程分別求出各時(shí)間點(diǎn)標(biāo)示量的計(jì)算值(y′)，再計(jì)算標(biāo)示量(y′)95％單側(cè)可信限的置信區(qū)間，y′±z式中tn-2為概率為0.05，自由度為n-2的t單側(cè)分布值，可從統(tǒng)計(jì)學(xué)中查到，n為組數(shù)。X0為給定自變量，為自變量X的平均值。Q＝Lyy-bLxy；b為直線斜率；Lyy為y的離差平方和；Lxy為xy的離差乘積之和。Lyy＝∑y2-(∑y)2/N，Lxy＝∑xy-∑x∑y/N計(jì)算出y′-z值，以時(shí)間對(duì)y′-z值進(jìn)行直線回歸，得到置信區(qū)間下限值回歸方程，取y′-z＝90(即一般含量合格最低要求)，計(jì)算出藥物的有效期。本長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)只檢測(cè)了9個(gè)月，根據(jù)中花人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部對(duì)制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)要求的規(guī)定，計(jì)算ADP-SMZ復(fù)方注射劑的有效期，經(jīng)計(jì)算得出三批樣品中ADP和SMZ的回歸方程見(jiàn)表9。表9三批本發(fā)明制備的制劑中艾地普啉和磺胺甲基異惡唑的下限值回歸方程實(shí)施例12應(yīng)用實(shí)施例(艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑在豬體內(nèi)的生物利用度試驗(yàn))選18頭健康杜長(zhǎng)大三元雜交(杜洛克×長(zhǎng)白×大約克，為全國(guó)推廣的商用品種)商品豬(20±5kg)，給藥前1d稱重。將18頭豬隨機(jī)分成A、B、C3組，每組6頭，按3交叉3周期設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)(見(jiàn)表10)。表10生物利用度實(shí)驗(yàn)中交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)肌肉注射給藥。給藥后采集前腔靜脈血液3～5mL，經(jīng)提取凈化后，高效液相色譜法測(cè)定血漿中艾地普啉和磺胺甲基異惡唑的含量。本試驗(yàn)建立了ADP和SMZ的檢測(cè)方法。血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)ADP和SMZ均無(wú)干擾，雜質(zhì)與藥物峰分離良好，色譜圖見(jiàn)圖3、4、5、6、7。給藥后，各采樣點(diǎn)艾地普啉和磺胺甲基異惡唑的平均血藥濃度見(jiàn)表11；用藥動(dòng)學(xué)軟件Winnorlin的非房室模型對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表12；艾地普啉水溶液、磺胺甲基異惡唑水溶液和復(fù)方制劑中艾地普啉和磺胺甲基異惡唑在18頭豬中的平均血藥濃度時(shí)間曲線見(jiàn)圖7。表1118頭豬肌注艾地普啉和磺胺甲基異惡唑水溶液及艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑后各采樣點(diǎn)的平均血藥濃度(Mean±S.D.，μg/mL)表11說(shuō)明：ND：低于定量限或未檢出：未測(cè)定或未采樣表12Winnorlin非房室模型擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)注：表中λz：末端消除速率常數(shù)；T1/2λz：消除半衰期；Tmax：達(dá)到峰濃度的時(shí)間；Cmax：峰濃度；AUCall：藥時(shí)曲線下面積；Vz：表觀分布容積；CLz：消除速率常數(shù)；MRT：平均滯留時(shí)間。18頭豬肌肉注射本發(fā)明制備的復(fù)方制劑后，ADP的Tmax和T1/2λ分別為1.06±0.16h、12.96±1.10h，比水溶液短；Cmax為1.79±0.10μg/mL，比水溶液低。SMZ的Tmax為1.94±0.17h，比水溶液短；T1/2λ為4.84±0.93h，比水溶液的長(zhǎng)，Cmax為15.47±0.81μg/mL，比水溶液低。與水溶液相比，復(fù)方制劑的藥物達(dá)峰時(shí)間短，吸收更快；表觀分布容積增大，峰濃度降低，消除速率加快，但是都不明顯，由此可以看出，ADP與SMZ合用后，對(duì)ADP和SMZ的吸收和分布沒(méi)有太大的影響。實(shí)施例13應(yīng)用實(shí)施例(艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑在豬體內(nèi)的殘留消除規(guī)律實(shí)驗(yàn))20頭健康豬常規(guī)飼養(yǎng)7d后，肌肉注射本發(fā)明制備的艾地普啉-磺胺甲基異惡唑復(fù)方注射劑(艾地普啉5mg/kg，磺胺甲基異惡唑25mg/kg)，注射1次，并標(biāo)記注射部位。于給藥后的1，3，6，15，30d分別屠宰，每次隨機(jī)屠宰4頭，分離背最長(zhǎng)肌、肝臟、腎臟、注射部位肌肉和腹部脂肪。樣品經(jīng)提取凈化后，高效液相色譜法測(cè)定各組織中艾地普啉和磺胺甲基異惡唑的含量。根據(jù)歐洲藥品管理局(EMEA)制定的艾地普啉和磺胺甲基異惡唑在豬各組織中的最高殘留限量(MRL)，采用EMEA推薦的方法，使用WT1.4軟件以雙側(cè)95％置信限計(jì)算這兩種藥物在各組織中的休藥期。20頭豬單次肌肉注射復(fù)方制劑后，ADP和SMZ在各個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)及各種組織中的平均濃度見(jiàn)表13。停藥后各種組織中總殘留的消除方程、半衰期和休藥期見(jiàn)表14。表13本發(fā)明制備的復(fù)方制劑在豬可食性組織中的殘留量ND：未檢出。ADP殘留主要集中于肝臟和腎臟中，在四種可食性組織中，肝臟中藥物濃度高于其他組織中濃度，給藥后30天，在五種組織中均檢測(cè)不到。假定ADP在豬肝臟、腎臟、肌肉、皮脂的最高殘留限量分別為50μg/kg，通過(guò)WDT公式計(jì)算出ADP在肌肉、肝臟、腎臟、脂肪和注射位點(diǎn)中的t1/2分別為83.5、86.6、81.5、84.5和67.3h，ADP在肝臟中消除最慢，腎臟中消除最快；在肌肉、肝臟、腎臟、脂肪和注射位點(diǎn)的休藥期分別為21、24、24、18和23d。表14本發(fā)明制備的復(fù)方制劑在豬各組織中殘留消除方程、半衰期和休藥期SMZ殘留主要集中于肝臟和腎臟中，在四種可食性組織中，肝臟中藥物濃度高于其他組織中濃度，其次為腎臟，給藥后30天，僅在注射位點(diǎn)檢測(cè)到藥物濃度。SMZ在豬肝臟、腎臟、肌肉、皮脂的最高殘留限量分別為100μg/kg，通過(guò)WDT公式計(jì)算出SMZ在肌肉、肝臟、腎臟、脂肪和注射位點(diǎn)中的t1/2分別為48.1、47.5、60.5、73.7和75.3h，除注射位點(diǎn)外，SMZ在脂肪中消除最慢，肌肉中消除最快；在肌肉、肝臟、腎臟、脂肪和注射位點(diǎn)的休藥期分別為16、15、18、20和31d。