專利名稱：二氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的抗腫瘤化合物，特別涉及ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物。
背景技術(shù)：
ニ氯醋酸(Dichloroacetic Acid, DCA)是ー種小分子有機(jī)酸，分子量為128.94。無色液體，能與水、こ醇混溶。ニ氯醋酸的鈉鹽是ー種小分子代謝藥物，現(xiàn)用于臨床治療酸毒癥。它可以促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸，從而扭轉(zhuǎn)由于過度的無氧糖酵解而產(chǎn)生的酸中毒。研究表明ニ氯醋酸鈉鹽有抗腫瘤作用，體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)表明其對(duì)乳腺癌、腦膠質(zhì)瘤有治療效果。傳統(tǒng)的堿性抗癌藥物，例如蒽環(huán)類、喜樹堿類、長(zhǎng)春堿類、紫衫烷類存在水溶性差，生物利用度低等問題，這些問題的存在給上述堿性抗癌藥物的應(yīng)用帶來了困難。為了解決上述抗癌藥物難溶性問題，多種增溶藥物的制劑被應(yīng)用于上述堿性抗癌藥物，例如脂質(zhì)體，膠束，固體分散體等。然而這些方法的制備エ藝較復(fù)雜且所需的材料成本較高。因此，現(xiàn)仍需尋找新的途徑來增溶堿性抗癌藥物，與此同時(shí)提高其生物利用度，甚至增強(qiáng)藥效。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的ー個(gè)目的，一方面提供ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物，其涉及將ニ氯醋酸與堿性抗癌藥物化合，以增加堿性抗癌藥物在水中的溶解性；另一方面發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，這種化合作用可以增加堿性抗癌藥物的抗癌活性。本發(fā)明的另ー個(gè)目的為提供一種ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物的制備方法。該方法包括步驟:將堿性抗腫瘤藥物的強(qiáng)酸鹽溶解于水中，加入強(qiáng)堿將其轉(zhuǎn)化為鈉鹽或鉀鹽，形成沉淀，根據(jù)沉淀的重量，加入一定的ニ氯醋酸，室溫?cái)嚢?，冷凍干燥即得。本發(fā)明第三個(gè)目的涉及包含所述ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物的藥物組合物，所述的藥物組合物包含治療有效量的所述ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。本發(fā)明第四個(gè)目的涉及ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物本發(fā)明所述的堿性抗腫瘤藥物，可以是具有預(yù)防和/或治療腫瘤(癌癥)的堿性藥物，這些藥物在常規(guī)的測(cè)定溫度下(例如20°C)具有小于0.lg/100g的水溶解度，優(yōu)選具有小于0.01g/100g的水溶解度。所述的堿性藥物可以與鹽酸、硫酸、甲硫酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、こ酸、苯甲酸、草酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸等強(qiáng)酸性物質(zhì)形成酸性鹽。本發(fā)明所述的堿性抗腫瘤藥物優(yōu)選為蒽環(huán)類藥物、喜樹堿類藥物、長(zhǎng)春堿類藥物以及其他堿性抗癌藥物。本發(fā)明所述的蒽環(huán)類藥物，是ー類來源于波賽鏈霉菌青灰變種的化療藥物。是目前臨床使用的重要化療類藥物，可用于治療包括白血病、淋巴瘤、乳腺癌、子宮癌、卵巣癌和肺癌在內(nèi)的癌癥。它們的實(shí)例包括但不限于柔紅比星，多柔比星，表柔比星，吡柔比星，伊達(dá)柔比星，米托蒽醌；優(yōu)選柔紅比星，多柔比星，表柔比星。本發(fā)明所述的喜樹堿類藥物，是ー種細(xì)胞毒性喹啉類生物堿，能抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(TOPOI)。喜樹堿類有顯著的抗癌特性、但溶解度低。所述的喜樹堿類藥物包括但不限于喜樹堿，羥基喜樹堿，拓?fù)涮婵岛鸵亮⑻婵?。本發(fā)明所述的長(zhǎng)春堿類抗腫瘤藥物是ー類從夾竹桃植物長(zhǎng)春花中提取的生物堿，包括長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛，長(zhǎng)春瑞賓，長(zhǎng)春氟寧，長(zhǎng)春甘酯等。研究表明長(zhǎng)春堿類藥物可干擾細(xì)胞的有絲分裂，從而抑制細(xì)胞的分裂和増殖。該類藥物與微管蛋白結(jié)合抑制微管聚合，妨礙紡錘體微管的形成，從而使分裂于中期停止，阻止癌細(xì)胞分裂増殖。制備方法本發(fā)明所涉及ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物的制備方法包括以下制備步驟:將堿性抗腫瘤藥物的強(qiáng)酸鹽溶解于水中，加入0.1-10倍摩爾量氫氧化鈉溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，過濾得沉淀。根據(jù)沉淀重量，將0`.1-10倍摩爾量ニ氯醋酸溶于水中，加入沉淀，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，冷凍干燥，得目標(biāo)化合物。其中所述的堿性抗腫瘤藥物可以是具有預(yù)防和/或治療腫瘤(癌癥)的堿性藥物；選自蒽環(huán)類藥物、喜樹堿類藥物、長(zhǎng)春堿類藥物以及其他堿性抗癌藥物，更優(yōu)選柔紅比星，多柔比星，表柔比星，吡柔比星，伊達(dá)柔比星，米托蒽醌，喜樹堿，羥基喜樹堿，拓?fù)涮婵担亮⑻婵?，長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛，長(zhǎng)春瑞賓，長(zhǎng)春氟寧，長(zhǎng)春甘酯；最優(yōu)選柔紅比星，多柔比星，表柔比星。所述的強(qiáng)酸鹽選自鹽酸鹽、硫酸鹽、甲硫酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、こ酸鹽、苯甲酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、碳酸鹽、磷酸鹽中的ー種或多種。所述的反應(yīng)時(shí)間為I到60分鐘，優(yōu)選3到30分鐘；所述堿性抗腫瘤藥物與ニ氯醋酸的摩爾比優(yōu)選為I: 0.1-1: 3。藥物纟目合物本發(fā)明還涉及包含所述ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物的藥物組合物，所述的藥物組合物包含治療有效量的所述ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。所述的藥物組合物可以為藥學(xué)上常規(guī)的劑型，例如片劑、膠囊劑、丸剤、散劑、注射劑、ロ服液、粉劑；所述藥物可以通過ロ服、直腸、經(jīng)皮給藥或者經(jīng)腸胃外注射給藥。所述的藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑包括但不限于填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、表面活性劑、PH調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑。此外，所述的藥物組合物還可以額外地包括其他抗腫瘤藥物。用涂本發(fā)明涉及ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的腫瘤包括白血病、淋巴瘤、乳腺癌、子宮癌、卵巣癌和肺癌。優(yōu)選用用乳腺癌，特別優(yōu)選多藥耐藥乳腺癌。


圖1-1為鹽酸多柔比星的氫譜；圖1-2為ニ氯醋酸與多柔比星連接的前體藥物的氫譜；圖2-1為鹽酸柔紅比星的氫譜；圖2-2為ニ氯醋酸與柔紅比星連接的前體藥物的氫譜；圖3-1為鹽酸表柔比星的氫譜；圖3-2為ニ氯醋酸與表柔比星連接的前體藥物的氫譜；圖4-1為ニ氯醋酸與多柔比星連接的前體藥物對(duì)MCF_7(乳腺癌)細(xì)胞的抑制曲線(以多柔比星的鹽酸鹽作為對(duì)比)；圖4-2為ニ氯醋酸與柔紅比星連接的前體藥物對(duì)MCF-7 (乳腺癌)細(xì)胞的抑制曲線(以柔紅比星的鹽酸鹽作為對(duì)比)；圖4-3為ニ氯醋酸與表柔比星連接的前體藥物對(duì)MCF-7 (乳腺癌)細(xì)胞的抑制曲線(以表柔比星的鹽酸鹽作為對(duì)比)；圖5為ニ氯醋酸對(duì)MCF-7 (乳腺癌)細(xì)胞的抑制曲線；圖6-1為ニ氯醋酸與多柔比星連接的前體藥物對(duì)MCF-7A(阿霉素誘導(dǎo)的多藥耐藥乳腺癌)細(xì)胞的抑制曲線(以多柔比星的鹽酸鹽作為對(duì)比)；圖6-2為ニ氯醋酸與柔紅比星連接的前體藥物對(duì)MCF-7A(阿霉素誘導(dǎo)的多藥耐藥乳腺癌)細(xì)胞的抑制曲線(以柔紅比星的鹽酸鹽作為對(duì)比)；圖6-3為ニ氯醋酸與表柔比星連接的前體藥物對(duì)MCF-7A(阿霉素誘導(dǎo)的多藥耐藥乳腺癌)細(xì)胞的抑制曲線(以表柔比星的鹽酸鹽作為對(duì)比)。
具體實(shí)施例方式制備例I ニ氯醋酸與多柔比星連接的前體藥物稱取鹽酸多柔比星(50mg，86iimol)，溶解于15ml水中，攪拌下，加入氫氧化鈉溶液(2ml，1.72mg/ml,86 u mol)，室溫?cái)嚢?分鐘。取上述反應(yīng)所得物料，過濾，收集固體沉淀，得多柔比星堿。取ニ氯醋酸7.liil(86iimol)，溶于IOml水中，攪拌下加入多柔比星堿固體，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5分鐘。冷凍干燥，得ニ氯醋酸與多柔比星連接的前體藥物，46mg。相比于圖1_1(鹽酸多柔比星的氫譜)，圖1-2 ( ニ氯醋酸-多柔比星)在8.5ppm附近出現(xiàn)了新特征峰，其代表ニ氯醋酸根上的氫，ニ氯醋酸-多柔比星被合成。制備例2 ニ氯醋酸與拓?fù)涮婵颠B接的前體藥物稱取鹽酸拓?fù)涮婵?50mg, 126.9 U mol),溶解于15ml水中，攪拌下,加入氫氧化鈉溶液(1ml，5.lmg/ml, 126.9 u mol)，室溫?cái)嚢?分鐘。取上述反應(yīng)所得物料，過濾，收集固體沉淀，得拓?fù)涮婵祲A。取ニ氯醋酸10.5iil(126.9iimol)，溶于IOml水中，攪拌下加入多柔比星堿固體，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5分鐘。冷凍干燥，得ニ氯醋酸與拓?fù)涮婵颠B接的前體藥物。制備例3 ニ氯醋酸與柔紅比星連接的前體藥物稱取鹽酸柔紅比星(50mg，86iimol)，溶解于15ml水中，攪拌下，加入氫氧化鈉溶液(2ml，1.72mg/ml,86 u mol)，室溫?cái)嚢?分鐘。取上述反應(yīng)所得物料，過濾，收集固體沉淀，得柔紅比星堿。取ニ氯醋酸7.liil(86iimol)，溶于IOml水中，攪拌下加入柔紅比星堿固體，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5分鐘。冷凍干燥，得ニ氯醋酸與柔紅比星連接的前體藥物，45mg。相比于圖2-1 (鹽酸柔紅比星的氫譜)，圖2-2 ( ニ氯醋酸-柔紅比星)在8.5ppm附近出現(xiàn)了新特征峰，其代表ニ氯醋酸根上的氫。ニ氯醋酸-柔紅比星被合成。制備例4 ニ氯醋酸與長(zhǎng)春堿連接的前體藥物稱取硫酸長(zhǎng)春堿(50mg, 55 U mol),溶解于15ml水中，攪拌下,加入氫氧化鈉溶液(1ml, 4.4mg/ml, 110 u mol),室溫?cái)嚢?分鐘。取上述反應(yīng)所得物料，過濾，收集固體沉淀，得長(zhǎng)春堿。取ニ氯醋酸9.1 Ul (110 y mol)，溶于IOml水中，攪拌下加入長(zhǎng)春堿固體，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5分鐘。冷凍干燥，得ニ氯醋酸與長(zhǎng)春堿連接的前體藥物。制備例5 ニ氯醋酸與表柔比星連接的前體藥物稱取鹽酸表柔比星(50mg，86iimol)，溶解于15ml水中，攪拌下，加入氫氧化鈉溶液(2ml，1.72mg/ml,86 u mol)，室溫?cái)嚢?分鐘。取上述反應(yīng)所得物料，過濾，收集固體沉淀，得表柔比星堿。取ニ氯醋酸7.liil(86iimol)，溶于IOml水中，攪拌下加入表柔比星堿固體，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5分鐘。冷凍干燥，得ニ氯醋酸與表柔比星連接的前體藥物，46mg。相比于圖3-1 (鹽酸表柔比星的氫譜)，圖2-2 ( ニ氯醋酸-表柔比星)在6.0ppm附近出現(xiàn)了新特征峰，其代表ニ氯醋酸根上的氫。ニ氯醋酸-表柔比星被合成。實(shí)施例1本發(fā)明的ニ氯醋酸與堿性抗癌藥物連接的前體藥物(制備例1，制備例3，制備例5得到的前體藥物)具有體外抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用。采用硫氰酸銨B (sulforhodamineB)測(cè)定方法，在第0天將細(xì)胞接種于96孔板中，在第I天，從原液中制備一系列前體藥物的稀釋液:將藥物溶于細(xì)胞用水中，0.22 i im濾膜過濾除菌，培養(yǎng)基稀釋10倍，得給藥組最大濃度藥物溶液，用培養(yǎng)基倍比稀釋，得各濃度藥物溶液。加入到腫瘤細(xì)胞中，每樣6孔，孵育24小時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用10%三氯こ酸在4°C固定細(xì)胞I小時(shí)，用自來水沖洗后，晾干并用0.4%SRB在4°C染色10分鐘，取出用0.1 %こ酸沖洗，晾干后加入IOii M的Tris溶液，置搖床震蕩30分鐘后，用酶標(biāo)儀在540nm處測(cè)定吸光值。圖5給出了ニ氯醋酸單獨(dú)使用對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制曲線，由圖上可知，ニ氯醋酸濃度為8 u mol/ml吋，抑制率仍不足20 %，而劑量達(dá)到80 u mol/ml時(shí),抑制率才達(dá)到80%。而與之相對(duì)的，申請(qǐng)人1驚人地發(fā)現(xiàn)0.02 u mol/ml ニ氯醋酸堿性抗癌藥物連接的前體藥物即具有接近100%的細(xì)胞(MCF-7)的抑制率，且由圖4-1至圖4-3的抑制曲線可知ニ氯醋酸與堿性抗癌藥物連接的前體藥相比于堿性抗癌藥物的鹽酸鹽具有更顯著的抗癌效果。此外，申請(qǐng)人還將ニ氯醋酸與堿性抗癌藥物連接的前體藥物用于阿霉素誘導(dǎo)的多藥耐藥乳腺癌細(xì)胞系MCF-7A，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ニ氯醋酸単獨(dú)使用對(duì)MCF-7細(xì)胞無抑制作用(未給出抑制曲線)，然而ニ氯醋酸與堿性抗癌藥物連接的前體藥物相比于堿性抗癌藥物的鹽酸鹽具有更為顯著的抗癌效果(參見圖6-1至圖6-3)。結(jié)果表明，堿性抗癌藥物與ニ氯醋酸化合的前體藥物具有優(yōu)于該堿性抗癌藥物鹽酸鹽的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
權(quán)利要求
1.一種抗腫瘤化合物，其特征在于由ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗腫瘤化合物，其特征在于所述的堿性抗腫瘤藥物選自蒽環(huán)類藥物、喜樹堿類藥物、長(zhǎng)春堿類藥物以及其他堿性抗癌藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗腫瘤化合物，其特征在于所述的蒽環(huán)類藥物選自于柔紅比星，多柔比星，表柔比星，吡柔比星，伊達(dá)柔比星，米托蒽醌；優(yōu)選柔紅比星，多柔比星，表柔比星；所述的喜樹堿類藥物選自喜樹堿，羥基喜樹堿，拓?fù)涮婵岛鸵亮⑻婵?；所述的長(zhǎng)春堿類藥物選自長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛，長(zhǎng)春瑞賓，長(zhǎng)春氟寧，長(zhǎng)春甘酷。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的抗腫瘤化合物的制備方法，其包括以下步驟:將堿性抗腫瘤藥物的強(qiáng)酸鹽溶解于水中，加入相當(dāng)于堿性抗腫瘤藥物0.1-10倍摩爾量的強(qiáng)堿溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，過濾得沉淀。根據(jù)沉淀重量，將相當(dāng)于堿性抗腫瘤藥物0.1-10倍摩爾量的ニ氯醋酸溶于水中，加入沉淀，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，冷凍干燥，得目標(biāo)化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，所述的強(qiáng)酸鹽選自鹽酸鹽、硫酸鹽、甲硫酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、こ酸鹽、苯甲酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、碳酸鹽、磷酸鹽中的ー種或多種；所述的攪拌時(shí)間為I到60分鐘，優(yōu)選3-30分鐘；所述的堿性抗腫瘤藥物與ニ氯醋酸的摩爾比優(yōu)選為1: 0.1-1: 3。
6.藥物組合物,包含治療有效量的權(quán)利要求1-3任ー項(xiàng)所述ニ氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，所述的藥物組合物為片劑、膠囊劑、丸劑、散剤、注射劑、ロ服液或粉劑。
8.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述 的抗腫瘤化合物在制備抗腫瘤藥物的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，所述的腫瘤選自白血病、淋巴瘤、乳腺癌、子宮癌、卵巣癌和肺癌。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的用途，所述的腫瘤選自乳腺癌，特別優(yōu)選多藥耐藥乳腺癌。
全文摘要
本發(fā)明提供二氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物，其涉及將二氯醋酸與堿性抗癌藥物化合，以增加堿性抗癌藥物在水中的溶解性；發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，這種化合作用可以增加堿性抗癌藥物的抗癌活性。所述二氯醋酸與堿性抗腫瘤藥物連接的抗腫瘤化合物的制備方法包括步驟將堿性抗腫瘤藥物的強(qiáng)酸鹽溶解于水中，加入強(qiáng)堿將其轉(zhuǎn)化為鈉鹽或鉀鹽，形成沉淀，根據(jù)沉淀的重量，加入一定的二氯醋酸，室溫?cái)嚢?，冷凍干燥即得。所述的堿性抗腫瘤藥物可以為蒽環(huán)類藥物、喜樹堿類藥物、長(zhǎng)春堿類藥物以及其他堿性抗癌藥物。
文檔編號(hào)A61K31/19GK103120796SQ201210540028
公開日2013年5月29日 申請(qǐng)日期2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月14日
發(fā)明者張烜, 段瑀, 任偉, 張強(qiáng) 申請(qǐng)人:北京大學(xué)