黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的作用，黃連素衍生物通過降低小鼠的血脂，抑制MMP9等炎癥因子的表達(dá)，減少VCAM-1分泌從而減少小鼠血管斑塊的形成，說明黃連素衍生物在抗動脈粥樣硬化治療中的顯著作用。本發(fā)明提供了治療動脈粥樣硬化的新藥物，黃連素是傳統(tǒng)中藥的重要組成部分，動物研究發(fā)現(xiàn)，黃連素對抗動脈粥樣硬化幾乎沒有作用，而黃連素衍生物因其結(jié)構(gòu)的修飾作用，在抗動脈粥樣硬化中顯示了更好的藥效，本發(fā)明通過動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了黃連素衍生物在抗動脈粥樣硬化中的作用。
【專利說明】黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及治療動脈粥樣硬化疾病的藥物領(lǐng)域，尤其涉及中國傳統(tǒng)中藥的提取成分黃連素和黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的作用。
【背景技術(shù)】
[0002]動脈粥樣硬化及其所致冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)是心血管最常見疾病，是人類致死的主要原因之一。慢性非特異性炎癥是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素[1-3]。國內(nèi)外研究表明，參與動脈粥樣硬化病理過程的炎癥因素很多，其中關(guān)鍵性步驟是單核細(xì)胞遷入內(nèi)膜下，受局部ox-LDL的刺激被激活分化為巨噬細(xì)胞，吞噬了過量ox-LDL的巨噬細(xì)胞分化成泡沫細(xì)胞，后者不僅是動脈粥樣硬化脂質(zhì)核心的主要成分，也是動脈粥樣硬化斑塊局部炎癥反應(yīng)的主要細(xì)胞，并產(chǎn)生和釋放基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)以及基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(EMMPRIN)，二者均可通過降解細(xì)胞外基質(zhì)促使斑塊趨向不穩(wěn)定[4]，造成急性冠脈綜合征(包括不穩(wěn)定性心絞痛、急性心肌梗死、猝死)。另一方面，oxLDL刺激可增加血管內(nèi)皮細(xì)胞多種粘附分子如ICAM-1、VCAM-1等表達(dá)分泌[5，6]，后者又促進(jìn)單核細(xì)胞向內(nèi)膜下遷移[7-10]，使更多的單核源巨噬細(xì)胞/泡沫細(xì)胞在斑塊局部積聚浸潤，泡沫細(xì)胞形成增多，炎癥反應(yīng)向縱深發(fā)展，最終協(xié)同促使動脈粥樣硬化斑塊的形成。
[0003]因此，尋求一種有效安全的措施或藥物以抑制EMMPRIN、MMPs蛋白表達(dá)、減少單核/巨噬細(xì)胞向病變局部遷移和減少泡沫細(xì)胞形成，必將對動脈粥樣硬化防治具有重大的理論和實(shí)際意義。1998年S.Bellosta[ll]和N.Abe[12]等在研究中發(fā)現(xiàn)氟伐他丁和辛伐他丁能有效抑制MMP-9、EMMPRIN表達(dá)，降低MMP-9活性，提示他汀類藥物穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊作用部分通過調(diào)節(jié)MMP-9、EMMPRIN表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。然而，這些藥物不是專門針對動脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)的藥物，且有些藥物副作用使患者不能耐受。
[0004]黃連素，又名小蘗堿，是一種異喹啉衍生化的生物堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)明確。它可從多種中草藥如白毛茛、黃柏、黃連等中分離，是這些中草藥的主要成分。迄今為止，黃連素在臨床上一直作為非處方藥治療如痢疾桿菌、大腸桿菌引起的腸道感染、腹瀉；然而，國內(nèi)外許多藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃連素具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)[13-14]、治療心力衰竭[15]等多種功效；近年來，Tang等[16]在動物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)黃連素具有調(diào)節(jié)血糖作用，Yin等在2型糖尿病患者中也驗(yàn)證了黃連素降血糖的作用與二甲雙胍相當(dāng)[17];更有學(xué)者研究表明黃連素具有顯著的降膽固醇作用[18-19]和控制體重等效應(yīng)，且黃連素和辛伐他丁聯(lián)合使用，與單獨(dú)用辛伐他丁者相比，能更好的降低血脂[20];這些結(jié)果不僅提示黃連素作為一種天然中草藥擁有多種藥理效應(yīng)，同時也提示了黃連素可以減少多種致動脈粥樣硬化的危險因素(如高血脂、糖尿病和肥胖等)。我們的臨床試驗(yàn)證實(shí)黃連素可以減少ACS患者PCI術(shù)后MMP9、IACM和VCAM的表達(dá)，抑制炎癥的發(fā)生[21]。
[0005]我們在細(xì)胞水平研究已表明，黃連素能抑制單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化時MMP-9和EMMPRIN的表達(dá)；并且黃連素能減少巨噬細(xì)胞p65核轉(zhuǎn)位，抑制NF-K B通路激活，下調(diào)oxLDL刺激下MMP-9和EMMPRIN兩種蛋白的表達(dá)，有效降低巨噬細(xì)胞吞噬oxLDL，減少泡沫細(xì)胞形成[22-23]。細(xì)胞水平研究證實(shí)黃連素對炎癥反應(yīng)和動脈粥樣硬化過程中關(guān)鍵進(jìn)程有抑制作用，提示其可能對動脈粥樣硬化防治有作用。進(jìn)一步體外研究發(fā)現(xiàn)，黃連素衍生物(二氫二甲基黃連素、二氫黃連素)對降低EMMPRIN表達(dá)有更好的作用，提示黃連素衍生物的抗動脈粥樣硬化作用可能優(yōu)于普通黃連素，國內(nèi)外還未見黃連素衍生物用于治療動脈粥樣硬化的研究，因此我們的研究具有首創(chuàng)性。
[0006]本研究以C57BL/6品系A(chǔ)poE-/-小鼠作為動脈粥樣硬化動物模型，體內(nèi)探討黃連素及黃連素衍生物(二氫二甲基黃連素、二氫黃連素)對動脈粥樣硬化斑塊發(fā)生發(fā)展的影響(病理結(jié)構(gòu)、細(xì)胞組成、局部炎癥因子的表達(dá)、纖維帽的厚度等)。我們基于黃連素細(xì)胞水平的研究，通過給小鼠喂食一段時間的黃連素和黃連素衍生物，檢測相關(guān)指標(biāo)，觀察其對動脈粥樣硬化的治療作用。其中，黃連素衍生物對動物動脈粥樣硬化的研究國際上未見報道，研究首次發(fā)現(xiàn)黃連素衍生物通過降低小鼠的血脂，抑制MMP9等炎癥因子的表達(dá)，減少VCAM-1分泌從而減少小鼠血管斑塊的形成，本研究首次提出了黃連素衍生物在抗動脈粥樣硬化治療中的作用，提供了一種潛在有效、價廉的新型藥物。
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0030]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供二氫二甲基黃連素或者二氫黃連素中的一種或兩種為基礎(chǔ)的各種劑型的抗動脈粥樣硬化藥物，即黃連素衍生物及其在制備治療抗動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。
[0031]為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種黃連素衍生物，其特征在于，所述黃連素衍生物是指二氫二甲基黃連素或者二氫黃連素中的一種。
[0032]本發(fā)明提供了黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述黃連素衍生物是指二氫二甲基黃連素或者二氫黃連素中的一種或兩種。
[0033]作為一個優(yōu)選方案，二氫二甲基黃連素所使用的劑量為15_25mg/kg,優(yōu)選20 mg/
kg ο
[0034]作為又一個優(yōu)選方案，二氫黃連素所使用的劑量為3-10mg/kg,優(yōu)選5mg/kg。
[0035]黃連素是傳統(tǒng)中藥的重要組成部分，我們前期人體研究證實(shí)黃連素可以減少ACS患者PCI術(shù)后MMP9、IACM和VCAM的表達(dá)，抑制炎癥的發(fā)生；而動物研究沒有發(fā)現(xiàn)黃連素有抗動脈粥樣硬化作用，可能與人體和動物的腸上皮細(xì)胞對黃連素的吸收率不同有關(guān)^而黃連素衍生物因其結(jié)構(gòu)的修飾作用，使其在體內(nèi)的生物吸收率明顯增高U2，在抗動脈粥樣硬化中顯示了更好的藥效。本發(fā)明通過動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了黃連素衍生物在抗動脈粥樣硬化中的作用。
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[0038]本發(fā)明采用的技術(shù)方案的技術(shù)步驟如下所述:
(I)黃連素衍生物的篩選:分別給予巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞不同濃度黃連素和黃連素衍生物(二氫黃連素、四氫黃連素、二氫二甲基黃連素)，后予oxLDL (100yg/ml)刺激5小時，流式檢測抗體EMMPRIN (⑶146)的表達(dá)變化，比較其抑制⑶146表達(dá)的能力。
[0039]黃連素衍生物由中科院上海藥物研究所胡立宏教授設(shè)計(jì)并合成。(L1-Hong Hu,PhD, Shanghai Institute of Materia Medica, 199 Guo Shou Jing Rd., ZhangjiangH1-Tech Park, Shanghai 201203, simmhullimail.shcnc.ac.cn)。
【權(quán)利要求】
1.一種黃連素衍生物，其特征在于，所述黃連素衍生物是指二氫二甲基黃連素或者二氫黃連素中的一種。
2.黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述黃連素衍生物是指二氫二甲基黃連素或者二氫黃連素中的一種或兩種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述二氫二甲基黃連素的劑量是15-25mg/kg。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述二氫二甲基黃連素的劑量是20mg/kg。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黃連素衍生 物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述二氫黃連素的劑量是3-10mg/kg。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的黃連素衍生物在制備治療動脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述二氫黃連素的劑量是5mg/kg。
【文檔編號】A61K31/4375GK103804374SQ201210453170
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月13日
【發(fā)明者】王長謙, 孟舒, 曹嘉添 申請人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院