一種在慢性乙肝病毒感染狀態(tài)下誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫的乙肝疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種乙肝疫苗。具體而言，本發(fā)明公開了一種包含一種免疫增強(qiáng)劑的乙肝疫苗，其能夠在慢性乙肝病毒感染狀態(tài)下誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫。本發(fā)明的乙肝疫苗包含Toll樣受體的激動(dòng)劑作為免疫增強(qiáng)劑。
【專利說明】一種在慢性乙肝病毒感染狀態(tài)下誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫
的乙肝疫苗
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及乙肝疫苗。具體而言，本發(fā)明涉及一種包含免疫增強(qiáng)劑的乙肝疫苗，其能夠在慢性乙肝病毒感染狀態(tài)下誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。本發(fā)明的乙肝疫苗包含Toll樣受體的激動(dòng)劑作為免疫增強(qiáng)劑。此外，本發(fā)明還涉及To 11樣受體的激動(dòng)劑在乙肝疫苗中作為免疫增強(qiáng)劑的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]在中國，乙型肝炎病毒(HBV)感染已經(jīng)成為最嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一，約60%的人群感染過HBV。根據(jù)2006年全國流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果，目前中國慢性乙肝表面抗原(HBsAg)攜帶率仍然高達(dá)7.2%，約有9300萬的HBV感染患者和3000萬的慢性乙肝患者。
[0003]目前，臨床上對慢性乙肝患者的治療主要是采取非特異性的抗病毒療法，包括使用核苷類似物和I型干擾素。核苷類似物藥物對于HBV的特異性不強(qiáng)，并且，HBV病毒基因在核苷類似物藥物使用后容易發(fā)生變異，治療效果不好；1型干擾素的治療療程長、費(fèi)用高，患者持久應(yīng)答率也僅為10-47%，平均24%。這種非特異性的抗病毒療法的治療策略，對乙肝患者的治療效果不理想。
[0004]常規(guī)重組乙型肝炎疫苗主要用于特異性預(yù)防新生兒和易感人群的HBV感染。新生兒乙肝疫苗免疫接種有效地預(yù)防了新發(fā)HBV感染。其中以天然結(jié)構(gòu)的乙肝表面抗原(HBsAg)為靶抗原。但是，這一手段僅能在未經(jīng)感染的健康人體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，發(fā)揮預(yù)防效果，是一種預(yù)防性疫苗。慢性HB V感染的持續(xù)狀態(tài)主要是由于機(jī)體對乙肝病毒抗原的免疫耐受。而目前常規(guī)使用的重組乙型肝炎疫苗，即免疫預(yù)防性乙肝疫苗，對已患有慢性HBV感染者無效，也無任何治療效果。慢性HBV感染患者如不做任何治療，據(jù)統(tǒng)計(jì)將有25-40%的感染者會進(jìn)展為失代償性肝硬化或者肝癌。因此，目前全世界許多學(xué)者嘗試通過誘導(dǎo)慢性HBV感染者產(chǎn)生針對HBV病毒抗原的特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)，通過調(diào)動(dòng)機(jī)體本身的特異性免疫力，清除慢性HBV感染性肝細(xì)胞的治療性疫苗。
[0005]治療性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的機(jī)體中，通過誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答，達(dá)到治療或防止疾病惡化的天然、人工合成或用基因重組技術(shù)表達(dá)的產(chǎn)品或制品，其能激發(fā)和誘導(dǎo)機(jī)體對相關(guān)抗原的特異性免疫應(yīng)答，可明顯改善病情甚至可以使疾病痊愈。治療性疫苗與傳統(tǒng)意義上的預(yù)防性疫苗有著明顯的區(qū)別。首先，治療性疫苗的使用者為已感染患者，他們往往存在不同程度上的免疫缺陷或免疫耐受，而預(yù)防性疫苗的使用者為健康人；其次，預(yù)防性疫苗主要是產(chǎn)生中和性抗體，而治療性疫苗除了需要誘導(dǎo)更高水平的抗體外，還需要誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性CD4及CD8T細(xì)胞應(yīng)答，才足以清除病毒感染性細(xì)胞，終止病毒感染。
[0006]乙肝治療性疫苗的研制是發(fā)現(xiàn)和設(shè)計(jì)HBV相關(guān)抗原，并通過聯(lián)合高效的免疫佐劑(免疫增強(qiáng)劑)，以達(dá)到有效刺激乙肝慢性攜帶者的免疫系統(tǒng)，從而打破免疫耐受，殺傷病毒感染性肝細(xì)胞，特異性地抑制和清除病毒，最終達(dá)到治療的目的。其具有費(fèi)用相對低、以及特異性強(qiáng)、療效好等特點(diǎn)。從發(fā)展趨勢來看，乙肝治療性疫苗有望成為治愈慢性乙型肝炎的有效途徑。因此，研制經(jīng)濟(jì)而有效的乙肝治療性疫苗，是一項(xiàng)世界性的重大而迫切的任務(wù)，這一任務(wù)對于亞非發(fā)展中國家顯得更為重要。而目前乙肝治療性疫苗多停留在實(shí)驗(yàn)室研究或臨床實(shí)驗(yàn)階段，迄今沒有治療性疫苗被批準(zhǔn)在任何國家上市。現(xiàn)階段研究較多的治療性疫苗種類主要有蛋白疫苗、核酸疫苗(如DNA疫苗)、T細(xì)胞表位肽疫苗等。
[0007]現(xiàn)有的治療性乙肝疫苗具有某些優(yōu)點(diǎn)，但也存在著一些問題。如DNA疫苗能誘導(dǎo)強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答，可打破特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)耐受，但其安全性(包括環(huán)境安全性和人體安全性)和標(biāo)準(zhǔn)化問題尚待深入研究。多表位基因疫苗或多表位多肽疫苗為多價(jià)疫苗研究提供了新的思路，但是由于MHC分子的限制性，其僅局限于表達(dá)某些特定MHC分子的患者，并且還需要克服表位疫苗免疫原性弱的固有缺點(diǎn)?？乖贵w復(fù)合物治療性疫苗由于采用的是常規(guī)的鋁鹽佐劑，其免疫原性也具有一定的局限性。
[0008]乙肝病毒核心抗原(HBcAg)是乙肝治療性疫苗研發(fā)過程中一個(gè)重要抗原，其是HBV的一種非分泌性的衣殼結(jié)構(gòu)蛋白，具有較高的免疫原性。在自發(fā)恢復(fù)的急性乙肝感染患者中可以檢測到強(qiáng)烈的HBcAg特異性的T細(xì)胞應(yīng)答，而在慢性乙肝感染患者中檢測不到。因此，HBcAg被認(rèn)為是宿主控制HBV感染中的一個(gè)重要靶標(biāo)，而其特異性T細(xì)胞的存在和慢性HBV感染的清除有關(guān)=HBcAg特異性的Th細(xì)胞能幫助B細(xì)胞產(chǎn)生抗HBs，而其誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性CTL將更有助于清除HBV感染細(xì)胞。HBsAg是HBV的表面結(jié)構(gòu)蛋白，含有病毒感染細(xì)胞的受體，特異性抗-HBs的產(chǎn)生，可以終止病毒感染的進(jìn)一步發(fā)生。因此從免疫原選擇方面，本發(fā)明即選用了 HBsAg及HBcAg作為免疫原，以誘導(dǎo)更有效的抗病毒免疫應(yīng)答。
[0009]目前在人體使用最廣泛的佐劑是鋁佐劑，同時(shí)它也是目前商品化乙肝預(yù)防性疫苗所采用的佐劑。鋁佐劑主要誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，而不能誘導(dǎo)針對靶蛋白的細(xì)胞免疫應(yīng)答。因此，對于乙肝治療性疫苗 來講，單純使用鋁佐劑是不足夠的。近年來隨著免疫學(xué)的研究進(jìn)展，已發(fā)現(xiàn)有許多分子具有佐劑的特性，它們可以活化特定種類的抗原提呈細(xì)胞(APC)并誘導(dǎo)不同類型的細(xì)胞免疫應(yīng)答。
[0010]發(fā)明概述
[0011]本發(fā)明一方面提供了 Toll樣受體(TLR)的激動(dòng)劑作為佐劑或者免疫增強(qiáng)劑在制備乙肝疫苗中的用途，其中所述Toll樣受體(TLR)的激動(dòng)劑用于增強(qiáng)所述乙肝疫苗在慢性乙肝病毒感染狀態(tài)下的對象中所誘導(dǎo)的針對乙肝病毒的免疫反應(yīng)。
[0012]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 TLR7和/或TLR8的激動(dòng)劑CL097作為免疫增強(qiáng)劑在制備乙肝疫苗中的用途，其中所述乙肝疫苗包含乙肝表面抗原(HBsAg)和鋁佐劑，并且所述乙肝疫苗能夠在慢性乙肝病毒感染狀態(tài)下的對象中誘導(dǎo)出針對乙肝病毒的特異性免疫反應(yīng)，所述CL097具有如下結(jié)構(gòu)式:
[0013]
【權(quán)利要求】
1.CL097作為免疫增強(qiáng)劑在制備乙肝疫苗中的用途，其中所述乙肝疫苗包含乙肝表面抗原(HBsAg)和鋁佐劑，并且所述乙肝疫苗能夠在慢性乙肝病毒感染狀態(tài)下的對象中誘導(dǎo)出針對乙肝病毒的特異性免疫反應(yīng)，所述CL097具有如下結(jié)構(gòu)式:
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述乙肝疫苗還包含乙肝核心抗原(HBcAg)。
3.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述乙肝疫苗中所使用的CL097和鋁佐劑的質(zhì)量比在1:10至1:100之間，例如1:40。
4.權(quán)利要求3的用途，其中所述乙肝疫苗中所使用的CL097和乙肝表面抗原(HBsAg)的質(zhì)量比在1:1至1:10之間，例如1:1。
5.權(quán)利要求2的用途，其中所述乙肝疫苗中所使用的CL097和乙肝核心抗原(HBcAg)的質(zhì)量比在1:1至1:10之間，例如1:1。
6.一種用于在慢性乙肝病毒感染狀態(tài)下的對象中誘導(dǎo)出針對乙肝病毒的特異性免疫反應(yīng)的乙肝疫苗，所述乙肝疫苗包含CL097作為免疫增強(qiáng)劑，且所述乙肝疫苗還包含乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝核心抗原(HBcAg)和鋁佐劑，其中所述CL097具有如下結(jié)構(gòu)式:
7.權(quán)利要求6的乙肝疫苗，其中所述乙肝疫苗中所使用的CL097和鋁佐劑的質(zhì)量比在1:10至1:100之間，例如1:40。
8.權(quán)利要求12的乙肝疫苗，其中所述乙肝疫苗中所使用的CL097和乙肝表面抗原(HBsAg)的質(zhì)量比在1:1至1:10之間，例如1:1 ;并且CL097和乙肝核心抗原(HBcAg)的質(zhì)量比在1:1至1:10之間，例如1:1。
【文檔編號】A61P31/20GK103566369SQ201210272762
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年8月1日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月1日
【發(fā)明者】曲春楓, 汪穎, 吳志遠(yuǎn) 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院