專利名稱：一種包含cla-ptx的微乳制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種被動靶向給藥系統(tǒng)，特別是涉及ー種包含CLA-PTX的微乳制劑。本發(fā)明還涉及所述微乳制劑的制備方法和所述微乳制劑在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
微乳(microemulsion)是水、油、表面活性劑和助表面活性劑按適當(dāng)?shù)谋壤旌希?自發(fā)形成的各向同性、透明、熱力學(xué)穩(wěn)定的分散體系，其具有粒徑小、透明、熱力學(xué)穩(wěn)定等特殊優(yōu)點，因此在制備藥物制劑及臨床治療方面具有日益廣泛的用途。現(xiàn)在，微乳被普遍認(rèn)為是ー新型理想的藥物釋放載體，這種藥物載體具有透明、穩(wěn)定、吸收完全，能夠?qū)崿F(xiàn)靶向釋藥等優(yōu)點，特別是水包油型(0/W型)微乳可増加脂溶性藥物在水中的溶解能力，從而提高了藥物的療效，降低其毒副作用，因此微乳的臨床應(yīng)用價值日益提高，具有非常廣闊的發(fā)展前景。新型抗腫瘤藥物CLA-PTX ( “共軛亞油酸-紫杉醇偶聯(lián)物”)是通過將傳統(tǒng)抗腫瘤藥物PTX(紫杉醇)與CLA(共軛亞油酸)進行化學(xué)連接形成的新型偶聯(lián)物，其具有通過血腦屏障從而實現(xiàn)對腦膠質(zhì)瘤的靶向治療效果。但是，CLA-PTX在水溶液中的溶解性極差，在進行靜脈注射給藥時無法達(dá)到理想的給藥劑量，因此需要在給藥時進行一定程度的增溶。然而，傳統(tǒng)的增溶劑在體內(nèi)會產(chǎn)生一定的毒副作用，游離藥物在體內(nèi)消除速率快并且不能實現(xiàn)非腦部腫瘤的靶向治療，因此如何提高CLA-PTX在腫瘤部位的濃度以及降低其對內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)以及正常組織的毒性是所述藥物的研究中面臨的最大問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的創(chuàng)新點在于將被動靶向微乳制劑與新型抗腫瘤藥物CLA-PTX相結(jié)合，實現(xiàn)靶向技術(shù)與新型藥物的配合，以提高抗腫瘤藥物的溶解性、穩(wěn)定性與靶向性，降低毒副作用，增強其抗腫瘤效果。為此，本發(fā)明的ー個目的是提供一種水包油型微乳制劑，所述制劑包括油相和水相，其特征在于用于制成所述油相的原料由抗腫瘤藥物CLA-PTX、油性介質(zhì)、表面活性剤、助表面活性劑和任選的其它用于制備油相的原料組成。本發(fā)明的另ー個目的是提供所述微乳制劑的制備方法。本發(fā)明的另ー個目的是提供所述微乳制劑在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。本發(fā)明的技術(shù)方案和要點將在下面作詳細(xì)說明。本發(fā)明還涉及以下技術(shù)方案I、如權(quán)利要求1-10任一項所述的微乳制劑的制備方法，其特征在于所述方法包括如下步驟將油性介質(zhì)、表面活性剤、助表面活性劑和任選的其它用于制備油相的原料精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；精確稱取CLA-PTX，加入至油相中，靜置或水浴超聲至CLA-PTX完全溶解；待CLA-PTX完全溶解后再加入用于制成水相的原料進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。2、如項I所述的微乳制劑的制備方法，其特征在于所述方法包括如下步驟將大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油與こ醇 按照5 10 : 15 22 : 10 20 50 70的質(zhì)量比精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；精確稱取CLA-PTX，加入至油相中，靜置或水浴超聲至CLA-PTX完全溶解，使CLA-PTX在油相中的濃度為 20mg/ml 200mg/ml,例如 20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml 或 200mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 %的葡萄糖注射液進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。3、如項I或2所述的微乳制劑的制備方法，其特征在于所述比例稀釋為按照油相與水相之間的質(zhì)量比=I : 10 I : 100進行比例稀釋。4、如項I或2所述的微乳制劑的制備方法，其特征在于所述水浴超聲的水浴溫度為 25-35 °C，例如 30。。。5、如權(quán)利要求1-10任一項所述的微乳制劑在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。6、如項5所述的用途，其特征在于所述惡性腫瘤為腦膠質(zhì)瘤，例如鼠源性腦膠質(zhì)瘤。術(shù)語“CLA”表示共軛亞油酸，其具有抗腦腫瘤與腦腫瘤新生血管的作用。“PTX”表示抗腫瘤藥物紫杉醇。“CLA-PTX”表示共軛亞油酸-紫杉醇偶聯(lián)物。“藥脂比”表示藥物與脂材的質(zhì)量比(w/w)，脂材為除抗腫瘤藥物CLA-PTX以外的用于制成所述油相的原料的總稱，即脂材由油性介質(zhì)、表面活性剤、助表面活性劑和任選的其它用于制備油相的原料組成?！癙BS溶液”表示pH = 7. 4的磷酸鹽緩沖液?！癐C50”表示導(dǎo)致50%腫瘤細(xì)胞死亡時所對應(yīng)的藥物濃度。“C6細(xì)胞”為原發(fā)于腦部的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞。進行藥效實驗時，將所述細(xì)胞接種于裸鼠右側(cè)腋下，構(gòu)成異位腫瘤模型。詳細(xì)說明本發(fā)明的下列技術(shù)特征之間可以進行任意的組合，以形成不同的技術(shù)方案。這些技術(shù)方案均包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)CLA-PTX( “共軛亞油酸-紫杉醇偶聯(lián)物”)的合成方法描述于參考文獻Ke XY,Zhao BJ, Zhao X，Wang Y，Huang Y，Chen XM, Zhao BX, Zhao SS，Zhang X，Zhang Q. Thetherapeutic efficacy of conjugated linoleic acid- paclitaxel on glioma intherat. Biomaterials. 2010 Aug ；31 (22) :5855-64中。在此將其公開的內(nèi)容整體引入本申
請中作為參考。本發(fā)明的第一個方面提供一種水包油型微乳制劑，所述制劑包括油相和水相，其特征在于用于制成所述油相的原料由抗腫瘤藥物CLA-PTX、油性介質(zhì)、表面活性剤、助表面活性劑和任選的其它用于制備油相的原料組成?？蛇x用的油性介質(zhì)的實例包括但不限于植物油(例如大豆油、棉籽油)、動物油、合成油脂和其混合物?？蛇x用的表面活性劑的實例包括但不限于卵磷脂(例如蛋黃卵磷脂、大豆卵磷月旨)和非離子表面活性劑(例如聚氧こ烯蓖麻油(如CremophorELP)、聚氧こ烯氫化蓖麻油(如CremophorRH)、吐溫(如吐溫80))的混合表面活性劑。可選用的助表面活性劑的實例包括但不限于こ醇、丙ニ醇、甘油和其混合物。 可選用的其它用于制備油相的原料的實例包括但不限于其它活性劑(例如其它用于治療惡性腫瘤的藥物)、防腐劑和抗菌劑。在一個優(yōu)選的實施方案中，用于制成所述油相的原料由植物油(為油性介質(zhì))、卵磷脂、非離子表面活性劑(卵磷脂和非離子表面活性劑為混合表面活性剤)和こ醇(為助表面活性劑)組成。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，用于制成所述油相的原料由大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油和こ醇組成。在該實施方案中，大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油和こ醇之間的質(zhì)量比(w/w)可以為5 10 15 22 10 20 50 70，例如 5 : 15 : 15 : 65、
5 20 10 65、5 20 20 55、6 : 17 : 11 : 66 和 8 : 22 : 10 : 60，優(yōu)選為8 22 10 60。在一個實施方案中，抗腫瘤藥物CLA-PTX在油相中的藥物濃度為20mg/ml 200mg/ml,例如 20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml 或 200mg/ml。。在一個實施方案中，制成所述水相的原料為任何生理學(xué)上可接受的水性介質(zhì)，例如注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的葡萄糖注射液(即每IOOg注射液中含有5g葡萄糖)。本發(fā)明的另ー個方面提供所述微乳制劑組合物的制備方法，所述方法包括如下步驟將油性介質(zhì)、表面活性剤、助表面活性劑和任選的其它用于制備油相的原料精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；精確稱取CLA-PTX，加入至油相中，靜置或水浴超聲至CLA-PTX完全溶解；待CLA-PTX完全溶解后再加入用于制成水相的原料進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述方法包括如下步驟將大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油與こ醇按照5 10 : 15 22 : 10 20 50 70的質(zhì)量比精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；
精確稱取CLA-PTX，加入至油相中，靜置或水浴超聲至CLA-PTX完全溶解，使CLA-PTX在油相中的濃度為 20mg/ml 200mg/ml,例如 20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml 或 200mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%葡萄糖注射液進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。在一個實施方案中，所述比例稀釋為按照油相與水相之間的質(zhì)量比=I 10 I 100進行比例稀釋。在一個實施方案中，所述水浴超聲的水浴溫度為25_35°C，例如30°C。本發(fā)明的另ー個方面提供所述微乳制劑在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。在一個實施方案中，所述惡性腫瘤為腦膠質(zhì)瘤，例如鼠源性腦膠質(zhì)瘤。本發(fā)明所述的微乳制劑可以通過靜脈注射給藥。本發(fā)明的優(yōu)點和/或能夠產(chǎn)生的效果在于將CLA-PTX包載于微乳制劑中后可以提高CLA-PTX的給藥濃度，同時被動靶向至異位腫瘤部位，從而發(fā)揮更好的抗腫瘤作用，同時對正常組織的毒副作用降低。


圖I為包含DiR的微乳制劑的活體成像實驗結(jié)果。圖2為荷瘤裸鼠在給藥后腫瘤的體積與時間的關(guān)系曲線。
具體實施例方式實施例I包含CLA-PTX的微乳制劑的構(gòu)建
輔料質(zhì)量
大豆油I O.Omg 蛋黃卵鱗脂30.0mg 聚氧乙烯蓖麻油30.0mg 乙醇130.Omg
將上述質(zhì)量比的大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油與こ醇精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；精確稱取20mgCLA_PTX，加入至Iml的油相中，靜置溶解或采用水浴超聲30s進行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的濃度為20mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 %的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。其中所述水浴超聲的水浴溫度為30°C。
實施例2包含CLA-PTX的微乳制劑的構(gòu)建
輔料質(zhì)量
大豆油I O.Omg 蛋黃卵磷脂40.0mg
聚氧乙稀霞麻油20.0mg こ醇130.0mg將上述質(zhì)量比的大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油與こ醇精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；精確稱取20mgCLA_PTX，加入至Iml的油相中，靜置溶解或采用水浴超聲30s進行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的濃度為20mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 %的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。其中所述水浴超聲的水浴溫度為30°C。實施例3包含CLA-PTX的微乳制劑的構(gòu)建
輔料質(zhì)量
大豆油I O.Omg 蛋黃卵磷脂40.0mg
聚氧こ烯蓖*麻油40.Omg
乙醇110.Omg將上述質(zhì)量比的大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油與こ醇精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；精確稱取20mgCLA_PTX，加入至Iml的油相中，靜置溶解或采用水浴超聲30s進行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的濃度為20mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 %的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。其中所述水浴超聲的水浴溫度為30°C。實施例4包含CLA-PTX的微乳制劑的構(gòu)建
輔料質(zhì)量
大豆油I O.Omg 蛋黃卵磷脂30.0mg 聚氧乙烯蓖麻油20_0mg こ醇115.Omg將上述質(zhì)量比的大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油與こ醇精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；精確稱取20mgCLA_PTX，加入至Iml的油相中，靜置溶解或采用水浴超聲30s進行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的濃度為20mg/ml ； 待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5 %的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。其中所述水浴超聲的水浴溫度為30°C。實施例5包含CLA-PTX的微乳制劑的構(gòu)建
輔料質(zhì)量或體積
大豆油lO.Omg
蛋黃卵嶙脂40.Omg
聚氧こ歸蓖麻油20,Omg
乙醇·120.Omg將上述質(zhì)量比的大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油與こ醇精確稱量后加入至容器內(nèi)；將上述步驟得到的混合物靜置或水浴超聲溶解，形成均一透明的油相；精確稱取20mgCLA-PTX，加入至Iml的油相中，靜置溶解或采用水浴超聲30s進行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的濃度為20mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w進行比例稀釋，得到水包油型微乳制劑。其中所述水浴超聲的水浴溫度為30°C。實驗部分為檢驗本發(fā)明的微乳制劑的抗腫瘤效果，我們以實施例5的包含CLA-PTX的微乳制劑為例，進行了以下方面的考察I、微乳性質(zhì)的表征采用動態(tài)光散射法(dynamic light scattering, DLS)對其進行粒徑和zeta電位的測定，結(jié)果見表I。結(jié)果表明本發(fā)明所述的微乳制劑的制備方法優(yōu)良、可行。表 I*
權(quán)利要求
1.一種水包油型微乳制劑，所述制劑包括油相和水相，其特征在于用于制成所述油相的原料由抗腫瘤藥物CLA-PTX、油性介質(zhì)、表面活性劑、助表面活性劑和任選的其它用于制備油相的原料組成。
2.如權(quán)利要求I所述的水包油型微乳制劑，其特征在于所述油性介質(zhì)選自植物油(例如大豆油、棉籽油)、動物油、合成油脂和其混合物。
3.如權(quán)利要求I所述的水包油型微乳制劑，其特征在于所述表面活性劑為卵磷脂(例如蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂)和非離子表面活性劑(例如聚氧こ烯蓖麻油(如CremophorELP)、聚氧こ烯氫化蓖麻油(如CremophorRH)、吐溫(如吐溫80))的混合表面活性劑。
4.如權(quán)利要求I所述的水包油型微乳制劑，其特征在于所述助表面活性劑選自こ醇、丙ニ醇、甘油和其混合物。
5.如權(quán)利要求I所述的水包油型微乳制劑，其特征在于所述任選的其它用于制備油相的原料選自其它活性劑(例如其它用于治療惡性腫瘤的藥物)、防腐劑和抗菌劑。
6.如權(quán)利要求1-5任一項所述的水包油型微乳制劑，其特征在于用于制成所述油相的原料由植物油、卵磷脂、非離子表面活性劑和こ醇組成。
7.如權(quán)利要求6所述的水包油型微乳制劑，其特征在于用于制成所述油相的原料由大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油和こ醇組成。
8.如權(quán)利要求7所述的水包油型微乳制劑，其特征在于大豆油、蛋黃卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油和こ醇之間的質(zhì)量比(w/w)為5 10 15 22 10 20 50 70，例如 5 15 15 65、5 20 10 65、5 20 20 55、6 : 17 : 11 : 66 或8 22 10 60。
9.如權(quán)利要求1-5任一項所述的水包油型微乳制劑，其特征在于抗腫瘤藥物CLA-PTX在油相中的藥物濃度為 20mg/ml 200mg/ml,例如 20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml或 200mg/ml。
10.如權(quán)利要求1-5任一項所述的水包油型微乳制劑，其特征在于用于制成所述水相的原料為任何生理學(xué)上可接受的水性介質(zhì)，例如注射用生理鹽水或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的葡萄糖注射液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種被動靶向給藥系統(tǒng)，特別是涉及一種包含CLA-PTX的微乳制劑。本發(fā)明還涉及所述微乳制劑的制備方法和所述微乳制劑在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。
文檔編號A61K47/48GK102670504SQ20121015924
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月22日
發(fā)明者張強, 張烜, 李丹, 李捷思, 楊科, 柯曦宇 申請人:北京大學(xué)