一種含有博落回提取物的微乳注射劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含有博落回提取物的微乳注射劑及其制備方法。該微乳注射劑的組分為：博落回提取物、二乙酸甘油酯、聚山梨酯-80、聚乙二醇600、甘油、維生素E和注射用水。將博落回提取物和維生素E加入濕熱滅菌的二乙酸甘油酯中，攪拌解至透明狀作為油相備用；將聚山梨酯-80、甘油和聚乙二醇600，加入注射用水中，加熱使其溶解至透明狀，滅菌后作為水相備用；油相經(jīng)管道進(jìn)入乳化罐，水相緩慢加入，攪拌形成初乳，初乳加入膠體磨剪切乳化形成澄明的單一相微乳體系，經(jīng)過濾、滅菌后得到O/W型微乳注射液。對(duì)仔豬大腸桿菌病的臨床防治效果表明，該制劑有效率達(dá)100％，治愈率達(dá)90％以上，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)中藥注射液。
【專利說明】一種含有博落回提取物的微乳注射劑及其制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于獸用微乳注射劑制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說是一種含有博落回提取物的微乳注射劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前獸醫(yī)臨床上由于抗生素的濫用，導(dǎo)致細(xì)菌的耐藥現(xiàn)象在全球范圍內(nèi)迅速蔓延。耐藥性的產(chǎn)生不僅使治療細(xì)菌感染成為了嚴(yán)重困擾動(dòng)物健康的問題，同時(shí)由于動(dòng)物源性食品的獸藥殘留超標(biāo)及耐藥性傳遞，對(duì)人類健康也產(chǎn)生嚴(yán)重的威脅。因此尋求中獸藥治療畜禽疾病、減緩耐藥菌株的產(chǎn)生已成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。但目前中獸藥制劑技術(shù)落后，劑型單一，主要以傳統(tǒng)散劑為主，占中國獸藥典收錄劑型的百分之八十多，遠(yuǎn)不能適應(yīng)滿足獸醫(yī)臨床實(shí)際需要。
[0003]微乳是由水相、油相、乳化劑及助乳化劑在適當(dāng)?shù)呐浔认陆M成的粒徑在10~IOOnm的一種透明或半透明、熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定的分散體系。微乳對(duì)水溶性、脂溶性及難溶性藥物均有較好的溶解力，作為油、水難溶性藥物的載體有其獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)。研究證明，制備微乳可提高難溶性藥物的溶解度，促進(jìn)大分子水溶性藥物在機(jī)體內(nèi)的吸收，提高藥物在體內(nèi)的生物利用度，還可提高不穩(wěn)定藥物的穩(wěn)定性。
[0004]博落回注射液是獸藥國標(biāo)收載的治療仔豬大腸桿菌病經(jīng)典處方，因博落回主要有效成分氨性生物堿水溶性差，目前標(biāo)準(zhǔn)上收載的博落回注射液只有一個(gè)低含量規(guī)格(0.5/100，g/ml)。小規(guī)格含量的博落回注射液存在用藥次數(shù)多，生物利用度低，質(zhì)量不穩(wěn)定等不利因素。本發(fā)明采用的自微乳技術(shù)，具有增加博落回生物堿溶解度及提高藥物穩(wěn)定性和生物利用度等優(yōu)點(diǎn)，具有更廣闊的發(fā)展前景并將得到廣泛的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前獸醫(yī)臨床上抗生素的不合理使用，提供一種防治仔豬大腸桿菌病的純中藥微乳制劑及其制備方法。博落回的主要有效成分為氨性生物堿，在水中幾乎不溶，生物利用度低，嚴(yán)重影響了藥物的臨床療效。本發(fā)明利用偽三元相圖篩選處方，確定了博落回提取物的微乳注射劑的各組分及最佳比例，主要包括藥物、油相、表面活性劑以及助表面活性劑的選擇及比例。采用本發(fā)明自微乳技術(shù)制備的微乳注射劑治療豬大腸桿菌病效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)中藥注射劑，具有良好的市場(chǎng)前景。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種含有博落回提取物的微乳注射劑，其特征是，所述每100mL的微乳注射劑包含以下組分:博落回提取物0.5~5g, 二乙酸甘油酯I~15g,聚山梨酯-80 (乳化劑)I~4g,聚乙二醇600 (助乳化劑)0.1~Ig,甘油(助乳化劑)I~IOg,維生素E0.1~Ig,注射用水加至100mLo
[0007]優(yōu)選配比為:博落回提取物3g，二乙酸甘油酯10g，聚山梨酯-80 2g，聚乙二醇6000.5g，甘油5g，維生素E0.5g，注射用水加至100ml。
[0008]所述博落回提取物是由博落回經(jīng)提取、純化、濃縮、干燥制得的中藥提取物，主要有效成分為血根堿(C2tlH14NO4)和白屈菜紅堿(C21H18NO4), 二者的總量不少于60.0% (w/w) 0
[0009]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種含有博落回提取物的微乳注射劑的制備方法，具體包括以下步驟:
[0010](I)油相的制備
[0011]按上述配比稱取博落回提取物、二乙酸甘油酯和維生素E，將二乙酸甘油酯100-120°C濕熱滅菌20-40分鐘，降至60~70°C時(shí)，將博落回提取物和維生素E加入其中，攪拌至完全溶解至透明狀作為油相備用；
[0012](2)水相的制備
[0013]按上述配比稱 取聚山梨酯-80、甘油和聚乙二醇600，加入注射用水中，加熱使其溶解至透明狀，100-120°C滅菌20-40分鐘，降至室溫作為水相備用；
[0014](3)乳化
[0015]油相經(jīng)管道進(jìn)入乳化罐，水相緩慢加入,邊加邊攪拌,加完繼續(xù)攪拌5~8min成初乳，初乳加入膠體磨剪切乳化15~30分鐘，形成澄明的單一相微乳體系，過0.45 μ m濾膜除去粗乳滴及碎片，最后經(jīng)低溫間歇蒸汽滅菌法重復(fù)3-5次，每次滅菌溫度75°C~80°C，每次滅菌時(shí)間20-40分鐘，即得細(xì)分散的0/W型微乳注射液。取樣，12000r/min離心15min觀察，應(yīng)不分層、不破乳，則合格，可進(jìn)行灌封，即得。
[0016]作用與用途:主治仔豬黃白痢。
[0017]用法與用量:肌內(nèi)注射,一次量，豬，2~IOml, —日I次；一次用量不得過15ml。
[0018]各原料藥來源及藥理作用
[0019]博落回:S粟科植物博落回(Macleaya cordata(ffilld.)R.Br.)的果實(shí)。博落回提取物中有效成分主要為血根堿(sanguinarine)和白屈菜紅堿(chelerythrine),以果實(shí)中含量最高。博落回具有較強(qiáng)的殺菌、抑菌活性，體外抑菌試驗(yàn)和獸醫(yī)臨床試驗(yàn)表明，博落回提取物對(duì)大腸桿菌最低抑菌濃度(MIC)為7.81ug/mL，治療仔豬黃痢和白痢的總有效率達(dá)80%，并具有用量小、成本低等優(yōu)點(diǎn)，已載入農(nóng)業(yè)部96版《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中。
[0020]二乙酸甘油酯:作為油相，無色透明無嗅油狀液體；微溶于水、易溶于醇、醚和其它有機(jī)溶劑，為優(yōu)良、高效、安全無毒的有機(jī)溶劑，廣泛用于制藥產(chǎn)業(yè)。
[0021]聚山梨酯80:別名吐溫80，為淡黃至橙黃色的黏稠液體，是非離子型親水性表面活性劑，毒性、刺激性、溶血性都很小，安全性高且乳化能力強(qiáng)。
[0022]聚乙二醇600、甘油:為助表面活性劑，協(xié)助表面活性劑降低界面張力；增加界面流動(dòng)性，減少微乳形成時(shí)的界面彎曲能，使微乳自發(fā)形成；調(diào)節(jié)表面活性劑的HLB值，使表面活性劑在油-水界面有較大的吸附。維生素E是抗氧劑。
[0023]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明根據(jù)微乳作為載藥系統(tǒng)，具有增加難溶性藥物溶解度及提高藥物穩(wěn)定性和生物利用度等優(yōu)點(diǎn)，將博落回提取物溶解在微乳的油相中，制成藥物微乳注射劑，不僅克服了博落回生物堿溶解性差，生物利用度低的缺點(diǎn)，而且微乳質(zhì)量穩(wěn)定，在室溫密封遮光條件下保質(zhì)期為24個(gè)月。同時(shí)該制劑具有緩釋特點(diǎn)，從而減少了用藥次數(shù)，有利于維持恒定的血藥濃度，減少多次給藥的毒副作用，更好得發(fā)揮了藥物臨床療效，在藥劑學(xué)方面展現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用發(fā)展前景。對(duì)仔豬大腸桿菌病的臨床防治效果表明，該制劑的有效率達(dá)100%，治愈率達(dá)90%以上，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)中藥注射液。該微乳注射劑無任何毒副作用、無殘留、符合當(dāng)前“綠色產(chǎn)品”發(fā)展要求等優(yōu)點(diǎn)?！揪唧w實(shí)施方式】
[0024]實(shí)施例1
[0025]配比:博落回提取物3g，二乙酸甘油酯10g，聚山梨酯-80 2g，聚乙二醇600 0.5g,甘油5g，維生素E0.5g，注射用水加至100ml。
[0026]上述博落回提取物，由湖南美可達(dá)生物資源有限公司生產(chǎn)，批號(hào)；2013051201，系博落回經(jīng)提取、純化、濃縮、干燥制得的中藥提取物，主要有效成分為血根堿(C2tlH14NO4)和白屈菜紅堿(C21H18NO4), 二者的總量不少于60.0 % (w/w) ο
[0027]制備方法:
[0028](I)油相的制備按上述配比準(zhǔn)確稱取博落回提取物、二乙酸甘油酯和維生素E，將二乙酸甘油酯115°C濕熱滅菌30分鐘，降至60~70°C時(shí)，將博落回提取物、維生素E加入其中，500rmp/min攪拌10分鐘并不斷攪拌至完全溶解至透明狀作為油相備用；
[0029](2)水相的制備按上述配比準(zhǔn)確稱取乳化劑聚山梨酯-80、助乳化劑甘油和聚乙二醇600，加入注射用水中，加熱使其溶解至透明狀，115°C滅菌30分鐘，降至室溫作為水相備用；
[0030](3)乳化油相經(jīng)管道進(jìn)入乳化罐，水相緩慢加入，邊加邊攪拌，加完繼續(xù)攪拌5~8min成初乳,初乳加入膠體磨剪切乳化15~30分鐘,形成澄明的單一相微乳體系，過0.45 μ m濾膜除去粗乳滴及碎片，最后經(jīng)低溫間歇蒸汽滅菌法重復(fù)3次，每次滅菌溫度75°C~80°C，每次滅菌時(shí)間30分鐘，即得細(xì)分散的0/W型微乳注射液。取樣，12000r/min離心15min觀察，應(yīng)不分 層、不破乳，則合格，可進(jìn)行灌封，即得。
[0031]上述微乳注射劑為淡棕紅色至棕紅色透明液體，平均粒徑為60.14± 1.06nm,多分散指數(shù)為0.198。微乳液滴呈圓球形。
[0032]該微乳體系性質(zhì)穩(wěn)定,3000r/m離心15min,未見分層,在37°C條件下避光放置21天進(jìn)行加速試驗(yàn)，結(jié)果未見破乳現(xiàn)象發(fā)生。
[0033]以下結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說明其治療效果。
[0034]1.試驗(yàn)材料
[0035]1.1試驗(yàn)藥物:實(shí)施例1制備的含有博落回提取物的微乳注射劑。
[0036]1.2對(duì)照藥物①:硫酸慶大霉素注射液(5ml: 20萬單位)，批號(hào):20020415，齊魯動(dòng)
保廠生產(chǎn)；
[0037]對(duì)照藥物②:博落回注射液，批號(hào):20130415，齊魯動(dòng)保廠生產(chǎn)。
[0038]1.3試驗(yàn)豬:患黃痢、白痢的自然發(fā)病仔豬，萊蕪振興豬場(chǎng)提供。
[0039]1.4菌種:豬大腸桿菌08、064、O101株，山東省獸醫(yī)總站檢驗(yàn)中心惠贈(zèng)，山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所傳代、保存。
[0040]1.5培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂平板,按常規(guī)方法制作。
[0041]2試驗(yàn)方法
[0042]2.1病原鑒定:用滅菌棉拭子從患拉稀的自然發(fā)病仔豬的直腸深部采集病料，進(jìn)行細(xì)菌分離、培養(yǎng)和鑒定，以確診是否為仔豬黃白痢。
[0043]2.2體外抑菌試驗(yàn):
[0044]2.2.1藥物原液的配制:用滅菌蒸餾水將藥物稀釋至1280ug/ml。[0045]2.2.2試管兩倍稀釋法測(cè)MIC
[0046]菌液的制備:無菌操作法取已活化的菌種一環(huán)于含6ml肉湯培養(yǎng)基的小試管中，37°C培養(yǎng)17小時(shí)，使其生長濁度達(dá)9X 108/ml。采用倍比稀釋法，將菌液稀釋10000倍。
[0047]MIC測(cè)定:根據(jù)所試藥物和菌種數(shù)排列無菌小試管，每一種藥物和任一菌排一列，每一列13管。將上述已稀釋10000倍的菌液加入到各小試管中，除第一管加入稀釋后菌液
1.8ml外,其余各管均加入1ml。繼于第I管加入抗菌藥物原液0.2ml,混勻后吸出Iml加入第2管中，用同樣方法依次稀釋至第12管，棄去lml。第13管作為生長對(duì)照。則各管的濃度依次為 128、64、32、16、8、4、2、1、0.5,0.25,0.125,0.06 μ g/ml ? [0048]培養(yǎng):將各管置于37°C溫箱中培養(yǎng)17h，以無細(xì)菌生長的最低濃度為最低抑菌濃度 MIC。
[0049]2.3臨床試驗(yàn)及療效觀察
[0050]2.3.1試驗(yàn)分組:挑選患黃白痢的自然發(fā)病仔豬隨機(jī)分成5組。1、IIJII組為博落回提取物的微乳注射液高、中、低劑量治療組，劑量分別為10、5、2.5mg/Kg體重，肌肉注射，I天I次，連用3天。IV組為硫酸慶大霉素注射液對(duì)照組，4mg/Kg體重，肌肉注射，每天二次，連用3天。V組為博落回注射液對(duì)照組，5mg/kg體重,一日2~3次,連用3天。VI組安全性試驗(yàn)組，給相同日齡的健康仔豬注射25mg/kg體重的博落回提取物的微乳注射液，每天2次，連用3天。與病豬隔尚飼養(yǎng)。
[0051]2.3.2療效觀察:試驗(yàn)期為7天，試驗(yàn)期間注意觀察排糞次數(shù)及糞便狀態(tài)。療效判斷標(biāo)準(zhǔn):
[0052]痊愈:治療后患豬的精神、食欲恢復(fù)正常,糞便呈條狀或顆粒狀,肛門干燥、收縮、無紅腫，七天內(nèi)無復(fù)發(fā)現(xiàn)象。
[0053]顯效:治療后糞便變稠，排便次數(shù)減少，肛門紅腫未完全消退，精神食欲有所改善。
[0054]無效:治療后患豬精神、糞便、食欲無明顯改善，甚至死亡。
[0055]3試驗(yàn)結(jié)果
[0056]3.1病原鑒定:用滅菌棉拭子從病豬直腸深部采集病料，接種營養(yǎng)肉湯增菌培養(yǎng)，然后在麥康凱鑒別培養(yǎng)基上劃線，37°C培養(yǎng)24小時(shí)有大量大小均一的紅色菌落生長。挑取菌落，涂片，染色，鏡檢為革蘭氏陰性短桿菌。用分離菌培養(yǎng)物給仔豬灌服，能復(fù)制出類似癥狀。結(jié)合流行病學(xué)特點(diǎn)，確診為仔豬黃痢白痢。
[0057]3.2體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果
[0058]本試驗(yàn)結(jié)果表明，博落回提取物的微乳注射液對(duì)豬源致病性大腸桿菌08、064、O101的MIC為8ug/ml,硫酸慶大霉素的最低抑菌濃度為16ug/ml?？梢?病原菌已對(duì)慶大霉素產(chǎn)生一定的耐藥性。
[0059]3.3臨床治療試驗(yàn)結(jié)果
[0060]病豬在用藥后精神好轉(zhuǎn)，拉稀癥狀減輕，排便次數(shù)減少，糞便變稠，用藥3次病豬基本痊愈。試驗(yàn)藥物中劑量組的有效率、治愈率分別為100%、94.7%，結(jié)果見下表:
[0061]表1博落回提取物的微乳注射液液臨床試驗(yàn)結(jié)果
[0062]
【權(quán)利要求】
1.一種含有博落回提取物的微乳注射劑，其特征是，所述每100mL的微乳注射劑包含以下組分:博落回提取物0.5~5g, 二乙酸甘油酯I~15g,聚山梨酯-80 I~4g,聚乙二醇600 0.1~Ig,甘油I~IOg,維生素E0.1~Ig,注射用水加至100ml。
2.如權(quán)利要求1所述的一種含有博落回提取物的微乳注射劑，其特征是，所述每100mL的微乳注射劑包含以下組分:博落回提取物3g，二乙酸甘油酯10g，聚山梨酯-80 2g，聚乙二醇600 0.5g,甘油5g,維生素E0.5g,注射用水加至100ml。
3.如權(quán)利要求1或2所述的含有博落回提取物的微乳注射劑，其特征是，所述博落回提取物的主要有效成分為血根堿和白屈菜紅堿，二者的總量不少于60.0% (w/w)。
4.一種制備權(quán)利要求1或2所述的微乳注射劑的方法，其特征是， (1)油相的制備 按權(quán)利要求1或2所述 的比例稱取博落回提取物、二乙酸甘油酯和維生素E，將二乙酸甘油酯經(jīng)濕熱滅菌后，降至60~70°C時(shí)，將博落回提取物和維生素E加入其中，攪拌至完全溶解至透明狀作為油相備用； (2)水相的制備 按權(quán)利要求1或2所述的比例稱取聚山梨酯-80、甘油和聚乙二醇600，加入注射用水中，加熱使其溶解至透明狀，滅菌后降至室溫作為水相備用； (3)乳化 油相經(jīng)管道進(jìn)入乳化罐，水相緩慢加入，邊加邊攪拌，加完繼續(xù)攪拌5~Smin成初乳，初乳加入膠體磨剪切乳化15~30分鐘，最后經(jīng)過濾、滅菌形成澄明的單一相微乳體系，即得微乳注射液。
5.如權(quán)利要求4所述的微乳注射劑的制備方法，其特征是，所述步驟(1)的濕熱滅菌為100-120°C濕熱滅菌20-40分鐘。
6.如權(quán)利要求4所述的微乳注射劑的制備方法，其特征是，所述步驟(2)的滅菌為100-120°C滅菌 20-40 分鐘。
7.如權(quán)利要求4所述的微乳注射劑的制備方法，其特征是，所述步驟(3)的滅菌為:低溫間歇蒸汽滅菌法重復(fù)3-5次，每次滅菌溫度為75°C~80°C，每次滅菌時(shí)間20-40分鐘。
8.如權(quán)利要求4所述的微乳注射劑的制備方法，其特征是，所述步驟(3)的過濾為:過0.45 μ m濾膜除去粗乳滴及碎片。
【文檔編號(hào)】A61K36/66GK103919862SQ201410180675
【公開日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】張傳津 申請(qǐng)人:張傳津