專利名稱：一種靶向熱敏脂質(zhì)體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靶向給藥系統(tǒng)，特別是涉及一種腫瘤歸巢肽修飾的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。本發(fā)明還涉及所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法和所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體(liposomes)在過(guò)去四十年中作為化療藥物給藥系統(tǒng)的載體，尤其是在腫瘤治療方面，得到了廣泛的發(fā)展。近年來(lái)，結(jié)合了物理化學(xué)靶向和脈沖釋放性能的熱敏脂質(zhì)體在抗腫瘤領(lǐng)域越來(lái)越引起重視。熱敏脂質(zhì)體(thermosensitive liposomes, TSL)是一類由相變溫度略高于正常組織溫度的溫敏材料制成的，能在局部高溫條件下迅速將所載藥物釋放的脂質(zhì)體。在正常的體溫下，脂質(zhì)體膜呈致密排列的膠晶態(tài)，親水性藥物很難透過(guò)脂質(zhì)體膜而擴(kuò)散出來(lái)。當(dāng)脂質(zhì)體隨血液循環(huán)經(jīng)過(guò)被加熱的靶器官時(shí)，局部的高溫使磷脂分子運(yùn)動(dòng)加強(qiáng)，脂質(zhì)體膜的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，原來(lái)排列整齊致密的膠晶態(tài)磷脂雙分子層在較高溫度下變成疏松混亂的液晶態(tài)，導(dǎo)致脂質(zhì)體迅速釋放內(nèi)含藥物。目前抗腫瘤藥物熱敏脂質(zhì)體研究中的最大問(wèn)題是如何提高其在腫瘤部位的濃度， 降低抗腫瘤藥物對(duì)內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)及正常組織的毒性。雖然熱敏脂質(zhì)體已經(jīng)集被動(dòng)靶向性 (從間隙比較大的腫瘤血管中泄漏進(jìn)入腫瘤部位，實(shí)現(xiàn)在腫瘤中的蓄積)和物理化學(xué)靶向性(在高于相變溫度時(shí)，將所包封的藥物釋放于加熱部位)于一身，但是有文獻(xiàn)報(bào)道，這兩種靶向作用的效果在對(duì)抗腫瘤藥效的提高上并不明顯。因此，如何顯著提高熱敏脂質(zhì)體的靶向性，增強(qiáng)熱敏脂質(zhì)體的抗腫瘤效果，是本領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。腫瘤歸巢肽(tumor homing peptide)由于特異性強(qiáng)、生物相容性好、無(wú)毒、無(wú)免疫原性，是用于主動(dòng)靶向的良好配體。所謂腫瘤歸巢肽，是一類由幾個(gè)到幾十個(gè)氨基酸組成的肽鏈序列，能以高度的親和力和特異性結(jié)合到腫瘤細(xì)胞或者腫瘤血管/淋巴管。除此之外， 很多腫瘤歸巢肽能被腫瘤細(xì)胞內(nèi)化，在腫瘤細(xì)胞內(nèi)以很高的濃度積累。CREKA(cys-arg-glu-lys-ala)是一種由半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、賴氨酸和丙氨酸組成的五肽，其作用于腫瘤微環(huán)境，對(duì)乳腺癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、黑色素瘤等多種癌細(xì)胞均有靶向作用，沒(méi)有腫瘤選擇性。CREKA在體內(nèi)發(fā)揮靶向作用的機(jī)制是1.識(shí)別腫瘤血管和間隙中特異性存在的凝固的血漿蛋白，選擇性歸巢到腫瘤部位；2、不僅歸巢到腫瘤部位，同時(shí)能夠自擴(kuò)大化歸巢作用，即CREKA在腫瘤部位積累后，能夠誘導(dǎo)額外的局部凝固，因而產(chǎn)生出更多的CREKA結(jié)合位點(diǎn)，類似于血小板的自擴(kuò)大效應(yīng)。目前，國(guó)內(nèi)外尚沒(méi)有利用CREKA對(duì)包含抗腫瘤藥物的熱敏脂質(zhì)體進(jìn)行修飾的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)在于將熱敏脂質(zhì)體與主動(dòng)靶向技術(shù)相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)多種靶向技術(shù)的
3配合，以提高熱敏脂質(zhì)體的靶向性，增強(qiáng)熱敏脂質(zhì)體的抗腫瘤效果。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，所述組合物包括表面修飾有腫瘤歸巢肽CREKA或具有CREKA核心序列的肽段的熱敏脂質(zhì)體，所述熱敏脂質(zhì)體中包含有抗腫瘤藥物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。本發(fā)明的技術(shù)方案和要點(diǎn)將在下面作詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明還涉及以下技術(shù)方案1、一種靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述組合物包括表面修飾有腫瘤歸巢肽CREKA或具有CREKA核心序列的肽段的熱敏脂質(zhì)體，所述熱敏脂質(zhì)體中包含有抗腫瘤藥物。2、如項(xiàng)1所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述抗腫瘤藥物選自阿霉素、表阿霉素、柔紅霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、吡柔比星、阿柔比星、順鉬、卡鉬、奧沙利鉬和甲氨蝶呤中的一種或多種。3、如項(xiàng)2所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中抗腫瘤藥物的藥脂比(藥物與脂材的質(zhì)量比)為 1 10w/w 1 50w/w，例如 1 10w/w、l 20w/w、l 30w/w、l 40w/ w、l 50w/wo4、如項(xiàng)1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、 熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物。5、如項(xiàng)4所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物 DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段是通過(guò)將腫瘤歸巢肽CREKA或具有CREKA核心序列的肽段與DSPE-PEG-馬來(lái)酰亞胺溶解于液體介質(zhì)中，調(diào)節(jié)液體介質(zhì)的pH 值至6. 0-8. O范圍內(nèi)，持續(xù)攪拌反應(yīng)，純化反應(yīng)所得物，經(jīng)冷凍干燥得到的腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段。6、如項(xiàng)5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中調(diào)節(jié)液體介質(zhì)的pH值至6. 5-7. 5范圍內(nèi)，優(yōu)選調(diào)節(jié)PH值至6. 8-7.2的范圍內(nèi)，更優(yōu)選調(diào)節(jié)pH值至6. 9-7. 1的范圍，最優(yōu)選調(diào)節(jié)至PH值為7.0。7、如項(xiàng)5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述液體介質(zhì)為可將腫瘤歸巢肽 CREKA與DSPE-PEG-馬來(lái)酰亞胺溶解于其中的任意種類的液體介質(zhì)，例如水性溶劑和有機(jī)溶劑。8、如項(xiàng)5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述反應(yīng)是在惰性氣體的保護(hù)下進(jìn)行的。9、如項(xiàng)5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述反應(yīng)是在環(huán)境溫度下進(jìn)行的， 優(yōu)選在15°C _35°C的溫度進(jìn)行，更優(yōu)選在20°C -30°C的溫度進(jìn)行，最優(yōu)選在25°C的溫度進(jìn)行。10、如項(xiàng)5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述攪拌的時(shí)間為M小時(shí)以上。11、如項(xiàng)5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述純化反應(yīng)所得物的步驟是通過(guò)對(duì)反應(yīng)所得物進(jìn)行透析的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)的。12、如項(xiàng)4所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC和 DSPC。13、如項(xiàng)4所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC、 HSPC 禾口 CHOL014、如項(xiàng)4所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC和 MSPC。15、如項(xiàng)4所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC、 MSPC 禾口 DSPG016、如項(xiàng)4所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC和 MPPC017、如項(xiàng)1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括 DPPC、DSPC、DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、DSPC、DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段之間的摩爾比為 DPPC DSPC DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段=60 100 25 5 0.2 10 0. 2 10，優(yōu)選70 90 20 10 0.5 5 0.5 5，例如 80 19 0. 5 0. 5,80 18 1 1、80 17 1. 5 1. 5、 80 16 2 2、80 15 2.5 2. 5,80 14 3 3 和 80 10 5 5。18、如項(xiàng)1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括 DPPC、HSPC, CHOL, DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、HSPC, CHOL, DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段之間的摩爾比為DPPC HSPC CHOL DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA或 DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段=90 110 40 60 20 40 1 6 1 6，例如 95 105 45 55 25 35 2 5 2 5，優(yōu)選 100 50 30 3 3。19、如項(xiàng)1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括 DPPC、MSPC, DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、MSPC, DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段之間的摩爾比為 DPPC MSPC DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段=80 120 0.5 20 0.2 5 0. 2 5，優(yōu)選85 100 1 10 0.5 2. 5 0. 5 2. 5，更優(yōu)選 86 10 2 2、90 10 2 2、95 5 2 2、 97. 5 2.5 2 2、99 :1:2: 2、89 10 2. 5 2. 5,90 10 2 2、 91 10 1.5 1. 5,92 10 1 1 禾口 93 10 0. 5 0. 5。20、如項(xiàng)1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括 DPPC、MSPC, DSPG、DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、MSPC, DSPG、DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段之間的摩爾比為DPPC MSPC DSPG DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA或 DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段=60 100 2 20 2 20 0. 5 5 0. 5 5，優(yōu)選 70 90 6 10 8 12 1 3 1 3，更優(yōu)選 82 8 10 2 2。21、如項(xiàng)1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括 DPPC、MPPC, DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、MPPC、DSPE-PEG、DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段之間的摩爾比為DPPC MPPC DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的月太段=70 110 2 20 0.5 5 0. 5 5，優(yōu)選80 100 8 12 1 3 1 3，更優(yōu)選 90 10 2 2。22、如項(xiàng)1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物被進(jìn)一步制成藥物劑型，例如注射劑、輸液、凍干粉針劑或噴霧劑。23、如項(xiàng)1所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，包括如下步驟以腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-腫瘤歸巢肽或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物為原料，采用薄膜分散法或逆向蒸發(fā)法制備靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。24、如項(xiàng)23所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述采用薄膜分散法制備靶向熱敏脂質(zhì)體組合物包括下述步驟將DSPE-PEG-腫瘤歸巢肽或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物溶解于有機(jī)溶劑中；除去有機(jī)溶劑，以在容器壁上形成脂質(zhì)薄膜；加入任選含有抗腫瘤藥物的緩沖液，進(jìn)行水化處理，以形成粗脂質(zhì)體混懸液；對(duì)粗脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行超聲粉碎處理；對(duì)超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行純化，從而得到靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。25、如項(xiàng)23所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述采用薄膜分散法制備靶向熱敏脂質(zhì)體組合物包括下述步驟將DSPE-PEG-腫瘤歸巢肽或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物溶解于有機(jī)溶劑中；除去有機(jī)溶劑，以在容器壁上形成脂質(zhì)薄膜；加入任選含有抗腫瘤藥物的緩沖液，進(jìn)行水化處理，以形成粗脂質(zhì)體混懸液；對(duì)粗脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行超聲粉碎處理；對(duì)超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行純化；將純化后的脂質(zhì)體混懸液與抗腫瘤藥物的溶液進(jìn)行恒溫共孵育，并對(duì)共孵育后的脂質(zhì)體進(jìn)行純化，從而得到靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。26、如項(xiàng)M或25所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述除去有機(jī)溶劑是通過(guò)在一定溫度的水浴條件下(例如30-60°C )減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。27、如項(xiàng)M或25所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述水化處理是通過(guò)對(duì)緩沖液進(jìn)行渦旋震蕩和/或超聲處理來(lái)實(shí)現(xiàn)的。28、如項(xiàng)M或25所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述任選含有抗腫瘤藥物的緩沖液為任選含有抗腫瘤藥物的硫酸銨緩沖液或PH = 4的檸檬酸緩沖液。29、如項(xiàng)M或25所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述對(duì)粗脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行超聲粉碎處理是利用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。30、如項(xiàng)M或25所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述對(duì)超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行純化是通過(guò)將超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液通過(guò)kphadexG50柱，用磷酸鹽緩沖溶液(PBQ或漢克平衡鹽溶液(HBQ洗脫并收集脂質(zhì)體部分來(lái)實(shí)現(xiàn)的。31、如項(xiàng)M或25所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述對(duì)超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行純化是通過(guò)將超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體離心并收集上清部分來(lái)實(shí)現(xiàn)的。32、如項(xiàng)25所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述恒溫共孵育是在 37度恒溫水浴震蕩器中進(jìn)行的。33、如項(xiàng)25所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述對(duì)共孵育后的脂質(zhì)體進(jìn)行純化是通過(guò)將共孵育后的脂質(zhì)體再次通a^phadex G50柱，除去未包封的抗腫瘤藥物并收集脂質(zhì)體部分來(lái)實(shí)現(xiàn)的。34、如項(xiàng)23所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，其中所述采用逆向蒸發(fā)法制備靶向熱敏脂質(zhì)體組合物包括下述步驟將DSPE-PEG-腫瘤歸巢肽或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材和DSPE-PEG溶于有機(jī)溶劑(如氯仿、乙醚等)中，加入待包封的抗腫瘤藥物的水溶液，其中抗腫瘤藥物的水溶液與有機(jī)溶劑的體積比為抗腫瘤藥物的水溶液有機(jī)溶劑= 1 3 1 6 ；對(duì)上述步驟形成的溶液進(jìn)行超聲，直至形成WO型乳劑；減壓蒸發(fā)溶劑至形成凝膠；繼續(xù)減壓蒸發(fā)，從而得到靶向熱敏脂質(zhì)體組合物；或者在混勻器上機(jī)械振蕩，使凝膠塊破碎并轉(zhuǎn)變成液體，減壓蒸發(fā)揮去溶劑，從而得到靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。35、如項(xiàng)1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。36、如項(xiàng)35所述的用途，其中所述惡性腫瘤選自乳腺癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌和黑色素瘤。術(shù)語(yǔ)“CREKA(cys-arg-glu-lys-ala) ”表示一種由半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、賴氨酸和丙氨酸組成的腫瘤歸巢肽?！熬哂蠧REKA核心序列的肽段”表示核心序列為CREKA的腫瘤歸巢肽?？商峒暗膶?shí)例包括但不限于環(huán)狀CREKA-CREKA(通過(guò)二硫鍵相連)。在本發(fā)明中，“CREKA”或“具有 CREKA核心序列的肽段”用以修飾熱敏脂質(zhì)體，實(shí)現(xiàn)熱敏脂質(zhì)體的主動(dòng)靶向。上述肽段是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所容易設(shè)計(jì)和制備的。“DPPC”表示二棕櫚酰磷脂酰膽堿。“MSPC”表示1-肉豆蔻酰-2-硬脂酰磷脂酰膽堿。
“DSPG”表示二硬脂酰磷脂酰甘油?！癕PPC”表示肉豆蔻酰磷脂酰膽堿?！癉SPC”表示二硬脂酰磷脂酰膽堿?！癏SPC”表示氫化大豆卵磷脂?！癈H0L”表示膽固醇。“PBS”表示磷酸鹽緩沖溶液。
“HBS”表示漢克平衡鹽溶液。"DSPE-PEG-馬來(lái)酰亞胺”表示1，2_硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇_馬來(lái)酰亞胺。在本發(fā)明中，其用于與CREKA或具有CREKA核心序列的肽段反應(yīng)構(gòu)建腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段?！癉SPE-PEG”表示1，2_硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇，其是本領(lǐng)域用于對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行PEG化(即使脂質(zhì)體表面修飾有親水性的PEG分子從而實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)體的長(zhǎng)循環(huán)效應(yīng)) 的常用物質(zhì)?！澳敢骸北硎九渲朴谶m當(dāng)溶劑中的抗腫瘤藥物的溶液?！八幹取北硎舅幬锱c脂材的質(zhì)量比“ %，，如無(wú)相反指示，“ %，，表示質(zhì)量體積百分比。詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的下列技術(shù)特征之間可以進(jìn)行任意的組合，以形成不同的技術(shù)方案。本發(fā)明首先提供一種靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述組合物包括表面修飾有腫瘤歸巢肽CREKA或具有CREKA核心序列的肽段的熱敏脂質(zhì)體，所述熱敏脂質(zhì)體中包含有抗腫瘤藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗腫瘤藥物選自阿霉素、表阿霉素、柔紅霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、吡柔比星、阿柔比星、順鉬、卡鉬、奧沙利鉬、甲氨蝶呤等中的一種或多種。在一個(gè)實(shí)施方案中，制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物 DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗腫瘤藥物的藥脂比為1 lOw/w 1 50w/w，例如 1 10w/wU 20w/w、l 30w/w、l 40w/w、l 50w/w。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段是通過(guò)將腫瘤歸巢肽CREKA或具有CREKA核心序列的肽段與 DSPE-PEG-馬來(lái)酰亞胺溶解于液體介質(zhì)中，調(diào)節(jié)液體介質(zhì)的pH值至6. 0-8. O范圍內(nèi)，持續(xù)攪拌反應(yīng)，純化反應(yīng)所得物，經(jīng)冷凍干燥得到的腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或 DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段。其中，優(yōu)選調(diào)節(jié)液體介質(zhì)的pH值至6. 5-7. 5范圍內(nèi)，更優(yōu)選調(diào)節(jié)pH值至6. 8-7. 2 的范圍內(nèi)，更優(yōu)選調(diào)節(jié)PH值至6. 9-7. 1的范圍，最優(yōu)選調(diào)節(jié)至pH值為7. O。 所述液體介質(zhì)為可將腫瘤歸巢肽CREKA與DSPE-PEG-馬來(lái)酰亞胺溶解于其中的任意種類的液體介質(zhì)，例如水性溶劑和有機(jī)溶劑。適宜的溶劑是本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易選擇和確定的。所述反應(yīng)優(yōu)選是在惰性氣體的保護(hù)下進(jìn)行的。惰性氣體的實(shí)例包括但不限于氮?dú)?、二氧化碳和惰性稀有氣體，例如氖、氬、氪和氙。所述反應(yīng)優(yōu)選是在環(huán)境溫度下進(jìn)行的，更優(yōu)選在15-35°C的溫度進(jìn)行，更優(yōu)選在 20-30°C的溫度進(jìn)行，最優(yōu)選在25°C的溫度進(jìn)行。所述攪拌的時(shí)間優(yōu)選為M小時(shí)以上。所述純化反應(yīng)所得物的步驟優(yōu)選是通過(guò)對(duì)反應(yīng)所得物進(jìn)行透析的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC( 二棕櫚酰磷脂酰膽堿)和DSPC ( 二硬脂酰磷脂酰膽堿)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC、HSPC(氫化大豆卵磷脂)和 CHOL(膽固醇)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC及MSPC (1-肉豆蔻酰_2_硬脂酰磷脂酰膽堿)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC、MSPC和DSPG ( 二硬脂酰磷脂酰甘油)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述熱敏脂質(zhì)體膜材包括DPPC和MPPC(肉豆蔻酰磷脂酰膽堿)。在一個(gè)實(shí)施方案中，制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括DPPC、DSPC、DSPE-PEG、 DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、DSPC、DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段之間的摩爾比為DPPC D SPC DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段=60 100 25 5 0.2 10 0. 2 10，優(yōu)選 70 90 20 10 0. 5 5 0. 5 5， 例如 80 19 0. 5 0. 5,80 18 1 1,80 17 1. 5 1. 5,80 16 2 2、 80 15 2.5 2. 5,80 14 3 3 和 80 10 5 5。在一個(gè)實(shí)施方案中，制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括DPPC、HSPC、CHOL、DSPE-PEG、 DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、HSPC, CHOL, DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段之間的摩爾比為DP PC HSPC CHOL DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段 =90 110 40 60 20 40 1 6 1 6，例如 95 105 45 55 25 35 2 5 2 5，優(yōu)選 100 50 30 3 3。在一個(gè)實(shí)施方案中，制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括DPPC、MSPC、DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、MSPC、DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段之間的摩爾比為DPPC MSPC D SPE-PEG DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段=80 120 0. 5 20 0.2 5 0. 2 5，優(yōu)選 85 100 1 10 0. 5 2. 5 0. 5 2. 5，更優(yōu)選 86 10 2 2、90 10 2 2、95 :5:2: 2,97. 5 2. 5 2 2、99 1 2 2、 89 10 2.5 2. 5,90 10 2 2、91 10 1. 5 1. 5,92 10 1 1 和 93 10 0. 5 0. 5。在一個(gè)實(shí)施方案中，制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括DPPC、MSPC、DSPG、DSPE-PEG、 DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、MSPC、DSPG、 DSPE-PEG、DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段之間的摩爾比為DP PC MSPC DSPG DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段 =60 100 2 20 2 20 0. 5 5 0. 5 5，優(yōu)選 70 90 6 10 8 12 1 3 1 3，更優(yōu)選 82 8 10 2 2。在一個(gè)實(shí)施方案中，制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括DPPC、MPPC、DSPE-PEG、 DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段，其中 DPPC、MPPC, DSPE-PEG, DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段之間的摩爾比為DPPC MPPC DSPE-PEG DSPE-PEG-CREKA 或 DSPE-PEG-具有 CREKA 核心序列的肽段=70 110 2 20 0.5 5 0. 5 5，優(yōu)選 80 100 8 12 1 3 1 3，更優(yōu)選 90 10 2 2。所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物可以進(jìn)一步制成藥物劑型，例如注射劑、輸液、凍干粉針劑或噴霧劑。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，包括如下步驟以腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-腫瘤歸巢肽或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物為原料，采用薄膜分散法或逆向蒸發(fā)法制備靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述采用薄膜分散法制備靶向熱敏脂質(zhì)體組合物包括下述步驟將DSPE-PEG-腫瘤歸巢肽或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物溶解于有機(jī)溶劑中；除去有機(jī)溶劑，以在容器壁上形成脂質(zhì)薄膜；加入任選含有抗腫瘤藥物的緩沖液，進(jìn)行水化處理，以形成粗脂質(zhì)體混懸液；對(duì)粗脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行超聲粉碎處理；對(duì)超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行純化，從而得到靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述采用薄膜分散法制備靶向熱敏脂質(zhì)體組合物包括下述步驟將DSPE-PEG-腫瘤歸巢肽或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物溶解于有機(jī)溶劑中；除去有機(jī)溶劑，以在容器壁上形成脂質(zhì)薄膜；加入任選含有抗腫瘤藥物的緩沖液，進(jìn)行水化處理，以形成粗脂質(zhì)體混懸液；對(duì)粗脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行超聲粉碎處理；對(duì)超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行純化；將純化后的脂質(zhì)體混懸液與抗腫瘤藥物的溶液進(jìn)行恒溫共孵育，并對(duì)共孵育后的脂質(zhì)體進(jìn)行純化，從而得到靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。其中，所述除去有機(jī)溶劑優(yōu)選是通過(guò)在一定溫度的水浴條件下(例如30-60°C )減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。所述水化處理優(yōu)選是通過(guò)對(duì)緩沖液進(jìn)行渦旋震蕩和/或超聲處理來(lái)實(shí)現(xiàn)的。所述任選含有抗腫瘤藥物的緩沖液優(yōu)選為任選含有抗腫瘤藥物的硫酸銨緩沖液或PH = 4的檸檬酸緩沖液。所述對(duì)粗脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行超聲粉碎處理優(yōu)選是利用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。所述對(duì)超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行純化優(yōu)選是通過(guò)將超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液通過(guò)kphadex G50柱，用磷酸鹽緩沖溶液(PBQ或漢克平衡鹽溶液(HBS) 洗脫并收集脂質(zhì)體部分來(lái)實(shí)現(xiàn)的。所述對(duì)超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體混懸液進(jìn)行純化優(yōu)選是通過(guò)將超聲粉碎處理后的脂質(zhì)體離心并收集上清部分來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
所述恒溫共孵育優(yōu)選是在37度恒溫水浴震蕩器中進(jìn)行的。所述對(duì)共孵育后的脂質(zhì)體進(jìn)行純化優(yōu)選是通過(guò)將共孵育后的脂質(zhì)體再次通過(guò) Sephadex G50柱，除去未包封的抗腫瘤藥物并收集脂質(zhì)體部分來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述采用逆向蒸發(fā)法制備靶向熱敏脂質(zhì)體組合物包括下述步驟將DSPE-PEG-腫瘤歸巢肽或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材和DSPE-PEG溶于有機(jī)溶劑(如氯仿、乙醚等)中，加入待包封的抗腫瘤藥物的水溶液，其中抗腫瘤藥物的水溶液與有機(jī)溶劑的體積比為抗腫瘤藥物的水溶液有機(jī)溶劑= 1 3 1 6 ；對(duì)上述步驟形成的溶液進(jìn)行超聲，直至形成WO型乳劑；減壓蒸發(fā)溶劑至形成凝膠；繼續(xù)減壓蒸發(fā)，從而得到靶向熱敏脂質(zhì)體組合物；或者在混勻器上機(jī)械振蕩，使凝膠塊破碎并轉(zhuǎn)變成液體，減壓蒸發(fā)揮去溶劑，從而得到靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。優(yōu)選的，本發(fā)明提供一種所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，所述熱敏脂質(zhì)體中包含水溶性藥物(例如阿霉素)，所述方法包括如下步驟將腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材和DSPE-PEG置于茄形瓶中，加入有機(jī)溶劑將其溶解，在45°C水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的透明薄膜；向茄形瓶中加入硫酸銨溶液或PH = 4的檸檬酸緩沖液，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈現(xiàn)藍(lán)色乳光；將所得脂質(zhì)體過(guò)kphadex G50柱，用PBS或用pH = 7的HBS，收集脂質(zhì)體部分，得空白脂質(zhì)體；將水溶性抗腫瘤藥物(例如阿霉素)溶于少量蒸餾水中，與空白脂質(zhì)體在37度恒溫水浴震蕩器中共孵育，再次過(guò)kphadex G50柱，除去未包裹的水溶性抗腫瘤藥物(例如阿霉素)，收集脂質(zhì)體部分，即得靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。還優(yōu)選的，本發(fā)明提供一種所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法，所述熱敏脂質(zhì)體中包含脂溶性藥物，所述方法包括如下步驟將腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材和DSPE-PEG置于茄形瓶中，加入有機(jī)溶劑將其溶解，再加入脂溶性抗腫瘤藥物母液，在45°C水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的透明薄膜；向茄形瓶中加入預(yù)熱(45°C)的PBS或pH = 7的HBS溶液，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光；將所得脂質(zhì)體離心，收集上清部分， 即得靶向熱敏脂質(zhì)體組合物。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述惡性腫瘤選自乳腺癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌和黑色素瘤。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和/或能夠產(chǎn)生的效果(特別是預(yù)料不到的技術(shù)效果)在于將熱敏脂質(zhì)體在局部加熱條件下大量釋放所載藥物所產(chǎn)生的物理化學(xué)靶向與腫瘤歸巢肽CREKA的主動(dòng)靶向相結(jié)合，起到協(xié)同抗腫瘤作用，對(duì)腫瘤的殺傷力更強(qiáng)，對(duì)正常組織的毒副作用更低。


圖1為阿霉素?cái)z取(流式細(xì)胞儀)實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖2為阿霉素?cái)z取(激光共聚焦)實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖3為藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1腫瘤歸巢肽CREKA與DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的連接稱取CREKA(1. lmg)、DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺(5mg)，即 CREKA 與 DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的摩爾比為2 1，溶解于:3ml PBS中(即反應(yīng)物濃度為^ig/ ml)，調(diào)節(jié)pH為7，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫?cái)嚢鐼小時(shí)。取上述反應(yīng)所得物料置于截留分子量為2000的透析袋中透析48小時(shí)，經(jīng)冷凍干燥得到DSPE-PEG2000-CREKA。實(shí)施例2腫瘤歸巢肽CREKA與DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的連接稱取CREKA(1. lmg)、DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺(IOmg)，即 CREKA 與 DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的摩爾比為1 1，溶解于5. 55ml PBS中(即反應(yīng)物濃度為^ig/ ml)，調(diào)節(jié)pH為7，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫?cái)嚢鐼小時(shí)。取上述反應(yīng)所得物料置于截留分子量為2000的透析袋中透析48小時(shí)，經(jīng)冷凍干燥得到DSPE-PEG2000-CREKA。實(shí)施例3腫瘤歸巢肽CREKA與DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的連接稱取CREKA(1. lmg)、DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺(5mg)，即 CREKA 與 DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的摩爾比為2 1，溶解于6. Iml PBS中(即反應(yīng)物濃度為Img/ ml)，調(diào)節(jié)pH為7，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫?cái)嚢鐼小時(shí)。取上述反應(yīng)所得物料置于截留分子量為2000的透析袋中透析48小時(shí)，經(jīng)冷凍干燥得到DSPE-PEG2000-CREKA。實(shí)施例4腫瘤歸巢肽CREKA與DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的連接稱取CREKA(1. lmg)、DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺(5mg)，即 CREKA 與 DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的摩爾比為2 1，溶解于^il PBS中(即反應(yīng)物濃度為!Bmg/ ml)，調(diào)節(jié)pH為7，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫?cái)嚢鐼小時(shí)。取上述反應(yīng)所得物料置于截留分子量為2000的透析袋中透析48小時(shí)，經(jīng)冷凍干燥得到DSPE-PEG2000-CREKA。實(shí)施例5腫瘤歸巢肽CREKA與DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的連接稱取CREKA(1. lmg)、DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺(5mg)，即 CREKA 與 DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的摩爾比為2 1，溶解于1.22ml PBS中(即反應(yīng)物濃度為5mg/ ml)，調(diào)節(jié)pH為7，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫?cái)嚢鐼小時(shí)。取上述反應(yīng)所得物料置于截留分子量為2000的透析袋中透析48小時(shí)，經(jīng)冷凍干燥得到DSPE-PEG2000-CREKA。實(shí)施例6腫瘤歸巢肽CREKA與DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的連接
稱取CREKA(1. lmg)、DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺(5mg)，即 CREKA 與 DSPE-PEG2000-馬來(lái)酰亞胺的摩爾比為2 1，溶解于:3ml DMF中(即反應(yīng)物濃度為^ig/ ml)，用三乙胺調(diào)節(jié)pH為7，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫?cái)嚢鐼小時(shí)。取上述反應(yīng)所得物料置于截留分子量為2000的透析袋中透析48小時(shí)，經(jīng)冷凍干燥得到DSPE-PEG2000-CREKA。實(shí)施例7CREKA靶向的阿霉素?zé)崦糁|(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC101.8mg
DSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE_PEG_CREKA，置于茄形瓶中，加入異丙醇溶解， 45度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入pH = 4的檸檬酸緩沖液，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。將所得脂質(zhì)體過(guò)kphadex G50柱，用HBS(pH= 7)洗脫，收集脂質(zhì)體部分， 得空白脂質(zhì)體，向空白脂質(zhì)體中加入2mg/ml的阿霉素母液0.5ml，使藥脂比為1 20m/m， 37度恒溫水浴震蕩器中共孵育，再次過(guò)kphadex G50柱，除去未包裹的游離阿霉素，收集脂質(zhì)體部分，即得最終阿霉素靶向脂質(zhì)體。實(shí)施例8CREKA靶向的阿霉素?zé)崦糁|(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC101.8mg
DSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE-PEG-CREKA，置于茄形瓶中，加入二氯甲烷溶解，45度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入pH = 4的檸檬酸緩沖液，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。將所得脂質(zhì)體a^phadex G50柱，用HBS(pH= 7)洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得空白脂質(zhì)體，向空白脂質(zhì)體中加入2mg/ml的阿霉素母液0. 5ml，使藥脂比為1 20m/ m, 37度恒溫水浴震蕩器中共孵育，再次過(guò)kphadex G50柱，除去未包裹的游離阿霉素，收集脂質(zhì)體部分，即得最終阿霉素靶向脂質(zhì)體。實(shí)施例9CREKA靶向的阿霉素?zé)崦糁|(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC10l.Bmg
DSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE_PEG_CREKA，置于茄形瓶中，加入氯仿溶解，45 度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入PH = 4的檸檬酸緩沖液， 渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。將所得脂質(zhì)體過(guò)kphadex G50柱，用HBS(pH = 7)洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得空白脂質(zhì)體，向空白脂質(zhì)體中加入2mg/ml的阿霉素母液0. 5ml，使藥脂比為1 20m/m，37度恒溫水浴震蕩器中共孵育，再次a^phadex G50柱，除去未包裹的游離阿霉素，收集脂質(zhì)體部分，即得最終阿霉素靶向脂質(zhì)體。實(shí)施例10CREKA靶向的阿霉素?zé)崦糁|(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC101.8mg
DSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE_PEG_CREKA，置于茄形瓶中，加入異丙醇溶解， 45度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入pH = 4的檸檬酸緩沖液，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。將所得脂質(zhì)體過(guò)kphadex G50柱，用HBS(pH= 7)洗脫，收集脂質(zhì)體部分， 得空白脂質(zhì)體，向空白脂質(zhì)體中加A^iig/ml的阿霉素母液lml，使藥脂比為1 10m/m，37 度恒溫水浴震蕩器中共孵育，再次a^phadex G50柱，除去未包裹的游離阿霉素，收集脂質(zhì)體部分，即得最終阿霉素靶向脂質(zhì)體。實(shí)施例11CREKA靶向的阿霉素?zé)崦糁|(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC101.8mgDSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE_PEG_CREKA，置于茄形瓶中，加入異丙醇溶解， 45度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入pH = 4的檸檬酸緩沖液，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。將所得脂質(zhì)體過(guò)kphadex G50柱，用HBS(pH= 7)洗脫，收集脂質(zhì)體部分， 得空白脂質(zhì)體，向空白脂質(zhì)體中加入2mg/ml的阿霉素母液0. 25ml，使藥脂比為1 40m/m， 37度恒溫水浴震蕩器中共孵育，再次過(guò)kphadex G50柱，除去未包裹的游離阿霉素，收集脂質(zhì)體部分，即得最終阿霉素靶向脂質(zhì)體。實(shí)施例12CREKA靶向的阿霉素?zé)崦糁|(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC101.8mg
DSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE_PEG_CREKA，置于茄形瓶中，加入異丙醇溶解， 45度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入硫酸銨溶液(123mM， pH5. 4)，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。將所得脂質(zhì)體過(guò)kphadex G50柱，用PBS洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得空白脂質(zhì)體，向空白脂質(zhì)體中加入2mg/ml的阿霉素母液0.5ml，使藥脂比為1 20m/m，37度恒溫水浴震蕩器中共孵育，再次a^phadex G50柱，除去未包裹的游離阿霉素，收集脂質(zhì)體部分，即得最終阿霉素靶向脂質(zhì)體。實(shí)施例13CREKA靶向的紫杉醇熱敏脂質(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC101.8mg
DSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE_PEG_CREKA，置于茄形瓶中，加入氯仿溶解，再加入ang/ml乙腈溶解的紫杉醇母液0. 5ml，使藥脂比為1 20m/m，45度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入anl 45度預(yù)熱的5%葡萄糖溶液，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。 將所得脂質(zhì)體離心，12000rpm, 5min,收集上清部分，即得最終紫杉醇靶向熱敏脂質(zhì)體。實(shí)施例14CREKA靶向的紫杉醇熱敏脂質(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC10I-Bmg
DSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE_PEG_CREKA，置于茄形瓶中，加入氯仿溶解，再加入ang/ml乙腈溶解的紫杉醇母液0.75ml，使藥脂比為1 30m/m，45度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入anl 45度預(yù)熱的5%葡萄糖溶液，渦旋震蕩，超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。將所得脂質(zhì)體離心，12000rpm，&iiin，收集上清部分，即得最終紫杉醇靶向熱敏脂質(zhì)體。實(shí)施例15CREKA靶向的紫杉醇熱敏脂質(zhì)體的構(gòu)建
原料摩爾比質(zhì)量或體積
DPPC8615.45mg
MSPC101.8mg
DSPE-PEG21.207mg
DSPE-PEG-CREKA21.54mg稱量DPPC、MSPC, DSPE-PEG和DSPE_PEG_CREKA，置于茄形瓶中，加入氯仿溶解，再加入ang/ml的乙腈溶解的紫杉醇母液lml，使藥脂比為1 40m/m，45度水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，成均勻的透明薄膜。向茄形瓶中加入anl 45度預(yù)熱的5%葡萄糖溶液，渦旋震蕩， 超聲，至脂膜完全脫落溶解，使用探頭超聲的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)將樣品超聲至呈藍(lán)色乳光。 將所得脂質(zhì)體離心，12000rpm, 5min,收集上清部分，即得最終紫杉醇靶向熱敏脂質(zhì)體。實(shí)施例16CREKA靶向的多西紫杉醇熱敏脂質(zhì)體的構(gòu)建
權(quán)利要求
1.一種靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述組合物包括表面修飾有腫瘤歸巢肽 CREKA或具有CREKA核心序列的肽段的熱敏脂質(zhì)體，所述熱敏脂質(zhì)體中包含有抗腫瘤藥物。
2.如權(quán)利要求1所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述抗腫瘤藥物選自阿霉素、表阿霉素、柔紅霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、吡柔比星、阿柔比星、順鉬、卡鉬、奧沙利鉬和甲氨蝶呤中的一種或多種。
3.如權(quán)利要求2所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中抗腫瘤藥物的藥脂比(藥物與脂材的質(zhì)量比)為 1 10w/w 1 50w/w，例如 1 10w/wU 20w/w、l 30w/w、l 40w/ w、l 50w/wo
4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中制成所述熱敏脂質(zhì)體的原料包括腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段、熱敏脂質(zhì)體膜材、DSPE-PEG和抗腫瘤藥物。
5.如權(quán)利要求4所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物 DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段是通過(guò)將腫瘤歸巢肽CREKA或具有CREKA核心序列的肽段與DSPE-PEG-馬來(lái)酰亞胺溶解于液體介質(zhì)中，調(diào)節(jié)液體介質(zhì)的pH 值至6. 0-8. O范圍內(nèi)，持續(xù)攪拌反應(yīng)，純化反應(yīng)所得物，經(jīng)冷凍干燥得到的腫瘤歸巢肽導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-CREKA或DSPE-PEG-具有CREKA核心序列的肽段。
6.如權(quán)利要求5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中調(diào)節(jié)液體介質(zhì)的pH值至6.5-7. 5 范圍內(nèi)，優(yōu)選調(diào)節(jié)PH值至6. 8-7.2的范圍內(nèi)，更優(yōu)選調(diào)節(jié)pH值至6. 9-7. 1的范圍，最優(yōu)選調(diào)節(jié)至PH值為7.0。
7.如權(quán)利要求5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述液體介質(zhì)為可將腫瘤歸巢肽 CREKA與DSPE-PEG-馬來(lái)酰亞胺溶解于其中的任意種類的液體介質(zhì)，例如水性溶劑和有機(jī)溶劑。
8.如權(quán)利要求5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述反應(yīng)是在惰性氣體的保護(hù)下進(jìn)行的。
9.如權(quán)利要求5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述反應(yīng)是在環(huán)境溫度下進(jìn)行的，優(yōu)選在15°C -35°C的溫度進(jìn)行，更優(yōu)選在20°C -30°C的溫度進(jìn)行，最優(yōu)選在25°C的溫度進(jìn)行。
10.如權(quán)利要求5所述的靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其中所述攪拌的時(shí)間為M小時(shí)以上。
全文摘要
本發(fā)明屬于靶向給藥系統(tǒng)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向熱敏脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述組合物包括表面修飾有腫瘤歸巢肽CREKA或具有CREKA核心序列的肽段的熱敏脂質(zhì)體，所述熱敏脂質(zhì)體中包含有抗腫瘤藥物。本發(fā)明還涉及所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物的制備方法和所述靶向熱敏脂質(zhì)體組合物在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的用途。本發(fā)明的靶向熱敏脂質(zhì)體具有很好的靶向腫瘤的作用及抗腫瘤效果。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102552144SQ20121000996
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月13日
發(fā)明者張強(qiáng), 張烜, 王欣 申請(qǐng)人:北京大學(xué)