通過抑制增殖性激酶cdk4和cdk6保護(hù)腎組織免于局部缺血的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開的主題涉及保護(hù)細(xì)胞和或組織免受由于局部缺血的損傷的方法和組合物。具體地，本發(fā)明公開的主題涉及向已暴露于局部缺血或有局部缺血的風(fēng)險的個體給藥的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6(CDK4/6)抑制劑的保護(hù)作用。
【專利說明】通過抑制增殖性激酶CDK4和CDK6保護(hù)腎組織免于局部缺血
[0001]優(yōu)先權(quán)聲明
[0002]本申請要求2010年11月17日提交的美國臨時專利申請系列號61/458，140的權(quán)益，其公開整體援引加入本文。
[0003]政府利益.[0004]本發(fā)明公開的主題是在美國國立衛(wèi)生研究院授予的基金號R43A1084284的美國政府支持下完成的。因此，美國政府享有本發(fā)明公開的主題的某些權(quán)利。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0005]本發(fā)明公開的主題涉及保護(hù)健康細(xì)胞免受局部缺血損傷的方法和組合物。例如，本發(fā)明公開的主題涉及使用細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6(CDK4/6)抑制劑以誘導(dǎo)哺乳動物個體內(nèi)某些組織和/或細(xì)胞如腎中的藥理靜止，從而增強(qiáng)該個體的臨床結(jié)果。
[0006]簡寫
[0007]%=百分比
[0008]μ g=微克
[0009]μ L=微升
[0010]μ M=微摩爾
[0011 ]BrdU=5-溴 _2_ 脫氧尿苷
[0012]CAT=計(jì)算機(jī)化軸向斷層掃描
[0013]⑶K=細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶
[0014]⑶K4/6=細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4和/或細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6
[0015]CT=計(jì)算機(jī)斷層掃描
[0016]dL=l/10 升
[0017]DMSO= 二甲基亞砜
[0018]g=克
[0019]h=小時
[0020]IC50=50% 抑制濃度
[0021]1.p.=腹腔內(nèi)
[0022]IRI=局部缺血再灌注損傷
[0023]kg=千克
[0024]mg=毫克
[0025]nM=納摩爾
[0026]PD=6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基_2_ (5-哌嗪_1_基-吡啶_2_基氨基)_8H_吡啶并_[2，3-d]-嘧啶-7-酮(也稱為PD0332991)
[0027]RLU=相對光單位
[0028]SEM=平均標(biāo)準(zhǔn)誤差【背景技術(shù)】
[0029]由于不存在證實(shí)保護(hù)腎免于缺血性損傷的療法，所以管理目前包括支持患者直至腎能夠自愈的時間。管理策略包括使用利尿劑以調(diào)節(jié)體積狀態(tài)、磷結(jié)合劑以及在需要時透析。值得注意的是，這些療法均不改變腎修復(fù)過程的自然歷史，并且一些證據(jù)表明利尿劑和透析可能甚至使腎損傷惡化。因此，對實(shí)用方法有持續(xù)需要以保護(hù)有計(jì)劃發(fā)生、有風(fēng)險發(fā)生或已發(fā)生局部缺血和/或其相關(guān)事件的個體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0030]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明公開的主題提供一種在細(xì)胞或組織暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件之前或之后緩解需要治療的個體中的所述細(xì)胞或組織中源自局部缺血和/或相關(guān)事件的損傷的方法，其中所述方法包括向所述個體給藥藥學(xué)有效量的抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4 (CDK4)和/或細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)的化合物，并且其中所述細(xì)胞或組織的特征在于損傷后的增殖是CDK4/6依賴性的。
[0031]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明公開的主題提供一種在腎細(xì)胞或腎組織暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件之前或之后緩解需要治療的個體中的所述細(xì)胞或腎組織中源自局部缺血和/或相關(guān)事件的損傷的方法，其中所述方法包括向所述個體給藥藥學(xué)有效量的抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)的化合物。
[0032]在一些實(shí)施方案中，在個體暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件之前、在個體暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件的同時、或者在個體暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件之后向個體給藥抑制CDK4和/或CDK6的化合物。在一些實(shí)施方案中，在個體暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件之后約24小時至約48小時之間向個體給藥抑制CDK4和/或CDK6的化合物。
[0033]在一些實(shí)施方案中，抑制⑶K4和/或⑶K6的化合物為選擇性⑶K4和/或⑶K6抑制劑。在一些實(shí)施方案中，所述選`擇性CDK4/6抑制劑是除CDK4和/或CDK6以外的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的不良抑制劑。
[0034]在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是心臟手術(shù)，或者與低血壓性發(fā)作相關(guān)的其他手術(shù)。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是給藥用于CT掃描、幽門成形術(shù)(pylorogram)和冠狀動脈造影術(shù)(artiography)的放射性造影劑。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是與血容量減少(例如，由于失血)和/或低血壓時期相關(guān)的創(chuàng)傷。
[0035]在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是給藥減少腎血流的藥物或物質(zhì)，如阿司匹林、布洛芬、他克莫司和/或環(huán)胞素。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是由動脈栓塞或者原位動脈或靜脈血栓形成引起的急性組織局部缺血或梗死。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是腸扭結(jié)的扭曲或者器官血流的其他短暫解剖學(xué)中斷。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是在移植之前收獲、轉(zhuǎn)運(yùn)和/或冷藏腎同種異體移植物。
[0036]本發(fā)明公開的主題的目的是提供通過向個體給藥有效量的CDK4/6抑制劑化合物來保護(hù)所述個體中的健康細(xì)胞免受局部缺血的影響的方法。
[0037]本發(fā)明公開的主題的目的已在上文中陳述，并且其全部或部分通過本發(fā)明公開的主題來實(shí)現(xiàn)，當(dāng)連同下文最佳描述的附圖進(jìn)行描述時，其他目的會變得明顯。【專利附圖】

【附圖說明】
[0038]圖1A為示出CDK4/6抑制誘導(dǎo)原代人腎近端小管上皮細(xì)胞中的G1停滯的一組直方圖。用不同濃度(0nM、10nM、30nM、100nM、300nM或ΙμΜ)的6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2- (5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8Η-吡啶并-[2，3-d]嘧啶-7-酮(PD0332991)處理16小時的原代人腎近端小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期分析的代表性直方圖。將細(xì)胞收獲、固定、染色并通過流式細(xì)胞術(shù)分析。利用Verity (Verity SoftwareHouse, Topsham, Maine, United States of America)的 Mod-Fit? 軟件擬合數(shù)據(jù)。漸增濃度的⑶K4/6抑制劑產(chǎn)生“完全的” Gl-停滯而沒有細(xì)胞毒性的跡象。
[0039]圖1B為示出CDK4/6抑制誘導(dǎo)原代人腎近端小管上皮細(xì)胞中的G1停滯的線圖。用不同濃度(0nM、10nM、30nM、100nM、300nM或ΙμΜ)的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并-[2，3-d]嘧啶~7~酮(PD0332991)處理16小時的原代人腎近端小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期分析。將細(xì)胞收獲、固定、染色并通過流式細(xì)胞術(shù)分析。利用 Verity (Verity Software House, Topsham, Maine, United Statesof America)的Mod-Fit?軟件擬合數(shù)據(jù)。Gl (菱形)、G2/M(正方形)和S(三角形)中的細(xì)胞的相應(yīng)％在圖上示出。
[0040]圖2為示出CDK4/6抑制阻斷原代人腎近端小管上皮細(xì)胞的增殖的條形圖。將細(xì)胞用不同濃度(0nM、10nM、30nM、100nM、300nM或ΙμΜ)的6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8Η-吡啶并-[2，3-d]嘧啶_7_酮(PD0332991)處理72 小時。溫育之后，利用 CellTitei'-Glo? (Promega, Madison, Wisconsin, United States
of America)定量細(xì)胞增殖。數(shù)據(jù)代表4個重復(fù)的平均值(相對光單位，RLU)+/-標(biāo)準(zhǔn)差。
[0041]圖3A為示意圖，其示出CDK4/6抑制劑單一劑量給藥后局部缺血再灌注損傷之后5-溴-2-脫氧尿苷(BrdU)摻入上皮細(xì)胞的研究的劑量給藥計(jì)劃。局部缺血再灌注損傷之前將小鼠用6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2- (5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并-[2，3-d]嘧啶-7-酮(PD0332991;150mg/kg)或媒介物(乳酸鈉緩沖液)通過口服管飼法處理I小時。損傷后21小時將BrdU(100mg/kg)通過1.p.注射給藥。BrdU注射后3小時將小鼠處死，并且定量BrdU摻入腎上皮細(xì)胞。
[0042]圖3B為示意圖，其示出2個劑量的⑶K4/6抑制劑后局部缺血再灌注損傷之后5-溴-2-脫氧尿苷(BrdU)摻入上皮細(xì)胞的研究的劑量給藥計(jì)劃。局部缺血再灌注損傷之前將小鼠用6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2- (5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并-[2，3-d]嘧啶-7-酮(PD0332991;150mg/kg)或媒介物(乳酸鈉緩沖液)通過口服管飼法處理I小時。損傷后21小時將BrdU(100mg/kg)通過1.p.注射給藥。另外2小時后，將小鼠用PD0332991或媒介物第二次處理。第二次劑量給藥后22小時，小鼠接受BrdU的第二次注射。第二次注射BrdU后3小時，將小鼠處死，并且定量BrdU摻入腎上皮細(xì)胞。
[0043]圖4A為示出局部缺血性損傷后24小時用⑶K4/6抑制劑處理防止上皮細(xì)胞進(jìn)入S-期的條形圖。圖的右邊示出來自局部缺血再灌注損傷(IRI)前I小時根據(jù)圖3A所示的劑量給藥計(jì)劃用媒介物(淺色陰影柱)處理的5只小鼠和用6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并-[2，3-d]嘧啶~7~酮(PD0332991 ；深色陰影柱)處理一次的6只小鼠的5-溴-2-脫氧尿苷(BrdU)陽性細(xì)胞的平均數(shù)據(jù)。雙向AN0VA, 001 (Bonferroni’ s事后檢驗(yàn))。圖的左邊示出用媒介物(淺色陰影柱)或Η)0332991(深色陰影柱)處理但不進(jìn)行局部缺血再灌注損傷(CLK)的小鼠的數(shù)據(jù)。
[0044]圖4B為示出局部缺血性損傷后48小時用⑶K4/6抑制劑處理防止上皮細(xì)胞進(jìn)入S-期的條形圖。圖的右邊示出來自進(jìn)行局部缺血再灌注損傷(IRI)并根據(jù)圖3B所示的劑量給藥計(jì)劃用媒介物(淺色陰影柱，n=5)或用6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并-[2，3-d]嘧啶-7-酮(PD0332991 ;深色陰影柱，n=6)處理兩次的小鼠的5-溴-2-脫氧尿苷(BrdU)陽性細(xì)胞的平均數(shù)據(jù)。雙向ANOVA, 001 (BonferroniJ s事后檢驗(yàn))。圖的左邊示出根據(jù)劑量給藥計(jì)劃用媒介物(淺色陰影柱)或Η)0332991(深色陰影柱)處理，僅不進(jìn)行局部缺血再灌注損傷(CLK)的小鼠的數(shù)據(jù)。
[0045]圖5為示出用6-乙酰基-8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶_2_基氨基)-8!1-吡啶并-[2，3-(1]嘧啶-7-酮(PD0332991)處理在雙側(cè)局部缺血再灌注損傷后24小時顯著降低血清肌酸酐水平。手術(shù)前7天采集基線血清肌酸酐水平，并且媒介物處理組與藥物處理組之間沒有可察覺的基線差異(分別為.050mg/dL±0.027和0.044mg/dL±0.044)。手術(shù)后24小時，媒介物組中的血清肌酸酐為2.27mg/dL±0.0732，而藥物處理組中的血清肌酸酐為1.74mg/dL±0.143。在媒介物組中N=8，而在藥物處理組中N=9。通過雙向ANOVA用Bonferroni事后檢驗(yàn)分析的001。
【具體實(shí)施方式】
[0046]參考所附實(shí)施 例(其中示出代表性實(shí)施方案)，現(xiàn)在在下文中更充分地描述本發(fā)明公開的主題。但是，本發(fā)明公開的主題可以以不同的形式體現(xiàn)，并且不應(yīng)當(dāng)解釋為受限于本文所示的實(shí)施方案。更確切地，提供這些實(shí)施方案以使本公開充分且完整，并且這些實(shí)施方案會向本領(lǐng)域技術(shù)人員充分傳達(dá)本發(fā)明的實(shí)施方案的范圍。
[0047]除非另外限定，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所述主題所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員的通常理解相同的含義。本文提及的所有出版物、專利申請、專利及其他參考文獻(xiàn)整體援引加入本文。
[0048]在整個說明書和權(quán)利要求中，給定的化學(xué)式或化學(xué)名應(yīng)當(dāng)包括所有活性的旋光異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，以及外消旋混合物(若存在此類異構(gòu)體和混合物)。
[0049]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明公開的主題允許保護(hù)腎免受局部缺血和誘發(fā)局部缺血的腎毒素的急性毒性作用。在腎損傷之前、期間或之后立即給藥可口服和無毒的小分子激酶抑制劑以在較晚的時間點(diǎn)增強(qiáng)腎再生。
[0050]據(jù)證實(shí)對腎損傷應(yīng)答誘導(dǎo)腎增殖。如本文第一次公開的，看來局部缺血后的腎增殖依賴于⑶K4/6的激酶活性。例如，如圖4A和4B所示，通過⑶K4/6抑制劑的給藥可以減少局部缺血后的腎細(xì)胞增殖。此外，在腎損傷附近的一段時間中，某些循環(huán)腎毒素可以以細(xì)胞周期依賴性方式進(jìn)一步增加腎損傷。因此，通過藥理使用CDK4/6抑制劑將腎上皮細(xì)胞短暫維持在Gl (藥理靜止或PQ)可以在清除循環(huán)腎毒素后允許增強(qiáng)的腎修復(fù)。參見圖5。在局部缺血性損傷時短暫PQ會增強(qiáng)隨后的腎恢復(fù)。因此，本發(fā)明公開的主題利用這樣的發(fā)現(xiàn)，增殖的細(xì)胞對外毒素高度敏感，因此短暫PQ是治療性的。本發(fā)明公開的主題可以包括在腎局部缺血性損傷之前、同時或之后(如20小時內(nèi))給藥(例如，口服或IV)CDK4/6抑制劑(例如，選擇性CDK4/6抑制劑)?？梢跃S持CDK4/6抑制劑的治療水平直至誘發(fā)腎損傷的條件已逆轉(zhuǎn)(一般24-48小時)。然后可以撤走CDK4/6抑制劑(利用不被腎完全清除的化合物)，并且腎再生性增殖可以繼而發(fā)生。例如，可以在與低血壓相關(guān)的手術(shù)(例如心臟搭橋手術(shù))之前或者在轉(zhuǎn)運(yùn)腎同種異體移植物(例如腎移植中的冷-局部缺血)之前或者在使用包含碘的放射性造影劑(其誘發(fā)腎局部缺血)之前誘導(dǎo)PQ。這樣的損傷后24-48小時在腎毒素已清除和/或全身血壓已恢復(fù)時PQ可以逆轉(zhuǎn)。
[0051]因此， 本發(fā)明公開的主題部分涉及這樣的觀察，藥理靜止提供保護(hù)防止形成腎損傷，特別是腎局部缺血。例如，腎局部缺血可以由任何原因(例如手術(shù)或創(chuàng)傷性休克期間)的低血壓所致，并且還是幾種腎毒性藥物(例如但不限于用于CAT掃描的包含碘的造影劑)的損傷機(jī)制。
[0052]1.定義
[0053]雖然我們認(rèn)為本領(lǐng)域技術(shù)人員完全理解以下術(shù)語，但是為了便于說明本發(fā)明公開的主題解釋以下定義。
[0054]遵循長期的專利法常規(guī)，術(shù)語“一個(a) ”、“一個(an) ”和“這個(the) ”在本申請包括權(quán)利要求中使用時是指“一個(種)或多個(種)”。因此，例如，提及“化合物”或“細(xì)胞”包括多個這樣的化合物或細(xì)胞等。
[0055]與“包括”、“含有”或“特征是”同義的術(shù)語“包含”是包容性或開放性的，并且不排除額外的未列舉的元素或方法步驟。“包含”是用于權(quán)利要求語言的專門術(shù)語，其表示所列舉的元素是必不可少的，但是可以加入其他元素，并且仍然形成權(quán)利要求的范圍內(nèi)的構(gòu)成。
[0056]在本文中使用時，短語“由…組成”排除權(quán)利要求中未指明的任何元素、步驟或成分。當(dāng)短語“由…組成”出現(xiàn)在權(quán)利要求的主體中而不是緊接在前序之后時，其僅限制該主體所列出的元素；其他元素并未從整個權(quán)利要求排除。
[0057]在本文中使用時，短語“基本上由…組成”將權(quán)利要求的范圍限制在指定的物質(zhì)或步驟，加上不會實(shí)質(zhì)上影響所要求保護(hù)的主題的基本和新特征的物質(zhì)或步驟。
[0058]關(guān)于術(shù)語“包含”、“由…組成”和“基本上由…組成”，當(dāng)本文中使用這三個術(shù)語中的一個時，本發(fā)明公開和要求保護(hù)的主題可以包括另外兩個術(shù)語的使用。
[0059]術(shù)語“和/或”，當(dāng)用于描述兩種項(xiàng)目或情況，例如CDK4和/或CDK6時，是指兩種項(xiàng)目或情況均存在或均適用的情況，以及僅所述項(xiàng)目或情況之一存在或適用的情況。因此，⑶K4和/或⑶K6抑制劑可以是抑制⑶K4和⑶K6的化合物、僅抑制⑶K4的化合物或者僅抑制⑶K6的化合物。
[0060]“健康細(xì)胞”或“正常細(xì)胞”是指個體中的不表現(xiàn)出疾病(例如但不限于癌癥或其他增殖性疾病)的特征、癥狀和/或標(biāo)志的任何細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述健康細(xì)胞是腎細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述健康細(xì)胞是組織如腎中的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞或組織的特征在于損傷后的增殖是⑶K4/6依賴性的，并且在一些實(shí)施方案中，所述損傷是局部缺血相關(guān)的。
[0061]“局部缺血”可以指組織或器官供血不足，這導(dǎo)致所述組織或器官不能滿足代謝的需要。向局部缺血性器官或組織再灌注(恢復(fù)血流)可以導(dǎo)致產(chǎn)生過量的活性氧物質(zhì)(ROS)和活性氮物質(zhì)(RNS)，因而引起氧化應(yīng)激，這導(dǎo)致一系列的事件如線粒體氧化磷酸化的改變，ATP的減少(這還在局部缺血期間發(fā)生并作為局部缺血的結(jié)果)，胞內(nèi)鈣的增加以及蛋白激酶、磷酸酶、蛋白酶、脂肪酶和核酸酶的激活，導(dǎo)致細(xì)胞功能/完整性的喪失。[0062]局部缺血再灌注損傷(IRI)指在經(jīng)歷局部缺血(例如，當(dāng)器官在移植或自體移植中通過手術(shù)切除和重新連接時)的組織中血液循環(huán)重新開始后發(fā)生的損傷。通過額外的實(shí)例而不是限制的方式，這樣的損傷還在血液循環(huán)為了器官移植中斷后重新開始時發(fā)生；在心肌梗死后用經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈成形術(shù)(PTCA)、支架或搭橋處理冠狀動脈后發(fā)生；以及在向中風(fēng)患者給藥溶栓劑后發(fā)生。另一實(shí)例是在為了心臟手術(shù)暫時中斷心臟血流時，通常通過心臟停跳溶液的同時給藥。另一實(shí)例是當(dāng)在四肢上充氣止血帶時由整形外科醫(yī)生在無血區(qū)域中為了手術(shù)中斷四肢的血流。這樣的損傷可以在許多組織中發(fā)生，例如但不限于腎、腸、心臟、肝、腦、甲狀腺、皮膚、腸粘膜、聽覺系統(tǒng)、肺、膀胱、卵巢、子宮、睪丸、腎上腺、膽囊、胰、胰島、胃、血管或肌肉(例如，骨骼肌、平滑肌或心肌)組織以及它們的組合。在一些實(shí)施方案中，所述損傷在心臟、肺、腎組織或它們的組合中發(fā)生。在一些實(shí)施方案中，患有所述損傷的細(xì)胞或組織的特征在于損傷后的增殖是CDK4/6依賴性的。
[0063]在一些實(shí)施方案中，損傷發(fā)生在腎細(xì)胞或組織中。因此，在一些實(shí)施方案中，通過本發(fā)明公開的主題治療(例如，減輕或預(yù)防)的IRI可以包括腎局部缺血再灌注損傷。在一些實(shí)施方案中，腎細(xì)胞或組織的特征在于損傷后的增殖是⑶K4/6依賴性的。
[0064]“有風(fēng)險暴露于局部缺血”是指預(yù)定在將來暴露于局部缺血的個體，或者有機(jī)會在將來無意地暴露于局部缺血的個體。
[0065]“化合物的藥學(xué)有效量”是指在個體中有效提供有益結(jié)果的量。在一些實(shí)施方案中，有效量是暫時(例如，幾小時或幾天)誘導(dǎo)個體中的細(xì)胞的靜止?fàn)顟B(tài)所需的量。
[0066]在一些實(shí)施方案中，抑制⑶K4和/或⑶K6的化合物沒有脫靶(off-target)效應(yīng)，例如但不限于長期毒性、抗氧化效應(yīng)和/或雌激素效應(yīng)?！皼]有”可以指CDK4/6抑制劑化合物不具有不期望的或脫靶效應(yīng)，特別是當(dāng)其在體內(nèi)使用或者通過基于細(xì)胞的測定進(jìn)行評價時。
[0067]在一些實(shí)施方案 中，“沒有”可以指選擇性CDK4/6抑制劑不具有脫靶效應(yīng)，例如但不限于長期毒性、抗氧化效應(yīng)、雌激素效應(yīng)、酪氨酸激酶抑制效應(yīng)、對除CDK4/6之外的CDK的抑制效應(yīng)；和/或非CDK4/6依賴性細(xì)胞中的細(xì)胞周期停滯。
[0068]“基本上沒有”脫靶效應(yīng)的選擇性⑶K4/6抑制劑是這樣的⑶K4/6抑制劑，其可以具有一些較小(minor)的脫靶效應(yīng)，所述脫靶效應(yīng)不干擾所述抑制劑提供對抗CDK4/6依賴性細(xì)胞中的細(xì)胞毒性化合物的保護(hù)作用的能力。例如，“基本上沒有”脫靶效應(yīng)的⑶K4/6抑制劑可以對其他⑶K具有一些較小的抑制效應(yīng)(例如，對⑶Kl或⑶K2的IC50>0.5 μ Μ; >1.0 μ M或者>5.0 μ Μ),只要所述抑制劑提供⑶Κ4/6依賴性細(xì)胞中的選擇性Gl停滯。
[0069]“減輕”或“預(yù)防”或其語法變體分別是指，減少效應(yīng)或者完全防止效應(yīng)發(fā)生?！熬徑狻笨梢灾笢p輕和/或預(yù)防。
[0070]“藥理性靜止”是指細(xì)胞周期的暫時停滯。
[0071]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明公開的主題中所治療的個體期望是人個體，但是應(yīng)當(dāng)理解本文所述的方法對所有脊椎動物物種(例如，哺乳動物、鳥類等)有效，術(shù)語“個體”旨在包括所有脊椎動物物種。
[0072]更具體地，本文提供哺乳動物的治療，例如，人，以及由于瀕危而具有重要性的那些哺乳動物(例如西伯利亞虎)、對人類具有經(jīng)濟(jì)重要性(為了供人食用而在農(nóng)場飼養(yǎng)的動物)和/或社會重要性(作為寵物飼養(yǎng)或在動物園中飼養(yǎng)的動物)的那些哺乳動物，例如，除了人之外的食肉動物(例如貓和狗)、豬類(豬、肉豬和野豬)、反芻動物(例如牛、公牛、綿羊、長頸鹿、鹿、山羊、野牛和駱駝)和馬。因此，本文所述的方法的實(shí)施方案包括家畜的治療，包括但不限于家養(yǎng)豬(豬和肉豬)、反芻動物、馬等。
[0073]在本文中使用時，術(shù)語“烷基”是指C1J(含端值)、線性的(即，“直鏈的”)、支鏈的、或環(huán)狀的、飽和的、或者至少部分不飽和的以及在一些情況中完全不飽和的(即，烯基和炔基)經(jīng)鏈，包括例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戍基、己基、羊基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、戍烯基、己烯基、羊烯基、丁二烯基、丙炔基、丁炔基、戍炔基、己塊基、庚炔基和丙二烯基基團(tuán)。“支鏈的”是指其中低級烷基基團(tuán)例如甲基、乙基或丙基與直鏈烷基鏈相連的烷基基團(tuán)?！暗图壨榛笔侵负?-約8個碳原子，例如1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子的烷基基團(tuán)(即Ci_8烷基)?！案呒壨榛笔侵负屑s10-約20個碳原子，例如
10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳原子的烷基基團(tuán)。在某些實(shí)施方案中，“烷基”特指Ci_8直鏈烷基。在其他實(shí)施方案中，“烷基”特指Ci_8支鏈烷基。
[0074]烷基基團(tuán)可以任選地由一個或多個烷基基團(tuán)的取代基取代(“取代的烷基”)，所述取代基可以相同或不同。術(shù)語“烷基基團(tuán)的取代基”包括但不限于烷基、取代的烷基、鹵代、芳基氨基、?；?、羥基、芳氧基、烷氧基、烷硫基、芳硫基、芳烷基氧基、芳烷基硫基、羧基、烷氧基羰基、氧代和環(huán)烷基?？梢匝刂榛溔芜x地插入一個或多個氧原子、硫原子或者取代或未取代的氮原子，其中氮的取代基是氫、低級烷基(本文也稱為“烷基氨基烷基”)或芳基。
[0075]因此，在本文中使用時，術(shù)語“取代的烷基”包括本文定義的烷基基團(tuán)，其中所述烷基基團(tuán)的一個或多個原子或官能團(tuán)被另外的原子或官能團(tuán)(包括例如烷基、取代的烷基、鹵素、芳基、取代的芳基、烷氧基、羥基、硝基、氣基、烷基氣基、二烷基氣基、硫酸酷和疏基)替代。
[0076]本文使用的術(shù)語“芳基”是指芳香族部分，其可以是單個芳香環(huán)，或者稠合的、共價連接的或連接至共有基團(tuán)(例如但不限于亞甲基或亞乙基部分)的多個芳香環(huán)。所述共有的連接基團(tuán)還可以是羰基(如在二苯甲酮中)、氧(如在二苯醚中)或氮(如在二苯胺中)。術(shù)語“芳基”具體地包括雜環(huán)芳香化合物。芳香環(huán)可以包括苯基、萘基、聯(lián)苯基、二苯醚、二苯胺和二苯甲酮等。在特定的實(shí)施方案中，術(shù)語“芳基”是指含有約5-約10個碳原子(例如5、6、7、8、9或10個碳原子)并且包含5元-和6-元烴和雜環(huán)芳香環(huán)的環(huán)狀芳香基團(tuán)。
[0077]芳基基團(tuán)可以任選地由一個或多個芳基基團(tuán)的取代基取代(“取代的芳基”)，所述取代基可以相同或不同，其中“芳基基團(tuán)的取代基”包括烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳烷基氧基、羧基、羰基、?；?、鹵代、硝基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、酰氧基、?；被?、芳酰基氨基、氨基甲?；⑼榛被柞；?、二烷基氨基甲酰基、芳硫基、烷硫基、亞烷基和-NR’R"(其中R’和R"可以各自獨(dú)立地為氫、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基和芳烷基)。
[0078]因此，在本文中使用時，術(shù)語“取代的芳基”包括本文定義的芳基基團(tuán)，其中所述芳基基團(tuán)的一個或多個原子或官能團(tuán)被另外的原子或官能團(tuán)(包括例如烷基、取代的烷基、鹵素、芳基、取代的芳基、烷氧基、羥基、硝基、氣基、烷基氣基、二烷基氣基、硫酸酷和疏基)替代。[0079]芳基基團(tuán)的具體實(shí)例包括但不限于環(huán)戊二烯基、苯基、呋喃、噻吩、吡咯、吡喃、批啶、咪唑、苯并咪唑、異噻唑、異噁唑、吡唑、吡嗪、三嗪、嘧啶、喹啉、異喹啉、噴哚、咔唑等。
[0080]術(shù)語“雜芳基”是指其中芳香環(huán)或環(huán)的骨架中的至少一個原子是除碳以外的原子的芳基基團(tuán)。因此，雜芳基基團(tuán)含有一個或多個選自包括但不限于氮、氧和硫的非碳的原子。
[0081]在本文中使用時，術(shù)語“?；笔侵钙渲恤然鶊F(tuán)的-OH已被另一個取代基替代的有機(jī)羧酸基團(tuán)(即，由RCO—表示，其中R是本文定義的烷基或芳基基團(tuán))。因此，術(shù)語“?；本唧w地包括芳基?；鶊F(tuán)，例如乙?；秽捅郊柞＜谆鶊F(tuán)。?；鶊F(tuán)的具體實(shí)例包括乙酰基和苯甲?；?br> [0082]“環(huán)狀的”和“環(huán)烷基”是指含有約3-約10個碳原子(例如3、4、5、6、7、8、9或10
個碳原子)的非芳香的單環(huán)或多環(huán)體系。環(huán)烷基基團(tuán)任選地可以是部分不飽和的。環(huán)烷基基團(tuán)還可以任選地由本文定義的烷基基團(tuán)的取代基、氧代和/或亞烷基取代。沿著環(huán)烷基鏈可以任選地插入一個或多個氧原子、硫原子或者取代或未取代的氮原子，其中氮的取代基是氫、烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，由此得到雜環(huán)基團(tuán)。代表性的單環(huán)環(huán)烷基環(huán)包括環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。多環(huán)的環(huán)烷基環(huán)包括金剛烷基、八氫萘基、萘烷、樟腦、莰烷和降金剛烷基(noradamantyl)。
[0083]術(shù)語“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”是指其中環(huán)狀環(huán)的骨架碳原子中的一個或多個被雜原子(例如氮、硫或氧)替代的環(huán)烷基基團(tuán)(即，上文所述的非芳香的環(huán)狀基團(tuán))。雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于四氫呋喃、四氫吡喃、嗎啉、二氧雜環(huán)己烷、哌啶、哌嗪和吡咯烷。
[0084]“烷氧基(alkox yl) ”或“烷氧基(alkoxy) ”是指烷基_0_基團(tuán),其中烷基如上所述。在本文中使用時，術(shù)語“烷氧基”可以指例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、叔丁氧基和戍氧基。術(shù)語“氧基烷基”可以與“烷氧基”互換使用。
[0085]“芳氧基(aryloxyl) ”或“芳氧基(aryloxy) ”是指芳基_0_基團(tuán),其中芳基基團(tuán)如上所述，包括取代的芳基。在本文中使用時，術(shù)語“芳氧基”可以指苯氧基或己氧基，以及被烷基、取代的烷基、鹵代或烷氧基取代的苯氧基或己氧基。
[0086]“芳烷基”是指芳基-烷基-基團(tuán)，其中芳基和烷基如上所述并且包括取代的芳基和取代的烷基。示例性芳烷基基團(tuán)包括芐基、苯乙基和萘甲基。
[0087]“芳烷基氧基(aralky1xyI) ”或“芳烷基氧基(aralky1xy) ”是指芳烷基_0_基團(tuán)，其中所述芳烷基基團(tuán)如上所述。示例性芳烷基氧基基團(tuán)是芐氧基。
[0088]術(shù)語“氨基”是指-NR’ R”基團(tuán)，其中R’和R”各自獨(dú)立地選自包括以下基團(tuán)的組:H以及取代和未取代的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳烷基、芳基和雜芳基。在一些實(shí)施方案中，氨基基團(tuán)是-NH2。“氨基烷基”和“氨基芳基”是指-NR’ R”基團(tuán)，其中分別地，R’如上文關(guān)于氨基所定義的，R”是取代或未取代的烷基或芳基。
[0089]“酰氨基”是指?；?NH-基團(tuán)，其中?；缟纤?。
[0090]術(shù)語“羰基”是指-(C=O) _，或者與上文命名的母體基團(tuán)的碳原子連接的成雙鍵的
氧取代基。
[0091]術(shù)語“羧基”是指-C00H基團(tuán)。
[0092]在本文中使用時，術(shù)語“鹵代”、“鹵化物”或“鹵素”是指氟、氯、溴和碘基團(tuán)。
[0093]術(shù)語“羥基(hydroxyl) ”和“羥基(hydroxy) ”是指-0H基團(tuán)。[0094]術(shù)語“氧代”是指其中碳原子被氧原子替代的上文已述的化合物。
[0095]術(shù)語“氰基”是指-CN基團(tuán)。
[0096]術(shù)語“硝基”是指-NO2基團(tuán)。
[0097]術(shù)語“硫代”是指其中碳或氧原子被硫原子替代的上文已述的化合物。
[0098]I1.化合物和方法
[0099]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明公開的主題允許保護(hù)腎免受局部缺血和誘發(fā)局部缺血的腎毒素的急性毒性作用。在腎損傷之前、期間或之后立即給藥可口服和無毒的小分子激酶抑制劑以在較晚的時間點(diǎn)增強(qiáng)腎再生。對腎損傷應(yīng)答而誘導(dǎo)腎增殖。見圖4A和4B。在腎損傷附近的一段時間中，某些循環(huán)腎毒素會以細(xì)胞周期依賴性方式進(jìn)一步增加腎損傷。因此，通過藥理使用CDK4/6抑制劑將腎上皮細(xì)胞短暫維持在Gl (藥理靜止或PQ)會在清除循環(huán)腎毒素后允許增強(qiáng)的腎修復(fù)。見圖5。在局部缺血性損傷時短暫PQ會增強(qiáng)隨后的腎恢復(fù)。該發(fā)現(xiàn)利用這樣的發(fā)現(xiàn)，增殖細(xì)胞對外毒素高度敏感，因此短暫PQ是治療性的。所述方法可以包括在腎局部缺血性損傷之前、同時或之后(例如20小時內(nèi))給藥(口服或IV)CDK4/6抑制劑。所述CDK4/6抑制劑可以是選擇性CDK4/6抑制劑?？梢跃S持CDK4/6抑制劑的治療水平直至誘發(fā)腎損傷的條件已逆轉(zhuǎn)(一般24-48小時)。然后可以撤走CDK4/6抑制劑(利用不被腎專門清除的化合物)，并且腎再生性增殖會繼而發(fā)生。例如，可以在與低血壓相關(guān)的手術(shù)(例如心臟搭橋手術(shù))之前或者在使用包含碘的放射性造影劑之前誘導(dǎo)PQ0這樣的損傷后24-48小時在腎毒素已清除和/或全身血壓已恢復(fù)時PQ可以逆轉(zhuǎn)。
[0100]腎通常是靜止的器官，但是其在損傷時能夠通過細(xì)胞增殖來極大地修復(fù)。腎對減少的血流以及減少腎血流的毒素所致的局部缺血特別敏感。局部缺血性損傷之后，腎上皮細(xì)胞增殖顯著增加。如本文 所示，局部缺血性損傷之后的增殖可以被誘導(dǎo)PQ的CDK4/6抑制劑所抑制。見圖4A和4B。在損傷后12-72小時持續(xù)的PQ允許清除腎損傷時產(chǎn)生的循環(huán)腎毒素，從而促進(jìn)腎恢復(fù)。
[0101]Davis等人的美國專利第6, 369.086號(下稱“‘086專利”)看來描述:選擇性⑶K抑制劑可以用于限制細(xì)胞毒性劑的毒性并且可以用來防止化療誘發(fā)的脫發(fā)。具體地，‘086專利描述了作為特異性CDK2抑制劑的羥吲哚化合物。相關(guān)的期刊文獻(xiàn)(參見Davis etal.，Science, 291，134-137 (2001))看來描述:⑶K2的抑制產(chǎn)生細(xì)胞周期停滯，降低上皮細(xì)胞對細(xì)胞周期活性的抗腫瘤藥的敏感性，并且可以預(yù)防化療誘發(fā)的脫發(fā)。但是，該期刊文獻(xiàn)由于不可再現(xiàn)結(jié)果而后被撤回。不同于這些標(biāo)榜的選擇性CDK2抑制劑的保護(hù)效應(yīng)(通過撤回所述期刊文章而對其質(zhì)疑)，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明公開的主題涉及保護(hù)組織和/或細(xì)胞如腎組織和/或細(xì)胞免受局部缺血的影響。
[0102]可以通過用抑制劑預(yù)治療(即，預(yù)定暴露于局部缺血或有風(fēng)險暴露于局部缺血的個體的先前CDK4/6抑制劑治療)來向個體提供CDK4/6抑制劑的保護(hù)效果。
[0103]在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是心臟手術(shù)，或者與低血壓性發(fā)作相關(guān)的其他手術(shù)。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是給藥用于CT掃描、幽門成形術(shù)和冠狀動脈造影術(shù)的放射性造影劑。在一些實(shí)施方案中，局部缺血的誘發(fā)性發(fā)作是腎同種異體移植物收獲(例如，尸體的腎同種異體移植物收獲)，具有在血流不存在下轉(zhuǎn)運(yùn)和/或儲存腎期間誘發(fā)的冷-局部缺血。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是與血容量減少(例如，由于出血、脫水等)和/或低血壓時期相關(guān)的創(chuàng)傷。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是給藥減少血流量(例如，腎血流)的藥物或物質(zhì)，例如但不限于阿司匹林、布洛芬、他克莫司和/或環(huán)胞素。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是由動脈栓塞或者原位動脈或靜脈血栓形成引起的急性組織局部缺血或梗死。在一些實(shí)施方案中，誘發(fā)局部缺血的事件是腸扭結(jié)的扭曲或者器官血流的其他短暫解剖學(xué)中斷。
[0104]在本文中使用時，術(shù)語“選擇性CDK4/6抑制劑化合物”是指這樣的化合物，其選擇性抑制⑶K4和⑶K6中的至少一種，或者其主要的作用模式是通過抑制⑶K4和/或⑶K6。因此，選擇性CDK4/6抑制劑是這樣的化合物，其一般具有比對其他激酶或?qū)ζ渌父偷膶Β荎4和/或⑶K6的50%抑制濃度(IC5tl)。在一些實(shí)施方案中，所述選擇性⑶K4/6抑制劑對其他⑶K (例如⑶Kl和⑶K2)的IC5tl可以是所述化合物對⑶K4或⑶K6的IC5tl的至少
2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。在一些實(shí)施方案中，所述選擇性⑶K4/6抑制劑對其他⑶K的IC5tl可以是所述化合物對CDK4或CDK6的IC5tl的至少20、30、40、50、60、70、80、90或100倍。在一些實(shí)施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑對其他CDK的IC5tl可以是所述化合物對CDK4或⑶K6的IC5tl的100倍以上或1000倍以上。在一些實(shí)施方案中，所述選擇性⑶K4/6抑制劑化合物是選擇性抑制CDK4和CDK6的化合物。在一些實(shí)施方案中，所述CDK4/6抑制劑不是天然存在的化合物(例如，異黃酮)。在一些實(shí)施方案中，所述CDK4/6抑制劑是一種或多種酪氨酸激酶的較差的抑制劑(例如，>1 μ M體外IC5tl)。在一些實(shí)施方案中，所述⑶Κ4/6抑制劑是絲氨酸和/或蘇氨酸激酶的高效抑制劑。在一些實(shí)施方案中，所述CDK4/6抑制劑是較差的⑶Kl抑制劑(例如，(例如，>1 μ M體外IC5tl)。在一些實(shí)施方案中，所述⑶Κ4/6抑制劑的特征是與CDKl相比具有10倍或50倍或100倍或更大的抑制CDK4或CDK6的相對效力。
[0105]在一些實(shí)施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑化合物是選擇性誘導(dǎo)CDK4/6依賴性細(xì)胞中的Gl細(xì)胞周期停滯的化合物。因此，當(dāng)按照本發(fā)明公開的方法用所述選擇性CDK4/6抑制劑化合物處理時， 處于Gl期的CDK4/6依賴性細(xì)胞的百分比升高，而處于G2/M期和S期的⑶Κ4/6依賴性細(xì)胞 的 百分比降低。在一些實(shí)施方案中，所述選擇性⑶Κ4/6抑制劑是這樣的化合物，其誘導(dǎo)CDK4/6依賴性細(xì)胞中的基本上純粹的(pure)(即“完全的(clean) ”)G1細(xì)胞周期停滯(例如，其中用所述選擇性CDK4/6抑制劑處理誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯，以致按照標(biāo)準(zhǔn)方法(例如，碘化丙錠染色或其他)測定，大多數(shù)的細(xì)胞停滯于G1，處于G2/M和S期的細(xì)胞群體合計(jì)為總細(xì)胞群體的20%、15%、12%、10%、8%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少)。
[0106]雖然已報告非特異性激酶抑制劑星形孢菌素在一些細(xì)胞類型中間接地誘導(dǎo)Gl停滯(參見 Chen et al.，J.Nat.Cancer Inst.，92，1999-2008 (2000))，但是選擇性 CDK4/6 抑制劑可以直接且選擇性地誘導(dǎo)細(xì)胞(例如腎上皮細(xì)胞)中的Gl細(xì)胞周期停滯以提供保護(hù)，具有減低的長期毒性，并且不需要在暴露于局部缺血之前用所述抑制劑長時(例如，48小時或更長)治療。具體地，雖然一些非選擇性激酶抑制劑可以通過降低CDK4蛋白水平引起一些細(xì)胞類型中的Gl停滯，但是，不拘于任何一種理論，認(rèn)為本發(fā)明公開的方法的益處至少部分歸因于選擇性CDK4/6抑制劑能夠直接抑制細(xì)胞(例如，腎細(xì)胞)中的CDK4/6的激酶活性而不降低它們的細(xì)胞濃度。
[0107]在一些實(shí)施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑化合物是基本上沒有脫靶效應(yīng)(特別是與抑制除CDK4和/或CDK6之外的激酶相關(guān))的化合物。在一些實(shí)施方案中，所述選擇性⑶K4/6抑制劑化合物是除⑶K4/6之外的⑶K(例如，⑶Kl和⑶Κ2)的較差的抑制劑(例如，>1 μ M IC50)。在一些實(shí)施方案中，所述選擇性⑶Κ4/6抑制劑化合物在非⑶Κ4/6依賴性細(xì)胞中不誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯。在一些實(shí)施方案中，所述選擇性CDK4/6抑制劑化合物是酪氨酸激酶的較差的抑制劑(例如，>1μΜ IC5tl)。其他不期望的脫靶效應(yīng)包括但不限于長期毒性、抗氧化效應(yīng)和雌激素效應(yīng)。
[0108]抗氧化效應(yīng)可以通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)測定進(jìn)行測定。例如，無顯著抗氧化效應(yīng)的化合物是不顯著地清除自由基例如氧自由基的化合物。可以將化合物的抗氧化效應(yīng)與抗氧化活性已知的化合物例如染料木黃酮比較。因此，無顯著的抗氧化活性的化合物可以是抗氧化活性為染料木黃酮的抗氧化活性的約1/2、1/3、1/5、1/10、1/30或1/100的化合物。雌激素活性也可以通過已知的測定進(jìn)行測定。例如，非雌激素化合物是不顯著地結(jié)合和激活雌激素受體的化合物?；旧蠜]有雌激素效應(yīng)的化合物可以是雌激素活性為具有雌激素活性的化合物(例如，染料木黃酮)的約1/2、1/3、1/5、1/10、1/20或1/100的化合物。
[0109]可以按照本發(fā)明公開的方法使用的⑶Κ4/6抑制劑包括任何已知的小分子(例如，<1000道爾頓，<750道爾頓、或者少于〈500道爾頓)⑶Κ4/6抑制劑，或者其藥學(xué)可接受的鹽。在一些實(shí)施方案中，所述抑制劑是非天然存在的化合物(即，自然界中未發(fā)現(xiàn)的化合物)。已報道幾類化合物具有CDK4/6抑制能力(例如，在無細(xì)胞測定中)。用于本發(fā)明公開的方法的選擇性CDK4/6抑制劑可以包括但不限于，吡啶并[2，3-d]嘧啶(例如，吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮和2-氨基-6-氰基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酮)、三氨基嘧啶、芳基[a]吡咯并[3，4-d]咔唑、含氮的雜芳基取代的脲、5-嘧啶基-2-氨基噻唑、苯并噻二嗪、吖啶硫酮和異喹啉酮。
[0110]在一些實(shí)施方案中，所述吡啶并[2，3-d]嘧啶為吡啶并[2，3-d]嘧啶酮。在一些實(shí)施方案中，所述吡啶并[2，3-d]嘧啶酮為吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮。在一些實(shí)施方案中，所述吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮由氨基芳基或氨基雜芳基基團(tuán)取代。在一些實(shí)施方案中，所述吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮由氨基吡啶基團(tuán)取代。在一些實(shí)施方案中，所述吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮為2-(2-吡啶基)氨基吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮。例如，所述吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮化合物可以具有Barvian等人的美國專利公開第2007/0179118號中所述的式(II)的結(jié)構(gòu)，該專利公開整體援引加入本文。在一些實(shí)施方案中，所述吡啶并[2，3-d]嘧啶化合物為6-乙?；?8-環(huán)戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮(B卩，TO0332991)或其藥學(xué)可接受的鹽。參見Toogoodet al.，J.Med.Chem.，2005，48，2388-2406。
[0111]在一些實(shí)施方案中，所述吡啶并[2，3-d]嘧啶酮為2-氨基-6-氰基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酮。例如，Tu等人描述了包括2-氨基-6-氰基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-酮在內(nèi)的選擇性CDK4/6抑制劑。參見Tu et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.,2006, 16, 3578-3581。[0112]在本文中使用時，“三氨基嘧啶”是其中嘧啶環(huán)中的至少三個碳原子由具有式-NR1R2的基團(tuán)取代的嘧啶化合物，其中R1和R2獨(dú)立地選自H、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基和雜芳基。每個R1和R2的烷基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基和雜芳基基團(tuán)可以進(jìn)一步由一個或多個羥基、鹵代、氨基、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基基團(tuán)取代。在一些實(shí)施方案中，所述氨基基團(tuán)中的至少一個是具有-NHR結(jié)構(gòu)的烷基氨基基團(tuán)，其中R為C1-C6烷基。在一些實(shí)施方案中，至少一個氨基基團(tuán)是環(huán)烷基氨基基團(tuán)或羥基取代的環(huán)烷基氨基基團(tuán)，具有式-NHR，其中R是由或不由羥基基團(tuán)取代的C3-C7環(huán)烷基。在一些實(shí)施方案中，至少一個氨基基團(tuán)是雜芳基取代的氨基烷基基團(tuán)，其中所述雜芳基基團(tuán)可以進(jìn)一步由芳基基團(tuán)取代基取代。
[0113]芳基[a]吡咯并[3, 4-d]咔唑包括但不限于萘基[a]吡咯并[3，4_c]咔唑、噴哚并[a]吡咯并[3，4_c]咔唑、喹啉基[a]吡咯并[3，4_c]咔唑和異喹啉基[a]吡咯并[3, 4-c]咔唑。參見例如 Engler et al..Bioorg.Med.Chem.Lett..2003.13.2261-2267: Sanchez-Martinez et al., Bioorg.Med.Chem.Lett., 2003, 13, 3835-3839;Sanchez-Martinez et al., Bioorg.Med.Chem.Lett., 2003, 13, 3841-3846: Zhu et al., Bioorg.Med.Chem.Lett., 2003, 13, 1231-1235; and Zhu et al., J.Med Chem., 2003, 46, 2027-2030。合適的芳基[a]吡咯并[3，4-d]咔唑還公開于美國專利公開第2003/0229026號和第2004/0048915號中。
[0114]含氮的雜芳基取代的脲是包含脲部分的化合物，其中脲氮原子之一由含氮的雜芳基基團(tuán)取代。含氮的雜芳基基團(tuán)包括但不限于包含至少一個氮原子的5-10元芳基基團(tuán)。因此，含氮的雜芳基基團(tuán)包括例如吡啶、吡咯、噴哚、咔唑、咪唑、噻唑、異噁唑、吡唑、異噻唑、吡嗪、三唑、四唑、嘧啶、噠嗪、嘌呤、喹啉、異喹啉、喹喔啉、噌啉、喹唑啉、苯并咪唑、苯鄰二甲酰亞胺等。在一些實(shí)施方案中，所述含氮的雜芳基基團(tuán)可以由一個或多個烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳烷基、芳基、雜芳基、羥基、鹵代、羰基、羧基、硝基、氰基、烷氧基或氨基基團(tuán)取代。在一些實(shí)施方案中，所述含氮的雜芳基取代的脲為吡唑-3-基脲。所述吡唑可以進(jìn)一步由環(huán)烷基或雜環(huán)基團(tuán)取代。在一些實(shí)施方案中，所述吡唑-3-基脲為:
[0115]
【權(quán)利要求】
1.一種在細(xì)胞或組織暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件之前或之后緩解需要治療的個體中的所述細(xì)胞或組織中源自局部缺血和/或相關(guān)事件的損傷的方法，所述方法包括向所述個體給藥藥學(xué)有效量的抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6 (CDK6)的化合物，其中所述細(xì)胞或組織的特征在于損傷后的增殖是CDK4/6依賴性的。
2.一種在腎細(xì)胞或腎組織暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件之前或之后緩解需要治療的個體中的所述細(xì)胞或組織中源自局部缺血和/或相關(guān)事件的損傷的方法，所述方法包括向所述個體給藥藥學(xué)有效量的抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和/或細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6 (⑶K6)的化合物。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中在所述個體暴露于所述局部缺血和/或相關(guān)事件之前、在所述個體暴露于所述局部缺血和/或相關(guān)事件的同時、或者在所述個體暴露于所述局部缺血和/或相關(guān)事件之后向所述個體給藥抑制CDK4和/或CDK6的化合物。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中在所述個體暴露于局部缺血和/或相關(guān)事件之后約24小時至約48小時之間向所述個體給藥抑制CDK4和/或CDK6的化合物。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中所述抑制CDK4和/或CDK6的化合物為選擇性CDK4/6抑制劑。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述選擇性CDK4/6抑制劑是除CDK4和/或CDK6以外的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的不良抑制劑。
7.權(quán)利要求1-6中任一 項(xiàng)的方法，其中所述誘發(fā)局部缺血的事件是心臟手術(shù)，或者與低血壓性發(fā)作相關(guān)的其他手術(shù)。
8.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述誘發(fā)局部缺血的事件是給藥用于CT掃描、幽門成形術(shù)和冠狀動脈造影術(shù)的放射性造影劑。
9.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述誘發(fā)局部缺血的事件是與血容量減少和/或低血壓時期相關(guān)的創(chuàng)傷。
10.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述誘發(fā)局部缺血的事件是給藥減少腎血流的藥物或物質(zhì)，如阿司匹林、布洛芬、他克莫司和/或環(huán)胞素。
11.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述誘發(fā)局部缺血的事件是由動脈栓塞或者原位動脈或靜脈血栓形成引起的急性組織局部缺血或梗死。
12.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述誘發(fā)局部缺血的事件是腸扭結(jié)的扭曲或者器官血流的其他短暫解剖學(xué)中斷。
13.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述誘發(fā)局部缺血的事件是植入腎移植受者之前的腎收獲和/或轉(zhuǎn)運(yùn)。
【文檔編號】A61P7/06GK103501789SQ201180065126
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2011年11月17日 優(yōu)先權(quán)日:2010年11月17日
【發(fā)明者】D·P·迪洛克, N·E·沙普爾斯, J·C·斯特魯姆, J·E·比希, P·J·羅伯茨, B·D·漢弗萊斯, K-K·王 申請人:北卡羅來納大學(xué)查珀?duì)栂柗中? 布賴漢姆婦女醫(yī)院, G1療法公司